姜黄素抑制肺癌细胞A549上皮间质转化的机制研究

目的 探讨姜黄素对肺癌细胞A549上皮间质转化的影响。方法 姜黄素诱导肺癌细胞A549 24 h,CCK-8法检测A549细胞活性,Transwell实验检测A549细胞迁移、侵袭的能力,Western blotting检测上皮间质转化标志蛋白的相对表达量,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测HOTAIR、E-cadherin、N-cadherin及Snail mRNA的相对表达量,测序方法检测姜黄素诱导后lncRNA表达的变化,实验验证介导姜黄素发挥作用的具体非编码RNA,分析HOTAIR与临床病理参数之间的关系。结果 CCK-8法检测结果显示,姜黄素诱导肺癌细胞A549 24 h后,不同浓度组肺癌细胞A549的OD值比较,差异有统计学意义（P <0.05）,随着姜黄素浓度的升高,OD值降低。Transwell结果显示,姜黄素诱导肺癌细胞A549 24 h后,姜黄素诱导组抑制肺癌细胞A549的侵袭、迁移,与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）。Western blotting和qRT-PCR检测结果显示,姜黄素诱导组的间质表型基因和蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Snail）与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,N-cadherin、Snail相对表达量下降,E-cadherin相对表达量升高。癌旁正常组和肺癌组中HOTAIR的相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）,肺癌组高于癌旁正常组。测序检测和qRT-PCR结果显示,姜黄素抑制HOTAIR的表达。分析HOTAIR在肺癌组织中的表达及其与临床病理参数之间的关系显示,HOTAIR的表达与TNM分期、分化程度、淋巴结转移密切相关。对照组、姜黄素诱导组、姜黄素诱导+HOTAIR过表达组A549细胞OD值比较,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 姜黄素有效抑制肺癌细胞A549的增殖、侵袭及迁移,姜黄素抑制lncRNA HOTAIR表达,姜黄素抑制肺癌细胞A549上皮间质转化是通过HOTAIR实现的。     

电离辐射促进食管鳞癌细胞上皮间质转化及迁移

目的:探讨电离辐射对人食管鳞癌TE-1细胞株的上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响和潜在机制。方法:用不同强度的电离辐射(0,2,4,8 Gy)处理TE-1细胞,定量PCR检测Snail 1、激活蛋白1(activator protein-1,AP-1)的mRNA表达,蛋白质印迹法检测Snail 1、Slug、E-钙黏蛋白、波形蛋白的表达量,免疫荧光观察E-钙黏蛋白、波形蛋白的表达,采用划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;结合Notch通路抑制剂DAPT,经蛋白质印迹法测定电离辐射(4 Gy)后TE-1细胞中Notch 1/NICD/Hes 1通路蛋白、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达变化。结果:电离辐射处理后TE-1细胞EMT相关转录因子Snail 1、Slug、AP-1明显上调,E-钙黏蛋白的表达显著减少,波形蛋白、MMP-9的表达显著增多,且4Gy处理水平即具有明显的促进作用(P<0.01);电离辐射上调了TE-1细胞的迁移能力(P<0.05);电离辐射通过上调Notch 1/NICD/Hes 1信号通路蛋白的表达水平,促使EMT相关蛋白的上调(P<0.01)。结论:电离辐射通过人食管鳞癌TE-1细胞中Notch信号通路诱导EMT及迁移。     

