益精方对小鼠精子线粒体功能的影响

目的观察益精方对环磷酰胺所致少弱精子症模型小鼠精子线粒体功能的影响。方法将40只雄性昆明小鼠随机分为对照组(CG)、模型组(MG)、小剂量中药治疗组(SG)和大剂量中药治疗组(LG)。按60mg/kg体质量给CG小鼠腹腔注射生理盐水(NS),给MG、SG、LG小鼠腹腔注射环磷酰胺,每天1次,连续5d,第6天开始按体质量分别给SG和LG小鼠灌服益精方,剂量分别为人类常规用量(以60 kg为标准)的1倍和5倍,MG小鼠给予等体积的NS灌胃,每天1次,连续34 d,CG常规饲养,然后对小鼠进行精液常规分析,流式细胞术检测精子线粒体功能。结果 CG、MG、SG和LG组小鼠附睾精子密度分别为(5.20±1.34)、(1.73±0.03)、(2.08±0.01)、(3.31±0.56)×106/m L;精子活力[(a+b)级精子百分率]分别为(14.49±0.30)%、(6.64±1.88)%、(11.99±1.01)%、(19.40±3.13)%;精子活率[(a+b+c)级精子百分率]分别为(68.39±15.13)%、(39.96±4.89)%、(62.28±4.43)%、(73.61±5.05)%。MG组精子密度、精子活力、精子活率显著低于CG组(P0.05);经治疗后LG组精子密度、精子活力和精子活率明显增加,与MG组比较有显著性差异(P0.05),而与CG组在精子活力和精子活率上没有明显区别。在CG、MG、SG和LG组,线粒体功能良好精子的百分率分别为(1105.93±0.33)%、(848.55±6.15)%、(888.77±22.46)%、(1000.885±72)%,线粒体功能丧失精子的百分率分别为(27.94±0.32)%、(42.43±1.00)%、(35.11±1.23)%、(30.91±0.44)%,MG小鼠精子线粒体功能良好的表达量明显下降,而线粒体功能丧失的表达量明显增多,与CG小鼠比较均有明显差异(P0.05);经治疗后,LG小鼠精子线粒体功能良好的表达量显著性增加(P0.05),同时线粒体功能丧失的表达量明显减少,与MG小鼠比较有明显差异(P0.05)。结论腹腔注射环磷酰胺可使小鼠精子密度、精子活力、精子活率降低,大剂量益精方可以增加小鼠精子密度,并增加精子线粒体功能,提高精子活力和精子活率,从而达到治疗少弱精子症的目的。     

益精方治疗弱精子症的临床随机对照研究

目的:观察益精方治疗弱精子症的临床疗效。方法:450例患者以信封法随机分为治疗组(益精方组)300例和对照组(五子衍宗丸+左卡尼汀口服液组)150例,经精液常规检查诊为弱精子症,治疗组服用益精方,每天1剂,温水冲服,分2次服用,对照组服用五子衍宗丸+左卡尼汀口服液,五子衍宗丸9 g,口服,每日2次,左卡尼汀口服液,10 ml,口服,每日2次,均治疗3个月,于治疗前及治疗后的第1个月(第27~33天)、2个月(第57~63天)和3个月(第87~93天)分别检测患者的精液常规,比较治疗前后精子浓度、前向运动精子百分率(PR)、精子总活力(PR+NP)等精液参数的变化。结果:两组患者治疗前精液常规检查结果无显著差异(P0.05)。治疗组治疗1、2、3个月时,精子浓度分别为49.66±10.91、55.21±11.46、74.90±13.07(×10~6/ml),PR分别为23.81±2.56、26.12±2.34、32.17±1.62(%),PR+NP分别为34.17±3.43、36.59±3.36、47.08±2.97(%),精液体积分别为3.15±1.06、3.12±0.90、3.27±0.78(ml),液化时间分别为31.68±3.14、30.38±3.44、30.86±2.42(min),组内比较显示,治疗后精子浓度、PR、PR+NP较治疗前差异显著(P0.001),精液体积、液化时间差异不明显(P0.05)。对照组治疗1、2、3个月时,精子浓度分别为40.53±8.32、47.51±12.73、56.14±11.98(×10~6/ml),PR分别为25.17±2.64、27.23±2.25、31.89±2.27(%),PR+NP分别为33.89±2.26、37.38±4.79、40.35±3.06(%),精液体积分别为3.16±1.78、3.15±0.96、3.12±0.65(ml),液化时间分别为29.36±4.25、28.21±3.26、28.33±3.59(min),组内比较显示,治疗后精子浓度、PR、PR+NP较治疗前差异显著(P0.001),精液体积、液化时间差异不明显(P0.05)。组间比较显示,治疗组精子浓度及PR+NP增长率较对照组有显著差异(P0.001),PR增长率两组间差异不明显(P0.05)。结论:益精方可在生精周期多个阶段调控精子的发生,提高弱精子症患者的PR及PR+NP比例,是一种有效的治疗弱精子症的方剂。     

