鞘内注射右美托咪定对背根结慢性压迫痛大鼠脊髓CaMK Ⅱ表达的影响

目的 观察鞘内注射右美托咪定对背根节慢性受压痛大鼠(CCD)脊髓CaMKⅡ表达的影响,探讨右美托咪定-CaMKⅡ通路在大鼠背根节慢性受压痛中的作用.方法 鞘内置管成功的雄性SD大鼠48只,随机分为6组,每组48只.分别是正常对照组(C组);模型组(CCD组);生理盐水组(NS组);右美托咪定2μg/kg组(Dex2);右美托咪定4 μg/kg组(Dex4);右美托咪定8 μg/kg组(Dex8).分别于鞘内置管前(T1),制备CCD模型前(T2)、CCD模型制备后5d鞘内给药前(T3)、鞘内给药后30 min(T4)、60 min(T5)、120 min(T6)、240 min (T7)检测大鼠机械缩腿阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).并于鞘内给药后240 min,各组取4只大鼠处死,取脊髓腰膨大,采用免疫印迹法检测CaMKⅡ的表达.结果 与C组比较,CCD组大鼠在T3～T7各时点MWT及TWL均显著降低,CCD组大鼠表现为明显的机械痛敏感和热痛敏感.NS组大鼠鞘内注射NS后对大鼠MWT及TWL无影响,鞘内注射不同剂量的右美托咪定则可显著提高CCD大鼠MWT和TWL.与C组(0.24±0.04)比较,CCD组(0.59±0.09)、NS组(0.61±0.08)大鼠CaMKⅡ蛋白表达均显著增加;鞘内注射不同剂量的右美托咪定后,大鼠脊髓CaMKⅡ蛋白表达(0.45±0.06、0.39±0.05、0.36±0.06)增加幅度显著降低.结论 鞘内注射右美托咪定可减轻CCD大鼠机械痛敏感和热痛敏感,抑制CCD大鼠脊髓CaMKⅡ蛋白表达.     

鞘内注射右美托咪定对切口痛大鼠脊髓p38MAPK表达的影响

目的:探讨右美托咪定对切口痛大鼠的镇痛作用,以及对脊髓p38MAPK表达的影响。方法:选用雄性SD大鼠,随机分为空白对照组(S组):仅鞘内注射NS20ul,单纯模型组(O组):鞘内注射NS20ul和实验组(D组):鞘内注射Dex3.0μg/kg。结果:大鼠术后B组的CPS显著高于A组(P<0.05),其中B组的PWT值显著低于A组(P<0.05),与C组相比无明显差异(P>0.05),显示Dex对切口痛大鼠有明显的镇痛作用。结论:Dex对切口痛大鼠有明显镇痛作用,其镇痛作用可能与抑制脊髓p38MAPK表达有关。     

右美托咪定通过抑制脊髓小胶质细胞活化减轻吗啡戒断反应痛觉过敏

目的 探讨右美托咪定（Dexmedetomidine, Dex）对吗啡（Morphine, M）戒断反应中痛觉过敏的影响及机制。方法 吗啡腹腔注射创建小鼠吗啡戒断反应痛觉过敏模型,根据药物处理随机分为Control、M、M/Dex、M/Min、M/Dex/Min。Von Frey测定各组小鼠机械性痛阈改变,免疫荧光检测脊髓背角小胶质细胞激活变化,Western blot和PCR检测各组脊髓降钙素基因相关肽（Calcitonin gene-related peptide, CGRP）蛋白和mRNA表达变化,并用微透析测定脊髓内炎症因子水平,最后电生理观察右美托咪定对脊髓抑制性突触后电流（Spontaneous inhibitory postsynaptic current, sIPSC）的影响。结果 同Control组相比,M组机械性痛阈显著降低,吗啡戒断痛觉过敏模型创建成功,同时小胶质细胞激活增加,脊髓背角CGRP及炎症因子表达增加。同M组相比,M/Dex、M/Min、M/Dex/Min组痛阈显著升高在模型创建后4h最明显,同时三组小胶质细胞激活均明显减少,脊髓背角CGRP及炎症因子表达降低。电生理结果显示右美托咪定显著增强脊髓背角神经元sIPSC的振幅和频率。结论 右美托咪定通过抑制脊髓小胶质细胞减少CGRP的表达并减轻脊髓炎症反应,且能够增强脊髓抑制性电活动,从而缓解吗啡戒断反应中的痛觉过敏。     

