菊藻丸含药血清对人乳腺癌细胞影响的体外实验研究

目的探讨含菊藻丸大鼠血清对人乳腺癌雌激素受体阳性细胞[ER(+)]MCF-7和人乳腺癌雌激素受体阴性细胞[ER(-)]MDA-MB-231增殖、细胞周期分布及凋亡的影响。方法将20只Wistar雌性大鼠分为4组,每组5只。3个中药组以3种不同浓度的菊藻丸水剂灌胃,分别为0.286、2.860和28.600 ng/ml;另以等量生理盐水灌胃进行对照。末次灌胃后于1.5~2.0 h时间段内取下腔静脉血制成血清。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测4组血清在不同时间(24~120 h)对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞增殖的影响;流式细胞术测定各组血清对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞作用48 h后的细胞周期分布及细胞凋亡的影响,并比较各组之间的差异。结果 3个中药组的含药血清对MCF-7细胞有一定的增殖抑制作用,而对MDAMB-231细胞有显著的增殖抑制作用,对两者的作用均成明显的剂量-时间依赖关系。从24~120 h,中药剂量由低至高,对MCF-7细胞抑制率由1.47%~11.06%增至6.29%~20.01%,对MDA-MB-231细胞抑制率由15.45%~20.19%增至21.24%~45.79%。两种细胞经各含药血清组处理48 h后,与对照组比较,随着药物剂量的加大,G0/G1期细胞逐渐增多,而各组的S期细胞和G2/M期细胞则逐渐减少,增殖指数PI值亦逐渐减少,但MCF-7细胞各中药组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),MDA-MB-231细胞中、高剂量组与对照组的G0/G1期数值和PI值比较,差异有统计学意义(P<0.01);随剂量的增大,凋亡的MCF-7细胞和MDAMB-231细胞逐渐增多,2种细胞的中、高剂量组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),但是对MDAMB-231细胞的抑制率要明显高于MCF-7细胞。结论含菊藻丸大鼠血清对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞均有抑制作用,呈剂量和时间依赖性,并能影响细胞周期分布,诱导肿瘤细胞凋亡。但是对E(-)的MDAMB-231细胞的抑制和杀伤作用远比对ER(+)的MCF-7细胞的作用要强。     

黄连素抑制人乳腺癌细胞MCF-7作用的研究

目的 研究黄连素对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用.方法 用WST-1方法、流式细胞术和划痕实验分别检测黄连素对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡、细胞周期及迁移能力的影响.结果 不同浓度的黄连素可以抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖.黄连素作用于MCF-7细胞24 h可以使细胞周期阻滞在G1期,进入S期的细胞比例降低,同时MCF-7细胞凋亡明显增加.黄连素作用于MCF-7细胞24 h及48 h后,可以抑制MCF-7细胞的迁移能力.结论 黄连素可有效地抑制乳腺癌细胞的增殖与迁移能力,并诱导其凋亡,参与抗肿瘤作用.     

苦参碱对乳腺癌细胞杀伤作用的体外实验研究

目的 研究苦参碱(matrine)对体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响及相关机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的苦参碱对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的苦参碱作用于MCF-7细胞后细胞周期分布、凋亡率及Bax,Bcl-2蛋白的表达水平.结果 苦参碱对MCF-7细胞的增殖具有明显的抑制作用,与对照组相比具有显著性差异(P＜0.05),并呈现时间和剂量依赖性;细胞周期被阻滞于G0/G1期;苦参碱能够诱导细胞凋亡,并且上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达.结论 苦参碱可显著抑制MCF-7细胞的增殖,且抑制作用呈剂量和时间依赖性.苦参碱对MCF-7细胞的增殖抑制作用可能与其诱导细胞周期阻滞及凋亡有关,诱导凋亡可能与其上调Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达有关.     

