疏肝法对小鼠卵母细胞质量的作用与BMP15/Smads信号通路的关系

目的研究疏肝法对小鼠卵母细胞中BMP-15、BMPRII、ALK6、Smad1/5/8表达的影响,进一步揭示疏肝法提高控制性超排卵小鼠卵母细胞质量的作用机制。方法将200只雌性昆明小鼠随机分为四组:空白对照组、COH组、疏肝低剂量组和疏肝高剂量组,每组50只。按1ml/100g体重进行灌胃,空白对照组及COH组使用蒸馏水灌胃,疏肝低剂量组和高剂量组分别使用逍遥丸0.3g/ml、0.6g/ml灌胃,每日1次,连续10天,第11日疏肝低、高剂量组及COH组均腹腔注射孕马血清促性腺激素,48h后均腹腔注射人绒毛膜促性腺激素,16h后处死小鼠,获取MⅡ期卵母细胞,检测BMP-15、BMPRII、ALK6、Smad1/5/8蛋白及mRNA表达。结果与空白对照组比较,COH组BMP-15、BMPRII、ALK6、Smad1/5/8蛋白及mRNA表达无统计学意义(P0.05);疏肝低、高剂量组BMP-15、ALK6、Smad1/5/8蛋白及mRNA表达增强(P0.05);疏肝高剂量组BMPRII蛋白及mRNA表达增强(P0.05)。结论疏肝法可上调小鼠卵母细胞中BMP-15的表达,诱导其与Ⅱ型受体BMPRⅡ结合,进一步活化ALK6,从而启动信号传导,发挥影响小鼠卵母细胞质量的作用。     

逍遥丸对小鼠卵母细胞BMP-6表达及妊娠结局的影响

目的观察逍遥丸对小鼠卵母细胞BMP-6表达及妊娠结局的影响。方法将160只雌性小鼠随机分为4组:疏肝高、低剂量组;COH组和空白对照组,每组40只;健康雄性小鼠80只,每组20只。应用免疫组化和real-time PCR方法分别测定卵母细胞中骨形态发生蛋白-6(bone morphogenetic protein-6,BMP-6)蛋白和m RNA的表达,并比较各组获卵数、优质卵泡率、妊娠率及子宫胚胎数。结果疏肝高低剂量组及空白对照组妊娠率均高于COH组(P0.05);疏肝高低剂量组卵母细胞BMP-6蛋白及m RNA表达均高于空白对照组和COH组(P0.05),其中疏肝高剂量组表达高于疏肝低剂量组(P0.05)。结论逍遥丸可在促性腺激素应用的基础上增加小鼠妊娠率,其作用机制可能与调控卵母细胞BMP-6的表达,提高卵母细胞质量相关。     

逍遥丸含药血清对体外生长小鼠腔前卵泡卵母细胞中Smads表达的影响

目的探讨逍遥丸提高体外卵母细胞质量的可能作用机制。方法分离58只昆明小鼠腔前卵泡,分别以10%正常大鼠血清,10%逍遥丸低、中、高剂量大鼠含药血清,10%逍遥丸高剂量大鼠含药血清+10μmol/L K02288孵育,设为对照组,疏肝低、中、高剂量组,抑制剂组,培养6天。实时荧光定量PCR法检测卵母细胞中Smad1、Smad5、Smad8 mRNA表达,细胞免疫荧光检测Smad1、Smad5、Smad8和磷酸化的Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)蛋白表达。结果疏肝高剂量组Smad1 mRNA和蛋白高于对照组(P0.05);疏肝各剂量组Smad5、Smad8 mRNA和蛋白及p-Smad1/5/8蛋白均高于对照组(P0.05),其中疏肝高、中剂量组Smad5 mRNA和蛋白比较差异无统计学意义(P0.05),均高于低剂量组(P0.05),Smad8 mRNA和蛋白及p-Smad1/5/8蛋白以疏肝高剂量组最高(P0.05);抑制剂组p-Smad1/5/8蛋白低于疏肝高剂量组(P0.05)。结论逍遥丸提高体外卵母细胞质量的作用可能与上调卵母细胞中Smad1、Smad5、Smad8 mRNA和蛋白及p-Smad1/5/8蛋白表达有关,以高剂量组效果更佳。     