右美托咪定对大鼠吗啡镇痛和耐受的影响

目的探讨右美托咪定对大鼠吗啡镇痛和耐受的影响。方法雄性成年SD大鼠54只,采用随机数字表法,将其分为9组（n=6）,对照组（C组）、吗啡组（M组）、右美托咪定组（D组）、MK-467组（右美托咪定抑制剂组）、右美托咪定加吗啡组（M＋D组）、MK-467加吗啡组（MK＋M组）、右美托咪定加吗啡耐受组（D＋MD组）、MK-467加吗啡耐受组（MK＋MD组）和吗啡耐受组（MD组）。皮下注射吗啡50mg／kg,1次／d,连续4d,建立吗啡耐受模型。于给药前1d测定热甩尾潜伏期（TFL）和热缩足反应潜伏期（TWL）。皮下注射吗啡5mg／kg后,腹腔分别注射右美托咪定和MK-467。每隔30min测定热甩尾潜伏期（TFL）和热缩足反应潜伏期（TWL）（0、30、60、90、120min）。结果与C组比较,M组、D组、M＋D组、D＋MD组和MD组TFL和TWL升高（P〈0．05）。与M组比较,M＋D组TFL和TWL升高（P〈0．05）,与MD组比较,D＋MD组TFL和TWL升高（P〈0．05）。与M组比较,MK＋M组TFL和TWL降低（P〈O．05）,与MD组比较,MK＋MD组TFL和TWL降低（P〈O．05）。结论右美托咪定可增强大鼠吗啡的抗伤害反应,并减轻吗啡耐受反应。     

右美托咪定联合布比卡因通过cAMP/PKA-CREB-BDNF信号通路对大鼠坐骨神经阻滞效果的影响

目的探究右美托咪定联合布比卡因通过cAMP/PKA-CREB-BDNF信号通路对大鼠坐骨神经阻滞效果的影响。方法选取SD大鼠36只随机均分为假手术组(Sham组)、布比卡因组(Bup组)、右美托咪定+布比卡因组(Dex组)和毛喉素+右美托咪定+布比卡因组(Fors组)。分别于阻滞前和阻滞后不同时间测定各组大鼠热刺激缩足反应最大效应百分比(MPE)和后肢伸姿推力(EPT)。于阻滞12 h检测各组脊髓环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)的水平。结果Bup组和Fors组在阻滞后10~180 min、Dex组在阻滞后10~360 min MPE较Sham组升高(P＜0.05);Bup组在阻滞后10~90 min、Dex组和Fors组在阻滞后10~120 min EPT较Sham组降低(P＜0.05)。Dex组在阻滞后10~360 min MPE较Bup组升高(P＜0.05);Dex组和Fors组在阻滞后10~120 min EPT较Bup组降低(P＜0.05)。Fors组在阻滞后10~360 min MPE较Dex组降低(P＜0.05)。阻滞后12 h cAMP、PKA、p-CREB、BDNF表达水平Sham组较其余3组升高,Dex组较Bup组下降,Fors组较Dex组升高(P＜0.05)。结论右美托咪定联合布比卡因增强大鼠坐骨神经阻滞效果,并延长了感觉和运动阻滞时间,其机制可能与抑制cAMP/PKA-CREB-BDNF信号通路有关。     