用SYBR Green I实时逆转录-聚合酶链反应定量检测人、小鼠精子中CatSper1 mRNA

目的：建立并优化SYBR GreenI实时RT-PCR体系,定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。方法：用TRIzol分别提取人、小鼠成熟精子中的总RNA,逆转录后用SYBR GreenI实时PCR定量检测CatSper1 mRNA。SYBR GreenI实时PCR采用普通PCR试剂,加入SYBR GreenI染料,优化退火温度、Mg^2＋浓度及上、下游引物比例,并在PCR循环时采用四步法以消除引物二聚体的影响。优化完成后用不同浓度的精子cDNA为模板做标准曲线,以检测SYBR GreenI实时PCR的扩增效率。结果：定量检测CatSper1 mRNA的SYBR GreenI实时PCR体系适宜退火温度、Mg^2＋浓度及上、下游引物比例分别为63℃、3.0mmol/L和1∶1,四步法中采集荧光的温度为88℃。优化后用人和小鼠精子cDNA为模板做标准曲线分别为Y=-3.402log（X）＋25.99和Y=-3.409log（X）＋24.09,扩增效率分别为96.8%和96.5%,可定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。结论：用普通的逆转录及PCR系统和试剂,建立了一种方便、廉价、可靠的SYBR GreenI实时荧光定量RT-PCR系统,可用于人、小鼠精子中CatSper1 mRNA定量检测。     

CatSper与精子超活化

精子超活化是受精前精子运动方式发生改变的过程,Ca2+参与这一过程,诱导精子鞭毛发生不对称运动。CatSper是近来发现的一类仅存于精子鞭毛上的阳离子通道,作为Ca2+内流的通道参与精子超活化过程。现就目前CatSper在小鼠上的研究现状,对其蛋白结构、分布、在精子超活化过程中调节Ca2+的作用以及尚待解决的问题作一综述。     

用SYBR Green I实时逆转录-聚合酶链反应定量检测人、小鼠精子中CatSper1 mRNA

目的:建立并优化SYBR GreenI实时RT-PCR体系,定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。方法:用TRIzol分别提取人、小鼠成熟精子中的总RNA,逆转录后用SYBR GreenI实时PCR定量检测CatSper1 mRNA。SYBR GreenI实时PCR采用普通PCR试剂,加入SYBR GreenI染料,优化退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例,并在PCR循环时采用四步法以消除引物二聚体的影响。优化完成后用不同浓度的精子cDNA为模板做标准曲线,以检测SYBR GreenI实时PCR的扩增效率。结果:定量检测CatSper1 mRNA的SYBR GreenI实时PCR体系适宜退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例分别为63℃、3.0mmol/L和1∶1,四步法中采集荧光的温度为88℃。优化后用人和小鼠精子cDNA为模板做标准曲线分别为Y=-3.402log(X)+25.99和Y=-3.409log(X)+24.09,扩增效率分别为96.8%和96.5%,可定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。结论:用普通的逆转录及PCR系统和试剂,建立了一种方便、廉价、可靠的SYBR GreenI实时荧光定量RT-PCR系统,可用于人、小鼠精子中CatSper1 mRNA定量检测。     

