健胎液对围着床期小鼠子宫炎性细胞因子IL-1的影响

目的:探讨健胎液对胚胎着床障碍小鼠着床期子宫炎性细胞因子IL-1β及IL-1RⅠ的影响。方法:建立胚胎着床障碍的动物模型,分为三组,观察各组着床率和着床点数,妊娠第5天分别检测各组小鼠子宫内膜IL-1β的蛋白含量,以及子宫内膜IL-1β、IL-1RⅠ的mRNA水平。结果:模型组胚胎着床数、着床位点数与正常组比较显著降低(P0.01);中药组胚胎着床数、着床位点数与模型组比较明显升高(P0.05),但仍低于正常组(P0.05)。模型组子宫内膜IL-1β蛋白量同正常组、中药组比较明显升高,中药组IL-1β蛋白量同正常组比较无显著性差异。模型组IL-1β、IL-1RⅠ的mRNA表达水平同正常组比较显著升高,中药组IL-1RⅠ的mRNA表达水平同模型组比较明显降低,但仍比正常组水平高。结论:围着床期子宫内膜IL-1β、IL-1RⅠ参与胚胎着床的病理生理过程,健胎液可能通过调节IL-1表达,改善子宫内膜微环境,提高子宫内膜胚胎种植容受性,促进着床。     

中药健胎液对围着床期小鼠IL-6表达的影响

目的:探讨细胞因子IL-6在胚胎着床障碍发生发展中的作用,以及中药健胎液促进胚胎着床对子宫内膜IL-6的影响。方法:用吲哚美辛建立胚胎着床障碍的动物模型,动物分为正常对照组(正常组),胚胎着床障碍组(模型组),中药治疗组(中药组)。观察各组着床率和着床点数,用ELISA方法检测了妊娠第5天各组小鼠子宫内膜IL-6的蛋白含量,用RT-PCR方法检测妊娠第5天小鼠子宫内膜IL-6的mRNA水平。结果:模型组的胚胎着床数、着床位点数同正常组比较显著降低(P<0.01);中药组胚胎着床数、着床位点数同模型组比较明显升高(P<0.05),但仍低于正常组(P<0.05)。模型组子宫内膜IL-6蛋白量同正常组、中药组比较明显升高,中药组IL-6蛋白量同正常组比较没有显著差异(P=0.211)。模型组IL-6 mRNA表达水平同正常组、中药组比较显著升高(P<0.01),中药组IL-6 mRNA表达水平同正常组比较没有显著差异(P>0.05)。结论:中药健胎液通过调节IL-6的表达促进着床。     

健胎液对小鼠子宫内膜LIF表达的影响

目的 :探讨小鼠围着床期子宫内膜LIF的表达规律及健胎液对小鼠子宫内膜LIF表达的影响。方法 :小鼠胚胎着床障碍模型诱导方法及对各组小鼠干预处理同第一部分 ,取正常组、中药组、模型组小鼠妊娠第 5天子宫内膜 ,应用超敏免疫吸附法检测内膜LIF的表达情况。比较 3组小鼠子宫内膜LIF的表达情况 ,结合整合素α4,β3 亚基的表达情况 ,分析 3者在围着床期中表达的联系。结果 :中药组LIF的表达较模型组明显升高 (P <0 .0 5 ) ,模型组水平最低 ,明显低于正常组 (P <0 .0 1)。中药组LIF的表达水平与正常组相近 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 0 )。结论 :健胎液对小鼠围着床期子宫内膜的LIF的表达有促进作用 ,与健胎液对α4,β3 的表达影响相同。     

健胎液改善胚泡着床障碍模型小鼠实验研究

目的:观察中药健胎液对胚泡着床障碍模型小鼠胚泡着床以及子宫内膜形态学影响。方法:采用吲哚美辛引起的胚泡着床障碍动物模型,将实验动物分为正常组、中药组、模型组,观察妊娠第5天、第8天子宫内膜形态结构变化和妊娠第8天胚泡着床率、着床位点数。结果:中药组胚泡着床率、着床位点数同模型组比较明显升高。中药组妊娠第5天子宫内膜与模型组比较,内膜血管明显比模型组增加,炎性细胞明显减少,基质出现明显蜕膜样变,子宫内膜空泡、脂滴明显少于模型组。模型组妊娠第5天子宫内膜腔上皮受损,妊娠第8天腺上皮受损,中药组子宫内膜腔上皮、腺上皮均未见结构改变。结论:中药健胎液能改善子宫内膜微环境,促进胚泡着床。     

