姜黄素对胃癌MGC-803细胞磷酸化-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶表达的影响

目的 探讨姜黄素对胃癌MGC-803细胞磷酸化-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)表达的影响.方法 将MGC-803细胞分为空白对照组和四个药物实验组,各组姜黄素浓度分别为5 μmol/L,10 μmol/L,20 μmol/L,40 μmol/L.经不同浓度的姜黄素作用24 h、48 h、72 h后,应用CCK8法检测姜黄素对MGC-803细胞增殖的影响;应用Annexin V-FITC/PI双染色法测定不同浓度的姜黄素作用24 h后胃癌MGC-803细胞凋亡情况;应用蛋白免疫印迹法检测不同浓度姜黄素作用24 h对MGC-803细胞内p-AKT蛋白表达水平的影响.结果 姜黄素对MGC-803细胞增殖有抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性.在5~40 μmol/L浓度范围内,姜黄素呈浓度依赖性地促进MGC-803细胞的凋亡,并下调MGC-803细胞中p-AKT的水平.结论 姜黄素可能是通过抑制p-AKT蛋白的表达和AKT信号通路促进MGC-803细胞凋亡并抑制其增殖.     

罗格列酮对Hep-2细胞核因子-κB和血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的:通过检测罗格列酮(ROS)作用前后人喉癌Hep-2细胞核因子(NF-κB)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的变化情况,探讨其抑制Hep-2增殖的机制.方法:采用MTT法检测12.5、25.0、50.0和100.0μmol/L ROS处理12、24、36、48、60和72h后Hep-2细胞的增殖抑制率.RT-PCR方法检测50 μmol/L的ROS处理0、24、48和72h后Hep-2细胞NF-κB和VEGF mRNA表达的变化.结果:ROS对Hep-2细胞的生长具有增殖抑制作用,其作用表现为剂量依赖性(12、24、36、48、60和72h各浓度组相比,F为117.584、98.241、92.352、117.228、148.458和124.900,P均<0.001)和时间依赖性(12.5、25.0、50.0和100.0 μmol/L各时间组相比,F为140.949、123.335、148.325和176.590,P均<0.001).RT-PCR检测结果显示50 μmoL/L的ROS处理Hep-2细胞0、24、48和72 h后,NF-κB相对表达量分别为(0.854 ±0.066)、(0.653 ±0.059)、(0.489 ±0.027)和(0.336 ±0.031),差异有统计学意义(F=111.357,P<0.001);VEGF相对表达量分别为(0.756 ±0.057)、(0.628 ±0.039)、(0.482 ±0.044)和(0.318 ±0.035).差异有统计学意义(F=89.796,P<0.001).结论:ROS具有抑制Hep-2细胞增殖的作用,其机制与下调NF-κB和VEGF mRNA表达有关.     

罗格列酮对肺成纤维细胞TGF-β1信号转导途径的干预作用

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对人肺成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)、CTGF mRNA、核因子-κB(NF-κB)及激活子蛋白-1(AP-1)表达的影响及其罗格列酮对肺成纤维细胞TGF-β1信号转导途径的影响及可能机制.方法 以人肺成纤维细胞系(HLF-02)为研究对象,用Western blot法检测TGF-β1、姜黄素、吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)、罗格列酮作用后的CTGF、NF-κB及AP-1蛋白的表达,免疫组织化学方法 检测CTGF蛋白、RT-PCR技术测CTGF mRNA的表达.结果 ①与对照组比较,1 ng/mL TGF-β1作用15 min后,CTGF表达水平即增强(P＜0.01),并随着作用时间延长而逐渐增强.CTGF mRNA的表达亦随着时间的延长逐渐增加,作用24 h表达最多.②1 ng/mL TGF-β1作用30 min后,NF-κB及AP-1的表达水平增强(P＜0.01),以后表达趋于稳定,抑制剂(PDTC 100 μmol/L、姜黄素50 μmol/L)抑制这两条通路后CTGF的表达明显下降.③低(5 μmol/L)、中(10 μmol/L)、高(15 μmol/L)浓度罗格列酮预处理细胞30 min+TGF-β1作用24 h组较单纯TGF-β1处理24 h组CTGF、NF-κB及AP-1蛋白表达明显降低(P＜0.01),并且可以明显抑制1 ng/mL TGF-β1作用24 h引起的CTGF mRNA的表达(P＜0.01).结论 在体外,罗格列酮可通过NF-κB及AP-1信号转导途径启动人肺成纤维细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)抑制TGF-β1诱导CTGF转录和表达.     