补肾调经方对小鼠体外培养卵泡卵母细胞BMPRⅡ/ALK6-Smads表达的影响

目的观察补肾调经方对小鼠体外培养窦前卵泡成活数及卵母细胞骨形成蛋白Ⅱ型受体(bone morphogenetic protein receptorⅡ,BMPRⅡ)/激活素受体样激酶6-Smads(activin receptor-like kinase6-drosophila mothers against decapentaplegic proteins,ALK6-Smads)信号通路的影响,探讨其提高体外生长卵泡卵母细胞质量的作用机制。方法 65只12日龄健康雌性昆明小鼠,采用机械法分离其窦前卵泡,分别以正常大鼠血清、高、中、低剂量补肾调经方大鼠含药血清、高剂量补肾调经方大鼠含药血清+K02288孵育,分为对照组、补肾高、中、低剂量组(即补肾组)、抑制剂组,普通法体外培养。培养第6天比较补肾组与对照组窦前卵泡成活数,实时荧光定量PCR法检测卵母细胞中BMPRⅡ、ALK6、Smad1、Smad5、Smad8mRNA表达;细胞免疫荧光法检测上述指标和磷酸化的Smad1/5/8(phospho-Smad1/5/8,p-Smad1/5/8)蛋白表达水平。结果与对照组比较,补肾高剂量组窦前卵泡成活数增加,补肾各剂量组BMPRⅡ、ALK6、Smad5、Smad8 mRNA表达水平升高,上述指标及p-Smad1/5/8蛋白表达水平升高,补肾高、中剂量组Smad1 mRNA及其蛋白表达水平升高(P0.05)。与补肾高剂量组比较,抑制剂组p-Smad1/5/8蛋白表达降低(P0.05)。结论补肾调经方能增加体外培养窦前卵泡成活数,提高卵母细胞质量,其作用机制可能与调控卵母细胞中BMPRⅡ/ALK6-Smads信号通路有关。     

补肾调经方对人卵泡壁颗粒细胞BMP/Smads表达的影响

目的 研究补肾调经方对人卵泡壁颗粒细胞Smad1（drosophila mothers against decapentaplegic protein 1）、Smad5、 Smad8及 Smad4表达的影响。方法 将66例接受体外受精－胚胎移植（in vitro fertilization embryo transfer,IVF ET）不孕症患者按1∶2的比例分为中药加长方案控制性超排卵组（简称治疗组, 23例）和长方案控制性超排卵组（简称对照组, 43例）。应用实时荧光定量PCR（real time PCR）法测定取卵日成熟卵泡壁颗粒细胞Smad1、Smad5、Smad8、 Smad4 mRNA的表达;应用细胞免疫荧光方法观察两组颗粒细胞Smad1、Smad5、 Smad8和 Smad4蛋白的表达。结果 治疗组颗粒细胞Smad1 mRNA及蛋白表达显著高于对照组（P<0.05）; 两组Smad5、Smad8和 Smad4 mRNA及蛋白表达差异无统计学意义。结论 补肾调经方提高妊娠率、改善卵巢功能的机制可能与上调壁颗粒细胞Smad1 mRNA和蛋白的表达有关。     

柴胡疏肝散对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的:探讨柴胡疏肝散对肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的作用机制。方法:60只Wistar大鼠被随机均分为6组:正常组、模型组、柴胡疏肝散高、中、低剂量组、柴胡疏肝散预防组。除正常组外,其余各组均采用猪血清ip诱发HF,0.5 m L/只,2次/周,连续10周,5周后即可形成HF。预防组于造模同时给药(以柴胡疏肝散6.3 g·kg-1),柴胡疏肝散高、中、低剂量组[(12.6,6.3,3.15)g·kg-1]于造模第6周给药,连续10周。采用RT-PCR法检测各组肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1),Smad2,Smad3,Smad4和Smad7的mRNA表达,免疫组化法分别检测肝组织TGF-β1,磷酸化Smad 2/3(p-Smad 2/3)和Smad7蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组TGF-β1,Smad2,Smad3的mRNA和TGF-β1,p-Smad 2/3蛋白表达均显著增加(均P0.01),Smad7基因表达显著降低(均P0.01);与模型组比较,柴胡疏肝散中剂量组TGF-β1和Smad3 mRNA表达均显著降低,p-Smad 2/3和TGF-β1蛋白表达显著减弱(P0.05,P0.01),Smad7基因表达显著增加(P0.01)。结论:柴胡疏肝散有明显的抗HF作用,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关。     

