急性白血病多药耐药相关蛋白基因表达及其与免疫表型和FAB分型的关系

为探讨急性白血病（ＡＬ）患者多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）基因表达与ＦＡＢ亚型及免疫表型的关系，应用半定量逆转录－多聚酶链反应技术检测了５４例ＡＬ患者ＭＲＰ基因的表达。以正常人或非恶性血液病患者的单个核细胞为对照组。发现临床耐药组ＭＲＰ基因表达（中位数１．１８）高于完全缓解（ＣＲ）组（中位数０．２２，Ｐ＝０．０６５９）。ＡＬ各组ＭＲＰ基因表达均明显高于对照组（中位数０）。ＭＲＰ基因表达与白血病ＦＡＢ亚型无关。ＣＤ１３＋与ＣＤ１３－组ＭＲＰ基因表达有显著性差异（Ｐ＝０．００２９），而与其它细胞免疫表型无关。根据ＭＲＰ基因表达在ＡＬ各组的分布，将ＭＲＰ与β２微球蛋白之比大于１．０定为ＭＲＰ＋，临床耐药组ＭＲＰ＋占６６．６７％，明显高于ＣＲ组（２０％，Ｐ＝０．０２１３）     

急性白血病患者肺耐药蛋白基因表达及其临床意义

目的 探讨急性白血病（ＡＬ）患者肺耐药蛋白（ＬＲＰ）基因表达临床耐药的关系。方法 应用产定量逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,并以β２微球蛋白（β２ＭＧ）作内对照,检测了６１例ＡＬ患者及１５名正常对照者ＬＲＰ基因的表达,奖ＬＲＰ／β２ＭＧ≥０．３定为ＬＲＰ阳性。结果 初治组ＬＲＰ的阳性率为３２．４％,ＬＲＰ阳性与ＬＲＰ阴性患者的首次完全缓解（ＣＲ１）率分别为３３．３％和８４．０％,两者的差异有     

急性白血病多药耐药相关蛋白基因表达及其与免疫表型和FAB…

为探讨急性白血病（ＡＬ）患者多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）基因表达与ＦＡＢ亚型及免疫表型的关系，应用半定量逆转录－多聚酶链反应技术检测了５４例ＡＬ患者ＭＲＰ基因的表达。以正常人或非恶性血液病患者的单信核细胞为对照组，发现临床耐药组ＭＲＰ基因表达（中位数１．１８）高于完全缓解（ＣＲ）组（中位数０．２２，Ｐ＝０．０６５９）。ＡＬ各组ＭＲＰ基因表达均明显高于对照组（中位数）。ＭＲＰ基因表达与白血病ＦＡＢ亚型     

反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药诱导细胞凋亡的研究

目的：探讨克服肿瘤细胞多药耐药（ＭＤＲ）的方法，提高化疗效果。方法：采用多药耐药反义基因（ｍｄｒ－１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ）逆转Ｋ５６２／ＡＤＭ肿瘤细胞的ＭＤＲ，而诱导肿瘤细胞凋亡。结果：ｍｄｒ－１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞产生大量ＤＮＡ断片，流式细胞仪检测发现几乎全部ｍｄｒ－１＋Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞发生凋亡。结论：ｍｄｒ－１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ能有效、特异地抑制ｍｄｒ－１基因表达，逆转肿瘤细胞的ＭＤＲ，促进阿霉素诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡，为其临床应用提供理论依据。     

白血病患者WT1基因的表达及其与预后及多药耐药的关系

目的探讨ＷＴ１基因与白血病的预后、多药耐药性及细胞凋亡之间的关系。方法应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法测定６８例白血病患者及２３名正常人的ＷＴ１、ＭＲＰ及ｍｄｒ１基因的表达,同时采用免疫荧光流式细胞术（ＦＣＭ）观察了３２例急性髓系白血病（ＡＭＬ）患者抗凋亡基因ｂｃｌ２的表达。结果６８例白血病患者中３７例ＷＴ１基因表达阳性,２３名正常人ＷＴ１基因表达阴性。ＷＴ１基因表达阳性患者的完全缓解（ＣＲ）率低于表达阴性者（分别为５９．４６％和８７．１０％,Ｐ＝００１１）。ＷＴ１表达阳性患者的ＭＲＰ阳性率高于ＷＴ１表达阴性者（分别为５８．３３％和３２．２６％,Ｐ＝００３３）。联合ＷＴ１及ｂｃｌ２表达情况将ＡＭＬ患者分为高危、中危、低危三组,其ＣＲ率分别为３３３３％、４７．３７％及１００％,三组间差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论ＷＴ１基因的表达与白血病患者的化疗效果及预后密切相关,是影响白血病患者ＣＲ率的重要危险因素之一。ＷＴ１基因及ｂｃｌ２的共同表达情况可作为预测ＡＭＬ患者预后的重要指标     