THP-1细胞中核因子-κB信号通路的活化状态及其抑制剂pathenolide对细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨急性单核细胞白血病THP-1细胞株中核因子-κB(NF-κB)信号通路的活化状态及其抑制剂pathenolide(PN)对细胞增殖、凋亡的影响.方法:THP-1细胞置于37℃、体积分数为5%CO2培养箱中培养.①收集处于对数增殖期的细胞,采用RT-PCR方法检测THP-1细胞中P65、IkBα mRNA的表达.②用细胞裂解液分别提取THP-1的细胞质和细胞核蛋白,采用Western Blotting法检测细胞质及细胞核中P65、IkBα蛋白的表达.③将处于对数增殖期的THP-1细胞分成10组[(空白对照孔、阴性对照孔及各实验孔(1、2、4、6、8、10、15、20 μmol/L PN)],按12h、24h 2个检测点计算细胞增殖抑制率及增殖半数抑制浓度(IC50)的范围.④将处于对数增殖期的THP-1细胞分为3组(空白对照、PBS对照和6 μmol/L PN处理组),按第0天至第6天设计,绘制细胞增殖曲线.⑤取处于对数增殖期的THP-1细胞,分5组(分别以0、2、4、6和8 μmol/L的PN处理)培养,24 h后收获细胞,分别检测细胞周期和细胞早期凋亡率.结果:①RT-PCR结果示THP-1细胞中有P65、IkBα mRNA的表达,Western blot-ting结果示细胞质中均有P65、IkBα蛋白的表达,细胞核中有P65蛋白的表达.②PN对THP-1有抑制作用,其抑制率在一定范围内存在着剂量-效应关系,测定范围内最大抑制率可达(69.56±2.52)%;PN作用12h、24h的IC50分别为8-10 μmol/L、6～8 μmol/L.③以6μmol/L的PN处理后,THP-1细胞增殖曲线明显下降.④在2-6 μmol/L范围内,随PN浓度增高,G0/G1期细胞构成增高;在2～8 μmol/L范围内,S期细胞随PN浓度的增加而减少.0、2、4、6及8 μmoL/L PN组细胞早期凋亡率分别为(3.84 ±1.50)%、(4.67 ±1.97)%、(12.67 ±2.13)%、(17.72 ±2.78)%和(23.62 ±3.36)%,差异有统计学意义(F=36.280,P<0.001).结论:THP-1细胞中有NF-κB通路的持续激活,PN对THP-1细胞有抑制增殖和促进凋亡的作用.     

小白菊内酯对EC9706细胞增殖及VEGF、NF-κB P65蛋白表达的影响

目的:探讨小白菊内酯(PTL)对食管癌EC9706细胞的增殖、血管内皮生长因子(VEGF)及核转录因子-κB P65(NF-κB P65)蛋白表达的影响.方法:倒置显微镜下观察不同浓度(20、40和80 μmol/L)的PTL作用48 h后EC9706细胞的形态学变化;MTT法检测20、40和80 μmol/L PTL及20 μmol/L PTL与25 mg/L 5-氟尿嘧啶(5-FU)联用对EC9706细胞增殖的影响;免疫细胞化学法检测20和40 μmol/L的PTL作用72 h后EC9706细胞VEGF和NF-κB P65蛋白表达的改变.结果:①PTL作用EC9706细胞48 h后,细胞数量减少,细胞固缩变圆,核浓缩、核质分布不清,细胞溶解碎裂.②PTL及联合组作用于EC9706细胞24、48和72 h后,相同时间段各组细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(χ224 h=31.420,P<0.001;χ248 h=34.590,P<0.001;χ272 h=38.190,P<0.001).PTL对EC9706细胞的增殖有抑制作用;细胞培养72 h后PTL与5-FU联合组对EC9706细胞的抑制作用与50 mg/L 5-FU组相当.③PTL作用EC9706细胞后,与对照组比较VEGF和NF-κB P65蛋白表达均降低(χ2NF-κB P65=25.120,P<0.001;χ2VEGF=22.190,P<0.001).结论:PTL能抑制EC9706细胞的增殖,增加EC9706对5-Fu的敏感性;PTL的抗肿瘤机制可能与抑制NF-κB传导通路有关.     