逍遥丸对人卵巢壁颗粒细胞ALK5/Smads通路的影响

目的 研究逍遥丸治疗不孕症的可能作用机制.方法 60例接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的不孕症患者中肝郁证者21例(治疗组),其余39例患者为对照组.对照组采用西医常规方案促排卵,治疗组在对照组的基础上口服逍遥丸,每次20丸,早晚分服.测定两组患者成熟卵泡壁颗粒细胞激活素受体激酶5(ALK5)、Smad2、Smad3和Smad4mRNA和蛋白的表达.结果 治疗组颗粒细胞ALK5和Smad2 mRNA及蛋白的表达显著高于对照组(P＜0.05)；Smad3、Smad4 mRNA和蛋白的表达两组比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 逍遥丸治疗不孕症的机制可能与上调壁颗粒细胞受体ALK5和Smad2 mRNA及蛋白,调节ALK5/Smads信号通路而达到促进卵泡发育目的,调节卵巢功能.     

补肾健脾活血方对成骨细胞增殖分化及BMP-2、Smad5影响的研究

目的:研究中药复方补肾健脾活血方对大鼠成骨细胞增殖分化及骨形成蛋白-2 (BMP-2)、Smad5表达的影响。方法:将60只3月龄雌性SD大鼠随机分为空白组、补肾健脾活血方组、阿仑膦酸钠组,每组20只。制备对应的含药血清后分别干预成骨细胞,采用细胞计数法(CCK-8)检测成骨细胞增殖活性,碱性磷酸酶染色(ALP)检测成骨细胞分化能力,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测BMP-2、Smad5 m RNA表达,蛋白免疫印迹法检测BMP-2、Smad5蛋白表达。结果:干预12 h、24 h、48 h时,各组细胞活性逐渐增强,干预48 h后各组细胞活性均降低。干预48 h时,与空白组、阿伦磷酸钠组比较,补肾健脾活血方组细胞活性最强(P<0.05)。补肾健脾活血方组成骨细胞ALP染色最深,明显深于空白组和阿仑膦酸钠组。与空白组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P<0.05);阿仑膦酸钠组BMP-2 mRNA表达降低(P<0.05)。与阿仑膦酸钠组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P<0.05)。结...     

丹芪合剂对DM大鼠肾小管BMP-7及其受体表达的影响

目的 观察丹芪合剂和依那普利对糖尿病(DM)大鼠肾小管上皮细胞骨形态发生蛋白-7(BMP-7)及其受体ALK-3表达的影响,探讨丹芪合剂的药理机制.方法 将SD大鼠分为正常对照组(A组)、糖尿病组(B组)、糖尿病丹芪合剂组(C组)和糖尿病依那普利组(D组).以链脲佐菌素复制DM大鼠模型.于实验12周处死大鼠后测定相应生化指标和肾脏指数,PAS染色观察肾组织的形态结构变化;免疫组化检测肾小管上皮细胞BMP-7和FN蛋白的表达;RT-PCR方法检测肾皮质BMP-7和ALK-3 mRNA水平.结果 ①B组的血糖、甘油三酯和总胆固醇、血肌酐、肾脏指数均显著高于A组并出现明显的蛋白尿,C和D组上述指标除血糖外均明显低于B组.②免疫组化结果显示BMP-7蛋白高表达于A组肾小管上皮细胞胞浆,FN仅有少量表达;B组BMP-7蛋白的表达明显减少,FN表达却明显增多;C和D组肾小管上皮细胞BMP-7蛋白表达显著高于B组,但低于A组,同时FN的表达减少.③RT-PCR结果显示,与A组相比,B组肾皮质BMP-7表达明显减少,且ALK-3 mRNA未见表达,C和D组BMP-7及其受体ALK-3 mRNA表达均显著高于B组,D组ALK-3 mRNA表达甚至高于A组.结论 丹芪合剂和依那普利可能通过促进内源性BMP-7及其受体ALK-3的表达,使FN的沉积减少,从而对糖尿病大鼠肾脏起保护作用.     

