培养基成分对云南红豆杉细胞生长和产生乙酰巴卡亭Ⅲ的影响

目的 研究B5培养基主要成分对云南红豆杉Taxus yunnanensis细胞生长和产生10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的影响.方法 利用植物组织培养技术结合HPLC分析手段,通过改变B5培养基中CaCl2、NaH2PO4、(NH4)2SO4和KNO3的质量浓度,研究其对云南红豆杉细胞生长及10-去乙酰巴卡亭Ⅲ量的影响.结果 试验组与对照品相比,B5培养基中高质量浓度的NaH2PO4能够显著促进云南红豆杉细胞生长,CaCl2、(NH4)2SO4和KNO3浓度对细胞生长无显著影响;B5培养基中低质量浓度的CaCl2、NaH2PO4、(NH4)2SO4和KNO3能够显著促进10-去乙酰巴卡亭Ⅲ合成与释放.结论 B5培养基中NaH2PO4为300 mg/L时,能够显著促进云南红豆杉细胞生长,细胞生长最是对照的1.2倍,CaCl2、(NH4)2SO4和KNO3分别在75～300、134～268和2 500～5 000 mg/L对细胞生长无显著影响;B5培养基中CaCl2、NaH2PO4、(NH4)2SO4和KNO3的质量浓度分别为75、75、33.5、625 mg/L时,能够显著促进细胞中10-去乙酰巴卡亭Ⅲ合成与释放,10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的量分别是对照的1.5、1.4、2.4倍.     

清金补肺汤对博莱霉素致大鼠肺纤维化干预作用的研究

目的探讨清金补肺汤对实验性大鼠肺纤维化的保护作用及其相关机制。方法将45只清洁级Wistar雄性大鼠随机分为盐水对照组15只、BLM模型组15只和治疗组15只。模型组和治疗组采用一次性气管内注入BLM诱导大鼠肺纤维化模型,盐水对照组在相同条件下给予等量的生理盐水气管内滴注。治疗组造模后第2天起给予清金补肺汤2 mL灌胃,模型组和盐水对照组给予等量的蒸馏水灌胃。各组分别于造模后第7天、第14天和第28天随机处死5只大鼠,留取血清及肺组织。用酶联免疫吸附测定法检测血清中TNF-α的含量;应用HE染色和Masson染色观察肺泡炎和肺纤维化的动态变化。结果病理切片可见模型组造模成功。模型组大鼠血清中的TNF-α含量较盐水对照组各时间点明显升高(P均<0.01);与模型组比较,治疗组各时间点血清中TNF-α含量均明显降低(P均<0.01)。结论清金补肺汤可降低博莱霉素所致肺纤维化大鼠血清中TNF-α的含量;早期应用清金补肺汤干预治疗博莱霉素致肺纤维化大鼠,可减缓其肺纤维化进程。     

丹参酮对肺纤维化大鼠的干预作用及其机制研究

目的:观察丹参酮对博莱霉素致大鼠肺纤维化的影响及其作用机制。方法:SD大鼠随机分为5组:空白对照组、模型组、地塞米松阳性对照组、丹参酮组、丹参酮加地塞米松组。大鼠气管内注射博莱霉素复制肺纤维化模型后,各给药组腹腔注射相应药物,给药1次/d。28 d后处死动物,取固定部位肺组织分别行HE、Masson染色及电镜进行病理组织学检查;RT-PCR法检测丹参酮对大鼠肺组织中u PA、PAI-1 mRNA表达的影响。结果:与模型组相比,丹参酮组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度明显减轻(P0.05,0.01);u PA显著升高而PAI-1表达明显降低(P0.05,0.01);在与地塞米松联合时以上作用更加明显。结论:丹参酮对博莱霉素所致大鼠肺纤维化具有一定的治疗作用且与地塞米松有协同作用,其机制可能与抑制炎性反应细胞的浸润活化、细胞外基质沉积及调控UPA及PAI-1之间平衡有关。     

