组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素（TSA）对骨肉瘤MG-63的诱导凋亡作用及其机制研究

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACIs）曲古抑菌素（TSA）对骨肉瘤细胞株MG-63的杀伤作用及机制。方法以不同浓度的TSA作用于体外培养的骨肉瘤细胞,采用MTF法检测细胞生长抑制率;以流式细胞技术（FCM）测不同浓度TSA作用前后骨肉瘤细胞周期变化情况;免疫细胞化学技术观察对Survivin基因和血管内皮生长因子（VEGF）的表达水平;RT—PCR分析TSA作用前后骨肉瘤细胞内P21^waf1/cip1mRNA的表达变化。结果TSA在纳摩尔浓度即可抑制细胞增殖;FCM检测到细胞周期发生改变,GJM期细胞较对照组增多。免疫组化结果表明,该药能明显抑制Survivin和VEGF蛋白的表达,RT—PCR结果表示TSA能显著诱导P21waf1／cip1 mRNA表达。上述结果都有明显的量一效关系。结论TSA作用于G州期并有效诱导体外培养的骨肉瘤细胞凋亡,其诱导凋亡机制之一可能是通过抑制Survivin和VEGF基因的表达并且上调P21蛋白水平实现的。     

VES体外抑制Raji细胞增殖及机制的初步研究

目的：观察维生素E琥珀酸酯（VES）体外对人单核细胞白血病Raji细胞的抗增殖作用及对细胞周期和细胞周期素依赖性激酶2（CDK2）的影响。方法：应用荧光显微镜、流式细胞仪、免疫细胞化学染色等技术方法，体外观察VES对Raji细胞的作用。结果：VES对Raji细胞的生长抑制作用与诱发细胞凋亡的明显增加同步发生，具有剂量疚和时间效应关系，同时VES作用后，细胞内CDK2蛋白表达下降，细胞周期发生变化，细胞阻滞于C1期。结论：VES通过影响细胞周期调控因子CDK2的表达从而干扰细胞周期可能是其抗肿瘤的途径之一。     

Anticancer Effect of Curcumin on B Cell non- Hodgkin''s Lymphoma

To explore the anticancer effect of curcumin on human B cell non-Hodgkin's lymphoma and compare its effects on human B cell non-Hodgkin's lymphoma cells and normal peripheral blood mononuclear cells (NPBMNCs). MTT assay was used to study the effect of curcumin on the growth of Raji cells and NPBMNCs. The effect of curcumin on the apoptosis of Raji cells and NPBMNC were studied by flow cytometry and TDT-mediated dUTP nick and labeling (TUNEL). The effect of curcumin on the cell cycle of Raji cells were examined by propidium iodide staining flow cytometry. The results showed that curcumin strongly inhibited ±1.82 μmol/L and curcumin induced Raji cell apoptosis in a time- and dose-dependent manner. Raji cells treated with curcumin showed curcumin did not demonstrate apparent proliferation inhibition and apoptosis induction in NPBMNCs. It was concluded that curcumin is able to inhibit the proliferation of Raji cells by regulating the cell cycle and inducing the cell apoptosis. Morever, curcumin has low toxicity on NPBMNCs but can selectively induce apoptosis in Raji cells.     

Anticancer Effect of Curcumin on Human B Cell non-Hodgkin＇s Lymphoma

Curcumin(diferuloylmethane)isayellowpig mentfromtherhizomesofturmeric(Curcumalon gaL.)andisamajorcomponentofvariousrecipesforcurry.Curcuminhasbeenreportedtohaveanumberofpharmacologicaleffectsincludinganti inflammatory,anti oxidant,antiviral,antibacterialandantitumoreffects,whichisattractingmoreandmoreattentionofinvestigators.Curcuminhasin hibitoryeffectsonmanytumorssuchasfoestom achcancer,esophagealcancer,coloncancer,livercancer,mammarytumor,bladdercancer,skincanceraswellasDMBA inducedleukem…     

曲古霉素A对人子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖和凋亡的作用及相关机制

【目的】探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichostatin A,TSA)对人子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖和凋亡的作用及其可能机制。【方法】应用不同浓度的TSA处理子宫内膜癌HEC-1B细胞72 h,Western blotting法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平及p21蛋白,荧光定量PCR方法检测p21基因mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率。【结果】经TSA作用后,人子宫内膜癌HEC-1B细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加,p21基因mRNA及蛋白表达增加;同时细胞生长受到抑制,细胞凋亡增加。【结论】TSA通过提高组蛋白乙酰化水平,增加p21基因表达,抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖和诱导细胞凋亡。     