益肾填精、补钙壮骨中药复方对骨形成蛋白-4诱导成骨信号转导机制的调控作用

目的研究益肾填精、补钙壮骨中药复方对骨形成蛋白-4（BMP-4）诱导成骨信号转导机制的调控作用。方法将雌性Wistar大鼠随机分为7组：正常组、模型空白组、牡蛎钙补肾中药复方低剂量组、牡蛎钙补肾中药复方中剂量组、牡蛎钙补肾中药复方高剂量组、骨疏康颗粒组、牡蛎碳酸钙咀嚼片组。采用切除大鼠双侧卵巢的方法复制绝经后骨质疏松症模型,应用益肾填精、补钙壮骨中药复方防治12周后进行取材及实验指标检测：用双能X线骨密度仪检测股骨骨密度;用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测大鼠骨组织BMP-4和Smad5、6 mRNA表达。结果与模型空白组比较,中药复方各剂量组股骨骨密度显著升高（P〈0.01）;骨组织BMP-4、Smad5 mRNA表达水平明显升高（P〈0.01）,Smad6 mRNA表达水平明显降低（P〈0.01）。结论益肾填精、补钙壮骨中药复方可明显上调BMP-4和Smad5 mRNA表达,下调Smad6 mRNA表达。     

补肺益肾方对TGF-β1/BMP-4诱导的肺血管平滑肌细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的:探讨补肺益肾方对转化生长因子-β1(TGF-β1)/骨形成蛋白-4(BMP-4)诱导的肺血管平滑肌细胞增殖及TGF-β1/Smad信号传导的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:应用TGF-β1/BMP-4诱导人肺动脉平滑肌细胞增殖。细胞分为正常组(10%正常大鼠血清),诱导增殖组(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4的10%正常大鼠血清),4%补肺益肾方含药血清(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,6%正常大鼠血清及4%补肺益肾大鼠血清),6%补肺益肾方含药血清(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,4%正常大鼠血清及6%补肺益肾大鼠血清)及8%补肺益肾方含药血清组(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,2%正常大鼠血清及8%补肺益肾大鼠血清)。24 h后,显微镜下观察细胞的密度,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,Brd U)法检测细胞增殖,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Smad1,2,3和5以及p-Smad2/3蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1),结缔组织生长因子(CTGF),分化抑制因子-1(ID-1)和ID-2 mRNA的表达。结果:TGF-β1/BMP-4作用24 h后,细胞密度增加、细胞增殖率显著增加(P0.05),补肺益肾方抑制TGF-β1/BMP-4诱导的细胞增殖,显示出浓度依赖性,其中8%浓度显著抑制细胞增殖(P0.01)。TGF-β1/BMP-4及补肺益肾方均不影响Smad1,2,3和5蛋白的表达;但TGF-β1/BMP-4诱导p-Smad2/3的表达(P0.05),8%补肺益肾方显著抑制TGF-β1/BMP-4诱导的p-Smad2/3表达(P0.05)。TGF-β1/Smad2通路的下游效应基因的检测发现,TGF-β1/BMP-4及补肺益肾方均不影响PAI-1,ID-1和ID-2 mRNA的表达;但TGF-β1/BMP-4诱导后,CTGF mRNA表达水平的显著增加(P0.01),8%补肺益肾方抑制TGF-β1/BMP-4诱导的CTGF mRNA的表达(P0.05)。结论:补肺益肾方抑制TGF-β1与BMP-4合用诱导的肺动脉平滑肌细胞的增殖,抑制p-Smad2/3/CTGF通路的活化是可能的作用途径。     

