siRNA沉默MACC1基因表达对宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨siRNA沉默结肠癌转移相关基因1(MACC1)表达对Hela宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响。方法通过脂质体将siRNA MACC1及siRNA NC转入Hela细胞中,RT-PCR及western blot检测转染效果,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力,western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cyclin E,基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达及细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化水平。结果与siRNA NC组比较,siRNA MACC1组中MACC1蛋白及mRNA表达量降低(P0.01),细胞活力及侵袭能力下降(P0.01),细胞周期阻滞在G1期,cyclin D1、cyclin E、MMP2、MMP9及p-ERK表达量下调(P0.01)。结论siRNA MACC1能显著的抑制宫颈癌Hela细胞增殖与侵袭,可能与下调ERK磷酸化水平有关。     

RNAI沉默Grp94基因对人食管癌ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨RNAI沉默Grp94基因表达对人食管癌ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响和可能机制.方法 设计、合成靶向Grp94基因的siRNA基因片段,应用脂质体包埋转染食管癌ECA109细胞,采用Real-time PCR和Western blot法分别检测转染后的细胞内Grp94、基质金属蛋白酶MMP2及MMP9的表达,采用Transwell实验检测沉默Grp94基因对细胞迁移及侵袭能力的影响.结果 SiGrp94组中Grp94mRNA和蛋白水平显著下调(P＜0.01),MMP2、MMP9表达明显下调(P＜0.05);SiGrp94组细胞迁移及侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 沉默Grp94基因可明显抑制ECA109细胞的迁移及侵袭能力,Grp94可能通过影响MMP2、MMP9参与其中.     

YY1基因在肾癌组织中的表达及对肾癌细胞功能的影响

目的探讨YY1基因在肾癌组织中表达及小干扰RNA(siRNA)对人肾癌786-O细胞增殖和侵袭的影响。方法以Real-Time PCR检测转录因子YY1在20对肾癌及癌旁组织中的表达;采用脂质体转染法将siRNA转染入人肾癌786-O细胞中,Real-Time PCR和Western印迹法检测YY1转染效率;MTT和平板克隆形成实验检测细胞增殖变化;流式细胞术检测细胞周期;Transwell及Matrigel检测细胞侵袭能力,Real-Time PCR检测基质金属蛋白酶MMP9及钙黏附蛋白E-cadherin mRNA表达水平。结果与癌旁组织相比,20对癌组织中YY1 mRNA表达量显著增高(P<0.01)。转染人肾癌786-O后,siRNA-YY1组细胞YY1mRNA的表达抑制率达66%(P<0.01),蛋白表达水平也明显低于siRNA-NC组。与NC组相比,siRNA-YY1组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞生长被阻滞在G0/G1期,细胞侵袭能力明显减弱(P<0.01)。此外,与NC组相比,MMP9及E-cadherin mRNA水平有显著差异(P<0.01)。结论 YY1在肾癌组织中高表达,靶向沉默YY1可以在体外显著抑制肿瘤细胞的生长和侵袭能力。YY1特异性siRNA作为一种治疗肿瘤的新途径值得进一步研究。     

干扰素α通过IFI16和P21影响人血管内皮细胞凋亡

目的 观察干扰素α(IFN-α)对人血管内皮细胞(VECs)凋亡的影响并了解其部分机制.方法 应用IFN-α和转染IFN诱导蛋白16基因(IFI16)的siRNA瞬时干预体外培养的VECs,以转染非特异性siRNA设为对照组,RT-PCR法检测IFI16及P21 mRNA表达,Western blot检测IFI16及P21蛋白表达,流式细胞仪Annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡情况.结果 与对照组比较,IFN-α组IFI16 mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05),细胞凋亡增多(P＜0.05),伴P21 mRNA和蛋白表达增多(P＜0.05);IFN-α干预后再转染IFI16 siRNA,IFI16 mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05),细胞凋亡减少(P＜0.05),P21 mRNA和蛋白表达减少(P＜0.05).结论 IFI16及P21参与IFN-α诱导VECs凋亡过程的调控.     

