分泌抗日本血吸虫卵单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用SP2/0骨髓瘤细胞与日本血吸虫可溶性虫卵抗原免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合,经筛选和克隆化后获得4株分泌抗血吸虫卵单克隆抗体的杂交瘤细胞.此4株单克隆抗体均能用虫卵抗原的ELISA、IHA和COP检出。用成虫冰冻切片作IFA可出现3种不同的免疫荧光反应类型。经交叉和吸收试验(ELISA法)证明其中3株对血吸虫卵具有高度特异性,另1株针对血吸虫、肺吸虫、华支睾吸虫共同抗原决定簇。4株单克隆抗体免疫球蛋白亚类鉴定均属小鼠IgM。     

曼氏血吸虫抗原和循环抗原的酶联免疫吸附试验抑制法的检测及其特性

本文报告以感染曼氏血吸虫鼠血清作指示抗体,用酶联免疫吸附试验抑制法(IELI-SA)检测曼氏血吸虫抗原。从感染螺蛳及鼠获得尾蚴、虫卵、成虫,制备可溶性尾蚴免疫原(SCI)、成虫免疫原(SWI)、卵抗原(SEA),将可溶性虫卵抗原经亲和层析得纯化卵抗原(CCI)。此外还制成日本血吸虫可溶性卵抗原(S,SEA),肝吸虫成     

抗日本血吸虫卵单克隆抗体的制备和免疫化学的鉴定

用可溶性日本血吸虫卵抗原(SEA)免疫小鼠制备单克隆抗体,获得5株特异的抗日本血吸虫卵单抗。免疫球蛋白亚类鉴定均为IgG_1。免疫印迹法结果表明其所识别的日本血吸虫卵抗原的分子量分别为>200kDa、116kDa和22kDa。经两维免疫印迹法(2-Dimensional Western Blot),显示被单抗IE1识别的22kDa SEA等电点pI4.6—6之间至少有3个以上同晶型体(isomorphs)。放射免疫沉淀试验表明IE1可识别30kDa抗原。     

单克隆抗体对日本血吸虫肺虫卵肉芽肿的影响

血吸虫虫卵肉芽肿引起的病理损害是日本血吸虫危害机体的主要病因。研究抑制和调节肉芽肿形成的措施,减轻其对机体的病理损害是当前血吸虫病防治工作中的一个重要研究课题。作者用一株对日本血吸虫卵抗原特异的单克隆抗体3D_11注入小鼠尾静脉内,显著抑制和减少了小鼠肺内肉芽肿的形成。现简报如下。用 BALB/c 纯系小鼠20只,随机分为不同剂量的单克隆抗体3个组和对照组,每组5只鼠。各组均以每     

单克隆抗体ELISA检测血吸虫循环抗原

采用感染日本血吸虫或曼氏血吸虫的BALB/C小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合试验,共获得30余株单克隆抗体。它们的靶抗原分别为血吸虫的表皮、肠道和虫卵。预初试验表明,在众多的单克隆抗体中,肠相关的多糖抗原单克隆抗体在免疫试验上最具活力。该单克隆抗体用于夹心法ELISA检测血吸虫三氯醋酸可溶性抗原时,其敏感度低于1ng/ml。该法检测感染     

用单克隆抗体进行抑制性酶联免疫吸附试验检测曼氏血吸虫抗原及其特性

作者以血吸虫抗原致敏小鼠的B细胞与B细胞瘤细胞融合,得到多种IgG类单克隆抗体。在抑制性酶联免疫吸附试验(IELISA)的前一天,用加入含1%牛血清白蛋白的pH7.2PBS稀释的单克隆抗体,加入“封闭”抗原。以10μg/ml曼氏血吸虫或日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)或5μg/ml曼氏血吸虫可溶性尾蚴免疫原(SCI)包被微量平底板。试验时并分别设不包被抗原的、无单克隆抗体的、不加“封闭”抗原的、无结合物的、无     