重组高效复合干扰素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的作用

目的 研究重组高效复合干扰素(rSIFN-co)对肺腺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响。方法 筛选rSIFN-co对A549细胞的有效浓度,及与顺铂联合用药的最佳浓度和作用时间。分为rSIFN-co（5 μg/mL）组、传统重组集成干扰素α(干复津,5 μg/mL）组、rSIFN-co（5 μg/mL）+顺铂（2 μg/mL）组、干复津（5 μg/mL）+顺铂（2 μg/mL）组、顺铂（2 μg/mL）组和RPMI-1640液空白组,分别干预A549细胞。MTT法检测各组7 d活细胞数并作生存曲线,流式细胞仪检测48 h各组细胞凋亡率,免疫荧光法检测48 h各组凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2表达。结果 rSIFN-co的有效浓度为1 ～64 μg/mL,顺铂的最低有效浓度为2 μg/mL,与2 μg/mL顺铂联合用药时rSIFN-co 的最佳浓度为5 μg/mL,最佳作用时间为48 h。生存曲线示rSIFN-co对A549的抑制作用强于干复津,rSIFN-co+顺铂的抑制作用强于干复津+顺铂。rSIFN-co可诱导A549细胞凋亡,rSIFN-co组凋亡率高于干复津组(P=0.000),rSIFN-co+顺铂组凋亡率高于rSIFN-co组（P=0.004）及顺铂组（P=0.023）。rSIFN-co能增强A549中Fas的表达,并抑制Bcl-2的表达,其中rSIFN-co组Bcl-2表达低于干复津组(P<0.05)。结论 rSIFN-co能抑制A549增殖,且作用强于干复津,与顺铂联合应用的抑制作用增强,其对A549的抑制作用与调节凋亡相关基因表达有关。     

抗人Ig抗体诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的实验研究

目的观察抗人Ig抗体对人乳腺癌传代细胞系MCF-7细胞的凋亡诱导作用。方法用培养上清中加入抗体和原位电转的方法将抗人Ig抗体分别作MCF-7细胞的抗体封闭实验,用流式分析仪进行细胞凋亡检测。结果培养上清中加入抗人IgG、抗IgM抗体后,对MCF-7细胞系没有明显的凋亡诱导作用。而通过原位电转的方法将抗人IgG、抗人IgM抗体转入MCF-7细胞内,发现二者均对MCF-7有明显的促凋亡作用（P〈0．01）。结论MCF-7细胞内的IgG及IgM对MCF-7细胞的生存具有重要意义。     

粉防己碱对人乳腺癌细胞MCF-7细胞株的作用

目的:观察粉防己碱对体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7细胞株增殖的影响.方法:MTT法检测MCF-7细胞对粉防己碱的敏感性;流式细胞仪检测粉防己碱对MCF-7细胞的细胞周期、凋亡率的影响.结果:随着粉防己碱浓度的增加,作用时间延长,MTT试验中试验组细胞光吸收值降低;流式细胞试验中S期细胞数减少,凋亡细胞比例增加.结论:粉防己碱对MCF-7细胞株的生长有明显的抑制作用,并且这种抑制效应存在剂量和时间的依赖关系;粉防己碱可阻滞MCF-7细胞周期活动,诱导细胞凋亡,且其调亡率和浓度及作用时间呈正相关.     

金雀异黄素对人乳腺癌细胞体外增殖作用机制的研究

目的研究金雀异黄素（Genistein,Gen）对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响及凋亡相关基因表达的调控。方法选用人乳腺癌细胞株MCF-7体外培养,MTT法检测Gen对乳腺癌生长活力的影响,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,Giemsa染色观察细胞形态学改变,免疫组化检测凋亡相关基因Bax和癌基因erbB-2蛋白表达水平的改变。结果金雀异黄素对MCF-7细胞体外生长具有明显的抑制作用。Giemsa染色显示,金雀异黄素处理的MCF-7细胞呈明显的凋亡形态改变,细胞固缩、发泡,染色质凝集呈块状,并沿核周分布。流式细胞仪检测在G。峰前可见凋亡峰,且随用药时间的延长,凋亡比率递增。蛋白水平检测表明金雀异黄素促进MCF-7细胞Bax表达升高,抑制erbB-2蛋白的表达。结论金雀异黄素通过诱导细胞凋亡或阻滞细胞于Gz～M期,从而抑制乳腺癌细胞的体外增殖,并主要是通过调节Bax和erbB-2蛋白的表达实现的。     

