氟尿嘧啶抗血管生成作用的实验研究

目的：探讨氟尿嘧啶(5-FU)的抗血管生成作用。方法：以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)原代培养模型，MTT法测定5-FU对HUVEC增殖的影响；采用鸡胚尿囊膜血管形成模型(CAM模型)，观察5-FU对鸡胚尿囊膜新生血管的抑制作用。结果：5-FU在非细胞毒浓度下可在体外抑制HUVEC的增殖，在体内抑制鸡胚尿囊膜新生血管形成。结论：5-FU在非细胞毒浓度下具有抗血管生成作用。     

改良鸡胚尿囊膜肿瘤实验动物模型及其生物学行为观察

目的利用鸡胚尿囊膜建立人移植瘤模型并观察其生物学行为和组织学形态已有报道。但是,在实际工作的过程中仍存在不少的问题。因此,通过改良的方法,获得简单,快捷,可重复的动物模型。方法将人胶质瘤SWO-38细胞滴加到鸡胚尿囊膜上,观察影响鸡胚的存活和成瘤的可能因素、移植瘤的生长特性和形态学特征。结果利用改良的方法成功建立胶质瘤鸡胚尿囊膜的模型;肿瘤组织能够诱导血管生成,镜下形态符合恶性胶质瘤的形态学特征。结论该模型简单,快捷,易于建立。便于观察肿瘤组织的生物学行为,可用于抗肿瘤的药物筛选。     

椿皮对鸡胚尿囊膜血管生成的影响

目的:研究收涩中药椿皮对鸡胚尿囊膜血管生成的影响。方法:建立鸡胚绒毛尿囊膜血管模型,观察椿皮含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响。结果:椿皮对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管数目有一定抑制作用。结论:椿皮对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成具有抑制作用。     

一种新的检测鸡胚尿囊膜血管生成的方法

目的：建立一种利用高铁氰化钾法检测鸡胚尿囊膜（CAM）血管生成的方法.方法：分离发育期鸡胚尿囊膜并将其匀浆,加入高铁氰化钾溶液,用紫外分光光度计测量A值,通过标准品计算样品中血红蛋白的含量.结果：采用该方法测定了发育7及9d的鸡胚尿囊膜血红蛋白含量,以及中等强度静磁场对不同发育阶段新生血管的抑制效应,而且与体视显微镜结果一致.结论：高铁氰化钾法是一种实用的可定量检测鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的实验方法.     

一氧化氮释放型阿司匹林对荷瘤小鼠前列腺癌血管形成的抑制作用

目的探讨一氧化氮释放型阿司匹林(NO-ASA)对小鼠皮下种植前列腺癌的生长及肿瘤血管形成的抑制作用。方法皮下荷前列腺癌小鼠体内注射NO-ASA后监测肿瘤生长情况;处死小鼠后以ELISA法检测小鼠血清VEGF的表达,实时定量PCR法检测肿瘤中VEGF mRNA的表达,免疫组化法检测肿瘤中CD34的表达并量化微血管数目,以未注射NO-ASA的皮下荷前列腺癌小鼠为对照。受精鸡胚尿囊膜(HET-CAM)试验检测NO-ASA在体外对血管形成的影响。结果小鼠体内注射NO-ASA后皮下种植的前列腺癌的生长受到抑制,小鼠血清以及肿瘤组织的VEGF表达明显降低,肿瘤组织中的CD34表达减少,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。NO-ASA对受精鸡卵尿囊膜上的血管生长也有明显抑制作用。结论 NO-ASA可抑制前列腺癌肿瘤生长和血管形成。     

