放射性PDGFR-β反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究32P标记血小板衍化生长因子β受体（PDGFR-β）的反义寡核苷酸（AON）对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响,为抑制血管术后再狭窄的形成提供可能的干预。方法体外进行大鼠VSMC的培养,以510代细胞为实验对象,人工合成PDGFR-βAON,并进行32P标记,按实验目的分组。MTT法分析细胞增殖活力,以流式细胞仪测定细胞周期,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果32P标记PDGFR-βAON作用后,VSMC的增殖强度明显弱于空白对照组（P<0.01）,而处于DNA合成前期（G0/G1）细胞百分比高于空白对照组（P<0.01）;32P标记AON组细胞凋亡率明显高于空白组（P<0.01）。结论32P-PDGFR-βAON可以诱导VSMC凋亡,抑制其增殖。     

PDGFR-β反义寡核苷酸对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 :探讨血小板衍化生长因子 β受体 （PDGFR- β）反义寡核苷酸对培养的大鼠血管平滑肌细胞 （VSMC）凋亡的影响。方法 :建立 SD大鼠胸主动脉 VSMC体外增殖模型 ,取 5～ 10代细胞为实验对象 ,按实验目的分为以下几组 :1反义寡核苷酸组 ;2正义寡核苷酸组 ;3错义寡核苷酸 ;4空白对照组。利用透射电镜等观察 VSMC加药前后形态学和超微结构的变化 ,采用原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的 d U TP缺口末端标记法 （TU NEL）和流式细胞仪观察和分析 PDGFR- β反义寡核苷酸对 VSMC凋亡的影响。结果 :1加药后 2 4h细胞形态和超微结构较加药前无明显改变 ,48h细胞形态和超微结构较加药前有明显改变。2加药后 2 4h TU NEL 染色各组未发现凋亡细胞 ,48h后反义寡核苷酸组细胞爬片染色有较多凋亡阳性细胞出现。 3加药 2 4h流式细胞仪检测未发现加药组细胞凋亡量与对照组之间有显著差异 ,48h加药组细胞凋亡量明显高于对照组。结论 :PDGFR- β反义寡核苷酸对大鼠VSMC凋亡有诱导作用。     

血小板源生长因子β受体反义寡核苷酸对血小板源生长因子诱导大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响

为研究血小板源生长因子β受体反义寡核苷酸对血小板源生长因子诱导的大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响和作用机制,利用激光共聚集显微镜观察平滑肌细胞对异硫氰酸荧光素标记的反义寡核苷酸的摄取和细胞内定位,改良Boden's小室法观察平滑肌细胞迁移。结果发现,加入反义寡核苷酸培养24h及48h后荧光分别位于细胞浆内和细胞核内,5umol/L以上浓度反义寡核苷酸作用36h后,被血小板源生长因子诱导迁移通过Boyden's小室碳纤维素膜的细胞数量小于空白对照组;正义,错义寡核苷酸和5umol/L以下浓度反义寡核苷酸迁移抑制不明显,提示血小板源生长因子β受体反义寡核苷酸在细胞核内呈时间和浓度依赖性抑制血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞迁移。     

反义治疗抑制再狭窄

血管再狭窄是心血管治疗领域的热点及难点，发生机制包括血管弹性回缩、血栓形成、血管重构和内膜增生。平滑肌细胞增殖、迁移在其病理形成中起关键作用。靶基因的硫代磷酸化寡核苷酸通过杂交依赖反义、G-quartet aptameric、非G—quartet apteric和非序列特异性抑制平滑肌细胞增殖、迁移及活体血管新生内膜形成。此外，硫代磷酸化寡核苷酸具有免疫调节作用。目前反义治疗多采用局部给药法进行抗再狭窄治疗。新的反义治疗抑制再狭窄策略是采用E2F诱骗寡核苷酸调节平滑肌细胞周期调节基因的表达，达到抑制平滑肌细胞增殖的目的。     

反义寡核苷酸抑制兔血管平滑肌细胞增殖和血小板源性生长因子β mRNA的表达

目的　应用血小板源性生长因子 β(PDGF β)cDNA的反义寡核苷酸作为药物 ,在体抑制兔血管平滑肌细胞 (VSMCs)增生 ,为人血管再狭窄的防治提供依据。方法　建立兔髂动脉再狭窄模型 ,用自行设计合成的PDGF βcDNA的反义寡核苷酸片段作为药物 ,在体原位观察对VSMCs表达PDGF βmRNA、增殖细胞核抗原和内膜增生的影响。 结果　这种反义寡核苷酸药物显著抑制球囊损伤后 1周内膜VSMCs表达PDGF βmRNA和增殖细胞核抗原 ,抑制率分别为 88 4 0 %和 93 4 4 %。 结论　设计的反义寡核苷酸药物可以通过下调VSMCs表达PDGF βmRNA抑制内膜增生 ,为转基因防治人血管再狭窄提供体内实验依据。     