鞘内注射右旋美托咪啶对大鼠外周疼痛的影响

目的:研究鞘内注射右旋美托咪啶对正常大鼠的外周疼痛的影响。方法:雄性SD大鼠24只,180～220g,分4组(每组6只):正常对照组,不做任何处理(C组);鞘内注射给药:生理盐水10μl组(NS组)、0.75μg/kg Dex10μl组(Dex1组)、1.50μg/kg Dex10μl(Dex2组),于给药前、后30min、1h观察大鼠的疼痛阈值变化。结果:PWMT与TFL,与给药前比较,给药后Dex1、Dex2组明显升高(P<0.01),与C组和NS组比较,Dex1、Dex2组比明显升高(P<0.01),且Dex1和Dex2组无统计学差异。%MPE,Dex1、Dex2组比C组和NS组高(P<0.01)。结论:鞘内注射右旋美托咪啶小剂量0.75μg/kg和1.50μg/kg时,镇痛效果较好,且无脊髓神经毒性。     

右美托咪定鞘内注射在剖宫产麻醉中的应用

目的对比鞘内右美托咪定与鞘内吗啡在剖宫产麻醉中的作用。方法择期剖宫产产妇120例随机分为右美托咪定组、吗啡组、对照组3组。观察麻醉阻滞情况、不良反应情况、新生儿情况及术后镇痛情况。结果鞘内注射右美托咪定能延长感觉和运动阻滞的时间,与吗啡有类似的镇痛作用,而瘙痒、寒战等副作较吗啡组明显减少。结论右美托咪定可以替代吗啡作为鞘内辅助用药。     

脊髓集落刺激因子1在大鼠吗啡镇痛耐受中的作用

目的观察脊髓集落刺激因子1（CSF1）在大鼠吗啡镇痛耐受过程中的作用。方法成功鞘内置管SD大鼠随机分为0.9%氯化钠溶液组（NS组）、吗啡组（MOR组）、CSF1R抑制剂组（PLX3397组）、CSF1R抑制剂+吗啡组（PLX3397+MOR组）,各15只。MOR组和PLX3397+MOR组连续7 d鞘内注射吗啡15 μg建立吗啡耐受动物模型,PLX3397+MOR组同时灌胃给予CSF1R抑制剂PLX3397（290 mg/kg）;NS组鞘内注射及灌胃给予0.9%氯化钠溶液,PLX3397组鞘内注射0.9%氯化钠溶液,灌胃给予CSF1R抑制剂PLX3397。采用50 ℃热水甩尾潜伏期法和机械反射阈值法观察CSF1在吗啡的镇痛耐受中作用;应用免疫组织荧光染色法检测脊髓背角小胶质细胞激活标志物IBA1表达变化;Western blotting法检测吗啡对腰段脊髓CSF1表达的影响。结果连续7 d鞘内注射吗啡,MOR组大鼠最大镇痛效应百分率（percent of maximal possible potential effect,%MPE）进行性降低（P < 0.05）;而与MOR组比较,PLX3397+MOR组大鼠注射吗啡3、5、7 d时%MPE均增加（P < 0.05）;PLX3397组与NS组各时点%MPE差异均无统计学意义（P>0.05）。注射吗啡7 d后,MOR组小胶质细胞标志物IBA-1在大鼠腰段脊髓背角表达较NS组增加（P < 0.05）,MOR+PLX3397组大鼠IBA-1表达较MOR组减少（P < 0.05）;MOR组和MOR+PLX3397组大鼠腰段脊髓CSF1表达均较NS组增加（P < 0.05）,2组CSF1表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论脊髓CSF1参与吗啡耐受形成,抑制脊髓CSF1表达可能为临床治疗吗啡镇痛耐受提供一种新的作用靶点。     