鸡胚肿瘤血管生成模型的建立

血管生成是肿瘤生长与转移的重要条件，阻断血管生成是抑制肿瘤生长，防止转移的有效方法。建立血管生成模型，对于研究肿瘤的复发与转移及肿瘤血管生成抑制因子提供了条件。本文将鸡胚尿囊膜肿瘤血管生成模型建立方法介绍如下：材料与方法一、鸡胚：孵化箱孵育5－7天经检卵灯检发育正常种蛋（黑龙江省农业现代化研究所提供）二、瘤株；Lewis肺癌；B16黑色素瘤均由上海市肿瘤研究所引进，继续传3代以上。选择生长期组织。剪成1－2mm3小块备用。三、接种方法：（一）5－7天鸡胚在5％CO2、38．5℃湿化空气孵育箱内孵育2天于检卵灯下检视，在…     

胃癌细胞鸡胚移植模型中血清基质金属蛋白酶9检测意义

目的 :测定胃癌细胞接种至鸡胚绒毛尿囊膜后的成瘤过程中鸡胚血清基质金属蛋白酶 9( MMP- 9)含量变化。方法 :利用形态学方法观察胃癌细胞接种至鸡胚绒毛尿囊膜后的成瘤过程 ,并通过酶联免疫吸附测定 ( ELISA)法检测不同时间点鸡胚模型血清中 MMP- 9含量的变化 ,并结合胃癌生物学行为进行分析。结果 :1× 1 0 6·ml-1 胃癌细胞组于接种 72 h后 ,出现肉眼可见独立结节 ,随时间推移 ,结节体积增大 ,且鸡胚绒毛尿囊膜上较大血管向结节处集中 ;1× 1 0 6·ml-1胃癌细胞组 ,72 h后血清 MMP- 9含量明显增高 ,至 7d时达到最高值。结论 :胃癌细胞的成瘤过程中 MMP- 9水解酶含量明显增加 ,此模型用于胃癌特性的研究是可行的。     

天花粉蛋白抗小鼠H22肿瘤作用的研究

对天花粉蛋白注射液（TCS）抗BALB/c小鼠体内H22肿瘤的作用进行了初步研究。建立移植型H22肝癌小鼠模型,腹腔注射TCS治疗,检测抑瘤率、皮内肿瘤微血管新生等指标,并通过细胞流式分析和体外鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）实验对其抗肿瘤作用机制进行探讨。结果显示,TCS治疗组实体瘤重与皮内肿瘤微血管新生数都明显小于模型对照组（P<0.01）。证明TCS通过抑制血管生长表现出一定的抗小鼠体内H22肿瘤生长的作用。     

人内皮抑素基因的克隆及其表达产物抗肿瘤活性

目的：克隆人内皮抑素（endostatin)基因并对其表达产物进行抗肿瘤活性研究。方法：从人肝cDNA文库中获得人endostatin基因，构建人载体PET15b，在大肠杆菌BL21（DE3）中表达，将表达产物（rhEndostatin)纯化后应用于小鼠Lewis肺癌治疗，并通过鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）实验。观察rhEndostatin的血管抑制作用。结果：rhEndostatin可抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管形成，明显抑制小鼠Lewis肺癌的生长。结论：rhEndostatin具有抗肿瘤活性。且此活性可能与其抑制肿瘤新生血管形成有关。     

几种收涩中药对鸡胚尿囊膜血管生成影响的实验研究

目的研究收涩中药乌梅、椿皮、金樱子、五味子、五倍子、赤石脂、禹余粮对鸡胚尿囊膜生成的影响。方法采用血清药理学方法,制备收涩药物的大鼠血清;建立鸡胚绒毛尿囊膜模型,并应用鸡胚绒毛尿囊膜模型进行活性筛选。于鸡胚发育的第5天,将加药物血清后的明胶海绵载体加于鸡胚绒毛尿囊膜上,孵育48h后,固定鸡胚绒毛尿囊膜,取出,采用医用图像采集系统分析结果。结果收涩药物金樱子、五味子、五倍子、乌梅、赤石脂、椿皮对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管数目有一定抑制作用（P〈0．05）;乌梅组、椿皮组对抑制新血管生成有一定的趋势,与空白对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论收涩中药对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管有一定的抑制作用。     