补肾调经方和逍遥丸对体外培养小鼠卵泡中ADAM8 及 ADAMTS-1 影响的比较

目的?探讨补肾调经方和逍遥丸对体外培养小鼠卵泡中去整合素-金属蛋白酶8（ADAM8）和Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶（ADAMTS-1）表达的影响。方法?机械法分离昆明乳鼠窦前卵泡，随机分为空白组、正常组、补肾组、疏肝组，空白组不加血清，正常组加入正常大鼠血清，体外培养12天；补肾组加入补肾调经Ⅱ号方高剂量大鼠含药血清，疏肝组加入逍遥丸高剂量大鼠含药血清体外培养11天。11天时补肾组和疏肝组分别改为补肾调经Ⅲ号方高剂量和逍遥丸低剂量大鼠含药血清体外培养1天。培养12天加入人绒毛膜促性腺激素（hCG）后0、8、12、16 h采用RT-PCR法检测各组卵泡和卵丘卵母细胞复合体（COCs）中ADAM8、ADAMTS-1 mRNA表达，细胞免疫荧光染色法比较各组ADAM8、ADAMTS-1蛋白表达。结果?加入hCG后0、8、12、16 h，各组ADAM8、ADAMTS-1 mRNA及蛋白的表达逐渐升高，各时间点空白组与正常组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。与本组0、8 h比较，补肾组12、16 h ADAM8、ADAMTS-1 mRNA及蛋白表达升高（P<0.05）。与本组0 h比较，疏肝组8 h ADAM8、ADAMTS-1 mRNA及蛋白表达升高（P<0.05）。与空白组和正常组比较，补肾组与疏肝组8、12、16 h ADAM8、ADAMTS-1 mRNA及蛋白表达升高，8 h疏肝组高于补肾组，12 h补肾组高于疏肝组（均P<0.05）。补肾组ADAM8、ADAMTS-1 mRNA及蛋白的表达高峰高于疏肝组（P<0.05）。结论?补肾调经方和逍遥丸均可通过增强ADAM8和ADAMTS-1的蛋白溶解作用，使卵泡壁破裂而诱发排卵，补肾法诱发排卵的作用优于疏肝法。     

止消通脉宁对TGF-β1诱导的HK-2细胞Smad 2、3、7 mRNA表达的影响

目的：探讨止消通脉宁对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、Smad 3、Smad 7的影响。方法：将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1：1)培养基培养;实验分为6组：空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、中药含药血清低剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清中剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清高剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁含药血清)。药物干预24小时后,荧光定量PCR检测Smad 2、smad 3、Smad 7的mRNA表达。结果：HK-2细胞经TGF-β1诱导后, Smad 2、smad 3的mRNA表达显著上升,Smad 7的mRNA表达下降,与空白对照组相比有显著性差异(P＜0.05),但经止消通脉宁含药血清干预后, Smad 2、smad 3的mRNA表达逐步下降,Smad 7的mRNA表达上调,与单纯TGF-β1诱导组相比有显著性差异(P＜0.05)。而空白血清无此作用。结论：止消通脉宁能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路mRNA表达的作用,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。     

姜黄素对肝星状细胞转化生长因子β1及受体和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的探讨姜黄素对体外培养大鼠肝星状细胞(HSC)增殖、转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体、下游信号通路及效应的影响。方法培养HSC细胞,给予不同浓度姜黄素处理,采用MTT比色法检测HSC细胞增殖;Hoechst 33342染色检测姜黄素对HSC凋亡的影响;采用免疫细胞化学法检测Smad3、Smad7蛋白表达;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β1及其I、II受体(TβRI、TβRII)和I、III型胶原(Col-I、Col-III)mRNA的表达。结果姜黄素能抑制HSC细胞增殖,诱导HSC细胞凋亡,免疫组化结果显示姜黄素能抑制HSC表达Smad3,并提高Smad7表达,RT-PCR结果显示姜黄素使HSC细胞TGF-β1及其I、II受体、Col-I、Col-III mRNA表达降低。结论姜黄素能抑制HSC增殖和活化,抑制TGF-β1及其受体和信号通路,是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