HIF-1α siRNA对非小细胞肺癌A549细胞TIMP1、MMP1表达的影响

目的 探讨HIF-1α基因沉默对非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase 1,MMP1)、基质金属蛋白酶抑制剂1(matrix metalloproteinase inhibitor,TIMP1)表达的影响。 方法 将siRNA-HIF-1α质粒载体稳定转染至A549细胞中,于缺氧环境下培养。应用MMT法和Transwell试验分别检测转染细胞的增殖、迁移和侵袭能力。应用qRT-PCR和蛋白免疫印迹分别检测转染细胞内TIMP1、MMP1 mRNA和蛋白表达水平。 结果 与Control组相比,A549组HIF-1α mRNA和蛋白表达显著增加(均P<0.05)。与Blank组和si-NC组相比,si-HIF-1α组HIF-1α mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与Blank组相比,si-HIF-1α组在转染24、48和72 h后细胞增殖率均显著降低(均P<0.05)。与Blank组相比,si-HIF-1α组A549细胞在转染24 h后的迁移和侵袭数量均显著降低(P<0.05)。与Blank组相比,si-HIF-1α组细胞内MMP1表达水平显著降低,而TIMP1表达水平显著增加(均P<0.05)。 结论 在缺氧状态下,HIF-1α siRNA靶向沉默HIF-1α在A549细胞内的表达,并可以通过下调MMP1表达和上调TIMP1的表达而抑制细胞的增殖、迁移和侵袭。      

HIF-1α516对人肝癌HepG2细胞侵袭转移能力的影响

目的观察HIF-1α516对人肝癌HepG2细胞侵袭转移能力的影响。方法人肝癌HepG2细胞分为空白组(同步培养,不做任何处理)、对照组(转染siRNA)和siRNA干扰组(转染HIF-1α516 siRNA)。siRNA和HIF-1α516 siRNA通过脂质体转染HepG2,转染18h后Western blot检测HepG2细胞中HIF-1β核蛋白和全细胞蛋白的表达、ELISA法检测细胞培养上清中MMP-2、MMP-9的含量,Transwell小室观察HepG2的转移侵袭能力。结果 HIF-1α516 siRNA能显著降低HepG2细胞HIF-1α516mRNA的表达(降低70.0%)(P<0.01);增强HepG2细胞的侵袭转移能力(增强71.10%)(P<0.01)。HIF-1α516siRNA对全细胞HIF-1β蛋白的表达无影响,但能促进HIF-1β蛋白的核转移(增强64.1%)(P<0.01)。HIF-1α516 siRNA能明显升高HepG2细胞培养上清中MMP-2、MMP-9蛋白表达,分别升高37.72%、55.46%(P<0.01)。结论 HIF-1α516能抑制HepG2的转移侵袭,其机制可能与抑制HIF-1β的核转移有关。     

干扰性小核糖核酸靶向抑制趋化因子受体4基因表达对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨干扰性小核糖核酸(siRNA)靶向抑制鼻咽癌细胞趋化因子受体4(CXCR4)基因表达对癌细胞增殖、侵袭的影响及机制。方法收集新乡医学院第一附属医院2014年1月至2016年12月保存的鼻咽癌及相应的癌旁组织标本各42例,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测鼻咽癌及相应的癌旁组织中CXCR4 mRNA及蛋白表达。将人鼻咽癌细胞系CNE-2Z分为空白对照组(细胞未做任何处理)、阴性对照组(细胞转染无义siRNA序列)和CXCR4转染组(细胞转染CXCR4的靶向siRNA序列),转染48 h后采用Western blot法检测各组细胞中CXCR4、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、β-连环蛋白(β-catenin)和细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;应用细胞计数试剂盒和Transwell小室分别检测细胞的增殖和侵袭能力。结果鼻咽癌及相应的癌旁组织中CXCR4 mRNA表达分别为5.526±0.143、0.953±0.091,蛋白表达分别为0.522±0.047、0.053±0.011,鼻咽癌组织中CXCR4 mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P<0.05)。CXCR4转染组细胞中CXCR4、MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达及细胞存活率、细胞侵袭数均显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),但空白对照组和阴性对照组细胞中CXCR4、MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达及细胞存活率、细胞侵袭数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞中CXCR4基因表达可显著降低肿瘤细胞的增殖与侵袭能力,其机制可能与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