小鼠宫颈癌腹水瘤U_(14)及其亚株侵袭特性的初步研究

本文将小鼠宫颈癌腹水瘤u_(14)和经本教研室活体筛选出的倾向于肺转移的u_(14)A-P_(11)和倾向于淋巴转移的u_(14)-AL_(10)两亚株,用鸡胚绒毛尿囊膜接种的体内方法和与经胰酶不同处理的BALB/C小鼠腹膜组织共同培养的体外方法,对三种瘤细胞的侵袭特性进行研究。结果证明,三种瘤细胞体内转移倾向的差异与其对鸡胚绒毛尿囊膜基质和小鼠腹膜基质的侵袭能力成正相关,表明瘤细胞转移的器官倾向性与瘤细胞的侵袭力有一定的关系。     

龙葵碱对人结肠癌鸡胚移植模型血管生成的影响

目的：建立人结肠癌鸡胚移植模型,研究龙葵碱对其血管生成的影响。方法将鸡胚分为对照组和低剂量组、中剂量组、高剂量组（均n＝10）,将培养的人结肠癌细胞系HT‐29细胞株接种到鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）上,通过立体显微镜、Image‐proplus6．0图像分析软件及免疫组织化学苏木精‐伊红（HE）染色法,观察移植瘤在CAM上血管生成的特点,及不同龙葵碱剂量对血管生成的影响。结果HT‐29细胞接种到CAM第3～5天,大量血管向瘤体集中,长入或跨越瘤体表面,肿瘤迅速生长。给药后第5天进行拍照,图像分析,定量计算血管新生面积明显低于对照组,且呈剂量依赖性,各组间差异有统计学意义（P＜0．01）。免疫组织化学检测表明不同剂量龙葵碱的微血管密度明显低于对照组,与血管新生面积相一致;ki‐67抗原表达指数逐渐下降,实验组低于对照组,且各组间差异有统计学意义（P＜0．01）。结论龙葵碱能明显抑制人结肠癌HT‐29细胞株诱导的血管生成,从而抑制肿瘤的生长,为抗肿瘤血管生成的治疗方面提供了重要依据。     

益气养阴方抗血管生成作用的实验研究

目的：探讨益气养阴方抗鸡胚绒毛尿囊膜（Chick chorioa—llantoic membrane,CAM）血管及肿瘤细胞诱导CAM血管生成的效应。方法：制备CAM模型及接种肿瘤细胞的CAM模型,采用血清药理学方法制备含药血清。观察含药血清对CAM血管和肿瘤细胞诱导CAM血管生成的影响,并与生理盐水血清组对照。结果：益气养阴方含药血清可抑制CAM血管及肿瘤细胞诱导的CAM血管生成,各剂量含药血清组血管数目（高剂量组：9．662±0．599,中剂量组：9．682±0．818,低剂量组：10．242±0．640）与血管面积（高剂量组：8878．500±1870．115,中刺量组：9369．750±3206．427,低剂量组：11226．875±2665．071,mm^2）均较对照血清纽（10．511±0．990,12759．375±4379．058,mm^2）明显减少,与生理盐水对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：益气养阴方对血管生成有明显抑制作用。     

益气养阴方抗血管生成抑制肿瘤转移作用的研究

[目的]研究益气养阴方抗血管生成抑制肿瘤转移的效应。[方法]制备接种肿瘤细胞的鸡胚尿囊膜(CAM)模型,采用血清药理学方法制备含药血清。观察含药血清对肿瘤细胞诱导CAM血管生成的影响,并与生理盐水血清组对照。另用小鼠经肌肉接种U14子宫颈癌细胞悬液,观察小鼠实体瘤的瘤质量、抑瘤率、肺部转移率、肺部转移瘤生长情况。[结果]益气养阴方含药血清可抑制肿瘤细胞诱导CAM血管生成,与生理盐水组比较差异具显著性。益气养阴方组的肺部转移结节较模型组明显减少,并且明显改善化疗对机体的免疫损伤。[结论]益气养阴方对肿瘤细胞诱导的CAM血管生成有明显抑制作用,并且益气养阴方对自发性转移模型有一定的抑制作用。     