健胎液对小鼠着床期子宫内膜孕激素受体及mRNA的影响

目的:研究健胎液对胚泡着床障碍小鼠着床期子宫孕激素受体(PR)的影响.方法:将受孕小鼠随机分为正常组、模型组和中药组,采用米非司酮诱导小鼠胚泡着床障碍,予健胎液进行干预,于妊娠第8天处死小鼠,观察子宫内膜形态学变化,采用免疫组化技术检测子宫PR的表达,Western印迹和RT-PCR技术检测子宫PR及PR mRNA表达.结果:模型组子宫内膜发育不良,中药组子宫内膜的发育与正常组相似;中药组子宫内膜腺体、间质PR表达范围和强度均较模型组显著增高(P＜0.05),与正常组无显著性差异(P＞0.05);中药组PR蛋白及基因表达均较模型组显著提高(P＜0.05),与正常组无显著性差异(P＞0.05).结论:健胎液通过调节胚泡着床障碍小鼠子宫PR及mRNA的表达,促进子宫内膜发育,改善胚泡着床.     

二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫血管生成相关因子表达的影响

目的：探讨二补助育汤对胚胎着床障碍模型小鼠子宫内膜形态及血管生成素-1（Ang-1）mRNA、血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达和定位的影响。方法：24只ICR雌性小鼠随机分为空白组、模型组、戊酸雌二醇组、二补助育汤组,每组6只,用米非司酮建立胚胎着床障碍动物模型,各组给予相应药物灌胃,妊娠第5天处死小鼠后,检测各组妊娠率、平均着床位点数、子宫内膜Ang-1和VEGF mRNA表达量及其蛋白定位。结果：模型组小鼠平均胚胎着床位点数、Ang-1 mRNA、VEGF mRNA表达量明显低于空白组（均P<0.05）;与模型组比较,二补助育汤组平均胚胎着床位点数、Ang-1 mRNA、VEGF mRNA表达量显著提高（均P<0.05）。结论：二补助育汤可提高子宫内膜Ang-1和VEGF蛋白表达量,促进子宫内膜血管生成,从而提高子宫内膜容受性。     

健胎液对胚泡着床障碍小鼠胚泡着床作用的研究

探讨健胎液(药物:桑寄生、丹参、当归、黄芪、川芎)对胚泡着床障碍小鼠胚泡着床及子宫内膜发育的影响.采用米非司酮诱导的小鼠胚泡着床障碍模型,予健胎液治疗,于妊娠第8天处死小鼠,观察胚泡着床率、平均着床胚泡数以及子宫内膜和卵巢的形态结构变化.结果:中药组着床率和平均着床胚泡数较模型组显著提高,与正常组无显著差异;模型组子宫内膜发育不良,中药组子宫内膜的发育与正常组相似;三组小鼠卵巢的形态结构变化无显著差异.提示健胎液能促进胚泡着床障碍小鼠胚泡着床,改善子宫内膜的发育.     

五子衍宗丸对GnRHa控制性超促排卵小鼠着床期S100A11基因的调控

目的:研究中药五子衍宗丸对GnRHa长方案控制性超促排卵(COH)小鼠着床期S100A11表达的影响,探讨COH影响胚胎着床的机制,寻求有效改善COH低妊娠率的中药方剂。方法:将60只小鼠随机分成3组:模型组(GnRHa+HMG+HCG),中药组(五子衍宗丸+GnRHa+HMG+HCG),对照组(生理盐水)。观察小鼠阴栓率和着床期子宫胚胎着床数及着床率;应用免疫组化法、RT-PCR和Western blot方法分别检测小鼠着床期子宫内膜S100A11 mRNA及蛋白的表达。结果:模型组胚胎着床数高于对照组和中药组(P0.01),但胚胎着床率和妊娠率均明显降低(P0.05)。模型组着床期子宫内膜S100A11mRNA及蛋白表达下降,与对照组和中药组比较均有明显差异(P0.05)。结论:中药五子衍宗丸可上调因GnRHa长方案COH所致下降的S100A11基因的表达,提高子宫内膜容受性,改善小鼠妊娠率和胚胎着床率。     