抑制胃癌Hedgehog通路对转化生长因子β诱导的上皮间质化的影响

目的 探讨Hedgehog通路对胃癌转移方面的作用,特别是探讨其在胃癌上皮间质化(EMT)中起的作用.方法 利用药物处理(环靶明)或小干扰RNA敲除基因的手段,抑制胃癌的Hedgehog通路,并通过显微镜下观察、Western印迹、Transwell侵袭及迁移实验,分别探讨与EMT相关的细胞形态、蛋白质水平及侵袭迁移等功能性改变.结果 抑制Hedgehog通路后胃癌细胞的侵袭及迁移能力明显下降.胃癌细胞在转化生长因子(TGF)-β诱导下,细胞呈现梭形的外观、上皮化蛋白(E-钙黏蛋白)水平下调,间质化波形蛋白(Vimentim)水平上调,侵袭及转移能力分别提高3倍及4倍.TGF-β诱导后可上调Hedgehog通路的Sonic Hedgehog(SHH)及锌指转录因子(Gli)l蛋白的表达水平,提示可激活Hedgehog通路.在TGF-β的持续刺激下,抑制Hedgehog通路可逆转EMT,细胞恢复上皮化外观,E-钙黏蛋白表达上调,Vimentim表达下调,侵袭及迁移能力下调3倍及2倍.结论 胃癌Hedgehog通路被抑制后,可逆转TGF-β引起的胃癌EMT化,提示Hedgehog通路在胃癌的转移方面发挥重要的作用.     

姜黄素联合紫杉醇对肺癌细胞PC9凋亡的影响

目的:研究姜黄素联合紫杉醇对人肺癌细胞PC9凋亡的影响。方法:将不同浓度梯度姜黄素和紫杉醇单用（单药组）和联合（联合组）作用于PC9细胞,MTT法测定其对PC9的增殖抑制作用,流式细胞术检测单药和双药联合对细胞周期分布和凋亡的影响,Western blot法检测凋亡相关蛋白表达的变化。结果:两药均以时间和剂量依赖方式抑制PC9细胞的增殖,联合组抑制作用大于单药组（P<0.01）。两药均能诱导PC9细胞发生凋亡和G₀/G₁期阻滞,联合组细胞凋亡和G₀/G₁期阻滞作用显著增强（P<0.01）。Western blot法检测显示,联合组Caspase-3蛋白、Bcl-2、Bax的改变显著大于单药组（P<0.01）。结论:姜黄素、紫杉醇可抑制人肺癌PC9细胞增殖,诱导其凋亡,阻滞细胞G₀/G₁期,伴随Caspase-3活性上调,且两者联合应用可显著促进细胞凋亡。     

上皮间质转化分子机制研究进展

上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）,是上皮细胞失去上皮特性获得间质细胞表型的一种生物现象,发生EMT后,细胞E-钙黏蛋白、角蛋白等上皮标记基因表达降低,波形蛋白、纤维连接素、N-钙黏蛋白等间质标记基因表达升高。已证实EMT参与肿瘤侵袭转移,在肿瘤转移过程中,癌细胞通过EMT而获得问质细胞表型和侵袭性,实现对周围组织的浸润;在种植部位,     

雷公藤红素抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移及上皮间质转化

目的 研究雷公藤红素在鼻咽癌细胞增殖、迁移及上皮间质转化中的作用。方法 使用终浓度为1.8 μmol/L的雷公藤红素处理人鼻咽癌HNE1、CNE2细胞,并设二甲基亚砜（DMSO）对照组。用CCK-8法检测HNE1、CNE2细胞的增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,细胞克隆形成实验检测细胞的克隆形成数,细胞黏附与分离实验检测细胞的黏附、分离能力,蛋白质印迹法检测细胞上皮间质转化蛋白（E-钙黏蛋白、β-连环蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白）的表达。结果 与DMSO对照组比较,采用1.8 μmol/L雷公藤红素处理24、48、72 h后,HNE1细胞的增殖能力均降低（P均<0.05）,处理48、72 h后,CNE2细胞的增殖能力均降低（P均<0.05）;处理48 h后,HNE1、CNE2细胞的迁移能力均下降（P均<0.05）;处理2周后,HNE1、CNE2细胞的克隆形成数均减少（P均<0.05）;处理1 h后,HNE1、CNE2细胞的黏附率降低（P<0.05）;处理24 h后,HNE1、CNE2细胞的分离率降低（P<0.05）;处理6 h后,HNE1、CNE2细胞中E-钙黏蛋白、β-连环蛋白的表达升高（P<0.05）,N-钙黏蛋白、波形蛋白的表达降低（P均<0.05）。结论 雷公藤红素可抑制鼻咽癌HNE1、CNE2细胞的增殖、迁移及上皮间质转化。     

