河北省2008年HIV-1感染者分子流行病学研究

目的利用分子生物学方法,了解2008年河北省新发现的感染者艾滋病病毒1型（HIV-1）毒株基因亚型的分布和变异情况。方法采集2008年河北省检测新发现的HIV-1感染者血样,提取血浆病毒RNA,使用套式聚合酶链反应对gag基因区和env基因区进行扩增并测定其序列。结果采集血样64份,扩增后获得序列共56份,共存在5种亚型。河北省HIV-1流行株主要为B亚型毒株,占43.1%（25/64）;其次是CRF01-AE和CRF07-BC亚型毒株,各占25.9%（15/64）。结论河北省发现了5种HIV-1亚型毒株,B亚型毒株是主要的流行株,CRF01-AE亚型毒株所占比例较以往（2007年）有所下降。CRF-BC亚型毒株所占比例明显上升。可见,随着HIV-1流行时间的推移和传播途径的多样化,HIV-1流行的亚型比例也在发生变化。     

贵州省HIV-1毒株亚型分布研究

目的揭示贵州省HIV-1亚型毒株分布特点。方法用套式PCR扩增HIV-1毒株外膜蛋白并基因测序分析。结果62例样本扩增测序成功52例,其中B亚型3例,B’亚型4例,C亚型2例,E亚型2例,BC重组亚型41例。结论贵州省HIV-1病毒以BC重组亚型流行为主,多亚型并存;提示亚型分布复杂,来源广泛,防治难度大。     

2004-2006年上海市麻疹病毒基因特征分析

目的 对2004-2006年上海市麻疹暴发、流行的野毒株进行基因特征分析和分子流行病学研究,为提出更好的免疫策略,实现麻疹消除目标提供科学依据.方法 采集的血清用ELISA法检测麻疹病毒IgM抗体;用Vero/SLAM细胞对采集的咽拭子标本进行病毒分离,分离到的麻疹病毒株用RT-PCR方法扩增其核蛋白基因C端的部分序列,并对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,以C端456个核苷酸为目的 片段进行基因亲缘性关系分析.结果 2004-2006年上海市疾病预防控制中心对148例疑似麻疹病人的血清进行麻疹IgM抗体检测,132份血清阳性,148份咽拭子中分离到66株麻疹野病毒,阳性率分别为89.2%和44.6%.病毒分离阳性标本的对应血清麻疹IgM抗体检测均为阳性.分离到的66株麻疹野毒株均为H1基因型,除Shanghai04-5为H1b基因亚型外,其余均为H1a基因亚型.所有分离毒株之间的核苷酸同源性为95.8%～100%,氨基酸同源性为95.8%～100%.所有毒株与中国疫苗株S191的核苷酸同源性为91.2%～93.2%,氨基酸同源性为86.8%～90.1%;与疫苗株Changchun-47的核苷酸同源性为92.5%～93.4%,氨基酸同源性为88.2%～91.4%.结论 引起2004-2006年上海市麻疹暴发、流行的野毒株为HI基因型,并以H1a为绝对优势亚型.上海市2005年和2006年可能都有一个主传播链的存在.     

2002-2004 年天津市流行的麻疹病毒株的基因型分析

目的：探讨2002-2004年天津市流行的麻疹病毒株基因型别。方法：采用B95a细胞培养法分离麻疹病毒（MV），用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法扩增分离出的MVN基因C端片段，并进行序列分析确定我市流行的MV型别，构建种系发育树，进行遗传距离、基因变异分析。结果：天津市2002-2004年分离到的16株MV经RT—PCR和序列分析后显示均为H1基因型，亚型分析1株为H1b亚型，15株为H1a亚型。结论：我市分离出的MV均为H1型，其中又以H1a占绝对优势，提示H1a型为我市的优势流行株。     