曲古抑菌素A对外周血自然杀伤细胞活性和功能的影响

目的探讨曲古抑菌素A（TSA）对正常人外周血自然杀伤细胞(NK)活性和功能的影响。方法从正常人外周血单个核细胞（PBMCs）分离淋巴细胞（PBLs）（主要包括T细胞和NK细胞）或纯化NK细胞。体外应用白介素 2（IL 2）诱导PBLs 72?h产生淋巴因子激活的杀伤（LAK）细胞。将PBLs, LAK或NK细胞进行体外培养,给予不同浓度的TSA处理12、24、48?h。流式细胞术检测NK细胞和T细胞的凋亡;采用51Cr释放试验检测NK细胞的杀伤功能。结果TSA以剂量和时间依赖方式诱导PBLs和LAK细胞凋亡,TSA处理组淋巴细胞及LAK细胞凋亡百分率明显高于对照组（P＜0.05）;TSA同样可诱导静止期NK细胞的凋亡,0.1?μmol/L TSA作用于NK细胞24?h后,36%NK细胞凋亡,显著高于未处理组（P＜0.05）;0.1?μmol/L TSA作用于NK细胞１2?h后,其杀伤白血病细胞的能力明显低于对照组（P＜0.01）。结论TSA能够诱导人外周血静止期NK细胞及LAK细胞发生凋亡,并影响NK细胞的细胞毒作用。     

曲古菌素A对Molt-4细胞细胞周期阻滞和凋亡的作用

目的:本研究旨在探讨曲古菌素A(TSA)对Molt-4细胞的诱导细胞周期阻滞及凋亡的作用及TSA高效低毒的抗肿瘤特性。方法:应用细胞培养、PI单标流式细胞术和DNA Ladder等方法初步探讨TSA对Molt-4细胞的诱导细胞周期阻滞及凋亡的作用。结果:在一定浓度范围内,TSA能以浓度依赖性诱导Molt-4细胞S期及G2期阻滞。TSA以浓度依赖性方式诱导Molt-4细胞凋亡,随着TSA的浓度的升高,细胞凋亡率也显著增高。TSA的各实验组的凋亡率和对照组的凋亡率相比均有显著性差异,P<0.01。经200 nmol/L的TSA处理后,Molt-4细胞凋亡率增高,且呈时间依赖性效应关系。TSA在显著诱导Molt-4细胞凋亡的浓度范围内对正常人外周血单个核细胞(NPBMNC)无明显的诱导凋亡作用。结论:TSA有明确的诱导Molt-4细胞周期阻滞和诱导Molt-4细胞凋亡的能力,并且这种作用呈浓度和时间依赖性,这可能是TSA体外抑制白血病细胞系Molt-4生长和发挥抗白血病作用的主要机理之一,与NPBMNC相比较,TSA能够选择性诱导Molt-4细胞凋亡。     

曲古菌素A对去乙酰化酶2在子宫内膜癌细胞株HEC-1B中表达的影响

目的研究曲古菌素A（TSA）对子宫内膜癌细胞株HEC-1B中去乙酰化酶2（HDAC2）和p53表达的影响,及TSA对HEC-1B增殖的抑制作用,探讨TSA诱导HEC-1B细胞增殖抑制的机制。方法用不同浓度的TSA（100、200、400nmol／L）分组培养HEC-1B细胞（0、24、48、72h）,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定不同浓度、不同时间的TSA作用后子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖率。应用Western Blot以及RT-PCR方法检测HDAC2和p53的表达水平,研究TSA对其表达的影响。结果TSA对HEC-IB细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈时间依赖性（P〈0．01）。HDAC2在该细胞中的表达随TSA的剂量和时间呈减弱趋势,而p53的表达呈升高趋势。结论TSA具有去乙酰化酶抑制剂作用,抑制HDAC2的表达并促进肿瘤抑制因子p53的活化与表达,能够抑制子宫内膜癌细胞的增殖。     

Regulation of Histone Acetylation and Apoptosis by Trichostatin in HL-60 Cells

TrichostatinA(TSA),akindoftypicalhistonedeacetylaseinhibitor(DAIS),wasisolatedfromthemetablitesofStreptomyceshygroscopicus.Recently,TSAwasfoundtoinducedifferentiationand/orapoptosisinsolidtumorsandleukemiccells.InvivoresultsshowedthatTSAcouldselectivelyin…     

曲古霉素A诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡反义cDNA文库的构建和效应基因的初步筛选