MDM2和p53基因蛋白在急性白血病细胞中表达及与化疗反应的关系

目的：研究人急性白血病（ＡＬ）细胞ＭＤＭ２及ｐ５３基因蛋白表达水平、它们的相互关系及对ＡＬ化疗反应预测的价值。方法：免疫组化方法检测ＭＤＭ２及ｐ５３蛋白。结果：①４６例ＡＬ细胞ＭＤＭ２蛋白阳性率为７１．７％，ｐ５３蛋白阳性率为２１．７％，无细胞类型不同的差别（Ｐ＞０．０５），复发难治组比初发未治组约高１倍；②ＭＤＭ２与ｐ５３蛋白呈反向表达者多见，以ＭＤＭ２（＋），ｐ５３（－）方式表达（６７．４％）高于同向方式表达（１５．２％）（Ｐ＜０．０１）；③ＭＤＭ２蛋白阴性者骨髓缓解（ＢＭＲ）率（６９．２％）高于阳性者（３３３％）（Ｐ＜０．０５），两种蛋白不同表达关系对化疗效应有影响；④ＡＬ患者４例中２例化疗后ＭＤＭ２蛋白转阴性，获ＢＭＲ，另２例则反之。结论：人ＡＬ细胞ＭＤＭ２蛋白阳性率高，ｐ５３蛋白阳性率低；在同一ＡＬ细胞中两者多呈反向表达，且不同表达方式对化疗有影响；在ＡＬ细胞中确实存在ＭＤＭ２（＋），ｐ５３（－）表达方式。ＭＤＭ２蛋白，特别是ＭＤＭ２蛋白与ｐ５３蛋白联检可能预测ＡＬ细胞对化疗的敏感性     

复合定量PCR检测谷胱苷肽-S转移酶和多药耐药相关基因mRNA表达水平方法的建立及初步应用

用β－肌动蛋白（β－ａｃｔｉｎ）作内参照，设计不同扩增片段的谷胱苷肽－Ｓ转移酶（ＧＳＴ－π）和多药耐药基因（ＭＤＲ１）引物，建立同时定量检测ＧＳＴ－π和ＭＤＲ１ｍＲＮＡ表达水平的复合定量ＰＣＲ法。扩增条带光密度值用凝胶成像系统检测，基因相对表达水平用目的基因和β－ａｃｔｉｎ光密度比值计算。本法灵敏度高、重复性好，能作批量分析。室内Ｘ控制图可有效控制定量ＰＣＲ扩增和电泳质量，保证本法能检测出小于２倍的表达差异。在乳腺癌组织中ＧＳＴ－π和ＭＤＲ１ｍＲＮＡ中位数分别为０．２７和１．３２，且表达水平呈明显正相关（ｒ＝０．３２３，Ｐ＜０．０５）。     

RT-PCR检测急性白血病MRP基因

目的：探讨急性白血病（AL）患者多药耐药相关蛋白（MRP）基因表达与临床耐药的关系。方法：应用半定量逆转录聚合酶链反应（RT－PCR），检测了48例AL患者骨髓和10例正常对照骨髓细胞MRP基因的表达。将MRP／β2－MG≥0．3表示为MRP阳性表达。结果：复发难治性MRP的平均表达水平及阳性率阳高，与正常对照组、初治组的MRP平均表达水平及阳性率相比均有显著差异（P＜0．05）。初治组MRP阳性病例与MRP阴性病例的首次完全缓解率（分别为28．6％和71％）之间有显著差异。结论：MRP基因过度表达可导致临床耐药，是AL患者预后的重要不利因素。     