siRNA靶向沉默HIF-1α基因对肺癌A549细胞转移和侵袭的影响

目的:探讨质粒介导RNA干扰抑制HIF-1α基因对肺癌A549细胞转移和侵袭能力的影响。方法:利用基因工程方法构建HIF-1α的干扰表达载体,并将其转染至肺腺癌A549细胞;分别用RT-PCR方法、Western blot方法检测细胞转染前后HIF-1α以及MMP-2的mRNA及蛋白表达的变化。细胞划痕试验和Transwell实验检测转染前后肺腺癌A549细胞迁移及侵袭能力的改变。结果:转染后肺腺癌A549细胞中HIF-1α和MMP-2的mRNA表达分别下降86%和64%(P<0.05)。转染后细胞蛋白表达明显下降。转染前后穿膜细胞数分别为(135.2±13.2)、(63.7±10.5),差异具有统计学意义(P<0.05)。转染前后划痕宽度分别为(0.48±0.14)、(1.04±0.15)mm,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:RNAi可有效抑制HIF-1α的表达,同时可结合MMP-2启动子下调MMP-2基因和蛋白的表达,降低肺癌A549细胞的转移和侵袭能力。     

WIF1在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨Wnt抑制因子(WIF1)在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞生物学行为的影响.方法 采用Western blot及RT-PCR法检测该院经手术切除的82例宫颈癌组织及癌旁组织中WIF1蛋白及mRNA表达,并应用LipofeetamineTM 2000将pcDNA 3.1 WIF1真核表达载体(过表达组)及空质粒pcDNA3.1(对照组)转染到宫颈癌Hela细胞中,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot检测CyclinD1、C-myc、基质金属蛋白酶(MMP)-2及MMP-9表达.结果 与癌旁组织比较,宫颈癌组织中WIF1蛋白及mRNA表达量显著降低(P＜0.01);与对照组比较,过表达组中WIF1蛋白及mRNA表达量提高(P＜0.01),细胞活力降低(P＜0.01),细胞凋亡率提高(P＜0.01),细胞周期阻滞于G1期(P＜0.01),CyclinD1、C-myc、MMP-2、MMP-9表达量显著下调(P＜0.01).结论 WIF1在宫颈癌组织中低表达,提高WIF1表达能显著抑制宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭.     

Spermidine/spermine N1-acetyltransferase 2 increases sensitivity of renal carcinoma Caki-1 cells to chemotherapy by inhibiting HIF-1α

目的 探讨转染精脒/精胺N1乙酰基转移酶2(spermidine/spermine N1 -acetyltransferase 2,SSAT2)在低氧条件下对肾癌Caki-1细胞增殖、凋亡和阿霉素敏感性的影响及机制.方法 经X-treme GENE HP介导将真核表达质粒pcDNA3.1 (D)/V5-His-SSAT2转入肾癌Caki-1细胞,细胞在1％氧浓度下培养,Western blot法检测SSAT2蛋白和低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)蛋白表达；流式细胞仪检测细胞的凋亡率、死亡率；MTT法检测细胞的增殖,以及不同浓度阿霉素对细胞的抑制率.结果 SSAT2成功转入肾癌Caki-1细胞,与空白细胞组及空载体组比较,转染SSAT2组HIF-1α蛋白表达明显下调(P＜0.01),细胞增殖受到明显抑制(P＜0.01),细胞凋亡率和死亡率均增加(P＜0.05).阿霉素浓度为2μg/ml时,转染组细胞抑制率可达(67.5±3.7)％,对空白细胞和空载体细胞的抑制率为(54.7±8.4)％、(56.8±7.7)％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 转染SSAT2可以通过下调HIF-1α蛋白表达,减少肾癌细胞的增殖,增加肾癌Caki-1细胞的凋亡率、坏死率和对阿霉素的敏感性,针对SSAT2的基因治疗可能成为逆转肾癌耐药的方法之一.     