化痰祛湿方对肥胖少弱精子症大鼠模型脂代谢及精子质量的影响

目的:探究化痰祛湿方(HTQSD)对肥胖少弱精子症大鼠脂代谢与精子质量的干预作用及可能机制。方法:8周龄Wistar雄性大鼠,按照体重随机区组法分为空白组,模型组,五子衍宗丸(WZYZP)组,化痰祛湿方(HTQSD)高、中、低剂量组,每组16只。空白组给予普通饲料,其余各组大鼠给予高脂饲料喂养8周。在饲喂相应饲料的同时,空白组及模型组灌胃相同体积生理盐水,WZYZP组给予五子衍宗丸(1.07 g/kg),其余各组给予化痰祛湿方高、中、低剂量(26.25、13.125、6.5625 g/kg),灌药体积均为1 ml/100 g。于实验周期的第1、4、8周末测量各组大鼠的体重,第4、8周末检测血清TG、TC、HDL-C、LDL-C,肝脏、睾丸系数及精子活率和浓度,第8周检测血血红素氧合酶1(HO-1)mRNA表达水平。结果:造模及干预的第8周,与空白组相比,模型组大鼠体重显著增加[(523.1±25.54) g vs(451.50±27.53) g,P0.01],血清TG、TC、LDL-C显著升高[(8.58±0.39)nmol/L vs(2.18±0.28)nmol/L,(4.41±1.44)nmol/L vs(1.68±0.18)nmol/L,(2.06±0.17)nmol/L vs(0.48±0.57)nmol/L,P0.01],血清HDL-C、精子活率、精子浓度、HO-1 mRNA表达显著降低[(27.92±0.40)nmol/L vs(57.47±1.52) nmol/L,(11.31±4.87)%vs(39.66±2.77)%,(31.07±10.52)×10~6/ml vs(65.37±6.30)×10~6/ml, 0.16±0.03 vs 1.06±0.20,P0.01]。与模型组相比,HTQSD中剂量组体重显著下降[(445.13±34.19) g vs(523.1±25.54) g,P0.00],血清TG、TC、LDL-C水平显著降低[(2.05±0.27)nmol/L vs(8.58±0.39) nmol/L,(1.63±0.21) nmol/L vs(4.41±1.44) nmol/L,(0.45±0.07) nmol/L vs(2.06±0.17)nmol/L,P0.01],血清HDL-C、精子活率、精子浓度显著升高[(48.35±3.63) nmol/L vs(27.92±0.40) nmol/L,(32.84±6.22)%vs(11.31±4.877)%,(46.90±6.39)×10~6/ml vs(31.07±10.52)×10~6/ml,P0.01或P0.05],HTQSD低剂量组HO-1 mRNA表达显著增加(0.76±0.13 vs 0.16±0.03,P0.01)。结论:化痰祛湿方可以预防性调节大鼠的血脂,并且其可能通过改善血清中相关的抗氧化物,减轻氧化应激程度,改善少弱精子症大鼠精液质量。     

CatSper蛋白对精子超活化运动和男性不育影响的研究进展

CtaSper通道是目前公认的哺乳动物精子细胞膜上最重要的Ca~(2+)通道,对精子运动、精子超活化和受精功能起着关键作用。Cat Sper蛋白只表达于精子尾部主段,由CatSper1-4和5个辅助单元β、γ、δ、ε和ζ构成。CatSper蛋白是Ca~(2+)功能结构域的主体,在时空上均有序调控精子尾部蛋白酪氨酸磷酸化(P-Tyr),维持了精子超活化运动。CatSper~(-/-)小鼠超活化表现为早发式、爆发式、散发式,能量很快耗尽,超活化提前终止。胞内p H值、膜电位、类固醇激素、多种蛋白质、环腺苷酸类似物等通过调控CatSper通道参与精子超活化、精子游动至受精部位和穿透卵子外膜。近年来,许多研究证实CatSper蛋白功能缺陷会严重影响精子功能,9个CatSper亚基的中任何一个丢失最终导致男性生育功能障碍。本文结合目前最新研究进展,从CatSper蛋白表达、定位、结构、调控等多角度就CatSper对精子超活化和男性不育的影响进行综述。     

口服锌硒宝对少弱精子症患者精子质量的影响

目的 :探讨微量元素锌和硒对少弱精子症患者精子质量的影响。　方法 :34例少弱精子症患者口服锌硒宝 ,5片 /次 ,3次 /d ,连服 90d。每个月末行计算机辅助精液分析 (CASA)。　结果 :服用 6 0d和 90d后 ,患者的精子质量明显改善 ,显效 5例 (14 .7% ) ,有效 2 5例 (73.5 % ) ,无效 4例 (11.8% )。　结论 :补充锌和硒可明显改善少弱精子症患者的精子质量。     

