乌贼墨抗肿瘤机制研究进展

乌贼属于软体动物门 ,头足纲的一种海洋动物 ,其医药应用历史悠久 ,乌贼骨 (药名海螵蛸 )可调节胃酸分泌、止血等 ;乌贼肉具有活血化瘀的功效 ;乌贼墨在《本草拾遗》中有“腹中墨 ,主治血刺心痛”的记载 ,对功能性子宫出血、肺结核咯血等出血性疾病有止血作用 ;2 0世纪 90年代日本学者发现乌贼墨中含有一种肽聚糖对Meth A肿瘤的抑制率达6 4 % [1] 。国内吕昌龙等[2 ] 用乌贼墨对小鼠连续灌胃 5d ,发现乌贼墨可明显抑制Meth A、S180两种肉瘤的生长 ,抑制率分别为 95 .4 8%和 73.91% ,并一定程度上抑制移植瘤的形成。关于乌贼墨的抗肿瘤机制…     

乌贼墨多糖抗肿瘤作用及其机制研究进展

近年来,针对海洋来源的生物物质的药用价值进行开发,特别是用于治疗严重危害人类健康的恶性肿瘤的研究,已成为药学领域的热点之一。乌贼散布于世界各大洋,乌贼墨多糖是乌贼墨中的1种重要的生物活性成分,具有抗肿瘤、抗氧化、抗菌、抗逆转录病毒等多种功效。本文就2013-2018年国内外对乌贼墨多糖抗肿瘤功效及作用机制的研究作了系统的归纳和总结,旨在为乌贼墨多糖的深入研究、开发提供理论依据。     

乌贼墨的药用研究概况

乌贼属于软体动物门头足纲乌贼目乌贼科 ,常见种类有 :金乌贼 (Sepia esculentaHoyle,别名 :乌鱼、墨鱼 )、虎斑乌贼 (Sepiapharaonis Ehrenberg,别名 :花旗、花西、墨姆 )、白斑乌贼 (Sepia L atimanus Quoy et Gaimard,别名 :花斑墨 )、拟目乌贼 (Sepia Lycidas Gray、别名 :眼墨、花鸡姆、墨公 )、罗氏乌贼 (Sepiarobsoni Sasaki)、曼氏无针乌贼 (Sepiellamaindroni de Rochebrune,别名 :日本无针乌贼、花拉子、麻乌贼、墨鱼、目鱼、疴血乌贼、血墨 )等 [1] 。它们在中国近海的地理分布见表 1。表 1　几种常见的乌贼在中国近海的地…     

乌贼墨抗氧化活性研究进展

乌贼墨是一味传统中药,近年来的研究显示其具有较强的抗氧化活性。本文在查阅大量文献资料的基础上,归纳总结了2008-2018年国内外对乌贼墨总提取物、乌贼墨无黑色素提取物、乌贼墨黑色素、乌贼墨多肽及乌贼墨多糖抗氧化活性的研究概况,旨在为进一步研究乌贼墨抗氧化活性提供依据。     

乌贼墨对H22癌细胞TPK、PKC及PKA活性的影响

利用γ-^23P－ATP作为反应启动剂掺入外源性底物的方法测定TPK、PKC及PKA活性,研究了乌贼墨对H22癌细胞TPK、PKC及PKA活性的影响。结果表现：癌细胞质膜、胞浆及线粒体TPK活性均显著升高而以质膜TPK活性升高最为显著;胞浆、线粒体及胞核PKC活性均显著升高而以胞核PKC升高最为明显;胞浆内PKA活性升高。给予乌贼墨作用后,癌细胞质膜、胞冻及线粒体TPK活性均显著下降;线粒体及胞核PKC活性均显著下降,胞浆PKA活性继续明显升高。结果提示：乌贼墨能明显的逆转癌细胞异常改变的TPK、PKC和PKA活性,引起Ras－MAPK信号传导系统的正调节作用减弱和负调节作用增强,结果抑制或阻断了Ras－MAPK信号传导系统的信号及联传导,使癌细胞由去分化性增殖向分化增殖转变,产生抗癌促分化作用。     