姜黄素、二苯甲酰甲烷、查尔酮对人胃癌MGC-803细胞生物学行为的影响

目的:观察并比较姜黄素、二苯甲酰甲烷、查尔酮对胃癌细胞MGC-803生长抑制及凋亡的作用.方法:细胞增殖抑制采用MTT法,细胞凋亡采用流式细胞仪(FCM)检测.细胞形态变化采用HE染色、光学显微镜观察并照相.细胞DNAladder采取DNA抽取及电泳分析.结果:MTT显示MGC-803细胞株增殖抑制作用与药物剂量呈正相关.细胞凋亡率在24h内随药物剂量增加呈上升趋势.光镜下显示,经分别用姜黄素、二苯甲酰甲烷、查尔酮配制的12.5μmol/L、25.0μmol/L溶液处理24h后的MGC-803细胞,部分细胞密度变稀疏,体积变大,细胞膜完整或起泡,核仁丰富,核质比增大;DNA电泳显示, 12.5μmol/L、25μmol/L浓度查尔酮溶液处理组均有典型的DNA梯形图像.结论:姜黄素、二苯甲酰甲烷、查尔酮均可通过诱导MGC-803细胞凋亡而抑制其增殖,该作用有剂量依赖性,并导致相应细胞形态、DNA性状改变.     

PDTC对顺铂抑制胃癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的探讨核因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)对顺铂抑制胃癌细胞SGC-7901增殖的影响。方法不同浓度的PDTC(25,50,75μmol/L)联合顺铂(4mg/L)作用于胃癌细胞SGC-7901,采用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8试剂盒)检测细胞增殖抑制率;实时荧光定量多聚酶链反应(RTPCR)检测NF-κB p65 mRNA的表达情况;免疫荧光细胞化学(IF)检测NF-κB p65蛋白的表达变化。结果CCK-8结果显示,SGC-7901细胞增殖抑制率随PDTC浓度的增加而增加,且高于单独顺铂组,差异有统计学意义。RT-PCR结果显示,与对照组比较,顺铂(4mg/L)能增加p65 mRNA的表达,差异有统计学意义;当与不同浓度PDTC(25,50,75μmol/L)联合作用时,p65 mRNA相对表达量呈剂量依赖性降低,且低于顺铂单独组。免疫荧光结果与RT-PCR结果一致,与对照组比较,顺铂(4mg/L)能增加NF-κB p65蛋白的表达;与PDTC联合时,随PDTC浓度的增加,p65蛋白的表达量降低,积分光密度(IOD)逐渐降低,且低于顺铂单独组。结论 NF-κB抑制剂PDTC能增加顺铂对胃癌细胞SGC-7901化疗的敏感性,提示NF-κB途径是胃癌治疗的重要靶点。     

姜黄素对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞炎症反应的影响及分子机制

目的 研究姜黄素对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)炎症因子表达的影响,初步探讨可能的分子机制.方法 使用LPS(1μg)和姜黄素(5μmol/L、15μmol/L或30μmol/L)处理HUVEC细胞24 h,收集细胞总RNA,实时定量PCR(RT-PCR)和ELISA方法检测细胞TNF-α、MCP-1水平;Western blot检测细胞TLR4、MAPKs、NF-κB p65、磷酸化-NF-κB p65及NF-κB抑制蛋白IκBα的表达情况.结果 与空白对照组比较,姜黄素能显著抑制LPS诱导HUVEC细胞TNF-α、MCP-1和TLR4的过表达(P<0.05),明显降低NF-κB p65和MAPKs的磷酸化及IκBα蛋白降解(P<0.05).结论 姜黄素可能基于抑制TLR4/NF-κB,从而影响LPS诱导HUVEC细胞炎症因子的表达.     