罗布麻宁治疗少弱精子症模型小鼠的作用机制

目的:探讨罗布麻宁在少弱精子症模型小鼠中的治疗作用及其治疗机制。方法:40只雄性小鼠随机分为空白组、模型组、罗布麻宁低剂量治疗组(200μg/ml)和高剂量治疗组(1 000μg/ml),每组10只。除空白组外的各组小鼠腹腔注射环磷酰胺60 mg/(kg·d),连续5 d,构建少弱精子症小鼠模型;罗布麻宁低、高剂量治疗组小鼠给予不同浓度罗布麻宁饮用水,空白组和模型组给予等量洁净水,每只小鼠饮水量(5.1±0.4)ml/d,给予30 d的治疗后,检测小鼠精子质量、睾丸组织病理改变以及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量变化。结果:罗布麻宁治疗后,少弱精子症小鼠的精子浓度由模型组的(2.94±0.57)×106/ml升高到低剂量治疗组的(3.88±0.43)×10~6/ml和高剂量治疗组的(4.12±0.53)×10~6/ml,前向运动精子百分率由模型组的(6.25±3.40)%升高到低剂量治疗组的(8.03±6.71)%和高剂量治疗组的(17.50±2.74)%;病理分析发现治疗组小鼠的睾丸组织损伤有所恢复,小鼠睾丸组织中的MDA水平由模型组的(1.34±0.22)nmol/mg prot分别降低到罗布麻宁低剂量治疗组的(1.13±0.19)nmol/mg prot和高剂量组的(0.98±0.19)nmol/mg prot,SOD水平由模型组的(26.46±4.36)U/mg prot提高到罗布麻宁低剂量治疗组的(32.46±3.28)U/mg prot和高剂量组的(37.39±5.77)U/mg prot,且差异显著(P均0.05)。结论:罗布麻宁可以显著提高少弱精子症小鼠的精子质量,可能是通过清除活性氧自由基,提高机体抗氧化能力实现的。罗布麻宁可用于男性不育的治疗和预防。     

齐墩果酸脂质体对顺铂所致小鼠少弱精子症的保护作用研究

目的:研究齐墩果酸脂质体(OA-Lips)对顺铂所致小鼠少弱精子症的保护作用。方法:将60只ICR小鼠随机分为对照组,模型组,阳性对照组,OA-Lips低、中、高剂量组,每组各10只。OA-Lips低、中、高剂量组每天分别给予25、50和100 mg/kg OA-Lips水溶液灌胃,阳性对照组每天给予50 mg/kg维生素E水溶液灌胃。第28天,除对照组外,其余各组小鼠均给予1次10 mg/kg顺铂溶液腹腔注射,对照组小鼠则给予相同剂量生理盐水腹腔注射。给药3 d后处死小鼠并取材,检测小鼠精子浓度和运动学参数、睾丸组织经HE染色检测,酶联免疫试剂盒测定睾酮水平。结果:与模型组相比,OA-Lips高剂量组活动精子百分率以及精子浓度显著升高(P<0.05)。睾丸组织经HE染色后,相较于模型组,OA-Lips可以显著改善睾丸组织的损伤(P<0.05),对生精小管和间质细胞有一定的保护作用。随着OA-Lips的使用剂量增加,各组小鼠前向运动的精子数量逐渐升高,各剂量组小鼠精子的VCL、VSL、VAP、LIN、STR、WOB、ALH和BCF逐渐升高。OA-Lips各剂量组小鼠血清中睾...     

Panax ginseng induces the expression of CatSper genes and sperm hyperactivation

The cation channel of sperm （CatSper） protein family plays important roles in male reproduction and infertility. The four members of this family are expressed exclusively in the testis and are localized differently in sperm. To investigate the effects of Panax ginseng treatment on the expression of CatSper genes and sperm hyperactivation in male mice, sperm motility and CatSper gene expression were assessed using a computer-assisted semen analysis system, a Fluoroskan Ascent microplate fluorometer to assess Ca2＊ influx, real.time polymerase chain reaction, Western blotting and immunofluorescence. The results suggested that the Ca2＊ levels of sperm cells treated with P. ginseng were increased significantly compared with the normal group. The P. ginseng-treated groups showed increased sperm motility parameters, such as the curvilinear velocity and amplitude of lateral head displacement. Taken together, the data suggest that CatSper messenger ribonucleic acid levels were increased significantly in mouse testes in the P. ginseng-treated group, as was the protein level, with the exception of CatSper2. In conclusion, P. ginseng plays an important role in improving sperm hyperactivation via CatSper gene expression.     