人工冬虫夏草联合糖皮质激素对大鼠肺纤维化的干预作用

目的:探讨人工冬虫夏草(虫草菌液)联合糖皮质激素对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的干预作用.方法:50只SD大鼠,随机分为5组:正常对照组、模型组、虫草菌液组、强的松组、虫草菌液联合强的松组(联合组).采用气管内注射博莱霉素建立模型,次日起分别给药灌胃治疗,正常组和模型组给予生理盐水.第28天处死动物,肺组织标本行HE染色及MASSON染色进行病理形态学观察、Ashcroft纤维化评分,碱水解法检测肺组织HYP含量,免疫组化检测肺组织CTGF蛋白表达,酶联免疫法检测肺泡灌洗液上清TGF-β1含量.结果:与模型组相比,虫草菌液、强的松组能够降低肺组织纤维化评分,减少肺组织胶原沉积、HYP含量,下调肺组织CTGF蛋白表达,降低BLAF中TGF-的含量;联合组分别与虫草菌液组、强的松组比较,能够进一步减少肺纤维化评分、胶原面积、HYP含量,进一步下调CTGF蛋白、TGF-蛋白表达.结论:虫草菌液、强的松对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化有治疗作用,且虫草菌液联合强的松能产生协同治疗效果.     

红豆杉提取物紫杉醇对博莱霉素致大鼠肺纤维化的影响

目的：观察红豆杉提取物紫杉醇对肺纤维化大鼠肺组织I型前胶原蛋白（Proαl（I）]和Ⅲ型前胶原蛋白（Proαl（Ⅲ）]含量的影响。方法：120只SD大鼠随机分为6组,通过气管内注射博莱霉素建立肺纤维化模型,静脉给予紫杉醇注射液,以酶联免疫吸附试验法检测Proαl（I）和Proαl（Ⅲ）含量,并进行各组间Proαl（I）和Proαl（Ⅲ）含量比较。结果：第14、21、28天紫杉醇低、中、高剂量组肺组织Proαl（I）含量均低于模型组（P〈0．05）,第21天紫杉醇高剂量组Proαl（I）含量低于强的松组（P〈0．05）,第7、14、21、28天紫杉醇中、高剂量组肺组织Proαl（IH）含量均低于模型组（P〈0．05）,第7、14、21天紫杉醇高剂量组Proαl（Ⅲ）含量低于强的松组（P〈0．05）。结论：紫杉醇脂质体能通过调节肺间质纤维化模型大鼠肺组织Proαl（I）以及Prowl（III）的含量,防止纤维化的形成。     

桔梗皂苷-D对大鼠肺纤维化的干预作用及部分机制研究

目的:研究桔梗皂苷-D(PD)对大鼠肺纤维化的干预作用。方法:50只Wistar大鼠随机分为假手术对照组、模型组、PD 25 mg/kg组、PD 50 mg/kg组、甲强龙组。大鼠一次性气管内滴注盐酸博莱霉素诱导肺纤维化模型。观察各组大鼠的生存状况;检测大鼠血清中I型胶原(C-I)、III前胶原肽(PIIIP)、透明质酸(HA)的含量并进行比较;检测大鼠肺组织TGF-βmRNA的表达情况。结果:PD组大鼠的生存率较模型组高,PD能有效降低大鼠血清中C-I、PIIIP、HA的含量(P0.05),并能下调大鼠肺组织TGF-βmRNA表达(P0.05)。结论:PD可以改善盐酸博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠的一般情况,并通过抑制大鼠肺组织TGF-βmRNA表达,以达到抗纤维化的作用。     

构建以肺纤维化为病理基础的肺气虚证大鼠模型

目的:通过观测大鼠一般情况、肺组织病理和免疫学指标,评价以博莱霉素致肺纤维化为病理基础构建的肺气虚大鼠模型。方法:48只SD大鼠,随机分为空白组和模型组,每组各24只,复制BLMA5致大鼠肺间质纤维化的模型,两组均于造模后每天给予生理盐水灌胃,观测动物一般表现并记录体质量变化,分别于第7、14、28d处死8只大鼠,依次收集大鼠血清和肺组织。通过病理切片HE染色观察肺泡炎分度、MASSON染色观察肺纤维化分级的变化;用ELISA法测定血清中INF-γ、IL-4、IgG含量的变化。结果:(1)模型组大鼠与正常组大鼠比较,呼吸急促,心率加快,精神疲惫,活动量减少,行动迟缓,食量减少,体质量增幅减轻,与气虚的证候特点符合。(2)模型组大鼠早期肺组织以中性粒细胞为主,其次为嗜酸性粒细胞浸润,后期以淋巴细胞、成纤维细胞增生为主。(3)模型组大鼠血清中IgG表达在各时期呈逐渐下调趋势,与正常组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。(4)模型组大鼠血清中IL-4的表达在各个时期呈增高趋势,而IFN-γ的表达在各时期呈逐渐下调趋势,并且IFN-γ/IL-4比值在各时期呈逐渐下降趋势,与正常组比较其差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:以肺纤维化为病理基础构建肺气虚模型是可行的。     