姜黄素诱导人胃癌SGC7901细胞自噬性凋亡的研究

目的 观察姜黄素体外诱导人胃癌SGC7901细胞自噬性凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制.方法 用不同浓度的姜黄素处理SGC7901细胞,MTT法检测细胞增殖;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin,MDC)荧光染色和Hoechst33342荧光染色观察细胞自噬和凋亡的发生;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白NF-κB、自噬相关蛋白Beclin1及LC3Ⅱ的表达.结果 姜黄素可呈剂量依赖性明显抑制SGC7901的生长.MDC染色显示,40μmol/L姜黄素在作用12h后即可诱导SGC7901细胞发生自噬,24 h自噬减少;Hoechst33342荧光染色显示,40μmol/L姜黄素诱导凋亡在24 h最明显;流式细胞术显示,40μmol/L姜黄素作用24h时SGC7901细胞凋亡率明显增加.Western blot检测显示,姜黄素诱导SGC7901细胞自噬性凋亡过程中,凋亡相关蛋白NF-κB、自噬相关蛋白Beclin1及LC3的表达均上调.结论 姜黄素通过诱导自噬性凋亡抑制人胃癌细胞SGC7901的生长,其机制与NF-κB、Beclin1及LC3蛋白的表达上调有关.     

二苯乙烯苷对氧化损伤人脐静脉内皮细胞NF-κB表达的影响

目的 研究二苯乙烯苷(TSG)对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法 以不同浓度(0.1、1.0和10.0 μmol/L)的二苯乙烯苷孵育体外培养人脐静脉内皮细胞4 h后,用200 μmol/L过氧化氢作用内皮细胞24 h,采用电镜观察、MTT等方法 测定各组细胞活力;RT-PCR、Western-blot检测基因NF-κB、IκB表达.结果 与对照组比较,不同剂量组TSG均可以提高过氧化氢诱导损伤的人脐静脉内皮细胞活性,降低NF-κB mRNA及蛋白水平的表达,其中以1 μmol/L TSG组的作用最明显(P<0.01),但对IκB基因表达的影响差异均无显著性(P>0.05).结论 二苯乙烯苷对氧化损伤的人脐静脉内皮细胞具有抗氧化保护作用,其作用机制可能与下调NF-κB的表达、阻断细胞NF-κB/IκB信号通路有关.     

岩白菜素对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡及NF-κB信号通路的影响

目的:探讨岩白菜素对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡及核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:体外培养NSCLC细胞株HCC827,随机分成7.5、15、30μmol·L^-1岩白菜素处理组和对照组。乳酸脱氢酶(LDH)实验检测HCC827细胞毒性;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测HCC827细胞增殖抑制率;平板克隆法检测HCC827细胞增殖情况;流式细胞术检测HCC827细胞周期和细胞凋亡情况;蛋白质印迹(Western blotting)检测增殖蛋白细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、CyclinE1、凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及NF-κB通路蛋白的表达。结果:岩白菜素浓度≤30μmol·L^-1时,HCC827细胞毒性不显著。与对照组比较,7.5、15、30μmol·L^-1岩白菜素处理组细胞增殖抑制率显著升高,且表现时间和剂量依赖性[24 h时分别为(9.22±1.23)%、(27.85±1.59)%、(41.86±1.42)%;48 h时分别为(11....     