白藜芦醇与半边旗二萜类化合物5F对活体血管生成的影响

目的:观察白藜芦醇(Res)、半边旗二萜类化合物5F(以下简称5F)对活体血管生成的影响。方法:采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)试验,检测Res和5F对活体血管生成的影响。结果:与对照组相比,Res用药组(11.4μg/egg、45.7μg/egg)的血管生成抑制率分别为(32.2±3.6)%、(53.7±4.2)%,5F用药组(8.3μg/egg、33.2μg/egg)血管生成抑制率分别为(19.7±4.0)%、(36.5±3.0)%。结论:Res和5F可抑制活体血管生成,对肿瘤和其他病理情况下的抗血管治疗可能具有重要应用价值。     

益气养阴方抗血管生成作用及对肿瘤细胞VEGF及MMP2表达的影响

目的观察益气养阴方抗血管生成作用及对肿瘤细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）2表达的效应。方法制备接种肿瘤细胞的绒毛尿囊膜（chorioallantoic membrane,CAM）模型,采用血清药理学方法制备益气养阴方含药血清。观察含药血清对肿瘤细胞诱导CAM血管生成的影响,并与9．0g／L氯化钠注射液（normal saline,NS）血清组对照。另外,用U14子宫颈癌细胞悬液经肌肉接种小鼠,观察小鼠实体瘤质量、抑瘤率、肺部转移率、肺部转移瘤生长情况。应用免疫组织化学及其组织形态学定量分析方法对VEGF和MMP2在肿瘤细胞中的表达进行研究。结果益气养阴方含药血清可抑制肿瘤细胞诱导CAM血管生成,与NS组比较差异具有显著性。益气养阴方组肺部转移结节较模型组明显减少,VEGF和MMP2的表达均明显低于对照组,差异有显著性。结论益气养阴方对肿瘤血管形成有明显抑制作用,降低VEGF和MMP2的表达可能是其抑制肿瘤血管形成的主要机制之一。     

替代激活的单核细胞促进人乳腺癌细胞SKBR3的生长侵袭

目的 研究不同激活状态的单核细胞在乳腺癌发展中的作用,探索肿瘤相关巨噬细胞在乳腺癌中的作用机制.方法 体外分离培养人外周血单核细胞,分为经典激活、替代激活、空白对照3组,分别采用细菌脂多糖IL-4、培养基进行相应激活.48～72 h后,采用RT-PCR、与人乳腺癌细胞株SKBR3共培养、建立鸡胚尿膜囊血管生成模型等方法检测各组TNF-α、AMAC-1、β-actin mRNA表达的差异,观察3种不同活化状态的单核巨噬细胞对乳腺癌细胞生长的影响以及对肿瘤诱导新生血管形成的影响.结果 经典激活组高表达TNF-α,替代激活组则高表达AMAC-1,3组间分子标志物的表达差异具有统计学意义(P＜0.05).共培养实验显示经典激活的单核细胞呈现出明显抑瘤效应,3 d后效应明显高于其他两组(P＜0.05),替代激活的单核细胞则在第5天开始呈现出明显促肿瘤效应(P＜0.05).在鸡胚尿囊膜血管生成模型中,替代激活的单核细胞可以明显促进肿瘤新生血管的生成(5733±14.82),与经典激活(20.44±6.50)及未激活组(32.22±8.33)相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IL-4可以促进人外周血单核细胞向替代激活的方向分化并高表达替代激活的分子标志物AMAC-1,而替代激活的单核巨噬细胞在与肿瘤细胞的共培养中可以促进肿瘤细胞的生长以及刺激肿瘤新生血管的生成.提示肿瘤相关巨噬细胞在体内很可能主要以替代激活的方式存在,从而直接或间接地促进了肿瘤的进展.     