KLF4调控 MMP9对原发性肝癌的侵袭迁移能力的影响

目的：研究Krüppel 样因子4(KLF4)和基质金属蛋白酶9(MMP9)在原发性肝癌中的表达情况,探讨 KLF4调节MMP9对原发性肝癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法收集原发性肝癌手术患者癌和癌旁组织标本,通过免疫组织化学、实时荧光定量 PCR 和免疫印迹试验(Western blot)检测50例肝癌组织及对应癌旁组织中 KLF4和 MMP9的表达情况;构建重组质粒,上调肝癌细胞(HepG2细胞系)的 KLF4表达,检测 MMP9 mRNA 及蛋白水平的表达情况;转染后的 HepG2细胞运用 Tran-swell 侵袭试验和划痕试验观察侵袭和迁移能力的变化。结果相比癌旁组织,KLF4在肝癌组织中的表达明显降低(P <0.05),而 MMP9的表达明显增高(P <0.05)。通过构建重组质粒,上调 KLF4的表达,发现 MMP9的 mRNA 和蛋白表达均降低,并影响 HepG2细胞的侵袭和迁移能力。结论在原发性肝癌中,KLF4低表达,而 MMP9高表达。在肝癌细胞中上调 KLF4表达可引起 MMP9表达下降,进而抑制肝癌细胞的侵袭和迁移。     

FBP1在肾透明细胞癌组织中的表达变化及意义

目的 探讨果糖1,6二磷酸酶1(FBP1)在人肾透明细胞癌(RCCC)及其癌旁组织中的表达,以及在肾癌发生、发展及预后中的作用和临床意义.方法 选取手术切除的118例RCCC患者的石蜡切片和40例RCCC患者的新鲜标本,分别采用免疫组织化学方法、Western blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肾癌及对应癌旁组织(阴性切缘)中FBP1蛋白及mRNA的表达,分析其与患者临床病理特征及预后的相关性.结果 免疫组织化学发现78.81％ (93/118)的癌旁组织中可见FBP1蛋白呈强阳性表达,仅39.83％(47/118)的肾癌组织中FBP1蛋白表达阳性.Western blot发现肾癌组织中FBP1的表达阳性率较其相应癌旁组织明显下降(P＜0.01).RT-PCR法发现癌旁组织FBP1 mRNA表达水平亦明显高于肾癌组织(P＜0.05).FBP1低表达与临床分期、病理分级、危险系数及是否复发明显相关(P＜0.05),与年龄、性别、症状及肿瘤大小、部位、是否有坏死、是否有血管侵犯和肾上腺是否有累及无关(P＞0.05).FBP1阳性表达的肾癌患者的5年生存率高于FBP1阴性表达者(P＜0.05).结论 FBP1及其蛋白在人肾癌组织中低表达,与肾癌的发生、发展相关,可能成为肾癌预后的侯选标志物之一.     

Toll样受体mRNA在人肾癌细胞786-0和正常肾细胞HK-2中的表达及意义

目的 探讨Toll样受体(TLR)在肾癌发生、发展中的作用和意义.方法 培养人肾癌细胞786-0(786-0实验组)和正常肾细胞HK-2(HK-2对照组).实时荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)检测TLR1～TLR10 mRNA在786-0实验组及HK-2对照组细胞中的表达规律.结果 786-0实验组和HK-2对照组细胞均表达TLR1～TLR6、TLR8～TLR10,而不表达TLR7.TLR1、TLR2、TLR4～TLR6、TLR8、TLR10在786-0实验组表达均高于HK-2对照组细胞[(4.40±0.19)×10-2、(1.77±0.24)×10-2、(5.03±0.62)×10-2、(3.93±0.86)×10-2、(6.11±0.48)×10-2、(1.89±0.47)×10-2、(2.84±0.57)×10-2比(0.84±0.27)×10-2、(0.40±0.04)×10-2、(0.95±0.73)×10-2、(0.56±0.25)×10-2、(0.49±0.16)×10-2、(0.20±0.07)×10-2、(0.27±0.08)×10-2,P＜0.01],而TLR3、TLR9在786-0实验组与HK-2对照组细胞的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TLR在人肾癌细胞和正常肾细胞细胞中的表达有差异,TLR1、TLR2、TLR4～TLR6、TLR8、TLR10在人肾癌的发生、发展中可能发挥一定的作用.