重组腺病毒rAd-MK-TNFα对人乳腺癌细胞的体外抑制作用

 目的 初步观察重组腺病毒rAd-MK-TNFα对乳腺癌细胞的抑制作用。方法 体外转染系列重组腺病毒,观察rAd-MK-TNFα在乳腺癌细胞Bcap37中TNFα的表达以及其对乳腺癌细胞的生长抑制作用,并比较其与对照病毒对乳腺癌细胞及人成纤维细胞生长的抑制作用的不同。结果 rAd-MK-TNFα感染Bcap37细胞后,可检测到TNFα的表达;rAd-MK-TNFα对Bcap37乳腺癌细胞存在生长抑制作用,且与其病毒浓度呈正相关;rAd-MK-TNFα对人成纤维细胞的抑制作用小于非靶向腺病毒（rAd-CMV-TNFα）。结论rAd-MK-TNFα可能通过靶向表达TNFα对乳腺癌细胞产生抑制细胞生长的作用。     

番茄提取物抑制乳腺癌生长的实验研究

目的 探讨番茄提取物在乳腺癌动物模型中对肿瘤增殖、凋亡及血管生成的影响.方法 建立二甲基苯葸诱导的大鼠乳腺癌模型,给予高中低剂量番茄提取物灌胃,应用5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷标记法检测细胞增殖;原位末端标记法检测细胞凋亡;免疫组化法检测肿瘤微血管密度.结论 番茄组乳腺肿瘤的增殖指数和肿瘤微血管密度均低于对照组,且高剂量番茄组中乳腺肿瘤的凋亡指数较对照组升高,差异具有显著性(P<0.05).结论番茄提取物在乳腺癌中具有抗增殖、促凋亡和抗血管生成活性,具有潜在的抗肿瘤应用价值.     

干扰素在肝癌治疗中耐药性问题的研究

目的 探讨干扰素受体表达水平与临床疾病二者之间进展的关系,从而更进一步研究干扰素应答的相关机制和因素.方法 采用流式细胞技术和细胞免疫组化对三组患者的外周血淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞膜进行检测.结果 通过检测干扰素受体水平发现,肝癌组和对照组干扰素受体水平存在明显的差别,即肝癌组患者的受体水平低于对照组.结论 产生干扰素耐药的肝癌患者组的干扰素受体(IFANR2)水平明显降低.     

高强度聚焦超声对人乳腺癌细胞的生长抑制作用及机理研究

目的　研究高强度聚焦超声 (HIFU)对人肿瘤细胞的杀伤作用 ,并探索其作用机理。方法　用不同强度HIFU处理人乳腺癌细胞 MCF- 7,用台盼蓝排斥法染色、细胞增殖试验 (MTT法 )、克隆形成实验研究 HIFU对癌细胞的杀伤和生长抑制作用 ;用流式细胞术检测 HIFU对癌细胞周期、凋亡及相关基因表达的影响。结果　用 HIFU处理后 ,癌细胞死亡率升高 ,增殖活性降低 (P<0 .0 5 ) ,克隆形成下降 (P<0 .0 0 1) ,G0 /G1 期细胞数增加 (P<0 .0 5 ) ,S期细胞数减少 (P<0 .0 1) ,凋亡指数升高 (P<0 .0 1) ,热休克蛋白表达升高 (P<0 .0 5 ) ,P5 3、BCL- 2、FAS表达阳性细胞数与对照组比 ,无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论　 HIFU对人乳腺癌细胞有明显的杀伤及抑制生长和克隆形成作用 ,其机理与抑制 DNA合成有关 ;HIFU具有诱导癌细胞凋亡作用 ,可能与 P5 3、BCL- 2、FAS的介导和调控无关。     