代谢型谷氨酸受体5在吗啡耐受大鼠脊髓中的表达

目的 研究吗啡耐受大鼠脊髓代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)的表达变化及mGluR5拮抗剂MPEP对其表达的影响.方法 雄性SD大鼠随机分为4组:对照组(NS),吗啡耐受组(Mor),吗啡加MPEP组(Mor+MPEP)和MPEP组.采用鞘内重复给药方式建立慢性吗啡耐受模型,鞘内注射吗啡10 μg,每日给药2次,连续7 d.通过甩尾实验,观察给药前和给药后30 min大鼠甩尾潜伏期并计算最大镇痛效应百分比[MPE%=(给药后阈值-基础阈值)/(最大阈值-基础阈值)×100%].采用免疫荧光和免疫印迹(Western blot)方法检测并比较各组L4～5脊髓组织mGluR5的表达.结果 鞘内重复注射吗啡后,吗啡组MPE%逐渐下降,到第7天与NS组比较,差异无统计学意义(P>0.05),吗啡加MPEP组第7天仍表现出较强的镇痛效应(P<0.05).免疫荧光和Western blot显示吗啡耐受组mGluR5表达升高,吗啡加MPEP组mGluR5的表达低于吗啡耐受组(P<0.05),但高于NS组(P<0.05).结论 mGluR5拮抗剂MPEP有延缓吗啡耐受的作用.吗啡耐受大鼠脊髓背角mGluR5表达上调,MPEP可能通过部分抑制mGluR5的上调节拮抗吗啡耐受.     

吗啡耐受大鼠脊髓NMDA受体NR2A亚基的表达

目的 研究N-甲基-M-天冬氨酸受体(NMDA)NR2A亚基在吗啡耐受大鼠脊髓的分布和表达变化.方法 12只雄性SD大鼠随机分成对照组(C组,n=6),C组和吗啡耐受组(M组,n=6),C组:鞘内注射生理盐水10μl;M组:鞘内注射吗啡10μg.每日给药2次,连续7d.给药前和给药后30min通过测定甩尾潜伏期(TFL)观察大鼠热痛阈的变化.最后一次给药后次日处死动物,取L4～5脊髓组织,采用免疫荧光方法检测NR2A在各组大鼠脊髓的表达.结果 随着用药天数增加,M组TFL逐渐下降,到第7天M组与C组比较差异无显著性[(3.25±0.93)s,(2.66±0.27)s,P＞0.05],成功建立吗啡耐受模型.NR2A在脊髓的分布贯穿全层.M组脊髓背角浅层NR2A表达(OD值:9617±1233)较C组(OD值:2.66±0.93)升高(t=3.133,P＜0.05).结论 鞘内重复注射吗啡后大鼠脊髓背角NMDA受体NR2A亚基表达上调,可能是吗啡耐受形成机制之一.     

Intrathecal co-administration of ketamine and morphine preventing activation of astrocytes and decreasing releases of IL-1β and IL-6 from spinal cord in rats of morphine tolerance

Objective: To investigate the effects of intrathecal administration of ketamine, a non-competitive N-methy-D-aspartate receptor antagonist, combined with morphine on the activation of astrocytes and releases of IL-1β and IL-6 from spinal cord in the rats of morphine tolerance. Methods: Twenty-seven Sprague-Dawley male rats were randomly divided into sham-operated, morphine tolerance, and morphine plus ketamine group. The subarachnoid catheterization of all the rats was prepared by the method of Jianping Yang.Morphine 20 μg in 10 μl was administrated intrathecally to induce spinal morphine tolerance once daily for 5 consecutive days. Morphine and ketamine 250 μg in 10 μl total volume was given in morphine plus ketamine group. Three groups all received intrathecal morphine 5 μg in 10 μl for morphine challenge test at 24 h after last administration of the morphine. After morphine challenge test, lumbar spinal tissues were taken for measurement of glial fibrillary acidic protein (GFAP) of astrocyte in lumbar spinal horn cord by immunohistochemistry and IL-1βand IL-6 of spinal cord by ELISA. Results: The decrease of ％MPE induced by chronic intrathecal morphine was inhibited by ketamine and hyperalgesia and allodynia induced by morphine-withdrawl were alleviated. The average areas, the average absorbency (-A), the integral absorbency (A) of GFAP immuno-reactive cells in the dorsal horn, and IL-1β and IL-6 of spinal cord were significantly larger in morphine tolerance group than in morphine plus ketamine group. Conclusion: Co-administration of ketamine and morphine enhance antinociceptive effect of morphine and prevent the development of morphine tolerance. Ketamine might attenuate the activation of astrocytes and inhibit the release of IL-1β and IL-6 from spinal cord in repeated intrathecal morphine rats.     