乌贼墨对小鼠NK细胞杀伤活性的影响和抑瘤作用的研究

研究乌贼墨对小鼠脾细胞NK细胞杀伤活性的诱生作用及NK细胞杀伤性的持续时间,并探讨乌贼墨对荷瘤鼠脾细胞NK细胞杀伤活性的影响及抑制肿瘤生长的作用。用5％的乌贼墨给小鼠灌胃,连续5d后取不同时间的小鼠脾细胞,应用乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞杀伤活性,结果表明,口服乌贼墨后可使小鼠NK细胞杀伤活性增强,实验组与对照组比较有显著性差异（P＜0．01）,诱生后24h杀伤活性明显增强,2周左右恢复正常水平,乌贼墨可使荷瘤鼠NK细胞杀伤活性增强,瘤体明显小于阴性对照组,病理学分析证明小鼠瘤组织出血坏死及炎细胞浸润程度明显高于对照组,阳性对照组小鼠免疫功能损伤严重。     

鱿鱼墨和乌贼墨部分成分及微量元素含量比较

目的：比较鱿鱼墨和乌贼墨中微量元素含量。方法：原子吸收法测定金属元素,原子荧光法测定Hg,银盐法测定As,结果：鱿 鱼墨和乌贼墨中常量元素以钙含量最高,分别达到0．34％和1．07％,微量元素中以铁,锶和铜含量较为丰富,乌贼墨中有毒微量元素铅,镉和砷的浓度分别比鱿鱼墨高121％,127％和319％,但汞的含量相近,鱿鱼墨的无机物含量仅为乌贼墨的1／3左右,但有机物含量比乌贼墨高,结论：除铁和锌外,其它微量元素在乌贼墨中的浓度均比鱿鱼墨高,两种墨在成分上明显差异异除和两种动物生物学差异有关外,可能和生活海域中海水的微量元素组成有关。     

乌贼墨对小鼠免疫功能的影响

本文报道乌贼墨对小鼠免疫功能影响的初步研究结果。实验组和对照组小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞吞噬率(55.8±9.5％和32.1±5.1％)和吞噬指数(3.12±0.41和2.38±0.50)均有明显差异。用ELISA法检测两组小鼠对肿瘤细胞抗原刺激所产生的血清特异性抗体量分别为4.43±0.78(log2)和3.17±0.86(log2),(P<0.01)。并且前者的脾脏重量大于后者,胸洙重量则无明显差别。     

一种新型乌贼墨糖胺聚糖的分离纯化、理化性质及其抗氧化活性研究

目的 从金乌贼墨(Sepia esculenta ink)中提取其活性成分乌贼墨多糖。并首次对其理化性质及体外抗氧化活性进行研究。方法 依次用两步酶解法提取乌贼墨粗多糖,用Q Sepharose 4 Fast Flow 阴离子交换层析柱对其进行分离纯化,获得主要组分。通过高效液相(HPLC)、紫外光谱(UV)、红外光谱(IR)、离子色谱法对乌贼墨多糖进行理化性质研究以及初步的结构判定,采用ABTS法对乌贼墨进行总的体外抗氧化活性研究。结果 两步酶解后乌贼墨粗多糖的得率为3%,分离纯化后得到0.05、0.25、0.5 mol/L NaCl三个洗脱组分,分别命名为SE-1、SE-2、SE-3,其中以SE-2为最主要组分,故主要对SE-2进行分析。经过离子交换柱层析,SE-2得率为50%。SE-2主要含有半乳糖胺(GalN)、岩藻糖(Fuc)、葡萄糖胺(GlcN)、乙酰氨基半乳糖(GalNAc)、葡萄糖醛酸(GlcUA)以及甘露糖(Man)等单糖,紫外扫描无蛋白质的特征吸收峰;该多糖为均一性多糖,分子量8.5 kD;SE-2的总糖含量、蛋白质含量、硫酸根含量、氨基己糖含量分别为54.2%、3.92%、7.74%、20.5%;IR光谱进一步证明该糖为SE-2糖胺聚糖,构象为D-吡啶环结构,并有硫酸根的存在;SE-2对ABTS自由基的清除能力较强,其半数清除质量浓度为0.21mg/mL。结论 金乌贼墨多糖SE-2是一种硫酸酯化的新型糖胺聚糖,具有较强的体外抗氧化性活性。     

