藤梨根提取物抑制肺癌A549细胞增殖作用机制研究

目的观察藤梨根乙酸乙酯提取物（RAE）对肺癌A549细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养肺癌A549细胞,分别给予不同浓度的RAE进行干预,流式细胞术检测用药后A549细胞凋亡率变化,免疫组化SP法检侧细胞Bcl-2、Bax蛋白表达变化,RT—PCR法检测细胞Bcl-2、Bax mRNA表达,激光共聚焦显微技术测定细胞胞内Ca^2＋浓度变化。结果各治疗组给予RAE作用后细胞凋亡率明显增加,并存在时相性和量效依赖性;用药后A549细胞Bcl-2蛋白和mRNA表达降低,而Bax蛋白和mRNA表达上调,细胞内Ca^2＋浓度明显升高,与对照组比较均有显著统计学差异（P均〈0．01）,亦存在时相性和量效依赖性。结论RAE可明显诱导肺癌A549细胞凋亡,其机制可能与降低其Bcl-2蛋白和mRNA表达、上调Bax蛋白和mRNA表达、升高细胞内Ca^2＋浓度有关。     

藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞增殖的影响

目的 探讨藤梨根乙酸乙酯提取物影响肺癌A549细胞生长增殖的作用机制.方法 体外培养肺癌A549细胞,分别给予不同浓度的藤梨根乙酸乙酯提取物进行干预,倒置显微镜观察藤梨根乙酸乙酯提取物作用后A549细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测藤梨根乙酸乙酯提取物对A549细胞增殖活性的影响,集落形成实验观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌克隆原细胞增殖的影响,3H-掺入法检测藤梨根乙酸乙酯提取物对A549细胞DNA合成的影响,免疫组化SP法检测用药后A549细胞Ki-67抗原表达变化.结果 倒置显微镜下观察细胞形态学变化、MTT实验、集落形成实验结果均显示在体外藤梨根乙酸乙酯提取物在一定浓度下可以抑制肺癌A549细胞的生长,当药物浓度在20～160 μg/ml时,抑制呈现出明显的时间和剂量依赖性.并且A549细胞epm值及增殖指数随着药物剂量的增加和作用时间的延长而逐渐降低,仍以40、80、160 μg/ml组作用明显,与对照组比较差异显著,有统计学意义(P＜0.05).结论 藤梨根乙酸乙酯提取物可以明显抑制肺癌A549细胞的生长、增殖,其机制可能与抑制细胞DNA合成、降低Ki-67抗原表达有关.     

藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用

目的观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用。方法体外培养肺癌A549细胞,分别给予40、80、160μg/ml的藤梨根乙酸乙酯提取物（实验组）,同时设对照组（0.04%DMSO＋肺癌A549细胞）。采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测用药后DNA梯状条带、TUNEL检测用药后肺癌A549细胞凋亡率的变化、免疫组化SP法检测用药后肺癌A549细胞Survivin蛋白表达变化、RT-PCR法检测用药后A549细胞Survivin mRNA的表达。结果实验组细胞DNA凝胶电泳均出现凋亡细胞所特有的DNA梯状条带图谱,而对照组细胞未出现。各实验组细胞随着藤梨根乙酸乙酯提取物浓度的增加,细胞凋亡率明显增加,并存在时相性和量—效依赖性;其Survivin蛋白和mRNA表达均低于对照组（P均〈0.05）,亦存在时相性和量—效依赖性。结论藤梨根乙酸乙酯提取物可明显诱导肺癌A549细胞凋亡,其机制可能与降低Survivin蛋白和mRNA表达有关。     