单味药鹿茸调控大鼠骨关节炎软骨组织Smad2、3表达的研究

目的观察单味中药鹿茸对大鼠骨关节炎（osteoarthritis,OA）软骨靶器官Smad2、3表达的影响。方法选择3个月龄健康雌性SD大鼠100只,体质量（200±20）g。常规喂养1周后,随机数字表法分成5组：鹿茸低剂量组、鹿茸高剂量组、盐水组、模型组及正常组,每组20只。除正常组外采用经典Hulth方法造模,造模后6周,行病理学观察,确认造模成功,鹿茸低剂量组按0．021g／100g给药,鹿茸高剂量组按0．084g,100g给药,盐水组每天灌服相应的生理盐水,正常组及模型组不予任何处理。于灌胃后2、4、6周,分别取大鼠双侧膝关节软骨,采用免疫组织化学、荧光定量一PCR和蛋白免疫印迹杂交方法分别检测Smad2、3mRNA和蛋白表达。结果病理观察可见成功制备OA模型,免疫组织化学可见Smad2、3蛋白在软骨层广泛表达,且定位于软骨细胞膜内。与模型组比较,鹿茸低、高剂量组在灌胃后2、4、6周Smad2、3mRNA表达量明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）;与同组灌胃后4周比较,灌胃后6周,鹿茸高、低剂量组的Smad2、3mRNA表达量有所下降,差异有统计学意义（P〈0．05）。与模型组比较,鹿茸低、高剂量组Smad2、3蛋白在灌胃后2、4周时,其在软骨细胞中的表达量有明显的升高,差异有统计学意义（P〈0．01）;与同组灌胃后2周比较,鹿茸低、高剂量组灌胃后4周升高更显著,差异有统计学意义（P〈O．01）;与同组灌胃后4周比较,灌胃后6周时鹿茸低、高剂量组Smad2、3蛋白表达降低,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论（1）鹿茸通过调控软骨细胞内Smad2、3基因和蛋白的表达而起到修复软骨的作用。（2）软骨细胞内的Smad2、3基因表达及蛋白水平的上调可能是OA发病的重要机制之一。     

疏肝平喘方通过转化生长因子-β1/Smad信号通路对哮喘小鼠免疫平衡的影响

目的：阐明疏肝平喘方对哮喘小鼠维甲酸相关核孤儿受体γt（RORγt）/叉头框蛋白P3（Foxp3）以及辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）平衡的干预作用,对转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad信号通路的影响。方法：建立空白对照组、哮喘模型组、疏肝平喘组及地塞米松组实验动物模型。酶联免疫吸附试验检测肺组织匀浆中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-17A（IL-17A）和TGF-β1水平,流式细胞仪检测肺组织中Th17/Treg细胞量,蛋白质印迹法检测肺组织中RORγt、Foxp3的蛋白表达,以及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺组织TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA表达水平。结果：疏肝平喘方能够降低哮喘小鼠肺组织IL-6、TGF-β1,与地塞米松比较,差异均有统计学意义（均P<0.05）,调节IL-10、IL-17A,与地塞米松组相当（均P>0.05）;Th17/Treg细胞量,RORγt、Foxp3的蛋白表达量,与地塞米松相当（均P>0.05）。与哮喘模型组比较,疏肝平喘方组、地塞米松组的TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA表达水平下降,而Smad7的mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论：疏肝平喘方在改善气道炎症方面,和地塞米松疗效相当,是通过TGF-β1/Smad信号通路,从而调节哮喘小鼠的Th17/Treg免疫平衡。     

加味茵芍散对肝纤维化家兔TGF-β1、Smad2、Smad4 mRNA表达的影响

目的:从加味茵芍散对肝纤维化家兔转化生长因子-β1(TGF-β1)、丝/苏氨酸激酶2(Smad2)、丝/苏氨酸激酶4(Smad4)mRNA表达的影响探讨该方对肝纤维化的可能作用机制。方法:按0.10mL/kg的用量腹腔注射CCl4诱导复制家兔肝纤维化模型,50只家兔随机分成模型组,秋水仙碱组,加味茵芍散高、中、低剂量组5组,每组10只,通过肝脏病理取材确定肝纤维化病变,同时实时定量逆转录一聚合酶链反应法检测TGF-β1、Smad2 mRNA、Smad4 mRNA的表达。结果:与模型组相比,秋水仙碱组和加味茵芍散高、中、低剂量组家兔肝组织TGF-β1、Smad2 mRNA、Smad4 mRNA表达明显减弱(P0.05);加味茵芍散中、高剂量组与秋水仙碱组相比TGF-β1、Smad2 mRNA、Smad4 mRNA的表达量显著降低(P0.05)。结论:加味茵芍散能减轻纤维组织增生,可以下调TGF-β1、Smad2 mRNA、Smad4的表达。该方对CCl4诱导家兔肝纤维化模型具有一定保护作用、可以延缓肝纤维化的进展,其作用机制可能与调节TGF-β/Smad信号通路有关。     