目的 构建曲古霉素A诱导人乳腺癌细胞凋亡反义cDNA文库,以筛选曲古霉素A抗肿瘤的效应基因.方法 收集经曲古霉素A处理不同时间点的人乳腺癌细胞MCF-7,提取poly(A)+RNA,将逆转录合成的cDNA反向插入载体PCEP 4中以构建反义cDNA文库.文库DNA随机转入人宫颈癌细胞HeLa中,以转染PCEP 4卒载体细胞为对照组,用200 nmol/L曲古霉素A和200μg/ml潮霉素同时筛选,至对照组细胞全部死亡,文库组仍有存活细胞时停止曲古霉素A筛选.存活克隆扩增后提取Hirt DNA并转化感受态细胞,获得的转化克降扩增后进行酶切鉴定并测序,得到多个EST片段,经生物信息学分析后选择感兴趣的EST片段进行初步功能验证.结果 构建的反义cDNA文库含有2 × 106重组子,重组效率>90%;经DNA测序和生物信息学分析提示第27号存活克隆是锌转运蛋白LIV1,该克隆在功能验证时表现出对曲古霉素A非常显著的抵抗效应.结论构建的反cDNA文库容量较大,质量较高;基因LIV1可能是曲古霉素A抗肿瘤的效应基因之一.     

蛋白磷酸酶2A参与孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的负调控作用

目的探讨蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)是否参与孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的负调控作用,以进一步揭示孕激素作用的分子机制。方法分离培养原代小鼠子宫内膜上皮细胞,在细胞生长汇合时将其分为4组:以1μmol/L孕激素为对照组(P4组),其他3组分别给予1μmol/L孕激素和5nmol/L、10nmol/L、20nmol/L 3种不同剂量的PP2A抑制剂冈田酸(OA)作为实验组,分别为A、B和C组。各组细胞在上述实验因素作用24h后,采用流式细胞术检测细胞周期各时相分布的细胞百分数。结果与P4组相比,A组分布在细胞周期各时相的细胞百分数差异没有统计学意义;B组处于G1期和G2/M期的细胞百分数降低,而S期的细胞百分数增加;C组处于G1期和S期的细胞百分数增加,但G2/M期细胞百分数降低(P均<0.05)。结论适当剂量PP2A抑制剂OA可明显解除孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的抑制作用,使细胞周期进程加快,从而证实PP2A参与了孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的负调控作用。     

曲古抑菌素A上调肿瘤细胞柯萨奇-腺病毒受体表达而抑制其侵袭力的体外研究

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACI）曲古抑菌素A（TSA）抑制肿瘤细胞侵袭力是否通过上调肿瘤细胞表面柯萨奇-腺病毒受体（CAR）的表达而实现的。方法：在TSA作用124细胞和MCF-7细胞后，分别检测CAR mRNA和蛋白水平的表达；同时采用体外黏附实验和Boyden小室体外侵袭实验，以评价细胞黏附和侵袭力的改变。结果：TSA作用72h后，肿瘤细胞CARmRNA和蛋白表达水平明显上调，细胞间同型黏附增强，侵袭力下降。且这一过程可被CAR特异性抗体部分逆转。结论：TSA可以通过上调CAR而使肿瘤细胞同型黏附增加，侵袭力下降。     

灵芝酸A对人胶质瘤细胞U251细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨灵芝酸A对人胶质瘤细胞U251细胞凋亡、侵袭及KDR表达的影响。方法制备灵芝酸A,以人胶质瘤细胞细胞U251细胞为研究对象,根据细胞培养液所含灵芝酸A的不同浓度,将实验分为空白对照组(等量细PBS)、灵芝酸A低浓度组(0.1 mmol/L)和高浓度组(0.5 mmol/L)。用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测KDR基因的表达,CCK-8法测定细胞体外增殖能力,流式细胞技术(flowcytometry,FCM)检测各组细胞周期和凋亡情况,TUNEL染色检测各组细胞的的凋亡,细胞侵袭小室法检测各组细胞的体外侵袭力。结果 RT-PCR和Western blot显示,灵芝酸A高浓度组和低浓度组较空白对照组的KDR mRNA和蛋白表达都明显下降;灵芝酸A高浓度组和低浓度组细胞的生长速度明显减慢,降低G1期细胞比例,S期和G2/M期比例增高;与空白对照组相比,高浓度组和低浓度组细胞的凋亡率明显升高(P0.01),增殖、侵袭能力显著下降(P0.05);高浓度组和低浓度组细胞相比促进凋亡和抑制KDR表达的作用更明显(P0.05)。结论灵芝酸A可诱导人胶质瘤细胞U251细胞凋亡,抑制其增殖和侵袭能力,并能抑制Kdr DR mRNA和蛋白的表达,提示这可能是其抗肿瘤的作用机制之一。     