乌贼墨诱生小鼠IFN-γ及调节LAK细胞活性的研究

为进一步研究乌贼墨对免疫功能的刺激作用 ,本文采用 ELISA技术和生物活性测定技术分别检测了经乌贼墨灌胃后小鼠血清中的 IFN- γ的水平和 L AK细胞活性的变化。结果显示 ,实验组小鼠 IFN- γ的水平于乌贼墨灌胃后 2 4 h开始升高 ,4 8h达高峰 ,72 h降至正常水平。L AK细胞杀伤活性也有明显增强 ,与对照组小鼠相比 ,差异显著 (P<0 .0 1)。结论进一步证实了乌贼墨可诱导机体产生多种细胞因子和促进免疫活性细胞作用的发挥     

乌贼墨对红细胞免疫粘附肿瘤细胞能力的影响

采用红细胞Ｃｎ受体花环试验和肿瘤红细胞花环试验,检测了乌贼墨对正常人和肿瘤病人红细胞Ｃ３ｂ受体活性及红细胞免疫粘附肿皎的影响,结果,乌贼墨对正常人和肿瘤病人红细胞Ｃ３ｂ受人有明显的激活作用,乌贼墨浓度为１０％时激活作用最强,乌贼墨能明显增强正常人和肿瘤人红细胞免疫粘附肿瘤细胞的能力,乌贼墨浓度为１０％时,其增强作用最明显。提示乌贼墨的抗肿瘤作用与其激活红细胞的免疫粘附功能有关。     

乌贼墨及其提取物的免疫刺激作用

本文从免疫学角度对乌贼墨及其提取物的抗肿瘤作用机制做了进一步探讨。结果显示,乌贼墨及其提取物可提高肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）和白细胞介素１（ＩＬ－１）的分泌水平,可增加ＮＫ细胞的杀伤活性,提示乌贼墨及其提取物可通过刺激机体例 免疫功能而起到抗肿瘤作用。     

乌贼墨提取物对环磷酰胺所致小鼠肺纤维化的保护作用

目的探讨乌贼墨提取物对环磷酰胺所致小鼠肺纤维化的改善或治疗作用及在不同乌贼墨提取物浓度条件下的保护效果。方法腹腔注射环磷酰胺以制作肺纤维化模型,试验组灌服不同剂量的乌贼墨提取物,观察小鼠肺重系数,血液与肺组织中MDA、SOD、HYP、CAT及GSH-Px含量。结果与对照组相比,环磷酰胺能显著地改变小鼠肺重系数(P<0.01),也能不同程度地改变小鼠血液及肺组织中MDA、SOD、HYP、CAT及GSH-Px的含量,从而促进肺的纤维化过程。适当剂量的乌贼墨提取物能显著改善由环磷酰胺所致肺纤维化小鼠各项指标的变化(P<0.05或P<0.01),但在提取物浓度太高的情况下,对环磷酰胺所致肺纤维化小鼠各项指标变化的影响较小。结论乌贼墨提取物对环磷酰胺引起的小鼠肺纤维化具有一定的保护作用。     

乌贼墨制剂对环磷酰胺致小鼠毒性损伤的缓解效应

目的本文旨在探讨乌贼墨制剂(SIP)对小鼠大剂量环磷酰胺(CP)化疗损伤的保护功效。方法昆明小鼠(22±3)g随机分组,试验组每天灌胃给予SIP(1.0、1.5和2.0g.mL-1)0.5mL.只-1,共15d,并腹腔注射环磷酰胺0.45g.kg-1,共3次。试验结束后,检测外周血象、脏器指数、骨髓DNA含量、血清过氧化氢酶(CAT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)等活性及尿素氮(BUN)含量,并与模型组比较。结果大剂量环磷酰胺腹腔注射对外周血像、骨髓细胞以及血清中若干酶类造成了严重的影响;SIP却能显著地缓解CP对以上所检测指标所造成的毒性损伤。结论乌贼墨制剂可显著缓解大剂量化疗药物环磷酰胺对小鼠正常组织所造成的毒性损伤。     