安徽省淮南市2012-2013年流感病毒细胞分离及其流行特征分析

目的：观察安徽省淮南市2012-2013年流感病毒细胞培养分离结果,研究淮南市流感流行特征,为该市流感防控提供科学依据。方法实时荧光定量PCR法对哨点医院送检咽拭子标本进行核酸快速分型后采用狗肾（ MDCK）传代细胞培养法分离病毒,红细胞凝集试验（ HA）鉴定病毒滴度,红细胞凝集抑制试验（ HI）进行型和亚型的鉴定。结果从148份流感网络实验室实时定量PCR阳性标本中,分离出流感毒株68株,总分离率45．9％,其中 A1（H1N1）型26株,分离成功率56．5％,A3（H3N2）型25株,分离成功率33.3％;BY型4株,BV型13株,B型毒株分离成功率为63．0％;各型毒株的分离成功率差异有统计学意义（P＜0．05）。2012年淮南市流行株为BV型流感病毒,于3月份达到流行高峰;2013年流行株为A（H1N1）型流感病毒,流行高峰期则是12月份。结论淮南市2012-2013年甲型流感病毒抗原的变异性强;细胞培养分离病毒对流感流行的病原鉴定起决定性作用;流感病毒B型毒株和新A（H1N1）型毒株分离成功率较高。     

河北省未治疗患者体内HIV毒株耐药基因检测研究

目的 研究河北省未接受抗HIV治疗患者体内HIV毒株耐药突变情况,为开展临床抗病毒药物治疗和制定合理的用药方案提供数据支持.方法 RT-PCR技术扩增HIV pol区基因,双脱氧法测定HIV基因序列,并使用Contig Express软件处理原始核苷酸序列,与Stanford Hiv Drug Resistance Database （hivdb.stan -ford.edu） 进行对比分析耐药突变情况.结果 10例患者HIV毒株基因亚型分析结果均为B亚型.发现存在大量逆转录酶和蛋白酶抑制剂继发耐药变异.结论 河北省未治疗患者体内HIV继发耐药变异的存在提示要及早进行耐药检测,适时调整治疗方案.     

柯萨奇病毒A组16型毒株的分离及其生物学特性初步分析

 目的  对柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CA16）毒株进行分离、鉴定,并分析其生物学特性,为CA16疫苗候选毒株的筛选奠定基础。方法  从手足口病患者的咽拭子或疱疹液样本中分离CA16毒株,经噬斑纯化后,用逆转录-聚合酶链反应进行病毒鉴定。将病毒连续传代后,对其VP1基因进行序列测定,分析VP1基因和氨基酸序列的同源性和遗传稳定性。结果  通过Vero细胞适应传代和噬斑纯化,获得遗传稳定的CA16毒株,感染Vero细胞后引起典型的细胞病变。病毒分离株经CA16特异性引物扩增后可见208 bp的特异性条带,经VP1基因测序进一步确定这些分离株为CA16。同源性和系统进化树分析表明,各毒株与shzh04-J31株的同源性最高,为92.4%~96.1%,均属于C基因亚型。病毒分离株在Vero细胞上连续传12代后,仅1株病毒的1个氨基酸发生改变。结论  成功分离到CA16毒株,其生物学特性稳定,可用于CA16疫苗的研发。     

天津市2001年-2004年流感病原学监测分析

目的：观察天津市流感病毒流行特点以及发生禽流感疫情时的情况。方法：2001年10月-2004年3月3个冬春季的类流感患者咽拭子标本采用MDCK细胞和鸡胚双腔法分离流感病毒，用鸡红细胞和豚鼠红细胞凝集试验（HA）证实是否存在病毒，再用红细胞凝集抑制试验（HI）进行型和亚型的鉴定。2004年用RT—PCR方法检测禽流感疫情区发热患者咽拭子标本。结果：3个监测周期共采集类流感样患者咽拭子标本953份．分离出流感毒株285株，总检出率为29、9％，男女比例为1．06：1，其中A（H1Nl）亚型4．6％（13／285株），A（H3N2）亚型59．6％（170／285株），B型35．8％（102／285株）。285株流感病毒都能适应MDCK细胞，但阳性标本液直接接种鸡胚阳性率极低，仅为2．1％（6／285）。21份禽流感监测咽拭子标本H5亚型RT—PCR结果为阴性。结论：天津地区同时存在A（H1N1）、A（H3N2）和B型流感病毒，12月为发病高峰。天津市2004年发生禽流感时未发现人感染H5亚型禽流感病毒。     