云南红豆杉生长过程中10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量变化

目的 研究云南红豆杉生长过程中不同部位10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-deacetyl baccatinⅢ)的含量变化.方法 采用色谱柱Agilent C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-乙腈-水(42∶13∶45),流速1.0 ml·min-1,柱温32℃,检测波长234 nm,测定云南红豆杉生长过程中不同部位10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量.结果 回归方程 Y = 15.290 29X -4.059 76 (r = 0.999 0),线性范围5.50～550 μg·ml-1;加样回收率(n=6)98.6%,RSD为2.4%.在云南红豆杉生长期树皮中10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量高于枝叶,是枝叶中最高含量的1.498倍;休眠芽分化期和休眠期是10-去乙酰巴卡亭Ⅲ积累的关键时期,在枝叶中的含量显著高于树皮,最高含量达0.115 0%是树皮中最高含量的1.769倍,二年生枝叶中含量略高于一年生枝叶.结论 该方法简便、准确度高,可用于云南红豆杉枝叶的质量控制.     

肺康灵对实验性大鼠肺纤维化的作用

肺康灵可显著降低博莱霉素所致肺纤维化大鼠肺系数，明显减轻肺间质成纤维细胞增生及炎细胞浸润，显著降低纤维化大鼠肺组织羟脯氨酸含量，降低血清过氧化脂质含量及单胺氧化酶活性。     

HPLC法测定东北红豆杉枝叶中10-脱乙酰巴卡亭的含量

目的测定东北红豆杉枝叶中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ(10-deacetylbaccatin Ⅲ,10-DABⅢ)的含量.方法采用RP-HPLC法.C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),甲醇-乙腈-水(203050)作为流动相,检测波长为233.9nm.结果 10-DABⅢ在0.004 75～0.038 μg与峰面积线性关系良好(r=0.999 0),平均回收率为100.5%,RSD为2.0%.结论方法操作简便、灵敏度高、专属性强,可用于红豆枝叶中10-DABⅢ的质量控制.     

美丽红豆杉枝叶中抗肿瘤活性成分的提取与分离

以美丽红豆杉的枝叶为原料,采用一种新的方法提取和分离用以合成高效抗癌药紫杉醇所需的前体———10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ),并对10-DABⅢ的提取、分离、纯化条件进行了优化筛选。采用该工艺方法得到的10-DABⅢ晶体纯度可达91%,得率也在70%以上,从而证实了该工艺路线在生产上是可行的。     

养阴清肺丸抗实验性大鼠肺纤维化作用

目的:探讨养阴清肺丸对实验性大鼠肺纤维化的防治作用.方法:通过气管内注射博莱霉素制造大鼠肺纤维化模型,给予养阴清肺丸4周,观察其对肺组织病理学和相关生化指标的影响.结果:养阴清肺丸显著降低博莱霉素所致肺纤维化大鼠肺系数和肺组织羟脯氨酸含量,明显减轻肺间质成纤维细胞增生及炎细胞浸润;降低血清过氧化脂质含量及单胺氧化酶活性.结论:养阴清肺丸具有抗博莱霉素致大鼠肺纤维化的作用.     

云南红豆杉中10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量的固相萃取-高效液相色谱法测定

目的 建立以固相萃取-高效液相色谱(HPLC)法测定云南红豆杉枝叶中10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量.方法 固相萃取柱:Agilent ODS C18 500 mg/3 ml;色谱柱:Agilent zorbax SB-C18( 250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:甲醇-水-乙腈(35∶55∶10),流速1.0 ml·min-1,检测波长227 nm,柱温30℃.结果 10-去乙酰巴卡亭Ⅲ在 1.6～8.0 μg·ml-1范围内,进样量与色谱峰面积呈良好的线性关系,r=0.999 9,平均回收率为96.8%,RSD为 4.8 %(n= 6).结论 该方法可用于云南红豆杉枝叶中10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量测定,方法稳定,结果准确、可靠.     