槲皮素对系膜细胞增殖、凋亡及细胞周期影响的初步研究

目的观察槲皮素对系膜细胞增殖及凋亡的影响。方法用M IT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果在5~30μm o l/L浓度范围内槲皮素能时间、剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖,可使G0~G1期细胞增多,S期细胞减少,而高浓度的槲皮素能诱导系膜细胞的凋亡。结论槲皮素可显著抑制系膜细胞增殖,使系膜细胞阻滞于G0~C1期;并且槲皮素有诱导系膜细胞凋亡的作用。     

一种新型吲哚满酮类化合物对鼻咽癌细胞的作用

目的：研发针对中国南方和东南亚高发恶性肿瘤鼻咽癌的新型靶向抗癌药。方法: 用本课题组合成的一种新型吲哚满酮类化合物IF239处理培养的鼻咽癌细胞系(CNE), 酸性磷酸酶法测定化合物IF239对CNE细胞百分活率的影响; 光学显微镜下观察细胞形态变化和黏附状态的改变; 流式细胞术检测细胞周期时相的改变; Wes tern blot检测细胞周期关键调控分子的变化。结果: IF239对CNE细胞具有强大的杀伤作用, 其抗肿瘤机制可能与抑制细胞黏附和诱导细胞周期阻滞于G₂/M期有关; 而G₂/M期阻滞与IF239上调cyclin B1和细胞周期蛋白依赖激酶1(CDK1)磷酸化水平有关。 结论: IF239对CNE细胞的增殖抑制作用显著, 其作用机制独特, 具有潜在应用前景。     

曲古菌素A对人肺癌细胞的诱导分化及其机制的实验研究

目的通过应用组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A（TSA）调节人肺腺癌细胞A549中组蛋白去乙酰化酶3的表达,观察肺腺癌细胞A549生长抑制、细胞周期阻滞以及对抑癌基因表达的变化。方法培养人肺腺癌细胞A549,应用MTT比色法观察TSA对A549细胞的生长抑制作用,流式细胞术分析细胞周期,以RT—PCR、Western印迹分别检测A549细胞中组蛋白去乙酰化酶3、P^21WAFL/CIPt和蛋白的表达水平。结果TSA处理后A549细胞的生长受到抑制（24h时对照组和各处理组细胞抑制率分别为6．2％±1．1％、18．5％±2．3％、28．9％±3．6％、39．4％±3．7％、45．6％±2．7％,P〈0．05;48h时分别为8．1％±2．3％、26．9％±4．2％、35．6％±3．8％、56．5％±6．1％、69．8％±5．3％,P〈0．05;72h时分别为10．5％±1．3％、28．4％±3．2％、50．5％±5．8％、70．5％±6．9％、78．6％±4．5％,P〈o．05）,细胞阻滞于G1期（对照组和各处理组细胞G1期分布：56．5％±8．1％、70．5％±6．7％、78,6％±4．6％、82．4％±3．7％、85．6％±7．5％,P〈0．05）,P^21WAFL/CIPt基因表达水平增强（对照组和各处理组RT—PCR吸光度分别为o．09、0．17、0．20、0．27、0．35,P〈0．05）。同时TSA处理A549细胞中组蛋白去乙酰化酶3的基因表达水平明显降低。结论TSA可能通过抑制组蛋白去乙酰化酶3,提高组蛋白的乙酰化水平诱导P^21WAFL/CIPt基因表达。     

曲古菌素A对视网膜母细胞瘤Hxo-rb44细胞凋亡及Survivin、c-Myc表达的影响

目的:探讨曲古菌素A(TSA)对人视网膜母细胞瘤(Rb)细胞株Hxo-rb44细胞凋亡和Survivin、c-Myc表达的影响.方法:将人Rb细胞株Hxo-rb44进行培养传代,流式细胞仪检测不同浓度的TSA作用不同时间对Hxorb44细胞周期和凋亡的影响,用Western blot法检测凋亡过程中Survivin和c-Myc蛋白表达的变化.结果;TSA可明显诱导细胞发生G2期阻滞及细胞凋亡,而且与药物作用时间呈依赖关系(r=0,97,P=0,02);Western blot法可以观察到Survivin和c-Myc的表达水平随着TSA作用时间的延长而下降(P均＜0,01).结论:TSA可以有效诱导人Rb细胞株Hxo-rb44细胞周期阻滞和凋亡,其作用机制与抑制Survivin和c-Myc表达有关.     