我国近期分离的6株狂犬病病毒的糖蛋白基因序列分析

目的  分析我国近期分离的6株代表性狂犬病病毒（rabies virus,RV）的糖（G）蛋白基因序列,了解RV街毒株与疫苗株在核苷酸和氨基酸序列水平的差异。方法  对6个RV街毒株G基因进行逆转录和PCR扩增,经纯化、克隆、测序后获得6条G基因全长序列,采用生物信息学软件对G基因序列进行分析。结果  6个街毒株的G蛋白在核苷酸水平的同源性为97.7％～100％,在氨基酸水平的同源性为97.9%~100%;与CTN-181疫苗株的核苷酸序列同源性最高,为86.7%~87.2%,氨基酸序列同源性为92.7%~93.1%。结论  6个RV街毒株的G蛋白在核苷酸及氨基酸水平上均有变异,但与CTN-181疫苗株关系最近,表明CTN-181疫苗株可能为我国境内流行的狂犬病提供良好的预防作用。     

贵州省3株甲3(H3N2)亚型流感病毒的血凝素基因HA1区序列分析

目的对贵州省3株甲3(H3N2)亚型流感病毒的血凝素基因HA1区序列进行分析。方法提取核酸,PCR扩增,测序分析、比对。结果同源性分析和系统发育树都说明了相同(或相近)年份的毒株核苷酸序列同源性较高,亲缘关系较近;不同年份的毒株核苷酸序列的同源性较低,亲缘关系较远;3株H3N2毒株共有59各位点核苷酸替换。结论通过序列测定分析,结果表明1995-2005年纵向比较,贵州省甲3(H3N2)亚型流感病毒的血凝素基因HA1区序列发生了变异;通过与Genbank上相应年份标准株横向比较,贵州省3株甲3(H3N2)亚型流感病毒的血凝素基因HA1区序列未发生大的变异,仅有少数核苷酸的替换。     

艾滋病病毒耐药研究的新进展(摘要)

由于未采用最佳治疗方案或者病人未能坚持高效抗逆转录病毒疗法(HAART),导致人体免疫缺损病毒-Ⅰ(HIV-1)耐药的出现。然而,即使患者能够很好地坚持HAART治疗,也很难长期维持检测水平以下的病毒载量。通常来说,单个HIV-Ⅰ靶基因的变异,即可特异性导致病毒对相应抗逆转录病毒药物的耐药。但是,应用3种药物联合治疗时,病毒至少需要有针对3种抗逆转录病毒药物的变异才会引起耐药和治疗失败。这些耐药突变的出现常为暂时性的,并与药物的半衰期(t1/2)和耐药株的病毒活力有关。特异性的耐药突变在主要的药物种类中,即核苷类似物逆转录酶抑制剂(NRTI,如nevi-rapine)、非核苷类似物逆转录酶抑制剂(NNRTI,如AZT)、蛋白酶抑制剂(PI,如nelfinavir)和整合酶抑制剂(INI,如raltegra-vir),已广为人知。然而,由于HIV-1的基因背景及二次变异的差异,病毒的耐药水平可能高低不一。另外,特异性的抗逆转录病毒药物CCR5拮抗剂(如maraviroc)可通过多种未知机制及途径选择耐药突变。基于在乌干达、中国、阿根廷和其他一些国家的研究,本研究所研发了1种检测耐药的新技术。该技术不仅可检测B亚型(主要流行于欧洲和北美),还可检测其他不同亚型HIV中新出现的耐药。为更好了解表型耐药情况,还研发了1种新的应用PCR技术从患者体内快速扩增HIV靶基因,利用酵母重组技术克隆其进入HIV基因组中。然后用产生的嵌合病毒做药物敏感试验。较之细菌克隆技术、酵母重组技术允许克隆更大的HIV基因,且不需要特别的克隆位点。由于表型分析法更为常用且费用较高,也研发了1种基因型耐药分析法。该方法是在绝大多数耐药突变位点上应用特异性寡核苷酸连接法分辨出该突变位点的存在与否。耐药突变的频率由多功能流式荧光检测仪测定。     

90岁以上老年人心电图变化分析

目的：观察90岁以上老年人心电图变化特点。方法：按国际标准描记39例90岁以上老年人（观察组）和56例20－45岁健康人（对照组）12导联体表心电图,测量心率、PR间期、QT间期,且进行统计分析。结果：心率对照组为（82±12）／min,观察组为（68±10）／min（P〈0．05）;PR间期对照组为（161±22）ms,观察组为（192±31）ms（P〈0．05）,QTc对照组为（32．14±10．16）ms,观察组为（48．51±18．22）ms（P〈0．05）,QTcd对照组为（36．65±14．13）ms,观察组为（55．23±20．18）ms（P〈0．05）。结论：90岁以上的老年人心电图心率相对偏慢,PR间期相对延长,QTc和QTcd显著增加。     