藤梨根提取物抗肺癌作用的体内实验研究

目的研究藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长抑制及凋亡诱导作用,探讨其可能机制。方法用肺癌A549细胞建立肺癌裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、治疗组（高剂量组、低剂量组）。根据瘤体积变化绘制移植瘤生长曲线,根据终末瘤质量比较计算抑制率,移植瘤细胞凋亡指数检测采用TUNEL法,移植瘤细胞Bcl-2、Bax蛋白、Ki-67抗原表达检测采用免疫组化SP法,RT-PCR检测移植瘤Bcl-2、Bax mRNA表达。结果各治疗组经藤梨根乙酸乙酯提取物治疗后移植瘤生长缓慢,治疗结束时治疗组移植瘤质量及瘤体积明显低于对照组（P均〈0.01）,高、低剂量组的瘤质量抑制率分别为69.00%和45.09%。治疗组移植瘤细胞透射电镜下均可见不同阶段典型的凋亡细胞形态学变化。各治疗组移植瘤组织凋亡指数明显高于对照组,而增殖指数明显减低,Bcl-2 mR-NA及蛋白表达较对照组亦明显减少,Bax蛋白及mRNA表达较对照组明显增加,高剂量组尤其明显（P均〈0.01）。结论藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长有抑制作用,其机制与抑制移植瘤细胞的增殖活性和诱导癌细胞凋亡有关,而降低Bcl-2基因表达、上调Bax基因表达可能是其诱导细胞凋亡机制之一。     

S100A6对人肺癌细胞株Calu-6分化的影响研究

目的 探讨S100A6对人肺癌细胞株Calu-6分化方向的影响。方法 本实验时间为2021年6月至2022年2月,将15只8～10周龄BALB/c裸鼠采用简单随机法分为S100A6实验组7只、空载体组4只、空白对照组4只。在前期实验基础上构建S100A6过表达慢病毒、空载体慢病毒,将S100A6过表达慢病毒、空载体慢病毒及空细胞分别注射到S100A6实验组、空载体组、空白对照组裸鼠右前背部。第2周开始每周测量裸鼠的肿瘤体积,5周后处死裸鼠,取出肿瘤组织。采用免疫组化印记法检测肿瘤组织中甲状腺转移因子(TTF)-1、天冬氨酸蛋白酶A(NapsinA)、P40、CK5/6、P63的表达情况。结果 第2、3、4、5周三组裸鼠肿瘤体积比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中S100A6实验组裸鼠肿瘤体积小于空载体组和空白对照组(P<0.05)。三组肿瘤组织中TTF-1、NapsinA、P40、CK5/6均表达阳性,S100A6实验组、空载体组、空白对照组肿瘤组织中P63表达阳性率分别为7/7、3/4、3/4。结论 S100A6可抑制人肺癌细胞株Calu-6增殖,对人肺癌细胞株C...     

诺帝对肺腺癌细胞系A549细胞凋亡的诱导作用

目的探讨化学合成物诺帝对人肺腺癌细胞系A549细胞凋亡和凋亡调控基因bcl-2蛋白表达的影响。方法采用自行合成的化合物诺帝（终浓度为100umol／L）处理A549细胞,于处理后12、24、48和72h用细胞培养、流式细胞仪、免疫组化及图像分析等方法检测诺帝对A549细胞凋亡和bcl-2蛋白的表达。结果一定浓度的诺帝处理A549细胞12～48h,均可诱导A549细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数增加越明显;诺帝处理A549细胞后,出现细胞bcl-2蛋白表达水平显著降低。结论诺帝诱导了A549细胞的凋亡,其作用可能与其下调了bcl-2蛋白的表达有关。     