RNA沉默Pin1表达对乳腺癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的应用RNA干扰技术沉默Pinl表达后,观察其对乳腺癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法采用脂质体介导法将Pinl干扰片段PinlsiRNA和对照片段controlsiRNA转染入乳腺癌细胞系MDA—MB一23l后,利用RT—PCR和Westernblot法检测Pinl基因在mRNA和蛋白水平的表达情况,并应用MTT法、Transwell法和AnnexinV—FITC／PI试剂盒及流式细胞仪技术分析检测Pinl对MDA—MB一23l细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。结果Pinl在乳腺癌细胞系中高表达。与未处理组及转染对照片段controlsiRNA组相比,沉默Pinl表达后,PinlmRNA（P〈0．05）和蛋白（P〈0．05）表达均明显下降,细胞生长增殖能力[P〉0．05（第1天）,P〈0．01（第2—4天）]减弱,细胞侵袭数目（6．61±0．53,P〈0．05）减少,细胞凋亡率（31．5％±3．06％,P〈0．05）显著增加。结论沉默Pinl表达后可抑制乳腺癌细胞增殖和侵袭,促进乳腺癌细胞凋亡。     

HSP90功能抑制对乳腺癌细胞端粒酶和突变型P53的影响

目的应用HSP90功能抑制剂格尔德霉素(geldanamycin,GA)研究HSP90功能抑制对乳腺癌细胞增殖及端粒酶活性和突变型P53表达的影响。方法培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-435s,采用MTT法检测GA对MDA-MB-435s细胞的生长抑制作用,流式细胞术分析细胞周期,用TRAP-ELISA法检测细胞端粒酶活性,Western blot检测细胞内突变型P53蛋白表达变化。结果GA对MDA-MB-435s细胞增殖有明显抑制作用,呈时效量效依赖关系,GA作用后细胞呈现G2/M期阻滞,细胞内端粒酶活性下降,突变型P53蛋白表达明显下调。结论乳腺癌细胞中端粒酶活化和突变型P53表达与HSP90功能有关,用GA抑制HSP90功能可降低端粒酶活性和突变型P53表达,从而抑制乳腺癌细胞增殖。     

人乳腺癌细胞系MCF-7中不同亚群细胞的体内外克隆和成瘤能力分析

目的了解在人乳腺癌细胞系MCF-7中是否存在乳腺癌干细胞。方法采用流式细胞技术对MCF-7细胞进行分选,检测MCF-7中不同亚群细胞的体外克隆形成能力和体内成瘤能力。结果MCF-7中有部分细胞具有体外克隆形成能力和体内成瘤能力,而且和CD44 CD24 细胞相比,CD44 CD24-细胞中成瘤细胞的含量更高。结论MCF-7中存在乳腺癌干细胞,并主要集中于CD44 CD24-细胞中,CD44 CD24 细胞也可能是乳腺癌祖细胞。     

CD40信号对肺癌细胞化疗敏感性影响的实验研究

目的　观察激发CD4 0分子对肺癌细胞的化疗敏感性影响。方法　以肺癌细胞株A5 4 9和SPC A 1为研究对象 ,以可溶性CD4 0配体 (sCD4 0L)及激发型CD4 0单克隆抗体 5C11处理A5 4 9和SPC A 1细胞 ,采用四氮唑盐(MTT)比色法比较CD4 0激发前后化疗药物顺铂 (DDP)或丝裂霉素 (MMC)对细胞增殖的影响 ,免疫荧光标记和流式细胞术测定激发CD4 0分子前后化疗药物对肺癌细胞的杀伤作用。结果　激发CD4 0分子可增强DDP及MMC对CD4 0表达肺癌细胞株A5 4 9增殖的抑制率 (P <0 .0 5 )以及增强DDP及MMC对该细胞株的杀伤效应 (P <0 .0 5 ) ;而CD4 0不表达细胞株SPC A 1经sCD4 0L或 5C11处理不能产生类似的作用。结论　激发CD4 0信号可引起CD4 0表达肺癌细胞A5 4 9对化疗药物DDP及MMC的敏感性增加 ,可能在肺癌的治疗中具有潜在的应用价值。     