多药耐药基因反义寡核苷酸逆转肿瘤细胞耐药的初步研究

目的：克服肿瘤细胞的多药耐药（ＭＤＲ）。方法：用人工合成互补于ｍｄｒ１基因５′端转录起始部位的反义寡核苷酸（ＯＤＮ），直接转染耐药细胞株ＫＢ－８－５细胞，或以脂质体ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ为载体进行基因转染实验，通过ＭＴＴ法检测细胞对柔红霉素（ＤＮＲ）的敏感性，流式细胞仪分析细胞内ＤＮＲ含量及免疫组化方法确定细胞表面糖蛋白（Ｐｇｐ）的表达水平。结果：ＯＤＮ可增加ＫＢ－８－５细胞内的ＤＮＲ浓度从而提高耐药细胞对ＤＮＲ的敏感性，ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ进一步加强上述作用。在ＤＮＲ浓度为３．０ｍｇ／Ｌ组中，约有７４．４３％的被转染细胞对ＤＮＲ敏感而致死，基本达到药物敏感细胞株ＫＢ－３－１的水平。ＯＤＮ转染的ＫＢ－８－５细胞的Ｐｇｐ为弱阳性表达，低于阳性对照ＫＢ－８－５细胞的Ｐｇｐ表达水平。结论：ＯＤＮ的逆转作用可能与其互补结合的ｍｄｒ１ｍＲＮＡ降解或直接阻滞了Ｐｇｐ合成使其表达降低有关。     

恶性淋巴瘤患者多药耐药的研究

应用逆转录－多聚酶链反应技术及免疫组化方法对２５例初治及２５例复发的恶性淋巴瘤患者的多药耐药进行了前瞻性分析。结果发现：初治患者仅８％（２／２５），而复发患者６０％（１５／２５）ｍｄｒｌｍＲＮＡ表达阳性（Ｐ＜０．０１）；初治患者仅４％（１／２５），而复发患者４８％（１２／２５）ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）表达阳性（Ｐ＜０．０１）；ｍｄｒ１ｍＲＮＡ及Ｐ－ｇｐ表达阳性患者的化疗有效率（ＣＲ－ＰＲ）明显低于ｍｄｒ１ｍＲＮＡ及Ｐ－ｇｐ表达阴性的患者（Ｐ＜０．０１）。结果表明：ｍｄｒｌ基因及Ｐ－ｇｐ表达的检测对恶性淋巴瘤患者化疗的敏感性及预后具有预测价值，可为临床化疗方案的个体化提供依据。     

急性白血病细胞的乳腺癌耐药蛋白基因表达与化疗耐药的关系

为了探讨急性白血病 (AL)患者乳腺癌耐药蛋白 (BCRP)基因表达与化疗耐药及预后的关系 ,本研究应用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)的方法 ,以 β2 微球蛋白 (β2 MG)作阳性对照 ,检测了 72例AL患者的白血病细胞及 15名正常对照者白细胞的BCRPmRNA的表达 ,将BCRP/ β2 MG≥ 0 .5定为BCRP基因表达阳性。结果显示 :初治组BCRP基因表达的阳性率为 37.6 % ,BCRP基因表达阳性与BCRP基因表达阴性患者的首次完全缓解 (CR1)率分别为 31.6 %和 79.3% (P =0 .0 0 1) ;临床耐药组 (NR组 )与化疗敏感组 (CR组 )BCRP基因的表达水平分别为 0 .96 2± 0 .4 2 6和 0 .315± 0 .2 96 (P =0 .0 0 0 1) ;复发 /难治组BCRP基因表达水平显著高于初治组 (P =0 0 0 2 5 ) ;正常对照组及长期生存组BCRP基因表达的水平较低 ;BCRP基因表达与FAB分型有关。结论 :BCRPmRNA过度表达可导致临床化疗耐药 ,是AL患者 (除M3 外 )预后的重要不利因素。     

葡萄糖神经酰胺合酶与白血病细胞耐药的关系

本研究旨在观察葡萄糖神经酰胺合酶（glucosylceramide synthase，GCS）基因及其蛋白在人白血病细胞的表达及其与肿瘤多药耐药的关系。首先以β—actin基因为内参照物，采用RT—PCR方法分析了53例耐药／非耐药白血病患者外周血标本，并对药物敏感的HL-60细胞株和对阿霉素耐药的HL-60／ADR细胞株中GCS基因的表达水平进行检测，同时与多药耐药基因（mdr1）的表达进行比较。继而采用Western blot法分析HL-60细胞株及HL-60／ADR细胞株中GCS蛋白及P-gP蛋白的表达情况。结果表明：白血病患者耐药组临床标本中的GCS基因扩增条带光密度相对比值明显高于非耐药组（P〈0．05），且GCS基因扩增条带光密度值显著增强时往往伴有mdr1基因的高表达，两者呈正相关（P〈0．01、r=0．6）。HL-60／ADR细胞株GCSmRNA及蛋白均过度表达，且明显高于HL-60细胞株，与此同时，HL-60／ADR细胞株的mdr1mRNA和P-gP的表达亦显著增高。结论：GCS可能在白血病多药耐药中起着重要作用。     