吲哚美辛联合奥沙利铂对人肺癌A549细胞株裸鼠移植瘤微淋巴管生成的影响及其化疗增敏作用

目的 研究非甾体抗炎药物吲哚美辛与化疗药物奥沙利铂对人肺癌A549细胞株裸鼠移植瘤微淋巴管生成的影响及化疗增敏作用.方法 将人肺癌A549细胞接种于裸鼠背部皮下,将裸鼠按随机数字表法分为4组:对照组、吲哚美辛组、奥沙利铂组、吲哚美辛和奥沙利铂联合用药组,并给予相应的药物.观察裸鼠生长情况,每7天测量1次肿瘤体积.42 d后处死裸鼠,切取移植瘤组织,用免疫组织化学染色法检测血管内皮生长因子C(VEGF-C)、β-连环素及生存素蛋白的表达,并测定微淋巴管密度,用实时荧光定量PCR检测VEGF-C mRNA及生存素mRNA的表达.用SPSS 16.0软件进行统计学分析,实验数据以((-x)±s)表示.多组间比较用方差分析,多组样本均数两两比较采用SNK检验,两变量的相关程度采用直线相关分析.结果 (1)吲哚美辛组、奥沙利铂组和联合用药组治疗后移植瘤体积分别为( 1322±327) mm3、(962 ±221) mm3和(611±161) mm3,低于对照组的(1664 ±318) mm3(F=23.33,P＜0.01);(2)吲哚美辛组和联合用药组VEGF-C、生存素、β-连环素蛋白的表达及微淋巴管密度积分吸光度值均低于对照组(均P＜0.05).奥沙利铂组VEGF-C蛋白含量(20 825±2067)高于对照组(16 075±875,F=97.24,P＜0.05),β-连环素蛋白和微淋巴管密度( 17 396±1693,9666±978)与对照组(9824±1181,17 588±1698)比较无明显差异;(3) VEGF-C蛋白、生存素蛋白与微淋巴管密度呈直线正相关(r值分别为0.737和0.662,均P＜0.01),β-连环素蛋白与生存素蛋白呈直线正相关(r =0.582,P＜0.01),VEGF-C mRNA的表达与其蛋白表达呈直线正相关(r =0.873,P＜0.01).结论 吲哚美辛与奥沙利铂联合应用可提高抗肿瘤及抗微淋巴管生成作用,其作用机制可能是协同抑制了VEGF-C/VEGF受体3和Wnt信号途径.     

热疗联合依托泊苷对非小细胞肺癌A549细胞凋亡相关基因的影响

目的探讨热疗联合依托泊苷对非小细胞肺癌(NSCLC)凋亡相关基因Bcl-2、Bax、热休克蛋白70(HSP70)的影响。方法培育NSCLC细胞株,分为热疗组、依托泊苷组、热疗联合依托泊苷组(联合组)和对照组,干预结束后提取RNA,用RT-PCR方法检测HSP70、Bcl-2、Bax的相对表达量和mRNA表达水平。结果热疗组、依托泊苷组及联合组Bcl-2、HSP70水平明显低于对照组(P均<0.01),Bax水平明显高于对照组(P<0.01)。结论热疗、依托泊苷均可一定程度地诱导NSCLC细胞凋亡,二者联合应用具有一定的协同作用,可进一步诱导NSCLC细胞的凋亡。     

肿瘤化疗药物对胃癌细胞Bcl-2，p53和Ki-67表达的影响

１材料和方法１．１材料取本院病理诊断为胃腺癌手术切除标本１０例,体外分离细胞制成细胞悬液混合培养,培液用含２００ｍＬ／Ｌ正常小牛血清的ＲＰＭＩ１６４０溶液,３７℃５０ｍＬ／ＬＣＯ２培养箱培养,实验取第４～５代培养细胞．选择阿霉素（ＡＤＭ）,长春新碱...     

非诺贝特联用顺铂对人肺癌A549细胞抑制和凋亡的实验研究

目的探讨过氧化物酶体增殖因子激活受体仪激动剂非诺贝特联用顺铂对体外培养的人肺癌A549细胞增殖和凋广的影响及可能机制。方法采用MTF法分别检测单用非诺贝特、顺铂和非诺贝特联用顺铂对肺癌A549细胞的生长抑制情况。采用Hoechest染色观察非诺贝特联用顺铂对肺癌A549细胞的生长抑制作用。流式细胞术检测联合用药对A549细胞的凋亡诱导作用。RT—PCR法检测联合用药对A549细胞中caspase－3、survivinmRNA的表达变化情况。结果非诺贝特对肺癌A549细胞有抑制作用,呈现时间剂量关系。联合用药组作用肺癌A549细胞48h后比单用药组的细胞抑制作用强（P〈0．05）。形态学观察及流式细胞术结果显示联合用药组A549凋亡细胞数目多于单药组,RT—PCR结果提示联合用药组较单用药组上调caspase－3mRNA的表达,下调stirvivin mRNA的表达。结论非诺贝特与顺铂联用可以增强顺铂杀伤肺癌A549细胞作用,其机制可能与上调caspase－3的表达和下调survivin的表达有关。     