药物干预TGF-β1诱导的上皮间质化作用的最新研究进展

上皮间质化是肿瘤转移涉及的重要过程,可以使肿瘤细胞获得更强的侵袭能力.对上皮间质化过程的抑制逆转可以阻止肿瘤的转移,改善癌症患者的预后.近些年对上皮间质化过程的各种通路的作用靶点以及药物的研究已经成为热点.试图通过对药物干预TGF-β1诱导上皮间质化过程的研究现状以及发展前景进行介绍,为相关的研究提供思路.     

Hedgehog信号通路调控胰腺癌细胞上皮间质转化的作用机制

目的 观察特异性阻断hedgehog(Hh)信号通路对胰腺癌Panc-1细胞上皮间质转化(EMT)过程的影响,探讨其分子机制.方法 设计并合成针对Smoothened (SMO)基因特异性的RNA干扰靶点,运用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默SMO基因表达以阻断人胰腺癌Panc-1细胞Hh信号通路.应用Matrigel/Transwell法检测阻断Hh信号通路后胰腺癌细胞侵袭能力的变化,应用实时PCR及Western印迹方法检测阻断Hh通路后Panc-1细胞EMT标志物E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、Vimentin、Fibronectin等的表达变化;并检测EMT调控因子Snail、Slug等的表达变化.结果 稳定干扰SMO基因表达阻断Hh信号通路后,人胰腺癌Panc-1细胞侵袭能力明显降低,p=0.020;上皮表型标志物E-cadherin表达明显上调,而间质表型Vimentin、Fibronectin、N-cadherin等的表达水平显著下调,P值分别为0.020、0.001、0.031和0.022;与对照组相比,SMO干扰组细胞中转录因子Snail、Slug的表达水平均显著下调,P值分别为0.018和0.016.结论 应用慢病毒介导的RNA干扰技术特异性沉默SMO基因阻断人胰腺癌细胞中Hh通路活性,可显著抑制Panc-1细胞EMT过程,其机制与下调转录因子Snail及Slug表达有关.     

微RNA在肿瘤上皮间质转化中的作用及机制研究进展

随着肿瘤学研究的不断深入,上皮间质转化(epitheliamesenchymal transition,EMT)在肿瘤侵袭和转移中发挥的用逐渐被人们认识和关注。近年来微RNA(microRNA,miRNA)的研究取得了极大进展,但其在肿瘤EMT过程中的作机制仍有待进一步研究。大量研究显示,miRNAs通过多种号通路参与肿瘤EMT的各个环节的调控过程[1]。本文主就miRNAs在肿瘤EMT中发挥的作用及目前研究的最新展进行综述。     

上皮间质转化的分子机制及其在肿瘤中的作用

参与上皮间质转化（EMT）过程的信号转导机制较多且复杂,目前越来越多的研究显示,EMT与肿瘤细胞的侵袭和转移有着重要联系,是近年来肿瘤转移研究的热点。就EMT相关分子信号机制及其在肿瘤中的作用的研究做一综述。     

他莫昔芬对ER- GPER+乳腺癌细胞上皮间质转化的影响及机制

目的：探讨他莫昔芬（TAM）对雌激素受体（ER）阴性、G蛋白偶联雌激素受体（GPER）阳性乳腺癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法：以ER阴性（ER-）、GPER阳性（GPER+）乳腺癌MDA-MB-468细胞为研究对象,用TAM处理细胞,GPER特异性抑制剂G15抑制胞内GPER活性,siRNA干扰GPER蛋白表达,侵袭小室实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测ERα、GPER、Vimentin、E-cadherin及N-cadherin蛋白表达变化。结果：TAM（5 μmol/L）可明显增强MDA-MB-468细胞的侵袭能力（P＜0.01）;G15（10 μmol/L）预处理能显著抑制TAM诱导的细胞侵袭活动（P＜0.01）;GPER-siRNA可明显干扰MDA-MB-468细胞GPER蛋白表达（P＜0.01）;干扰GPER蛋白表达能有效抑制TAM诱导的细胞侵袭活动（P＜0.01）。TAM处理明显诱导Vimentin和N-cadherin蛋白表达上调（P＜0.01）,E-cadherin蛋白表达下调（P＜0.01）;G15预处理或干扰GPER蛋白表达均能抑制TAM的上述诱导作用（均P＜0.05）。结论：TAM能诱导ER- GPER+乳腺癌MDA-MB-468细胞EMT,其作用与其激活GPER有关。     