Abstract：

Objective To investigate the expression of toll-like receptors (TLR1-TLR10) in human renal carcinoma cell 786-0 and normal renal cell HK-2 and discuss the significance of TLRs in the development of renal carcinoma. Methods Human renal carcinoma cell 786-0 ( experimental group) and normal renal cell HK-2 (control group) were cultured. The expression of TLR1-TLR10 was detected by realtime fluorogenic quantitative PCR (FQ-PCR). Results The FQ-PCR analysis demonstrated that 786-0 cell line and HK-2 cell line expressed TLR1-TLR6 and TLR8-TLR10 mRNA. Yet neither had an expression of TLR7. Moreover, the expression levels of TLR1, TLR2, TLR4, TLR5, TLR6, TLR8 and TLR10 in the experimental group were significantly higher than those in HK-2 cell line [(4.40 ±0.19) × 10-2, ( 1.77 ±0.24) × 10-2,(5.03 ±0.62) × 10-2,(3.93 ±0.86) × 10-2, (6.11 ±0.48) × 10-2,(1.89 ±0.47) ×10-2,(2.84±0.57) × 10-2 vs (0.84 ±0.27) × 10-2,(0.40 ±0.04) × 10-2,(0.95 ±0.73) × 10-2,(0.56±0.25) ×10-2,(0.49 ±0.16) × 10-2,(0.20 ±0.07) × 10-2,(0.27 ±0.08) × 10-2,P＜0.01].There was no significant change in the expressions of TLR3 and TLR9 between 786-0 and HK-2 cell line (P ＞0. 05). Conclusion The expressions of TLR1, TLR2, TLR4, TLR5, TLR6, TLR8 and TLR10 are significantly higher in 786-0 cell line than those in HK-2 cell line. They may play key roles in the development of renal carcinoma.     

PLK1基因与胃癌AZ521细胞肿瘤生物学行为的研究

［摘要］ 目的观察抑制PLK1基因表达后对胃癌AZ521细胞生长增殖和侵袭转移的影响,探讨PLK1基因作为胃癌基因治疗靶点的可行性及相关机制。 方法应用siRNA干扰技术抑制PLK1基因表达,采用实时荧光定量PCR法检测胃癌AZ521细胞PLK1 mRNA表达水平;采用Western blot法检测AZ521细胞中PLK1、MMP-9、E-cadherin、Vimentin蛋白表达;应用流式细胞仪检测AZ521细胞周期分布的变化;采用Transwell实验检测AZ521细胞侵袭能力的影响。 结果siRNA组PLK1 mRNA表达水平明显低于control组（P＜0.05）。siRNA组PLK1、Vimentin、MMP-9蛋白表达明显低于control组,E-cadherin蛋白表达明显高于control组（P＜0.05）。siRNA组G2/M期细胞细胞表达量明显高于control组,S期细胞表达量明显低于control组（P＜0.05）;2组G0/G1期细胞表达量差异无统计学意义（P＞0.05）。siRNA组AZ521细胞穿膜细胞数明显少于control组（P＜0.05）。 结论PLK1 siRNA可以阻断PLK1的表达和功能,PLK1在胃癌的生长和侵袭转移中发挥了重要作用。     