肾康注射液治疗慢性肾功能衰竭的临床观察

目的 观察肾康注射液对慢性肾功能衰竭（CRF）的疗效.方法 将100例CRF患者按随机数字表法分为2组.在常规治疗基础上,观察组50例：肾康注射液60ml加入0.9％氯化钠注射液250 ml中静脉滴注,1次/d,疗程为14 d;对照组50例：丹红注射液20ml加入0.9％氯化钠注射液250 ml中静脉滴注,疗程14 d.分别对治疗前后临床疗效和血尿素氮、肌酐、内生肌酐清除率、血红蛋白进行评价.结果 观察组治疗后总有效率高于对照组,血尿素氮、肌酐较对照组低,内生肌酐清除率、血红蛋白较对照组高,差异均有统计学意义[90.0％（45/50）比74.0％（37/50）,（14±8）mmol/L比（25±11） mmol/L,（422±112） μmol/L比（573±126） μmol/L,（19±8） ml/min比（14±8）ml/min,（77±18） g/L比（66±14） g/L]（均P＜0.05）.结论 肾康注射液治疗CRF疗效确切,可延缓CRF的疾病进展,不良反应少,患者依从性好.     

Mechanism of drug resistance due to N88S in CRF01_AE HIV-1 protease, analyzed by molecular dynamics simulations

Nelfinavir (NFV) is a currently available HIV-1 protease (PR) inhibitor. Patients in whom NFV treatment has failed predominantly carry D30N mutants of HIV-1 PRs if they have been infected with the subtype B virus. In contrast, N88S mutants of HIV-1 PRs predominantly emerge in patients in whom NFV treatment has failed and who carry the CRF01_AE virus. Both D30N and N88S confer resistance against NFV. However, it remains unclear why the nonactive site mutation N88S confers resistance against NFV. In this study, we examined the resistance mechanism through computational simulations. The simulations suggested that despite the nonactive site mutation, N88S causes NFV resistance by reducing interactions between PR and NFV. We also investigated why the emergence rates of D30N and N88S differ between subtype B and CRF01_AE HIV-1. The simulations suggested that polymorphisms of CRF01_AE PR are involved in the emergence rate of the drug-resistant mutants.     

乙醛脱氢酶1与乳腺癌的分子亚型和临床病理特征的相关性

目的：探讨乙醛脱氢酶1（ALDH1）在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌分子亚型和临床病理特征的相关性。方法应用免疫组织化学方法检测和比较20例乳腺癌癌旁正常乳腺组织、20例良性乳腺肿瘤组织及80例乳腺浸润性导管癌组织（Luminal A型、Luminal B型、Her-2过表达型、Basal-like型各20例）中ALDH1的表达情况,统计分析乳腺癌组织中ALDH1的表达与其分子亚型和临床病理特征的相关性。结果在20例乳腺癌癌旁正常乳腺组织及20例良性乳腺肿瘤组织中,ALDH1均呈阴性表达;80例乳腺浸润性导管癌组织中,ALDH1呈阳性表达者17例（21.25％）,阳性表达率显著高于乳腺癌癌旁正常乳腺组织及良性乳腺肿瘤组织（P0.007）。ALDH1的阳性表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移、CK5/6、TopⅡ、Ki-67表达均无关,与ER、PR状态具有显著相关性（P〈0.01）。结论乳腺癌组织中,ALDH1呈阳性表达,与乳腺癌的发生和分子分型有关,可能有助于乳腺癌的诊断、分型及预后预测。     

干扰素-α治疗慢性乙型肝炎疗效与HLA—DRB1等位基因相关性研究

目的探讨人白细胞抗原-DRB1等位基因与干扰素-α治疗慢性乙型肝炎疗效的关系。方法以45例接受干扰素治疗24个月的慢性乙型肝炎患者做为研究对象,应用聚合酶联．序列特异性引物（PCR—SSP）技术对患者的HLA-Ⅱ类抗原的DRB1＊07进行等位基因检测,SPSS10．0统计软件进行结果分析。结果45例慢性乙型肝炎中有应答的32例,占71．1％,无应答的13例,占28．9％。无应答组中HLA—RB1＊07出现频率较应答高。结论干扰素-α治疗无应答与HLA-DRB1＊07相关。检测HLADRB,等位基因有助于临床医师预测患者对干扰素的疗效。