急性白血病患者白血病细胞DNA拓扑异构酶Ⅱ活性与多药耐药？…

探讨急性白血病患白血病细胞ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ活性与多药耐药的关系。方法：采用溴乙锭荧光法与１７例初治化疗前及２０例化疗后的急性白血病患外周血或骨髓白血病细胞ＤＮＡ ＴｏｐｏⅡ活性进行测定，采用抗多药耐药单抗ＪＳＢ－Ｉ检测１８例化疗后患ｐ－糖蛋白表达，采用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ｍｄｒ－１基因表达。     

急性白血病患者LRP、GST-π、MRP1蛋白表达及临床意义

本研究探讨谷胱甘肽硫转移酶-π(GST-π)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、肺耐药相关蛋白(LRP)与急性白血病(AL)多药耐药(multi-drug resistance,MDR)的关系、并探讨这3种耐药蛋白表达的相关性以及三者表达与AL患者临床特征的关系。采用免疫组织化学S-P法检测80例AL患者及30例正常人GST-π、MRP1及LRP的表达。结果表明:GST-π,MRP1,LRP蛋白表达均与临床耐药相关,3种耐药蛋白表达阳性组的完全缓解率均低于阴性组,提示耐药蛋白表达时白血病患者预后不良。GST-π、MRP1在AL难治组中的表达具有高度相关性。结论:GST-π/MRP1二者联合检测对评定白血病预后不良较单独测定某一蛋白更具有显著的临床意义。当外周血白细胞数≥10×109/L时,LRP阳性表达率显著增高,提示LPR对高白细胞数白血病患者的耐药性和预后评定具有很高的判断价值。     

MRP在急性白血病患者骨髓涂片中表达的临床意义

目的 探讨多药耐药相关蛋白（multidrug resistance assoliated protien, MRP）在急性白血病（acute leukemia AL）患者骨髓涂片中的表达及其与临床疗效的关系。方法采用免疫组化染色技术检测42例AL患者骨髓涂片中MRP的表达。其中初发AL29例，复发13例。按FAB分类：其中急性淋巴细胞白血病（acute lymphocytic leukemia ALL）10例，急性髓细胞白血病（acute mylogenous leukemia AML）31例。结果 初发AL患者NRP的表达阳性率（17．2％）与复发患者（46．2％）有差异。骨髓涂片中MRP表达阳性患者化疗缓解率54．5％低于NRP表达阴性患者95％，具有统计学差异。结论AL患者骨髓涂片中MRP的检测是判断疗效的一个简便可行的方法，对其疗效有其一定影响关系。     

急性白血病患者P-gp、mdr1、MRP和Topo Ⅱ表达及其与预后关系的研究

目的 探讨P糖蛋白（P－gp)、mdr1、MRP和TopoⅡ是否为急性白血（AL）临床耐药的预后因素。方法 用单抗UIC2标记,流式细胞术测定45例AL患者的P－gp;用RT－PCR方法检测其mdr1、MRP和TopoⅡ的表达。结果 耐药组P－gp、mdr1、MRP阳性率均高于敏感组,P值均＜0．01,而TopoⅡ耐药组表达阳性率较敏感组降低,但差异无统计学意义。经单因素逻辑回归分析,P－gp、mdr、MRP、TopoⅡ和年龄与临床耐药性显著相关;性别、发病时白细胞计数、FAB亚型和骨髓原始＋（早）幼稚细胞比例与耐药性无关。采用多因素逻辑回归分析经以上变量校正后显示P－gp、mdr1、MRP、TopoⅡ和年龄仍与耐药性显著相关：P－gp RR=14.87,P=0.003;mdr1 RR=19.98,P=0.003;MRP RR=16.53,P=0.006;TopoⅡRR=0.23,P=0.046;年龄RR＝10．87,P＝0．013。将36例初发AL患者单独分析,结果发现P－gp、mdr1和MRP亦可完全缓解密切相关。经直线相关分析发现所有病例组和临床耐药组P－gp和mdr1,P-gp和MRP,mdr1和MRP具有相关性（P＜0．001）。结论 P－gp、mdr1、MRP和TopoⅡ是AL临床耐药的独立预后因素。mdr1和MRP具有相关性。     