小干扰RNA沉默组织因子基因对肝癌侵袭转移能力的影响

目的 应用RNA干扰(RNAi)技术抑制人类肝癌细胞内组织因子(TF)基因表达,从而探讨对其侵袭转移能力的影响。方法 本实验以人类肝癌细胞系HepG2细胞株为实验对象,将携带有针对TF小干扰RNA( siRNA)序列的质粒pGPU6/GFP/Neo-TF siRNA,转染HepG2细胞株,以适当浓度的G418筛选获得阳性克隆,通过RT-PCR和蛋白质印迹法比较转染TF siRNA(+)质粒、转染TF siRNA( -)质粒以及未转染任何质粒的HepG2细胞内源性TF在基因及蛋白质表达水平的差异,进而应用Transwell体外侵袭实验检测三者的侵袭转移能力,探讨TF对肿瘤细胞侵袭转移能力的影响。结果 (1) RT-PCR结果 显示,转染TF siRNA(+)质粒的HepG2细胞其内源性TF表达水平低于转染TF siRNA（-）质粒和未转染质粒的表达水平。(2)蛋白质Western印迹法结果 显示,转染TFsiRNA(+)质粒的HepG2细胞其内源性TF蛋白表达水平低于转染TF siRNA( -)质粒和未转染质粒的表达水平。(3) Transwell体外侵袭实验结果 显示,转染TF siRNA(+)质粒的HepG2穿膜细胞数[(14±10)个]少于转染TF siRNA（-）质粒的HepG2穿膜细胞数[(128±18)个],经t检验比较,两组差异有统计学意义（P＜0.05）。这提示应用RNA干扰技术抑制肿瘤细胞TF表达可以使HepG2细胞侵袭转移能力显著下降。结论 TF与肝癌细胞的侵袭转移能力密切相关,应用RNA干扰技术抑制其表达可以明显降低细胞HepG2体外侵袭转移能力。     

Macrophage migration inhibitory factor enhances neoplastic cell invasion by inducing the expression of matrix metalloproteinase 9 and interleukin-8 in nasopharyngeal carcinoma cell lines

Background Nasopharyngeal carcinoma (NPC) shows highly invasive and metastatic features. This study aims to investigate macrophage migration inhibitory factor (MIF)-induced invasion of NPC cells in vitro and the effects on matrix metalloproteinases (MMPs) and interleukin-8 (IL-8), and to study the mechanism of tumor cell invasion and metastasis in the early stage of NPC. Methods Two nasopharyngeal carcinoma cell lines, CNE-1 and CNE-2, were adopted in this study. The NPC cell invasion and migration were evaluated by microinvasion assay. The variation of expression percentages of MMP2- or MMP9-positive cells was detected by flow cytometry in two cell lines with or without MIF treatment. Western blotting and RT-PCR were used to assay the protein and mRNA expressions of MMP2 and MMP9. The IL-8 concentration secreted by NPC cells was compared with the cells with different treatments using ELISA. Results After treating with MIF for 48 hours, the cell numbers of CNE-1 and CNE-2 which went through the 8-μm filter membrane were increased. Compared with non-MIF treated NPC cells, significant difference could be found both in CNE-1(P=0.005) and CNE-2 cells (P=0.001) . The percentages of MMP9-positive cells were significantly increased in both CNE-1 ［from （28.5±2.5）% to （82.4±3.5）%, P=0.001］ and CNE-2 ［from （32.8±3.5）% to （86.1±1.6）%, P=0.002］. The relative intensity of MMP9 protein expression was also enhanced in both cell lines (CNE-1: from 83.1±6.0 to 242.9±22.9, P=0.002; CNE-2: from 84.4±4.3 to 278.9±29.7, P=0.003). Correspondingly, the increased MMP9 mRNA expression level was significantly detectable in both cell lines.The concentration of IL-8 in the supernatant of CNE-2 was higher ［(1201.8±593.3） pg/ml］ after treatment. It was also remarkably higher than that in the supernatant of CNE-2 without treatment (P=0.026). However, there was no significant difference in the concentration variation of IL-8 in CNE-1 (P=0.581), while the IL-8 mRNA level was only enhanced in CNE-2. Conclusions MIF can induce potent invasion of NPC cell lines in vitro, and the infiltrating lymphocytes in NPC might be responsible for the invasion and metastasis of tumor cells. MIF cytokine which is secreted by these infiltrating lymphocytes might contribute to the invasion as well as metastasis of NPC in the early stages by induction of MMP9 and IL-8 in an indirect pathway.     