新型肿瘤在体模型——鸡胚绒毛尿囊膜的研究进展

鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)是近年来兴起的一种新型的肿瘤模型,与传统的动物肿瘤模型相比具有更为简单、方便、价廉、快速、敏感等的优点。利用CAM肿瘤模型在肿瘤浸润以及肿瘤转移机制、肿瘤血管生成、抗肿瘤药物筛选等各方面研究均取得了一定的成果。然而,CAM肿瘤模型的应用尚存在一定的局限性以及有待解决的问题。充分并正确利用此模型可以为肿瘤生长侵袭的体外研究提供一种科学可行的方法及思路。     

人参皂甙Rg3抑制肿瘤新生血管形成的研究

目的 :探讨人参皂甙 Rg3抗肿瘤生长的作用机制。方法 :利用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)观察 Rg3作用后肿瘤新生血管的生长情况 ,并采用 L ewis肺癌模型进一步探讨 Rg3在体内对肿瘤生长及肿瘤新生血管形成的影响。结果 :Rg3浓度为 0 .1和 0 .5 mm ol/L时 ,CAM血管生长抑制指数分别达 (6 2 .4± 9.3) %和 (4 5 .6± 5 .7) % ,与对照组相比差异非常显著 (P<0 .0 1)。对 L ewis肺癌荷瘤小鼠分别以 5、10、2 0 mg/kg的剂量隔日灌胃一次给予 Rg3,连续 10次 ,2 0 d后观察到 3组的肿瘤瘤质量分别为 (1.77± 0 .2 1)、(1.5 8± 0 .17)及 (1.2 2± 0 .2 9) g,与对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 1) ,生长抑制率分别为 2 3.0 4%、31.30 %和 47.10 % ,同时观察到 Rg3组的新生血管数也明显减少。 结论 :人参皂甙 Rg3可明显抑制 L ewis肺癌的生长 ,其抑瘤作用部分是因为抑制了肿瘤诱导的新生血管形成     

SAC重组腺相关病毒载体的构建及其对前列腺癌CAM移植瘤的抑制作用

目的 构建携带NT4-SAC-HA2-TAT融合基因的重组腺相关病毒载体,并感染前列腺癌鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)移植瘤,观察目的基因前列腺凋亡反应基因 4(par-4)选择性癌细胞凋亡结构域(SAC)的表达及其对CAM移植瘤的生长抑制作用。方法 利用磷酸钙共沉淀法将包装质粒pAAV/Ad、腺病毒辅助质粒pFG140及重组穿梭质粒pSSCMV/NT4-SAC-HA2-TAT共转染293细胞,制备重组腺相关病毒(rAAV), 斑点杂交法检测病毒滴度。取孵育9d龄健康鸡胚,CAM接种前列腺癌细胞系PC 3细胞,建立前列腺癌的CAM移植瘤模型,接种3d后挑选成瘤鸡胚随机分为3组：空白对照组(PBS),空病毒组(AAV)和重组病毒组(rAAV),观察瘤体生长情况,上述处理4d后测量比较不同组移植瘤体积,并切片染色病理检查。免疫荧光法检测移植瘤中SAC融合肽的表达。结果 酶切鉴定结果证实成功构建pSSCMV/NT4-SAC-HA2-TAT, 斑点杂交法检测重组病毒滴度约为3.34×1010～3.34×1011cfu/mL。免疫荧光法证实SAC融合肽表达。移植瘤能在CAM上生长,可见瘤周围丰富毛细血管汇集,rAAV组瘤体显著缩小,病理HE染色可见瘤细胞局限及侵袭抑制。结论 成功构建SAC重组腺相关病毒载体并感染前列腺癌CAM移植瘤,重组病毒表达分泌的SAC融合肽对前列腺癌CAM移植瘤具有诱导细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭性增殖等作用。