二补助育改良方对小鼠子宫内膜胞饮突、LIF、ER和PR表达的影响

目的观察二补助育改良方对胚泡着床障碍模型小鼠子宫内膜胞饮突、白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)、雌激素受体(estrogen receptor,ER)和孕激素受体(progesterone receptor,PR)表达的影响。方法建立小鼠胚泡着床障碍模型,将50只实验动物分为5组:空白组、模型组、西药组1(补佳乐组)、西药组2(阿司匹林组)、二补助育改良方组,每组10只。造模与给药同时进行,其后处死小鼠,扫描电镜观察胞饮突的表达,并采用免疫组化HBP法检测小鼠子宫内膜LIF、ER、PR的表达量。结果扫描电镜下,二补助育改良方组小鼠子宫内膜表面形态较规整,大量微绒毛及丰富胞饮突表达,细胞之间的间隙明显。免疫组化结果示,二补助育改良方组小鼠子宫内膜LIF、ER、PR表达较模型组明显增加(P0.05);LIF表达低于补佳乐组(P0.05),ER表达优于补佳乐组(P0.05),PR表达与补佳乐组无明显差异(P0.05);各指标与阿司匹林组比较无明显差异(P0.05)。结论二补助育改良方可能通过调节胚泡着床期子宫内膜胞饮突、LIF、ER和PR的表达,从而提高子宫内膜容受性,参与胚泡植入的黏附过程,改善着床障碍,创造良好的受孕环境,促进胚泡着床。     

二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜自噬作用的影响

目的 观察二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜自噬作用的影响.方法 将24只ICR妊娠小鼠随机分为空白组、模型组、补佳乐组、二补助育汤组,每组小鼠6只.胚胎着床障碍小鼠模型采用米非司酮制备,每组予以相应药物灌胃,妊娠第5天脱颈处死.计算各组小鼠平均胚胎着床位点数,检测自噬标志物微管相关轻链蛋白3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin-1表达,透射电镜观察子宫内膜细胞中自噬小体的表达.结果 模型组平均着床位点数低于空白组(P<0.05),补佳乐、二补助育汤组高于模型组(P>0.05).各组小鼠子宫内膜细胞中均见自噬小体,空白组见少量自噬小体表达;模型组部分细胞有破坏、坏死,内膜发育不良,细胞内自噬小体多于其他组;补佳乐组和二补助育汤组子宫内膜腺体和血管较模型组丰富,细胞内自噬小体表达虽多于空白组,但较模型组少.模型组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白水平均低于空白组,其中LC3-Ⅱ有显著差异(P<0.05);补佳乐组和二补助育汤组LC3-Ⅱ表达高于模型组(P>0.05);二补助育汤组Beclin-1表达高于模型组和补佳乐组(P<0.05).结论 二补助育汤能够通过调节子宫内膜自噬作用,维持细胞稳态,从而利于胚胎着床.     