乙醛调控大鼠HSC中NF-κB的表达及其意义

目的: 研究从大鼠肝脏中新鲜分离的肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)在乙醛刺激下的增殖、IκB和NF-κB的表达,以探讨乙醛调控HSC中IκB和NF-κB的表达及其意义.方法: 用链霉蛋白酶、胶原酶以及密度梯度离心法分离培养大鼠肝星状细胞.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、免疫组化(Immunohistochemistry)和凝胶电泳迁移率法(EMSA)分别检测肝星状细胞的增殖、IκB和NF-κB的表达.结果: ①成功分离出大鼠肝星状细胞;② 200 μmol/L的乙醛刺激新分离培养的肝星状细胞后,细胞增殖明显[乙醛组A值(2.21±0.10),空白组(0.52±0.05),P＜0.01];③ 200 μmol/L的乙醛刺激传一代肝星状细胞后,IκB的表达量下降明显[乙醛组光密度值(0.32±0.02),空白组(1.60±0.32),P<0.01];④乙醛刺激传一代肝星状细胞后30 min,NF-κB的表达即有增加,到120 min时达最高值[乙醛组光密度值(3.92±0.82),空白组(0.82±0.04),P<0.01].结论: 乙醛可以使静止的肝星状细胞中IκB表达下降和NF-κB活性增加,从而使HSC活化增殖.     

姜黄素通过下调PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白表达对胃癌MGC-803细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的：观察姜黄素对胃癌MGC-803细胞体内外增殖和侵袭的作用,探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B (Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的作用机制。方法：胃癌MGC-803细胞分为对照组、低剂量（10μmol·L-1）姜黄素组、中剂量（20μmol·L-1）姜黄素组和高剂量（40μmol·L-1）姜黄素组。采用CCK-8法检测各组MGC-803细胞增殖能力,Transwell法检测各组MGC-803细胞侵袭能力,流式细胞术检测各组MGC-803细胞凋亡率。采用MGC-803细胞建立胃癌移植瘤模型,分别使用低剂量（0.5 mg·kg-1）、中剂量（1.0 mg·kg-1）和高剂量（2.0 mg·kg-1）姜黄素处理小鼠,观察姜黄素对各组小鼠肿瘤生长的抑制作用,TUNEL法检测各组小鼠移植瘤组织中肿瘤细胞的凋亡情况,Western blotting法检测各组小鼠移植瘤组织中PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白表达水平。结果：与对照组比较,不同剂量姜黄素组细胞增殖能力和侵袭细胞数明显降低（P<0.05）,细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;低剂量姜...     

辛伐他汀对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞NF-κB信号通路的影响

目的 探讨辛伐他汀对人急性早幼粒细胞白血病细胞株(NB4细胞)增殖与凋亡的影响以及对凋亡信号转导通路NF-κB通路相关基因mRNA表达的影响,以探讨辛伐他汀抗白血病效应及可能机制.方法 以不同浓度辛伐他汀处理NB4细胞,取对数生长期细胞进行实验.实验分为阴性对照组和辛伐他汀处理组(终浓度分别为5、10、15 μmol/L),培养24、48、72 h.采用MTT法观察NB4细胞增殖能力;流式细胞术测定NB4细胞凋亡指标AnnexinⅤ/propidium iodide变化;PCR芯片研究NB4细胞NF-κB通路相关基因mRNA的差异表达.结果 辛伐他汀对NB4细胞的生长有明显抑制作用和促凋亡作用(均P＜0.01),且呈时间与剂量依赖性.15 μmol/L辛伐他汀处理NB4细胞24、48、72 h细胞抑制率分别达到45.75％、92.91％、96.46％,而细胞早期凋亡率分别为30.25％、64.34％、87.38％.与对照组相比,15 μmol/L辛伐他汀处理NB4细胞48 h组中NF-κB通路有56个基因表达发生改变,其中47个基因表达下调、9个基因表达上调.结论 辛伐他汀能抑制NB4细胞增殖并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与辛伐他汀调节NF-κB通路相关基因的表达有关.     