诺帝对肺腺癌细胞系A549细胞增殖的影响

目的 探讨化学合成物诺帝对人肺腺癌细胞系A549细胞增殖的影响.方法 采用自行合成的化合物诺帝(终浓度为100 μmol/L)处理A549细胞,处理后12、24、48和72 h,用细胞培养、流式细胞仪检测、免疫组化及图像分析等方法检测诺帝对A549细胞的影响.结果 诺帝可使A549细胞增殖受抑制,对细胞周期抑制作用主要表现于G1→S期;诺帝处理后,A549细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达明显减弱.结论 诺帝对A549细胞的增殖有显著抑制作用,这种作用与其抑制PCNA有关.     

廿烷五烯酸协同顺铂对肺腺癌细胞株的影响

目的观察廿烷五烯酸（EPA）联合顺铂对肺腺癌细胞株A-549的抗增殖和诱导凋亡作用。方法A-549进行体外培养后分为A组和B组。B组分别加EPA15（B1组）、30（B2组）、60（B3组）μg/ml及顺铂30μg/ml（B4组）、顺铂30μg/ml＋EPA15μg/ml（B5组）、顺铂30μg/ml＋EPA 30μg/ml（B6组）、顺铂30μg/ml＋EPA60μg/m（B7组）,分别培养24、48、72、96 h。A组加培养液50μl。实验步骤两组相同。MTT法测A-549的生长抑制率,倒置显微镜、光学显微镜观察细胞形态,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果①B1～B7（EPA在15～60μg/ml范围内）组,A-549均呈抑制生长,EPA与顺铂具有协同抗癌作用,并表现出浓度、时间依赖性关系。②光镜下B组A-549体积变小、变圆,核染色质浓缩或染色质块形成,部分细胞核脱落,细胞膜起泡形成凋亡小体;A组细胞生长旺盛,呈不规则形,核分裂象多见,细胞核规整,染成均一蓝色。倒置显微镜下,B组A-549体积变小、变圆,核染色质凝集,细胞间连接疏松,贴壁能力减弱;A组细胞贴壁生长良好,充分生长,透亮度好。③B1～B3组细胞凋亡指数（AI）依次升高,分别为5．57％±0．82％、11．68％±1．26％、24．53％±1．68％（P〈0．01）。结论体外实验中,EPA对A-549生长有抑制作用,呈明显的量效和时效关系;EPA与顺铂有协同作用。     

~（125）I-脱氧尿嘧啶核苷对肺癌细胞A549的杀伤作用

目的探讨125I-脱氧尿嘧啶核苷（125I-UdR）对体外培养的A549肺癌细胞的杀伤作用及其影响因素。方法测定A549肺癌细胞在含有不同浓度125I-UdR的RPMI 1640培养液中培养48 h后细胞及细胞核摄取125I-UdR的量;测定肺癌细胞A549及脐静脉内皮细胞（ECV304）在含有100 kBq/ml 125I-UdR的RPMI 1640培养液中培养2～48 h后不同时间细胞摄取125 I-UdR的量;用细胞克隆形成法评价不同浓度125 I-UdR对A549肺癌细胞的杀伤作用。结果 A549细胞和细胞核摄取125I-UdR的量随培养基中125I-UdR浓度增加而增加;在含有100 kBq/ml浓度125 I-UdR的培养液中,随培养时间的延长A549细胞和细胞核摄取125 I-UdR的量增加。在不同培养时间下,A549细胞摄取125I-UdR的量在各时间点均明显高于ECV304细胞的摄取量。细胞存活分数随培养基中125I-UdR浓度增加呈递减趋势。结论 125I-UdR能够被A549肺癌细胞摄取,并快速进入细胞核内,且摄取量存在浓度依赖性和时间依赖性1,25I-UdR对肺癌细胞具有明显的杀伤作用。     