白血病患者可溶性耐药相关钙结合蛋白基因的表达及其临床意义

目的：探讨白血病患者可溶性耐药相关钙结合蛋白（Sorcin)基因的表达及其与临床耐药和疗效的关系。方法：应用半定量RT－PCR检测95例急性白血病患者、27例非白血病患者和健康人的Sorcin基因表达水平，并分析了Sorcin基因表达的临床意义。结果：白血病患者Sorcin基因表达高于对照组，差异有显著性（P＜0．001）；急性髓系白血病（AML）复发难治组高于初诊组和完全缓解（CR）组；临床耐药组Sorcin基因表达显著高于非临床耐药性（P＜0．001）；Sorcin基因阳性表达的CR率为20．0％，Sorcin基因阴性表达的CR率为80．0％，差异有显著性（P＜0．001）；AML各亚型Sorcin基因过度表达存在差异，以M5的阳性表达率最高。结论：Sorcin基因过度表达与白血病患者临床耐药密切相关，是影响预后的重要因素，可作为检测临床耐药和判断预后的指标之一。     

中期因子在急性白血病中的表达及其意义

目的 检测中期因子(Midkine,MK)基因在白血病患者中的表达,初步探讨其与白血病的关系.方法 应用实时定量逆转录PCR(RQ-RT-PCR)方法,对181例急性白血病(AL)患者、31名正常人骨髓标本进行了中期因子转录本的检测.结果 中期因子在初治和复发AL患者、AL完全缓解(CR)患者及正常人骨髓细胞均有表达.初治和复发AL患者中期因子表达明显高于正常人及CR患者(P＜0.01及P＜0.05).而正常人与CR患者相比差异无统计学意义.中期因子的表达在B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)各亚型(包括pro-B-ALL,common-B-ALL,pre-B-ALL)及各年龄段均有显著升高(P＜0.01),且与T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)、急性杂合性白血病及急性髓系白血病(AML)各FAB亚型问差异均有统计学意义(P值均＜0.01);与正常人相比,M2型患者中期因子表达明显升高(P＜0.01),与AML其他FAB亚型相比差异亦有统计学意义(P值均＜0.05);M3患者中期因子表达也较正常人明显升高(P＜0.05),但与除B-ALL和AML-M2外的其他白血病亚型间差异无统计学意义.CD34+患者较CD34-患者中期因子表达显著升高(P＜0.01),AML1-ETO融合基因阳性的M2患者较阴性的M2患者中期冈子表达显著升高(P＜0.05).结论 B-ALL、AML-M2和AML-M3型白血病患者中均存在中期因子基因不同程度的表达升高,为白血病诊断及其发病机制的研究提供了新的方向.     

磷酸化STAT5、FOXP3在急性白血病患者骨髓中的表达及意义

目的观察急性白血病患者骨髓中单个核细胞磷酸化STAT5及FOXP3的表达水平及其临床意义。方法采用蛋白磷酸化流式细胞术分别检测45例急性白血病患者（AL）[急性髓系白血病（AML）29例,急性淋巴细胞白血病（ALL）16例]及12名对照组骨髓单个核细胞磷酸化STAT5（P-STAT5）及FOXP3阳性细胞的百分率。结果 AL患者组骨髓单个核细胞PSTAT5表达（2.35±0.82）%较对照组（0.58±0.16）%增高,差异具有统计学意义（P〈0.05）;AL患者组FOXP3（3.98±1.17）%高于对照组（0.96±0.45）,差异具有统计学意义（P〈0.05）;AML组P-STAT5及FOXP3水平（2.51±0.91）%,（3.72±1.12）%和ALL组（2.27±0.78）%,（4.03±1.18）%比较无显著差异（P〉0.05）。AL患者P-STAT5及FOXP3表达水平显著正相关（r=0.81,P〈0.05）。结论磷酸化STAT5及Foxp3可能共同参与了急性白血病的发生过程,同时检测可以提供有临床意义的实验依据。