寿胎丸对控制性超促排卵小鼠围着床期子宫内膜血管生成及let-7f和TSP-1表达的影响

目的 研究寿胎丸对控制性超促排卵(COH)模型小鼠着床胚胎数、内膜容受性、微血管密度、microRNA let-7f及其靶标蛋白TSP-1表达的影响。方法 60只ICR雌鼠随机分为3组：空白对照组、COH模型组和寿胎丸干预组，每组20只。寿胎丸干预组每日给予寿胎丸灌胃，即空白对照组和COH模型组每日给予生理盐水灌胃。灌胃3个动情周期，在第3个动情周期的动情后期，模型组与寿胎丸干预组建立COH模型(曲普瑞林+HMG+HCG)。HCG注射后，按雌雄比例2:1合笼，合笼后第4天和第6天，每组各处死10只小鼠，HE染色观察子宫内膜形态、厚度，免疫组化染色检测子宫内膜微血管密度，RT-PCR检测容受性标记因子HOXA10、LIF及let-7f的表达量，RT-PCR和Western blot检测TSP-1 mRNA及蛋白表达量。合笼后第8天，每组各处死5只小鼠，计算植入胚胎数。结果 寿胎丸干预显著提高COH模型组小鼠植入胚胎数(P<0.05);与空白对照组相比，COH模型组小鼠内膜厚度、腺体面积、微血管密度、容受性标记因子HOXA10及LIF mRNA表达水平显著降低(P<0.05),...     

健胎液对胚泡着床障碍小鼠雌、孕激素及其受体的影响

目的探讨健胎液促进胚泡着床障碍小鼠子宫内膜发育的机制。方法采用米非司酮诱导的小鼠胚泡着床障碍模型,予健胎液进行干预,于妊娠第8天处死小鼠,留取血清及子宫标本,采用放免法检测血清和子宫局部雌二醇(E₂),孕酮(P)含量,采用免疫组化技术检测子宫雌,孕激素受体(ER,PR)表达。结果各组血清和子宫组织E₂,P含量无显著差异(P>0.05);中药组子宫内膜腺体、间质ER,PR表达范围和强度均较模型组显著增高(P<0.05),与正常组无差异(P>0.05)。结论健胎液通过促进胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体、间质的ER,PR表达,改善子宫内膜的发育,利于胚泡着床。     

疏肝补肾法对慢性应激模型小鼠子宫内膜容受性的调节及作用研究

目的:研究疏肝补肾中药对于慢性应激模型小鼠子宫内膜容受性的调节及作用机制。方法:将60只SPF级6周龄KM雌性未孕小鼠随机分为4组,每组小鼠数量为15只,即空白对照组(空白组)、应激模型组(模型组)、阳性对照组(逍遥丸组)、中药观察组,除空白组外其余各组均接受21d应激刺激,在刺激期间各组分别灌药,造模成功后各组小鼠按雌雄2∶1合笼,仍接受慢性应激刺激,并给予孕后方药继续灌胃至见栓第5d。观察各组小鼠行为学指标、见栓率、着床数以及子宫内膜VEGF、LIF的表达水平。结果:各组间中央格停留时间、水平穿格数、直立次数、悬尾静止时间均具有统计学差异(P0.05);经进一步两两对比,各组间各项行为学指标均具有统计学差异(P0.05)。各组间见栓率具有统计学差异(P0.05),进一步对比观察组与空白组、模型组与阳性对照组间见栓率无统计学差异(P0.05);其余各组间均具有统计学差异(P0.05);观察组胚胎着床数高于其它各组,各组间胚胎着床数两两对比均具有统计学差异(P0.05)。各组子宫内膜VEGF、LIF表达水平均具有统计学差异(P0.05)。结论:疏肝补肾法能够有效改善慢性应激小鼠子宫内膜容受性,从而提高妊娠成功率,其作用较单纯应用逍遥丸治疗更为理想。     

电针对COH小鼠子宫内膜IGF-1-MAPK/ERK1/2信号转导及胚胎着床的影响

目的观察电针对COH小鼠子宫内膜IGF-1-MAPK/ERK1/2信号转导的影响,探讨电针改善胚胎着床的作用机制。方法将昆明纯种性成熟雌性小鼠随机分成自然周期组、COH组、电针组、电针+BMS-536924组、电针+LY-294002组,每组20只,每组又分为供体鼠和受体鼠。采用控制性超促排长方案制备动物模型,并行胚胎移植,电针组、电针+BMS-536924组、电针+LY-294002组于HCG注射日行电针治疗,观察临床妊娠率和胚胎着床位点数,检测子宫内膜IGF-1mRNA、IGF-1R mRNA及p-IGF-1R、p-ERK1/2蛋白表达。结果 COH组妊娠率、平均着床位点数和子宫内膜IGF-1mRNA、IGF-1R mRNA及p-IGF-1R、p-ERK1/2蛋白表达均低于自然周期组,经电针治疗后,电针组、电针+LY-294002组各项指标均显著性增高。电针+BMS-536924组p-IGF-1R和p-ERK1/2蛋白表达虽较COH组增加,但仍显著性低于其他电针治疗组,且妊娠率、平均着床位点数未见改善。结论电针调控IGF-1改善COH小鼠胚胎着床可能与上调p-IGF-1R蛋白表达,激活MAPK/ERK1/2信号转导通路有关。     