姜黄素对人急性髓性白血病细胞的作用及机理的初步探讨

目的　探讨姜黄素对急性髓性白血病细胞 (HL- 6 0 )增殖和细胞周期的调控及细胞凋亡的影响。方法　采用 MTT法测定姜黄素在不同浓度、不同时间对 HL- 6 0的抑制作用 ;流式细胞仪分析细胞周期分布 ;透射电镜观察细胞的超微结构变化。结果　姜黄素可抑制 HL- 6 0细胞的生长 ,其抑瘤率与药物浓度和作用时间呈依赖关系 ;中效浓度 (IC50 )为 2 4 .8μm ol/ L 时 ,流式细胞仪分析证实姜黄素能使 HL- 6 0细胞聚积在 S期、G2 / M期 ;电镜观察发现姜黄素可使 HL- 6 0细胞超微结构发生改变。结论　姜黄素可干扰 HL- 6 0细胞的周期分布 ,具有抗细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用     

鳕鱼皮寡肽对人胃癌细胞BGC-823增殖影响的实验研究

目的探讨鳕鱼皮寡肽（codskinofoligopeptide,CSO）对人胃癌细胞（BGC-823）增殖的影响。方法用不同浓度（20、40、60、80mg/ml）CSO处理体外培养的BGC-823,72h后显微镜下观察细胞生长情况;分别于24、48、72h,应用CCK-8法检测细胞增殖情况并计算50%细胞抑制率（IC50）;处理后24h采用流式细胞术测定细胞凋亡及细胞周期的改变情况。结果与对照组相比,经CSO处理后,镜下BGC-823数目减少。CCK-8检测结果显示,BGC-823数目减少呈剂量、时间依懒性（均P＜0.05）,并且CSO对BGC-823作用24、48和72h的IC50分别是87.34、68.14、44.55mg/ml。对照组BGC-823存活率为（86.62±10.32）%,60mg/ml组BGC-823存活率为（24.18±6.59）%,差异有统计学意义（P＜0.05）;对照组BGC-823晚期凋亡率为（1.81±0.35）%,60mg/ml组BGC-823晚期凋亡率为（55.84±5.89）%,差异有统计学意义（P＜0.05）。在G1期,对照组BGC-823细胞分布为（61.13±10.32）%,60mg/ml组BGC-823细胞分布为（79.74±10.21）%,差异有统计学意义（P＜0.05）;在S期,对照组BGC-823细胞分布为（23.04±8.64）%,60mg/ml组BGC-823细胞分布为（10.42±5.36）%,差异有统计学意义（P＜0.05）;在G2期,20mg/ml组BGC-823细胞分布为（9.96±2.68）%,40mg/ml组BGC-823细胞分布为（6.93±1.25）%,60mg/ml组BGC-823细胞分布为（9.84±3.79）%,与对照组BGC-823细胞分布（15.83±5.89）%相比,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论CSO可阻滞BGC-823生长周期,促进BGC-823凋亡,抑制增殖,从而抑制肿瘤细胞的生长。     

去甲基化药物5-氮-2'-脱氧胞苷抑制膀胱肿瘤细胞生长作用的实验研究

目的探讨去甲基化药物5-氮-2’-脱氧胞苷（5-aza-2’-deoxycytidine,DAC）对膀胱肿瘤细胞生长的抑制作用。方法采用WST-1法测定DAC对膀胱癌细胞株的生长影响作用,流式细胞仪检测其在诱导细胞凋亡与细胞周期捕获中的效果,APOPCYTO半胱天冬酶（Caspase）色度法分析DAC处理后Caspase 3及Caspase 9的活性,Western blot检测DAC处理后增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况。结果 DAC对膀胱肿瘤细胞的生长具有抑制作用,药物作用呈剂量依赖性,并且该作用不受p53表型影响。DAC不能诱导膀胱肿瘤细胞凋亡,细胞中Caspase 3、9的活性也未见激活,但DAC可以抑制膀胱癌细胞的增殖能力,PCNA蛋白的表达量呈剂量依存性降低,发生G2/M期捕获。用0、1和8μmol/LDAC处理RT112后G2/M期细胞分别为（36.3±3.4）%、（46.2±4.6）%和（56.5±6.2）%;处理TCCsup后为（37.5±3.8）%、（48.4±4.9）%和（60.1±6.7）%。结论 DAC对膀胱肿瘤细胞生长具有抑制作用,可能成为将来治疗膀胱恶性肿瘤的一种新型药物。