2-甲氧基雌二醇对鼻咽癌CNE-2干细胞体外增殖、迁移及放疗敏感性的影响

目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2-MeOE2)对人鼻咽癌CNE-2干细胞(nasopharyngeal cancer stem cells,NPCSCs)增殖、迁移及放疗敏感性的影响及其可能机制.方法 收集本课题组前期富集并已鉴定的鼻咽癌CNE-2干细胞,Western blot检测亲本CNE-2细胞及NPCSCs乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)和核转录因子(NF-κB p65)的蛋白表达,克隆形成实验检测两组细胞的放射敏感性.按2-MeOE2浓度分为3组,分别用0、4、8μmol/L 2-MeOE2处理鼻咽癌干细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8及Transwell检测细胞增殖及迁移能力,再联合X射线(0、2、4、8 Gy)照射,克隆形成实验检测3组细胞放疗敏感性;同时用4 μmol/L 2-MeOE2处理鼻咽癌干细胞后不同时间(0、24、48 h)提取蛋白,Western blot检测不同浓度2-MeOE2处理以及4μmol/L 2-MeOE2处理后0、24、48 h提取的干细胞HIF-1α和NF-κB p65蛋白表达.结果 相对于亲本CNE-2细胞,干细胞HIF-1 α和NF-κB p65蛋白表达明显增高(P均＜0.01),X射线辐射后干细胞各放射学参数D0、Dq、N及SF2均高于亲本CNE-2细胞.0、4、8μmol/L 2-MeOE2处理干细胞后,随浓度增加,致密球状生长的干细胞微球体逐渐变得离散,干细胞增殖活力降低(P＜0.01);迁移能力降低(P＜0.01);放疗敏感性增高,4 μmol/L2-MeOE2组放射增敏比(sensitivity enhancement ratio,SER)为1.19,8μmol/L 2-MeOE2组SER为1.39;HIF-1 α、NF-κB p65蛋白表达降低(P＜0.01),呈浓度依赖性.2-MeOE2(4μmol/L)处理干细胞后随时间延长HIF-1α、NF-κB p65蛋白表达明显降低(P＜0.01),呈时间依赖性.结论 相对于亲本CNE-2细胞,干细胞高表达HIF-1α和NF-κB p65,并且对放疗具有较低的敏感性.2-MeOE2能有效抑制鼻咽癌CNE-2干细胞增殖、迁移并增加其放疗敏感性,其机制可能为2-MeOE2抑制HIF-1α和NF-κB p65蛋白表达.     

姜黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的:研究姜黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白(FN)表达的影响.方法:以大鼠系膜细胞(MCs)为受试对象,将MCs分为7组:①正常对照组(5 mmol/L葡萄糖,NG组),②高糖组(30 mmol/L葡萄糖,HG组),③高糖 6.25 μmol/L姜黄素组,④高糖 12.5 μmol/L姜黄素组,⑤高糖 25μmol/L姜黄素组,⑥高糖 50 μmol/L姜黄素组,⑦高糖 100μmol/L姜黄素组.分别作用24 h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况,用Western Blot法测定细胞内FN蛋白表达.结果:作用24 h后,高糖明显诱导MCs增殖并上调细胞内FN表达.不同浓度姜黄素均能抑制高糖诱导的细胞增生,并抑制FN蛋白表达增加.结论:姜黄素能抑制高糖诱导的MCs增殖,并下调FN蛋白表达,提示姜黄素可能通过阻抑FN表达减少细胞外基质积聚,从而发挥对糖尿病肾脏的保护作用.     

胃复春胶囊提取物对人胃癌细胞系MGC-803细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响*

目的研究胃复春胶囊提取物对人胃癌细胞系MGC-803细胞的凋亡作用及其作用机理。方法 MGC-803细胞分别用不同浓度的胃复春胶囊提取物处理。CCK-8法检测细胞活力;Hoechst 33258染色观察形态学改变;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达。结果 胃复春胶囊提取物（浓度为0～100 μg·mL-1）可以浓度和时间依赖性地降低MGC-803细胞的活力。Hoechst 33258染色显示胃复春胶囊提取物处理后的MGC-803细胞膜通透性增高。流式细胞检测结果显示胃复春胶囊提取物作用于MGC-803细胞后可以诱导细胞凋亡,细胞凋亡率分别为（20.4 ± 2.7）%（25 μg·mL-1）、（41.3 ± 6.2）%（50 μg·mL-1）、（68.8 ± 5.8）%（100 μg·mL-1）,明显高于对照组凋亡率（3.8 ± 1.6）%（0 μg·mL-1）（P<0.05）。MGC-803细胞经过不同浓度胃复春胶囊提取物处理24 h后,处于G0/G1期细胞比例升高,而G2/M期和S期细胞比例下降;免疫印迹实验结果表明胃复春胶囊提取物（浓度为25,50,100 μg·mL-1）处理组 MGC-803 细胞中cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9和Bax表达量升高,而Bcl-2表达量降低,且呈剂量依赖性。结论 胃复春胶囊提取物能抑制MGC-803细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制与下调Bcl-2基因的表达,上调Bax基因的表达以及增加Caspases活性有关。     