滋肾育胎丸联合阿托西班治疗反复胚胎移植失败临床观察

目的:观察滋肾育胎丸联合阿托西班治疗反复胚胎移植失败的临床疗效。方法:210例随机分为两组各105例。两组均持续进行超长促排卵方案治疗。试验组在排卵期前1周服用滋肾育胎丸,持续治疗至胚胎移植后2周,并在胚胎移植前30min静脉注射阿托西班;对照组在常规促排卵治疗基础上单用阿托西班。结果:试验组子宫内膜厚度、子宫动脉搏动阻力指数均大于对照组(P0.05),试验组血管内皮生长因子(VEGF)、白介素-1β(IL-1β)、白血病抑制因子(LIF)水平均高于对照组(P0.05),试验组胚胎着床率、妊娠率、活产率均高于对照组(P0.05)。结论:滋肾育胎丸联合阿托西班治疗反复胚胎移植失败疗效较好,可促进子宫内膜增厚,子宫动脉搏动阻力指数,调节免疫指标,改善妊娠结局。     

健肾助孕方对着床障碍小鼠雌孕激素及子宫HOXA10表达的影响

目的:观察健肾助孕方对着床障碍小鼠血清雌孕激素浓度和子宫HOXA10表达的影响。方法:将30只孕鼠随机分为模型组3只、健肾助孕方低剂量组6只、健肾助孕方高剂量组6只、黄体酮组7只和正常对照组8只。从妊娠第1天开始,模型组、正常对照组每日给予生理盐水0.2 m L·只-1灌胃,黄体酮组皮下注射黄体酮溶液0.1 m L·只-1,健肾助孕方低剂量组、高剂量组每日灌胃0.2 m L·只-1。妊娠第4天皮下注射米非司酮诱导着床障碍小鼠模型。妊娠第8天处死小鼠,ELISA法检测血清中雌孕激素浓度,免疫组织化学法和Western blot法对子宫中HOXA10的表达和蛋白含量进行检测。结果:健肾助孕方低剂量组、高剂量组血清雌孕激素浓度较模型组明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。健肾助孕方高剂量组、黄体酮组子宫中HOXA10的表达显著增多,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05);健肾助孕方低剂量组、高剂量组、黄体酮组子宫中HOXA10的蛋白含量明显高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:健肾助孕方可以升调着床障碍小鼠血清雌孕激素水平,提高子宫中HOXA10的表达量,从而改善着床障碍小鼠的子宫内膜容受性,促进胚胎着床。     

电针对控制性超排卵小鼠子宫内膜IGF-1的影响

目的观察子宫内膜IGF-1在电针改善控制性超排卵(COH)小鼠妊娠率中的作用。方法将昆明纯种性成熟雌性小鼠随机分成自然周期组、COH组和电针组,每组又分为供体鼠和受体鼠,每组20只。采用控制性超促排长方案制备动物模型,并行胚胎移植,于HCG注射日行电针治疗,观察临床妊娠率和胚胎着床位点数,并采用Western blot和RTPCR检测子宫内膜IGF-1蛋白及其mRNA表达。结果 COH组妊娠率、平均着床位点数和子宫内膜IGF-1蛋白及其mRNA表达显著低于自然周期组(P0.01);电针治疗后,表达增加,且妊娠率、平均着床位点数显著提高(P0.05)。结论在IVF-ET治疗不孕症过程中,配合针刺可促进子宫内膜分泌IGF-1,从而提高临床妊娠率。     