微小RNA分子miR-214对食管鳞癌细胞Eca109侵袭能力的影响

目的 探讨微小RNA分子miR-214对食管鳞癌细胞Eca109侵袭能力的影响及其可能的分子机制.方法 根据人源miR-214序列合成双链模拟物.通过脂质体转染将miR-214模拟物分子导入食管鳞癌Eca109细胞中,转染无关miRNA模拟物作为对照.采用定量PCR法检测细胞中成熟miR-214分子水平,以Matrigel包被的Transwell实验测定侵袭细胞率,通过蛋白质印迹法检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达,利用流式细胞术检测E-cadherin阳性细胞率.结果 Eca109细胞转染miR-214模拟物48 h后,其成熟miR-214水平较对照组明显上升(P＜0.01);细胞侵袭能力较对照组降低(P＜0.05).同时,miR-214转染组的E-cadherin表达水平及E-cadherin阳性细胞率较对照组下降(P＜0.05).结论 miR-214可能通过抑制细胞上皮间质转化(EMT)的方式抑制食管鳞癌细胞的侵袭能力.     

白藜芦醇对食管鳞癌Eca-109细胞侵袭迁移及EMT的影响

目的:研究白藜芦醇(RES)对食管鳞癌Eca-109细胞侵袭迁移及上皮间质转化(EMT)的影响.方法:用不同浓度(50和100 μmol/L)的RES处理Eca-109细胞,采用细胞划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭能力,荧光定量PCR检测EMT蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果:与对照组比较,RES各浓度(50 μmol/L和100 μmol/L)组均可明显抑制Eca-109细胞侵袭迁移(P<0.01),下调N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达(P<0.05~P<0.01),增加E-cadherin mRNA和蛋白表达(P<0.01).结论:RES抑制Eca-109细胞侵袭迁移能力,其机制可能通过下调MMP-2、MMP-9的表达,调控EMT蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)的表达、抑制上皮间质转化过程.     

姜黄素通过上皮-间质转化过程对口腔鳞癌细胞株HN4侵袭转移的影响

旨在探讨姜黄素对口腔鳞癌细胞株HN4 的增殖、侵袭和凋亡效应及其分子机制。方法0～60μmol/L 姜黄素作用于口腔鳞癌细胞株HN4,24 h后应用MTT 法检测细胞的生长活性;划痕实验检测细胞迁移作用;Transwell 实验测定对细胞的侵袭作用;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot测定P53、E-cadherin和Snail 蛋白表达水平。结果MTT 检测结果显示各浓度姜黄素对癌细胞生长有抑制,其中,20μmol/L姜黄素有明显抑制。随着姜黄素浓度的增加,对细胞凋亡有明显作用。姜黄素处理后细胞周期生长阻滞于G0/G1期。Snail的蛋白表达量随着姜黄素的浓度增加而减少。P53 和E-cadherin的表达量随着姜黄素的浓度增加而增加。结论姜黄素能显著抑制口腔鳞癌细胞株HN4 的体外生长,上调P53 蛋白表达诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一。     

Growth inhibition and apoptosis inducing mechanisms of curcumin on human ovarian cancer cell line A2780