维甲酸抑制对不同分化程度甲状腺肿瘤细胞体外侵袭转移能力的影响

目的 研究维甲酸对人甲状腺肿瘤细胞体外侵袭转移能力的影响,初步探讨其分子机制.方法 对4种人甲状腺肿瘤细胞予一定浓度的维甲酸处理,以Transwell试验验证维甲酸对细胞侵袭能力的影响,黏附试验判断维甲酸作用机制环节,最后以RT-PCR及Western印迹法检测侵袭相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)及其受体(uPAR)的基因及蛋白表达变化.结果 维甲酸处理5 d后,4种甲状腺肿瘤细胞体外侵袭能力均低于乙醇对照组,差异有统计学意义,其中FTC-133为91±9比118±10,C643为92±17比164±21,HTH74为87±18比169±15,XTC.UC1为95±23比136±15,差异均有统计学意义(均P<0.05),同时发现除FTC133以外的3种肿瘤细胞的黏附能力均较对照组高.其中未分化癌细胞C643、HTH74 uPA和uPAR mRNA及蛋白表达均低于对照组,同时E-cadherin表达较对照组高;滤泡癌细胞FTC-133和Hürthle癌细胞XTC.UC1中,uPAR和MMP2 mRNA及蛋白水平低于乙醇对照组,uPA和E-cadherin表达无显著改变.结论 维甲酸可能通过上调E-cadherin表达,降低uPA、uPAR及MMP2等多种蛋白溶解酶活性,显著抑制人甲状腺肿瘤细胞体外侵袭转移能力.     

MAGI1通过调节PETN抑制肝癌细胞的侵袭运动

目的:探讨MAGI1基因在肝癌侵袭转移中的作用及分子机制.方法:将MAGI1过表达载体,稳定转染HepG2细胞(HepG2MAGI1),应用划痕愈合实验和基质胶侵袭实验检测HepG2MAGI1 和对照组细胞(HepG2)在细胞运动侵袭能力上的差别.采用Western印迹方法检测MAGI1和PTEN的表达,并分析其相关性...     

FoxM1通过Wnt/β-catenin信号通路对鼻咽癌细胞5-8F增殖、迁移的影响

目的 探讨FoxM1对鼻咽癌细胞5-8F恶性生物学行为的影响及其可能机制.方法 将化学合成的靶向FoxM1的siRNA转染鼻咽癌细胞5-8F(FoxM1-siRNA组),并设立空白对照组、阴性对照组,采用RT-PCR及Western blot检测FoxM1表达变化.采用MTT法、FCM法、Transwell法分别检测下调FoxM1表达对细胞增殖、周期、凋亡、迁移的影响.Western blot检测下调FoxM1表达后β-catenin、C-Myc、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达变化.结果 转染FoxM1-siRNA的5-8F细胞FoxM1 mRNA和蛋白表达水平降低(P＜0.05).下调FoxM1表达可抑制5-8F细胞增殖(P＜0.05),FoxM1-siRNA组的凋亡率为(22.68±0.67)％,较阴性对照组[(1 1.74±1.36)％]和空白对照组[(10.94±1.52)％]显著增加(P＜0.05),细胞周期阻滞于G0/G1期.FoxM1-siRNA组细胞穿膜数(100.00±10.97)明显低于阴性对照组(246.00±6.66)和空白对照组(233.70±12.41),细胞迁移能力降低(P＜0.05).下调FoxM1的表达可抑制β-catenin细胞核表达,抑制C-Myc、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9总蛋白表达(P＜0.001).结论 FoxM1表达下调抑制鼻咽癌细胞5-8F的增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞迁移能力,使细胞周期阻滞于G0/G1期.其机制可能是通过抑制Wnt通路关键蛋白β-catenin细胞核表达从而抑制Wnt 通路活性实现的.