肝豆扶木汤对TX小鼠肝纤维化的保护作用及机制研究

目的 探讨肝豆扶木汤（Gandou Fumu Decoction, GDFMD）对Wilson病肝纤维化模型TX（toxic milk）小鼠TGF-β1/Smad信号通路表达的影响。方法 60只TX小鼠随机分为模型组、GDFMD高、中、低剂量组和青霉胺组,每组12只,另设正常组12只。GDFMD高、中、低剂量组按31.2、15.6、7.8 g生药/kg进行灌胃,青霉胺组按0.1 g/kg（0.2 mL/10 g）灌胃,模型组和正常组给予等容积生理盐水,每天 1次,连续灌胃4周。采用赖氏法检测血清谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）活力,溴甲酚绿法检测血清白蛋白（albumin,ALB）含量;采用HE染色、Masson染色观察肝组织病理变化;采用RT-PCR和Western blot检测肝组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7 mRNA和蛋白的表达。结果 （1）与正常组比较,模型组血清ALT、AST活力升高,ALB含量降低（P<0.01）,与模型组比较,GDFMD高、中剂量组和青霉胺组ALT、AST活力降低,ALB含量升高（P<0.01）,GDFMD低剂量组AST活力降低,ALB含量升高（P<0.05）。（2）模型组可见肝纤维化特征性病理表现,各用药组均有不同程度改善。（3）与正常组比较,模型组TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白表达升高,Smad7 mRNA和蛋白表达降低（P<0.01）,与模型组比较,GDFMD高、中剂量组和青霉胺组TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白表达降低,Smad7 mRNA和蛋白表达升高（P<0.05, P<0.01）,GDFMD低剂量组TGF-β1 mRNA和蛋白、Smad2蛋白表达降低,Smad7蛋白升高（P<0.05, P<0.01）。结论 GDFMD具有抗肝纤维化作用,其作用机制可能与调控TGF-β1/Smad信号通路相关因子的基因与蛋白表达有关。     

牡蛎钙补肾中药血清对骨形成蛋白-4诱导成骨信号转导机制的调控作用

目的:用血清药理学方法研究牡蛎钙补肾中药血清对离体大鼠成骨细胞中骨形成蛋白-4诱导成骨信号转导机制的调控作用.方法:采用多次胶原酶消化法获得足够数量的成骨细胞(OB),用改良钙钴法测定碱性磷酸酶(ALP)活性以鉴定0B.用含药血清进行细胞培养48h后,用逆转录多聚酶链反应技术(RT-PCR)检测各组0B中BMP-4和Smad5、6mRNA表达.结果:与模型空白组比较,牡蛎钙补肾中药组可明显上调OB中BMP-4和Smad5 mRNA表达,下调Smad6mRNA表达.结论:牡蛎钙补肾中药血清可以提高OB中BMP-4和Smad5基因表达、降低Smad6基因表达,这可能是其防治骨质疏松症的重要机制之一.     

基于Smads信号通路探讨止消通脉宁干预TGF-β1诱导HK-2细胞转分化的研究

目的:探讨止消通脉宁含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化Smad信号通路的影响。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为6组:空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、中药含药血清低剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清中剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清高剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁含药血清)。药物干预24小时后,荧光定量PCR检测TβRI、TβRⅡ的mRNA表达,Western blot检测Smad 2、Smad 3的蛋白表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,TβRI、TβRⅡ的mRNA表达和Smad 2、Smad 3的蛋白表达显著上升,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),经止消通脉宁含药血清干预后,其表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组相比差异有统计学意义(P<0.05)。而空白血清无此作用。结论:止消通脉宁能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。