3-BrPA对肺癌A549/DDP细胞耐药的逆转作用研究

目的探究3-Br PA对肺癌A549/DDP细胞耐药的逆转作用及其机制。方法 1细胞培养:RPMI1640培养基培养肺癌A549细胞及人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP细胞;2采用CCK8及Western blot法观察3-Br PA对A549/DDP细胞的耐药逆转作用和P-糖蛋白(P-glycoprote,P-gp)的表达水平;采用流式细胞术检测不同浓度3-Br PA作用A549/DDP细胞后细胞内罗丹明-123(Rhodamine-123,Rh123)的蓄积情况。结果顺铂对A549细胞、A549/DDP细胞及3-Br PA作用后的A549/DDP细胞的IC50分别为6.714μg/ml、38.99μg/ml及12.86μg/ml,逆转倍数为3.03,相对逆转效率为81%。3-Br PA可使A549/DDP细胞的P-gp表达下调。3-Br PA可使A549/DDP细胞内的Rh123蓄积增多并呈剂量依赖性。结论 3-Br PA可逆转A549/DDP细胞对顺铂耐药,作用机制可能与其抑制P-gp的功能和表达有关。     

沉默OGFR基因对非小细胞肺癌A549细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨沉默OGFR基因对非小细胞肺癌A549细胞株增殖、迁移和侵袭的影响。方法取A549细胞株,分为对照组、实验组,分别转染si-NC阴性对照、OGFR特异性的小干扰RNA。采用RT-qPCR和Westernblotting法分别检测细胞中的OGFRmRNA和蛋白,采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,平板克隆形成实验检测细胞集落形成能力。结果与对照组相比,实验组OGFRmRNA及蛋白相对表达量低,培养24、48、72 h细胞增殖OD值均低,穿膜细胞数少,细胞迁移率低,克隆形成细胞集落数少(P均<0.05)。结论沉默OGFR基因可降低A549细胞株OGFR基因mRNA和蛋白质的表达,在体外减弱了其增殖、迁移和侵袭能力。     

人肺腺癌A549细胞系培美曲塞耐药细胞株模型的建立

目的建立人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株模型。方法以人肺腺癌A549细胞为亲本株,应用高浓度反复间歇法模拟临床给药模式建立人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株。MTT法绘制生长曲线、计算倍增时间,同时检测耐药株细胞对顺铂、依托泊苷、紫杉醇、长春新碱的药物敏感性。结果亲本株IC_50为(181.75±12.56)ng/ml,耐药株IC_50为(4930.40±129.71)ng/ml,最终获得耐药指数为27.18±1.16的人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株,命名为A549/PEM。A549和A549/PEM增殖速度接近,倍增时间分别为(62.78±1.06)h和(62.35±0.89)h(P=0.773)。A549/PEM同时对顺铂、依托泊苷耐药,耐药指数分别为(1.93±0.02)、(8.26±1.55);对紫杉醇、长春新碱敏感,耐药指数分别为(0.89±0.10)、(0.95±0.11)。结论本研究成功建立的人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株模型。     

ⅢA-N2期肺癌新辅助化疗前后Ki-67表达水平与预后关系

目的探讨ⅢA-N2期非小细胞肺癌(NSCLC)新辅助化疗(NCT)前后Ki-67表达水平与预后的关系。方法收集60例ⅢA-N2期NSCLC患者,首先进行新辅助化疗(NCT),再行手术。观察NCT疗效,比较Ki-67表达与临床疗效和预后的关系。结果NCT客观缓解率(ORR)是53.3%。NCT前后癌组织中Ki-67表达阳性率分别为63.2%和43.9%(P<0.05)。临床疗效显著组与疗效不显效组比较,Ki-67表达阳性率较低(31.3%vs 60.0%)(P<0.05)。生存分析显示:Ki-67表达阴性者具有更好的OS和PFS(P<0.01)。单因素分析示:Ki-67表达阴性者有更高的2年PFS和OS。多因素分析示:Ki-67阴性表达是预后的独立危险因素。结论Ki-67表达水平影响临床疗效和预后,Ki-67可作为NSCLC新辅助化疗疗效预测指标。