抗日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备抗日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3单克隆抗体,并鉴定抗体性质。方法以重组表达纯化的日本血吸虫信号蛋白14-3-3为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,采用酶联免疫吸附试验及免疫印迹法对获得的单克隆抗体进行类和亚类、效价、浓度、纯度、亲和常数、特异性和检测灵敏度的测定与鉴定。结果共获得6株针对日本血吸虫信号蛋白14-3-3的单克隆抗体,分别为5G9、3F1、3F7、5C6、5D1和1G6,抗体类型分别为IgG1、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG1和IgG1。对其中的单克隆抗体5G9分析显示,制备的腹水抗体效价为1∶1.28×105,亲和层析纯化后的浓度为5.3 mg/ml,纯度95%,亲和常数为5.1×107mol/L。免疫印迹试验结果表明,该单克隆抗体可与体外重组表达纯化的日本血吸虫14-3-3蛋白特异性结合,同时也能与日本血吸虫可溶性虫卵抗原、成虫排泄分泌抗原和成虫抗原特异性反应,而与大肠埃希菌、健康人血清和华支睾吸虫抗原均无明显交叉反应。HRP标记的单克隆抗体5G9检测14-3-3蛋白的灵敏度为31.25 ng/ml。结论本研究获得了6株能稳定分泌抗日本血吸虫14-3-3蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为建立新的日本血吸虫活动性感染检测方法奠定了良好的基础。     

抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体的研制及初步应用

目的制备抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体并研究其初步应用。方法用广州管圆线虫成虫可溶性抗原免疫BALB/c小鼠,经融合,筛选分泌高滴度、高特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。使用所得的单克隆抗体以Western blotting检测广州管圆线虫病患者血清,并建立双抗体夹心ELISA法检测感染大鼠血清。结果获得3株分泌高滴度抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株(2A2、3F1、4H2),其分泌的抗体与日本血吸虫、卫氏并殖吸虫、猪囊尾蚴、旋毛虫抗原均不发生交叉反应。3株单克隆抗体均可识别广州管圆线虫成虫可溶性抗原蛋白Mr 15 000,以及患者血清中两种循环抗原Mr24 000和Mr15 000。双抗体夹心ELISA检测阳性率为76.5%。结论制备的抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原的杂交瘤细胞株能分泌高滴度、高特异性的单克隆抗体,且在循环抗原的检测方面有应用前景。     

日本血吸虫未成熟卵免疫血清抗卵胚反应的观察

目的 研究日本血吸虫未成熟卵免疫血清在抗卵胚方面的作用.方法 采用多途径免疫新西兰家兔的方法,制备日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原的免疫兔血清,通过免疫酶染色定位观察免疫血清与未成熟卵胚的反应.结果 证明未成熟卵免疫血清能特异地识别虫卵早期胚胎抗原,与未成熟虫卵卵胚出现较强的免疫反应.结论 未成熟虫卵可溶性抗原免疫产生的抗卵胚作用与未成熟虫卵胚胎抗原所诱导的保护性免疫应答有关.     

无佐剂免疫的抗曼氏血吸虫保护性抗原的分离和定性

用曼氏血吸虫波多黎各株制备可溶性成虫抗原(SWAP)、可溶性虫卵抗原(SEA)及童虫表面抗原提取物。曼氏血吸虫童虫加福氏佐剂免疫BALB/c小鼠后取脾分离脾细胞,与鼠骨髓瘤细胞P3NS-1融合。ELISA     

抗日本血吸虫未成熟虫卵单克隆抗体的制备和鉴定

采用日本血吸虫来成熟卵抗原（SIEA）免疫BALB／c小鼠，制备抗SIEA单克隆抗体。获得一株强阳性、高特异的抗未成熟虫卵的单抗（2B2），免疫球蛋白为IgG1类。免疫印迹分析表明该单抗单一识到日本血吸虫未成熟虫卵抗原中的50kDa分子。免疫荧光染色表明，与雌虫子宫内虫卵呈现强阳性反应，而不与成虫抗原交叉。     

日本血吸虫成虫31/32KD诊断蛋白:与血吸虫单克隆抗体和病人血清的免疫印斑反应

应用免疫印斑试验观察日本血吸虫成虫蛋白与感染日本血吸虫病人和鼠血清的反应证实:日本血吸虫和曼氏血吸虫具有相同的31/32KD诊断蛋白;两者均来源于成虫肠管:与抗血吸虫单克隆抗体的反应基本相同。但是,两种血吸虫蛋白至少有一个抗原决定簇不同。日本血吸虫诊断蛋白与血吸虫病人和其他寄生虫病患者血清检测结果,证实了血吸虫成虫31/32KD蛋白可应用于日本血吸虫病的血清学诊断。     

抗华支睾吸虫代谢抗原单克隆抗体的制备及鉴定研究

目的建立分泌抗华支睾吸虫代谢抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株。方法用华支睾吸虫成虫代谢抗原免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合，筛选分泌高滴度单克隆抗体的杂交瘤细胞株，测定单抗免疫球蛋白亚类和单抗效价，检测单抗与日本血吸虫全虫可溶性抗原、卫氏并殖吸虫成虫抗原和猪囊尾蚴抗原的交叉反应。结果获得3株分泌高滴度抗华支睾吸虫代谢抗原的杂交瘤细胞株，其分泌的抗体与日本血吸虫、卫氏并殖吸虫和猪囊尾蚴抗原均不发生交叉反应，3株单抗均属IgG。结论制备的抗华支睾吸虫代谢抗原的杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗，为制备免疫诊断试剂盒奠定了基础。     