Curcumin,aphenolicpigmentextractedfrom curcuma,isthemajoreffectivecomponentofthat traditionalChinesemedicineandusedasadietarycoloringagentandanaturalcondiment.Recentre searchreportshaveshownthatcurcumincouldse lectivelyinhibittheproliferationandinducetheap optosisofmanytumorcells,buttheinvolvedmech anismsstillunclear(1,2).Thephenomenonthatcurcu mininducesapoptosisoftumorcellscouldbeseen innumerouscancers,however,theeffectsofcurcu minonhumanovariancancercellshavenotbeenre portedyet.Inthisresear…     

PI3K抑制剂对食管癌Eca-109细胞株放射增敏作用及机制

目的:研究PI3K抑制剂对食管癌细胞株Eca-109放射增敏作用及机制.方法:以食管癌细胞株Eca-109为实验对象,MTT法观察PI3K抑制剂LY294002对Eca-109细胞增殖抑制;克隆形成实验分析细胞放射敏感性;RT-PCR检测DNA双链断裂修复基因DNA-PKcs mRNA表达;流式细胞技术检测细胞周期.结果:PI3K抑制剂LY294002对Eca-109细胞有生长抑制作用,且呈剂量依赖性,在较低浓度(10μmol/L)时即可降低Eca-109细胞的克隆形成率,其放射增敏比为1.58.药物LY294002组DNA-PKcs mRNA表达受抑,但与对照组比较差异无统计学意义;照射组表达较对照组明显升高(P<0.05);药物LY294002+照射组的表达较照射组下降(P<0.05).药物LY294002组G2期细胞比例与对照组比较差异无统计学意义,照射组较对照组升高(P<0.01),药物LY294002+照射组G2期细胞比例较照射组下降(P<0.05).结论:PI3K抑制剂LY294002对Eca-109细胞有放射增敏作用,其机制可能与抑制肿瘤细胞DNA双链断裂修复基因DNA-PKcs及减少G2期细胞...     

姜黄素对前列腺癌PC-3细胞作用的研究

目的观察姜黄素对前列腺癌PC-3细胞的体外作用,并探讨其可能的作用机制。方法应用光镜形态学、MTT法、流式细胞仪和免疫细胞化学法观察10、20和30μmol/L浓度的姜黄素在体外对前列腺癌PC-3细胞的作用,与其对细胞DNA含量和对bcl-2表达的影响。结果20μmol/L以上浓度的姜黄素对前列腺癌PC-3细胞具有明显的生长抑制作用(抑制率>54.5%,P<0.05),诱导凋亡(凋亡率>26.6%,P<0.05),下调bcl-2的表达,(表达率<9.5%),与阳性对照组bcl-2表达率30.7%相比,差异有显著性(P<0.05)。结论姜黄素对前列腺癌PC-3细胞有明显的生长抑制和诱导凋亡的作用,为姜黄素应用于临床激素非依赖性前列腺癌的治疗提供了实验依据。     

ZEB1对食管癌细胞侵袭转移的影响及作用机制研究

目的 探讨E盒结合锌指蛋白1（zinc finger E-box-binding protein 1,ZEB1）对食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）增殖和侵袭转移的影响和机制。 方法 选择人ESCC细胞系EC9706细胞为研究对象,采用ZEB1 shRNA对EC9706细胞进行转染,敲除ZEB1表达;采用CCK8法检测细胞活力;细胞侵袭转移能力通过划痕实验检测;利用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）技术检测转染后细胞ZEB1 mRNA表达水平;ZEB1,细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinase,ERK）1/2,p-ERK1/2, E-cadherin和N-cadherin蛋白表达水平通过免疫印迹（Western blot,WB）检测。 结果 与对照组相比,敲除ZEB1的EC9706细胞系的细胞活力明显降低,并抑制了ESCC的侵袭转移能力（P＜0.05）。ZEB1表达水平降低减少了ERK1/2激活水平,促进E-cadherin表达,抑制N-cadherin表达（P＜0.05）。 结论 下调ZEB1表达抑制ESCC细胞增殖和侵袭转移能力,其作用机制与ERK1/2激活抑制及调控E-cadherin、N-cadherin相关。