芬太尼对慢性吗啡耐受大鼠中脑导水管周围灰质μ受体与β-arrestin 2表达的影响

目的 观察芬太尼对慢性吗啡耐受大鼠中脑导水管周围灰质μ受体与β-arrestin2表达的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠40只,体重(230±20) g,随机分为5组(n=8):NS组(对照组):皮下注射生理盐水1 ml/kg 2次,间隔30 min;M组(慢性吗啡耐受组):皮下注射吗啡10 mg/kg,30 min后皮下注射生理盐水1 ml/kg;MF1、MF2、MF3组:吗啡用药同M组,注射吗啡30 min后分别皮下注射芬太尼3、6、12 μg /kg.各实验组每日给药2次,连续9 d,给药后进行痛阈测定.断头处死大鼠,取中脑导水管周围灰质组织(PAG),逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法 测定μ受体、β-arrestin2的mRNA表达,免疫印迹(Western- blot)方法 测定μ受体、β-arrestin2的蛋白表达.结果 注射吗啡后,M组大鼠痛阈值明显高于NS组(P<0.01),连续给药9天后,痛阈值降至给药前水平.与M组比较,MF2组与MF3组大鼠痛阈值下降趋缓,第7、9天,MF2组与MF3组痛阈值均高于M组(P<0.05或0.01),MF1组差异无统计学意义(P＞0.05).与NS组比较,M组μ受体mRNA及其蛋白表达显著下调(P<0.01);与M组比较,MF2组和MF3组μ受体mRNA及其蛋白表达上调(P<0.05或0.01),MF1组差异无统计学意义(P＞0.05).M组β-arrestin2mRNA及其蛋白表达明显低于NS组(P< 0.01);MF2组和MF3组β-arrestin2 mRNA及其蛋白表达高于M组(P<0.05或0.01),而MF1组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 芬太尼6、12 μg/kg通过上调慢性吗啡耐受大鼠PAG 部位μ受体与β-arrestin2表达,可增强吗啡镇痛作用,部分延缓慢性吗啡耐受产生.     

静脉注射右美托咪啶和咪唑安定对蛛网膜下隙阻滞麻醉效果的影响

目的 比较静脉注射右美托咪啶和咪唑安定对蛛网膜下隙阻滞麻醉效果的影响. 方法 选择择期在蛛网膜下隙阻滞麻醉下行经尿道前列腺电切术患者90例（ASA Ⅰ-Ⅱ级）,随机分为3组：对照组（C组）、右美托咪啶组（D组）和咪唑安定（M组）,每组30例.D组患者预先静脉泵注右美托咪啶0.5 μg/kg,M组患者预先静脉泵注咪唑安定0.05 mg/kg,C组则给予等容生理盐水10 ml.各组患者行蛛网膜下隙阻滞,均给予0.5％罗哌卡因2ml.比较各组患者一般情况;Ramsay镇静评分、感觉阻滞平面、感觉及运动阻滞恢复时间;术中低血压、心动过缓发生例数;术后首次要求使用镇痛药的时间及各组术后24h要求使用镇痛药物的例数. 结果 三组患者一般情况无明显差异;与C组比较,D组和M组镇静效果满意（P＜0.05）,而发生低血压、心动过缓副作用无明显差异（P＞0.05）;与M组比较,D组患者最高感觉阻滞平面明显增高（p＜0.05）,感觉阻滞恢复时间及术后首次要求使用镇痛药物的时间明显延长（P＜0.05）,术后24h要求使用镇痛药物的病例明显减少（P＜0.05）. 结论 蛛网膜下隙阻滞前单次剂量静脉注射右美托咪啶0.5 μg/kg和咪唑安定0.05 mg/kg均能产生良好的镇静效果;而相比咪唑安定,右美托咪啶能明显延长罗哌卡因引起的感觉阻滞时间,并具有较好的镇痛效果.     