单克隆抗体NP28—5B对日本血吸虫卵肉芽肿形成的调节作用

本研究首先应用针对中国大陆株日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)中140kD靶抗原的单克隆抗体NP28-5B(lgG_1),经体内被动转移试验表明对虫卵致敏/虫卵攻击的小鼠肺肉芽肿模型中日本血吸虫虫卵肉芽肿形成具显著的抑制或调节作用(抑制率为53％,P<0.002),进一步提供证据表明抗体参与虫卵肉芽肿形成的调节网络,也将为日本血吸虫病抗病免疫和抗病疫苗研究提供重要的分子基础。作者对上述作用机理作了有限探讨。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的建株及初步鉴定

用感染8条日本血吸虫尾蚴,时间长达一年半的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用兔抗日本血吸虫肠相关抗原和兔抗可溶性虫卵抗原免疫血清与细胞培养上清进行ELISA筛选阳性克隆,最终建立了分泌单克隆抗独特型抗体细胞株NP30。作者用一系列试验证明,NP-30是日本血吸虫肠相关抗原的内影象抗独特型抗体,有替代日本血吸虫虫源性抗原用于血清学诊断的可能性。     

抗日本血吸虫未成熟虫卵部分纯化抗原免疫血清的制备及定位观察

抗日本血吸虫未成熟虫卵部分纯化抗原免疫血清的制备及定位观察汪世平周汨波曾庆仁赵慰先日本血吸虫卵不同发育时期抗原性存在明显差异。来源于不同发育阶段的虫卵可溶性抗原所诱导的宿主免疫应答明显不同。因此，制备针对未成熟虫卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）的免疫血清，对...     

日本血吸虫病肠相关与卵相关抗原血症检测的诊断互…

应用经羟基磷灰石纯化，偶联长链生物素ＢＡＣＨ（Ｂｉｏｔｉｎａｍｉｎｏｃａｐｒｙｌｈｙｄｒａｚｉｄｅ）的两株主要识别卵相关不同表位的单克隆抗体建立检测灵敏度达微微克水平的硷性磷酸酶抗原捕获酶联试验（ＢＡ－ＡＰＥＬＩＳＡ），对粗制日本血吸虫卵抗原ＳＥＡｊ－ＴＣＡ的检测极限，２Ｈ１－ＥＬＩＳＡ则达３．２ｎｇ／１－０．３ｎｇ／ｍｌ，仅有效地检出日本血吸虫种特异的卵抗原表位分子；而２Ｈ１－ＥＬＩＳＡ则达３．     

日本血吸虫童虫保护性单克隆抗体的建株和鉴定

本研究获8株抗日本血吸虫(中国大陆株)童虫的单克隆抗体,从中确定一株具有体内保护性功能的单克隆抗体(编号为N15D9),其保护率范围为14-39％。经间接免疫荧光法和ELISA试验检测,N15D9能与尾蚴、3h龄机械转化童虫和5d龄肺童虫的表膜抗原反应。经3h龄机械童虫可溶性抗原的免疫印迹法分析,N15D9能识别132、96和10kDa抗原分子。     

对纯化的日本血吸虫糖蛋白虫卵抗原用于免疫诊断人体血吸虫感染的评价

本文作者曾报道应用Con-A Sepharose 4B吸附分离日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的糖蛋白部份具有生物学活性,并用反复凝胶过滤层析进一步纯化糖蛋白2(gp-2)。发现将该抗原注入感染日本血吸虫鼠的足底,可使致敏鼠在虫卵周围形成肺肉芽肿     

重组日本血吸虫中国大陆株rTPI分子对小鼠免疫保护性作用的研究

目的研究重组日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶（SjC－TPI）分子抗血吸虫感染的保护性作用。方法用IPTG诱导表达,制备纯化的重组TPI蛋白,将重组TPI抗原免疫C57BL／6及昆明鼠,8周后用血吸虫尾蚴攻击感染,45d后剖杀,计数减虫率及减卵率。结果C57BL／6获得27．78％的减虫率;昆明鼠获得21．39％的减虫率,54．00％的减卵率。结论重组SjC－TPI对血吸虫感染具有一定的保护作用,可能为日本血吸虫病疫苗候选分子之一。