CatSper基因家族在人和小鼠组织中的表达特征

目的研究CatSper基因家族在人和小鼠组织中的分布特点。方法将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA与Affymetrix全基因组芯片探针进行杂交,筛选出差异表达基因CatSper基因家族。RT—PCR验证差异表达基因在不同发育阶段的小鼠睾丸组织的表达特征,及其在人和小鼠不同组织中的分布。结果基因芯片分析发现CatSper1、CatSper2和CatSper3在小鼠睾丸的表达呈阶段特异性。RT-PCR结果表明该基因家族在睾丸的表达丰度明显高于其它组织;CatSper1和CatSper4在人体睾丸组织中特异性表达。结论CatSper基因家族在人和小鼠中呈现睾丸特异性表达或高表达,可能在精子发生中发挥重要功能。     

Effects of dioxin on testicular histopathology,sperm parameters,and CatSper2 gene and protein expression in Naval Medical Research Institute male mice

The CatSper gene family is known to be solely expressed in sperm cells and is possibly associated with sperm motility and penetration through the zona pellucida. Despite its vital role in male fertility, factors regulating its expression are not widely known. The present study aimed at evaluating the effects of dioxin on CatSper2 gene and protein expression, testicular histopathology, sperm quality and biochemical parameters in a mice model. The experiments were performed on 32 Naval Medical Research Institute male mice (2–3 months). The animals were divided into four groups in a random manner: (a) control; (b) dioxin 1; (c) dioxin 2; and (d) dioxin 3. The treatment groups received 0.1, 0.5 and 1 µg/kg of dioxin intraperitoneally every day for 2 weeks. Administration of dioxin significantly downregulated the CatSper2 gene and protein expression. A greater reduction in gene and protein expression was found at higher doses of dioxin. At the same time, sperm parameters, especially sperm motility and count, decreased in mice exposed to dioxin. The results of testicular histopathology showed necrotic degeneration and epithelium thickness reduction in the dioxin groups in comparison with the controls. Besides, oxidative stress increased in seminiferous tubules.     

Single Nucieotide Polymorphisms in a male infertility-related cene CatSper

Aim: To identify the single nucleotide polymorphisms (SNPs) of human CatSper gene, the mouse homologous gene product. Methods: A systematic screening of SNPs in coding regions and flanking intronic regions of human CatSper gene in a sample subset from 210 Chinese Han males by DNA sequencing was demonstrated. PCR single-strand conformation polymorphism (SSCP) analysis was used to determine the allele frequencies of the possible SNPs. Results: Three SNPs, including two novels, were identified and their allele frequencies determined in 210 males. These SNPs were assembled into large SNP database that permits the analysis of the genetic basis of different diseases.     

CATSPER1蛋白与特发性弱精子症关系的研究

目的:探讨CATSPER1蛋白在特发性弱精子症发病中的作用。方法:采用非连续密度梯度离心分离精子,免疫细胞化学技术检测CATSPER1蛋白在特发性弱精子症患者精子中的定位及表达变化;同时用蛋白印迹技术检测CATSPER1蛋白在正常对照组及轻度弱精子症组、中度弱精子症组和重度弱精子症组中表达的差异,进行统计学分析。结果:CATSPER1蛋白定位于精子鞭毛主段;与正常对照组相比,CATSPER1在弱精子症患者中的表达下降,差异具有显著性(t=2.188,P=0.042);CATSPER1蛋白在正常对照组、轻度弱精子症组、中度弱精子症组和重度弱精子症组中的相对含量分别为(0.806±0.266)、(0.669±0.207)、(0.505±0.214)、(0.295±0.162),与对照组相比,CATSPER1蛋白相对表达量在各弱精子症组均存在不同程度的下降,差异存在显著性(P<0.05)。前向运动精子(a+b级)百分率与CATSPER1蛋白的含量成正相关(r=0.633,P=0.000)。结论:CATSPER1蛋白表达下降或异常可能是导致特发性弱精子症发生的一个环节。     

Podocyte expression of human phospholipase A2 receptor 1 causes immune-mediated membranous nephropathy in mice

1. Download : Download high-res image (340KB)
2. Download : Download full-size image