冬凌草甲素对人乳腺癌Bcap-37细胞的增殖抑制作用及其机制

目的观察冬凌草甲素对人乳腺癌细胞株Bcap-37细胞的生长抑制作用,初步探讨冬凌草甲素调控乳腺癌细胞增殖的分子机制。方法 MTT比色法检测冬凌草甲素对Bcap-37细胞的增殖抑制作用,相差显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪分析细胞周期分布,RT-PCR检测p21、cdc2和cyclin B1 mRNA表达。结果冬凌草甲素对Bcap-37细胞有显著的增殖抑制作用,呈时间剂量依赖趋势（P〈0.01）;处理后的Bcap-37细胞发生明显的形态改变;作用24h后,Bcap-37细胞在G2/M期阻滞;冬凌草甲素作用Bcap-37细胞后,p21 mRNA水平的表达增加,而cdc2、cyclin B1 mRNA的表达降低（均P〈0.05）。结论冬凌草甲素可抑制乳腺癌细胞的增殖,该作用可能与p21 mRNA表达上调及cdc2、cyclin B1 mRNA表达下调有关。     

BMP6在乳腺癌组织的表达及意义

目的 探讨骨形态发生蛋白6(bone morphogenetic proteins,BMP6)在乳腺癌组织的表达及与临床病理特征的关系。方法 应用实时荧光定量RT-PCR方法检测BMP6 mRNA在36例配对乳腺癌组织及癌旁组织中的表达情况;免疫组织化学染色方法检测BMP6蛋白在80例乳腺癌组织中的表达,并结合组织临床病理资料进行统计分析。结果 实时荧光定量RT-PCR结果显示,BMP6 mRNA在乳腺癌组织中的表达水平低于相对的癌旁组织（P <0.01）。BMP6 mRNA在雌激素受体阳性(ER+)乳腺癌组织中的表达高于ER－乳腺癌组织,同时BMP6 mRNA表达随乳腺肿瘤分化程度的增高而降低（P <0.01）。免疫组化染色结果显示,BMP6蛋白在不同ER、孕激素受体(progestogen receptor,PR)表达、增殖细胞核蛋白Ki-67表达指数及病理分级间的差异有统计学意义（P <0.05）,在不同乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、人表皮因子受体2(Her2)表达状况以及乳腺癌分子亚型间的差异无统计学意义（P >0.05）。结论 BMP6分子在乳腺癌组织的低表达与乳腺癌的发生、发展有关,提示BMP6有可能成为鉴别乳腺良、恶性病变的重要分子指标,对乳腺癌的内分泌治疗等具有重要意义。     

临床乳腺癌细胞周期蛋白非时相性表达的初步探讨

目的 初步探讨临床乳腺癌细胞的细胞周期蛋白(Cyclin)表达规律并予以归类，为进一步研究肿瘤的细胞周期机制提供依据。方法 采用Cyclin／DNA双参数流式细胞术对临床上获取的乳腺癌细胞的Cyclin(Cyclin D1、E、A和B1)和DNA表达进行检测。结果 在16例乳腺癌标本中，细胞周期蛋白的非时相性表达可以归类如下：①Ⅰ型Cyclin D1、E、A和B1均呈非时相性过表达(5例)。②Ⅱ型Cyclins D1、E、A和B1均呈低表达或不表达(3例)。②Ⅲ型Cyclin D1呈过表达并贯穿于整个细胞周期，而Cyclins E、A和B1呈低表达成不表达(3例)．④Ⅳ型Cyclins E、A和B1呈不同程度的非时相性过表达，而Cyclin D1呈低表达成不表达(5例)。结论 Cyclins在乳腺癌细胞中的非时相性表达存在着一定的规律，而每一种表达类型则显示了某一特定的细胞周期破坏机制。