不同时间点针刺对控制性超排卵小鼠妊娠结局的影响

目的:探讨辅助生殖中针刺治疗介入的最佳时间点。方法:120只雌性鼠和60只雄性鼠,选取20只雌性鼠设为自然周期组,剩余100只雌性鼠制备控制性超排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)模型后,随机分为COH组、降调节日组、促性腺激素(Gonadotropins,Gn)起动日组、人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)注射日组和胚胎种植日组,每组20只,每组又分为供体鼠和受体鼠,各10只。30只雄性鼠实验前1周输精管切断结扎,30只不结扎。降调节日组、Gn起动日组、HCG注射日组和胚胎种植日组分别于降调节日、Gn起动日、HCG注射日和胚胎种植日取"关元""中极""三阴交"行电针治疗,予连续波,频率2 Hz,强度1mA,自然周期组和COH组小鼠不予干预。注射HCG当日各组供体鼠与未结扎雄性鼠合笼,获取受精卵,并标注受孕日期,培养箱中培养;各组受体鼠与雄性结扎鼠1∶1合笼,次晨检查阴栓,见阴栓者为假孕小鼠,逐一标记见栓日期。于胚胎培养第68h时,将供体鼠的胚胎移植至本组同日见阴栓的受体鼠内。观察各组临床妊娠率和胚胎着床位点数,RT-PCR检测子宫内膜胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)mRNA的表达。结果 :COH组妊娠率、平均着床位点数和子宫内膜IGF-1mRNA表达均显著低于自然周期组(均P0.01);电针治疗后,Gn起动日组、HCG注射日组和胚胎种植日组妊娠率较COH组显著提高(P0.05,P0.01),HCG注射日组平均着床位点数和IGF-1mRNA表达较COH组明显增加(均P0.01),且优于Gn起动日组和胚胎种植日组(均P0.01)。结论:在针刺配合体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗不孕症过程中,HCG注射日介入针刺治疗为其最佳治疗时间点,可增加子宫内膜IGF-1的分泌,从而提高临床妊娠率和平均着床位点数,改善胚胎着床。     

补肾助孕方、逍遥丸对超促排卵小鼠围着床期妊娠结局和子宫内膜容受性的影响

目的研究补肾助孕方、逍遥丸对超促排卵小鼠妊娠结局和子宫内膜容受性的影响及可能作用机制。方法将240只动情周期正常的昆明系雌性小鼠随机分为正常组、模型组、补肾组、疏肝组,每组各60只。除正常组,其余各组小鼠建立控制性超促排卵模型。造模第1天始补肾组、疏肝组分别给予补肾助孕方混悬液(浓度1.5 g/mL)和逍遥丸混悬液(浓度0. 09 g/mL),均0.4 mL/(30 g·d)灌胃,模型组及正常组给予同等剂量蒸馏水灌胃,连续11天。比较各组小鼠围着床期血清雌二醇(E_2)、孕酮(P)、NO含量及子宫内膜雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白及其mRNA表达,测量子宫内膜厚度,观察小鼠内膜胞饮突表达,统计各组小鼠妊娠数、胚胎着床数。结果与正常组比较,模型组小鼠妊娠数、胚胎着床数减少(P0.05),同时模型组血清E_2、P降低,子宫内膜ER、PR蛋白,VEGF、eNOS蛋白及其mRNA表达,子宫组织匀浆内NO含量均降低(P0.05),子宫内膜厚度变薄,胞饮突发育不良;与模型组比较,补肾组、疏肝组小鼠妊娠数及胚胎着床数增加,血清E_2、P含量及子宫内膜ER、PR蛋白,VEGF、eNOS蛋白及其mRNA表达,子宫组织匀浆内NO含量均升高(P0.05),子宫内膜厚度增加,胞饮突发育接近正常组。结论补肾法、疏肝法均能够增加超促排卵小鼠妊娠率及胚胎着床数,其作用机制可能与调节雌、孕激素水平及其受体,影响VEGF、eNOS表达,调控NO释放,改善小鼠子宫内膜组织形态及血管通透性有关。