辛伐他汀对脂多糖诱导人THP-1单核细胞MCP-1表达与NF—κB活化的影响及机制

目的 通过研究辛伐他汀对脂多糖(LPS)诱导人THP-1单核细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达与NF-κB活化的影响,探讨辛伐他汀调控炎症状态下单核细胞MCP-1表达与NF-κB活化的机制.方法 体外培养人THP-1单核细胞,分为对照组、LPS组、辛伐他汀低、中、高浓度组,辛伐他汀3组加入不同浓度(1、5、10 μmol/L)辛伐他汀预孵2h与LPS组均加入LPS刺激24 h.应用Western blot检测各组细胞质蛋白IκBα、NF-κB p65、MCP-1水平与各组细胞核蛋白NF-κB P65水平,ELISA检测各组细胞培养上清MCP-1水平.结果 辛伐他汀呈浓度依赖性抑制LPS诱导人THP-1单核细胞胞质蛋白与培养上清MCP-1增加;辛伐他汀呈浓度依赖性抑制LPS所致人THP-1单核细胞胞质蛋白IκBα与NF-κB P65降低及核蛋白NF-κB P65增加.结论 辛伐他汀抑制LPS诱导人THP-1单核细胞MCP-1表达可能与其抑制NF-κB活化有关;而抑制NF-κB活化可能与其抑制IκBα降解有关.     

姜黄素抑制膀胱癌T24细胞增殖及Hsp90α的表达

目的 探讨姜黄素对膀胱癌T24细胞增殖以及热休克蛋白90α(Hsp90α)表达的影响。 方法培养T24细胞株,分别用不同浓度姜黄素(0,5,10,5,20 μmol/L)处理细胞24小时和20 μmol/L姜黄素分别处理细胞不同时间(0,6,12,4,48小时),采用四唑盐(MTT)比色法,检测T24细胞的生长抑制率,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),检测Hsp90α 基因mRNA的表达,以蛋白免疫印迹法(Western blotting),检测Hsp90α蛋白质的表达。结果姜黄素处理后的T24细胞代谢MTT能力降低,细胞生长抑制率明显增加;细胞Hsp90α基因mRNA和蛋白质的表达均下调,并且这些效应呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。结论姜黄素可能通过调控Hsp90α的表达而抑制T24细胞的增殖。     

血管紧张素Ⅱ通过NF-κB信号传导途径促进人脐静脉内皮细胞内皮脂肪酶表达

目的 探讨血管紧张素Ⅱ促进内皮脂肪酶(EL)表达的信号传导通路.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为3组:①血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激组:在培养液中加入AngⅡ,使之终浓度为10 μmol/L;②PDTC预处理组:核因子(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)(10mmol/L)预处理HUVECs 1 h后加入AngⅡ(10 μmol/L)刺激;③对照组:不加任何刺激因子.上述各组细胞分别孵育2、4、8、12、24 h后终止实验,收集细胞,采用western blot法检测不同时间各组EL、NF-κB亚单位p65 (NF-κB p65)的表达.结果 ①AngⅡ可以上调HUVECs的EL、NF-κB p65的表达,两者的升高趋势一致.HUVECs经AngⅡ刺激后,在4、8、12 h其EL的表达量较对照组明显增加(P均＜0.05);2、4、8、12h时NF-κB p65的表达量较对照组明显增加(P均＜0.05).②PDT℃可以抑制EL的表达.HUVECs经PDTC处理后,其EL蛋白表达量在作用2、4、8、12、24 h与AngⅡ刺激组比较明显降低(P均＜0.05).结论 AngⅡ可能通过NF-κBp65信号传导通路促进内皮细胞中内皮脂肪酶EL的表达.