丹参对大鼠肺纤维化的影响研究

目的:观察丹参对博莱霉素(BLM)诱导肺纤维化大鼠肺内羟脯氨酸含量变化及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,以探讨丹参防治肺纤维化可能的作用机制.方法:将60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和丹参组各20只.模型组和丹参组大鼠气管内滴注博来霉素(5mg/kg)诱导肺纤维化.造模24h后模型组大鼠用1mL生理盐水灌胃,丹参组大鼠用丹参药液10mL/kg灌胃给药.3组均正常饲养.各组分别在灌胃后第28天处死大鼠,取肺组织样本,按试剂盒方法检测肺内羟脯氨酸含量以判断肺纤维化程度;免疫组化方法检测肺组织CTGF的表达.结果:模型组大鼠肺内羟脯氨酸含量及肺组织CTGF表达均明显升高,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),丹参组肺组织羟脯氨酸含量及CT-GF表达均明显低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:丹参治疗肺纤维化的作用机制可能与其抑制结缔组织生长因子在肺组织中的表达有关.     

虫草复方对博莱霉素致大鼠肺纤维化的作用及其机制

目的探讨虫草复方对博莱霉素致大鼠肺纤维化的作用及其机制。方法 Wistar大鼠随机分为对照组,模型组,复方虫草高、低剂量(150、75 mg/kg)组和醋酸泼尼松(3.33 mg/kg)组,每组18只。除对照外其余各组大鼠采用气管内一次性滴注盐酸博莱霉素造模,对照组大鼠气管内一次性滴注等体积生理盐水。造模后第2天开始给药,对照组和模型组分别ig给予等体积生理盐水。各组动物于7、14、28 d随机处死6只,分别观察大鼠肺指数、肺组织羟脯氨酸(Hyp)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及血清中MDA的量和SOD的活性。同时取固定部位肺组织进行病理组织学检查,并应用免疫组织化学法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原在肺组织中的表达;观察各组大鼠动脉血气的变化。结果虫草复方能明显降低肺纤维化大鼠肺指数和肺组织Hyp的量,并可提高血清和肺组织中SOD活性,降低血清和肺组织中MDA和肺组织TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达;虫草复方可使肺纤维化大鼠动脉二氧化碳分压[p(CO2)]降低和血氧分压[p(O2)]提高;虫草复方明显改善实验性大鼠肺纤维化程度。结论虫草复方对大鼠肺纤维化具有一定的干预作用,其机制可能与抗脂质过氧化、抑制TGF-β1表达、减少肺泡间质胶原沉积及改善肺呼吸功能有关。     

黄芩总黄酮对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用及其机制研究

目的观察黄芩总黄酮对博莱霉素致大鼠肺纤维化的影响及其作用机制。方法 SD大鼠随机分为5组:对照组、模型组、泼尼松龙阳性对照(3.34 mg/kg)组、黄芩总黄酮高剂量和低剂量(50、25 mg/kg)组。大鼠气管内注射博莱霉素制备肺纤维化模型后,各给药组ig给予相应药物,每天给药1次。28 d后处死动物,观察大鼠血清中总抗氧化能力(T-AOC)、还原性谷胱甘肽(GSH)、髓过氧化物酶(MPO)的水平;取固定部位肺组织分别行HE、Masson染色,进行病理组织学检查;RT-PCR法检测黄芩总黄酮对大鼠肺组织中TGF-β1、Smad2、Smad7、α-SMA、胶原I的mRNA表达水平。结果与模型组相比,黄芩总黄酮给药组大鼠血清中T-AOC、GSH水平均升高,MPO水平显著降低;肺泡炎和肺纤维化程度明显减轻(P<0.05、0.01);TGF-β1、Smad2、α-SMA、胶原I基因表达显著降低,Smad7表达显著升高(P<0.05、0.01)。结论黄芩总黄酮对博莱霉素所致大鼠肺纤维化具有一定的治疗作用,其机制可能与抗氧化损伤、抑制炎症细胞的浸润活化及调控TGF-β1/Smad信号通路有关。     