乌贼墨糖胺聚糖的制备与理化性质研究

本实验采用胰蛋白酶、链霉蛋白酶两次酶解,乙醇沉淀和DEAE一纤维素离子交换柱分离,从新鲜无针乌(Sepiella maindroni de Rochebrune)墨中提取得到乌贼墨糖胺聚糖(GAG);经醋酸纤维素薄膜电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳证明乌贼墨GAG为均一性多糖;紫外扫描无蛋白质的特征吸收峰;红外光谱分析,样品具有典型的GAG吸收峰;对该GAG酸水解产物的薄层色谱、纸色谱研究表明该GAG主要由氨基半乳糖、葡萄糖醛酸、岩藻糖3种单糖组成,含量分别为25．6％,29．2％,23．3％;硫酸根和蛋白质含量分别为8．2％,3．5％。     

乌贼墨诱导小鼠巨噬细胞产生白细胞介素-1的研究

目的：应用乌贼墨,研究其诱导BALB／C鼠巨噬细胞产生白细胞介素-1(interleukin-1)。方法：给小鼠ig灌入乌贼墨,抽取腹腔液,应用成纤维细胞增殖实验检测诱导巨噬细胞产生IL-1的生物学活性,体内持续时闰争不同稀释浓度促细胞增殖的结果。结果：乌贼墨能诱导BALB／C鼠巨噬细胞产生IL-1,且分泌活性较强,与对照组比较有显著性差异。体内跟踪检测可见停止诱生后第2天达高峰,第5天分泌活性仍明显,第9天接近正常。lL-1待检液稀释8倍时活性无明显变化,32倍时近正常水平。结论：乌贼墨能诱导小鼠巨噬细胞产生IL-1,48h分泌活性最高。     

乌贼墨对高脂血症大鼠血脂代谢和抗氧化能力的影响

目的 探讨乌贼墨对实验性高脂血症大鼠血脂代谢和抗氧化能力的影响。方法 饲喂高脂饲料建立高脂血症大鼠模型,同时灌胃乌贼墨,剂量分别为50和200mg·kg^-1,连续30d。分别测定大鼠血清总胆固醇（TC）,甘油三酯（TG）,低密度脂蛋白胆固醇（LDL—c）,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）和一氧化氮（NO）含量,以及大鼠血清和肝脏丙二醛（MDA）含量,超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）活性。结果乌贼墨能显著性降低模型大鼠血清中的TC,TG和LDL-c含量,升高HDL-C,降低动脉粥样硬化指数（LDL-c／HDL-c）;显著提高高脂血症大鼠血清中NO含量;显著降低血清及肝组织中MDA含量,提高SOD和GSH—Px活性。结论乌贼墨可通过调节机体血脂代谢、提高机体内源性抗氧化酶活性,降低机体的过氧化水平,有效预防高脂血症的形成。     

乌贼墨对小鼠生成白细胞介素─2的影响

研究乌贼墨对小ＩＬ—２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ—２）的诱生作用。用乌贼墨连续５ｄ给予ＢＡＬＢ／ｃ,小鼠灌胃后,取其抗凝血,分得淋巴细胞,制备ＩＬ— ２待检上清,通过 ＭＴＴ（［３─（４,５— Ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ— ２ｙＬ）─２,５ｄｉｐｈｅｎｙｌｔ　ｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ　ｂｒｏｍｉｄｅ］）比色法测其ＩＬ—２分泌活性。结果表明：致敏后２４ｈ小鼠血液中 ＩＬ—２活性升高达５０％以上,与对照组比较有明显差异（Ｐ＜０．０１）,持续至４８ｈ开始呈下降趋势,９６ｈ后恢复正常。证实口服乌贼墨为诱生小鼠ＩＬ─２的唯一途径。