加巴喷丁联合阿米替林治疗阿片耐受的重度癌痛的临床回顾性研究

目的 通过回顾性研究,评价加巴喷丁联合阿米替林治疗阿片耐受(opioid tolerance)的重度癌痛(cancer pain)的临床疗效.方法 以2015年9月至2016年9月间,德阳市人民医院肿瘤科诊断明确的仅能姑息对症治疗的阿片耐受的重度癌痛患者为研究对象.按接受的镇痛治疗方案分为两组,对照组29例:仅给予吗啡(吗啡缓释片、吗啡注射液)治疗;观察组28例:给予加巴喷丁、阿米替林及吗啡(吗啡缓释片、吗啡注射液)治疗.治疗目标为背景痛(background cancer pain)数字评分法(numberical rating scale,NRS)≤3分,两组患者均根据疼痛程度调整药物用量,当出现爆发痛(breakthrough pain,BTP)时采用盐酸吗啡注射液皮下注射.比较两组患者疼痛稳定后焦虑、抑郁、生存质量、日需吗啡量.结果 ①焦虑、抑郁状态改善:与治疗前相比,两组患者焦虑、抑郁评分均下降(P＜0.05),但观察组较对照组下降更明显(P＜0.05);②日需吗啡量:相比治疗前,疼痛控制稳定需要增加一定量的吗啡,但观察组增加量较对照组少(P＜0.05);③生存质量:与治疗前相比,两组患者的躯体功能、角色功能及社会功能无明显改变(P＞0.05),但情绪功能改善(P＜0.05),对照组患者失眠、总健康较治疗前无明显改善(P＞0.05),且恶心呕吐、便秘、食欲丧失较治疗前症状加重(P＜0.05).观察组失眠、食欲丧失、总健康得到改善(P＜0.05),恶心呕吐、便秘较治疗前无明显变化(P＞0.05).结论 加巴喷丁联合阿米替林不仅可增强吗啡对阿片耐受的重度癌痛的疼痛控制,且不增加恶心呕吐、便秘,还可以改善焦虑、抑郁、失眠和食欲丧失等症状,提高总健康评分.     

右美托咪定对大鼠体外循环期间炎性因子、S100β和NSE的影响

目的 探讨不同剂量右美托咪定(Dex)对大鼠体外循环(CPB)脑损伤的脑保护作用.方法 采用随机数字表法将体重250～ 350 g、健康成年SD大鼠40只分为4组(n=10):假手术组(S组)、CPB组(C组)、DexⅠ组(DⅠ组)和DexⅡ组(DⅡ组).S组仅行动静脉穿刺置管术,DⅠ组、DⅡ组和C组行CPB转流2h,S组和C组静脉泵注与DⅡ组相同容量的生理盐水.DⅠ组在CPB前10 min静脉泵注Dex 2.5 μg/kg负荷剂量,随后以2.5 μg/(kg·h)的速度静脉输注,CPB转流2h;DⅡ组Dex负荷剂量为5 μg/kg,静脉输注速度为5μg/(kg·h).于CPB前(T0)、CPB 1 h(T1)、CPB 2 h(T2)时采集静脉血,测定血浆中白细胞介素(IL)-6、IL-10、S100β和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的浓度.结果 与S组比较,C组T1、T2时点血浆IL-6、IL-10、S100β和NSE升高(P＜0.05);与C组比较,DⅠ组T2时点血浆IL-6、S100β降低(P＜0.05),DⅡ组T1、T2时点血浆IL-6、S100β降低(P＜0.05),DⅠ组和DⅡ组T1、T2时点血浆NSE降低(P＜0.05);与DⅠ组比较,DⅡ组T1时点血浆S100β降低(P＜0.05),DⅡ组T2时点血浆NSE降低(P＜0.05).结论 Dex可以剂量依赖性地降低S100β和NSE水平,有脑保护作用,其机制可能与抑制炎性反应有关.