参蛤养肺胶囊对博莱霉素诱发的肺纤维化大鼠的抗纤维化作用

目的 本研究首次对Sheng-Yangfei-Capsules（SGYC）对博莱霉素致大鼠肺损伤和纤维化的抗纤维化作用进行了研究。方法 将动物随机分为6组,在博来霉素造模给药后第7,14和28天处死动物,并分别取肺组织。对于肺损伤和纤维化进行组织学评估,肺标本进行了HE和Masson染色。对各组动物的体重进行了测定并计算肺重量指数,对单核细胞中单胺氧化酶（MAO）和转化生长因子-β1（TGF-β1）的浓度进行了测定。结果 SGYC能够降低博莱霉素诱导肺纤维化大鼠的体重和肺重量指数。病理学证据表明SGYC能够降低博莱霉素诱导的肺纤维化和巩固。 SGYC可降低肺组织中的MAO和TGF-β1活性。结论 这些发现表明,SGYC可能是一种有希望的候选物,可防止博来霉素诱导的肺损伤或其他间质病变。     

灯盏生脉胶囊对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的干预作用

目的:研究灯盏生脉胶囊对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的干预作用.方法:将40只C57BL/6雌性小鼠随机分为盐水对照组(NS)、模型组(Model)、灯盏生脉组(DZSM)和N-乙酰半胱氨酸阳性对照组(N-AC),NS组气管滴注0.1 mL生理盐水,其余3组按5 mg·kg-1剂量滴注博莱霉素溶液复制肺纤维化模型,以后每天分别给予生理盐水、灯盏生脉溶液(222mg· kg-1·d-1)、N-乙酰半胱氨酸溶液(489.6 mg·kg-1)ig治疗,连续给药21 d.实验过程中隔天记录小鼠的生存状态及体重变化,在完成给药后观察肺顺应性和肺阻力的改变状况.留取肺泡灌洗液检测细胞转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)含量,观察博莱霉素引起的肺炎症改变;留取肺组织,测定肺组织中羟脯氨酸含量,并分别行HE染色和Masson's染色,观察肺组织的炎症变化和纤维化程度.结果:给予博莱霉素后,各组小鼠体重显著下降,进食减少,肺阻力升高(P＜0.05),肺泡灌洗液中TGF-β,TNF-α,IL-1β含量显著升高(P＜0.05);灯盏生脉胶囊干预组小鼠体重下降减缓,肺阻力显著下降(P＜0.05),肺泡灌洗液中TGF-β,TNF-α,IL-1β含量明显降低(P＜0.05);肺组织的病理切片显示肺部炎症及肺纤维化程度均有不同程度的减轻.结论:灯盏生脉胶囊能改善博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠的虚弱状态,增强小鼠肺顺应性,降低肺阻力,抑制小鼠的肺组织炎症反应,减轻肺纤维化程度.     

参龙煎剂对博莱霉素致大鼠肺纤维化模型HYP表达的影响

目的:观察参龙煎剂对博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化的防治作用。方法:将大鼠按照体质量随机分为正常对照组、模型组、泼尼松组(5.4 mg/kg体质量)、参龙煎剂组(生药量1.2 g/ml)。按照BLM 5 mg/kg体质量气管内注入,复制大鼠肺纤维化模型。24 h后给药,观察各实验组7 d1、4 d2、8 d时肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量表达的变化。结果:除正常对照组外,其他各组HYP含量明显增强,模型组最强。结论:参龙煎剂可下调BLM致肺纤维化大鼠HYP含量,对肺纤维化有一定的治疗作用。     

气管内注入博莱霉素致大鼠肺纤维化动物模型方法优化分析

气管内注入博莱霉素（BLM—A5）是目前最常用复制肺纤维化动物模型方法。20世纪70年代，Snider等首次用BLM—A5制模成功以来，采用不同动物及不同方式建立的模型逐渐增多（包括猴、犬、兔、豚鼠、大鼠、小鼠），采用多种途径（静脉、腹腔、皮下、气管）给药，均成功建立。其中经支气管给药已是国内外公认的成熟方法。