反义EGFR寡核苷酸对AngⅡ促血管平滑肌细胞增殖效应的影响

目的探讨脂质体介导的反义表皮生长因子受体（EGFR）寡核苷酸基因转染对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）促大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法用EGFR寡核苷酸脂质体复合物转染Sprague-Dawley大鼠VSMC,通过RT-PCR、Western-Bloting分别检测转染后EGFR mRNA及蛋白的表达情况,用3H-Tdr掺入法检测经EGFR寡核苷酸转染再用AngⅡ刺激VSMC的增殖情况。结果反义EGFR寡核苷酸转染大鼠VSMC后,EGFR mRNA及蛋白的表达较正义组及对照组显著减少（P<0.01）;用AngⅡ刺激后,反义组细胞的3H-Tdr掺入较正义组及对照组显著降低（P<0.01）。结论脂质体介导的反义EGFR寡核苷酸转染可以减弱AngⅡ的促VSMC增殖效应。     

反义寡核苷酸对培养内皮细胞c－sis表达的抑制作用

用合成的与人ｃ－ｓｉｓｍＲＮＡ起始码及其后五个密码子互补的硫代型寡聚核鞋处理培养的人脐带静脉内皮细胞，观察其对细胞ｃ－ｓｉｓ基因表达的抑制作用。实验结果，ｃ－ｓｉｓ反义寡核鞋酸可抑制内皮细胞ｃ－ｓｉｓｍＲＮＡ量（Ｐ＜０．０１）和其表达产物血小板衍化生长因子量，以７２小时作用最强。而用正义寡核鞋酸片段及空白做对照，未出现上述结果。实验揭示，ｃ－ｓｉｓ反义寡核苷酸可特异地抑制人内皮细胞ｃ－ｓｉｓ基因的表达。     

血管内皮生长因子C反义脱氧寡核苷酸对肺癌细胞的作用

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCC)中血管内皮生长因子C(VEGF-C)信使核糖核酸(mRNA)的表达及其反义脱氧寡核苷酸(antisense oligodeoxyribonucleotide,ASODN)对人肺癌细胞的作用.方法 应用原位杂交技术检测48例新鲜肺癌标本中VEGF-C mRNA的表达,将脂质体介导的VEGF-C ASODN转染人肺癌细胞株A-549,用Western印迹法检测肺癌细胞VEGF-C蛋白的表达.结果 VEGF-C mRNA在肺鳞癌和腺癌细胞中的表达阳性率分别为65.4%(17/26)和59.1%(13/22),经VEGF-C ASODN转染的细胞株A-549中,VEGF-C蛋白表达水平明显下降(P＜0.01).结论 VEGF-C mRNA在NSCC中有一定程度的表达,体外实验VEGF-C ASODN通过下调VEGF-C蛋白的表达抑制肺癌细胞的侵袭作用.     

反义寡核苷酸抑制肝癌血管内皮生长因子表达

目的 探讨不同序列的反义寡核苷酸对肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的抑制效果。 方法 SMMC7721细胞于正常氧和缺氧条件下培养24 h,观察缺氧对VEGF mRNA表达的影响;SMMC7721细胞接种于6孔板后,各加入不同的反义寡核苷酸(反帽子结构A06513、反翻译起始部位A06514、反第三外显子A06515、反翻译终止部位A06516和空白组),缺氧培养24 h,然后收集细胞提取总RNA并作逆转录聚合酶链反应分析,同时以管家基因GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)表达为内对照。 结果 缺氧条件下,SMMC7721细胞VEGF mRNA表达明显增强,而有氧条件下未见表达;反义寡核苷酸具有明显抑制VEGF mRNA表达,和空白对照组相比,A06513、A06514、A06515及A06516的VEGF/GAPDH值分别为0.49±0.08、0.71±0.12、0.72±0.11及0.86±0.12(F=12.21,P<0.05)。帽子结构的反义基因表现最强的抑制作用(P<0.0 1)。 结论 与VEGF帽子结构作用的反义寡核苷酸,有望成为肝癌反义基因治疗的新选择。     

VEGF反义寡核苷酸对淋巴瘤新生血管生成的抑制作用

目的研究硫代磷酸化修饰的血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)对裸鼠淋巴瘤血管生成的作用。方法将终浓度为20μmol/L的VEGFASODN、错义序列及PBS分别与人淋巴瘤细胞系Namal-wa细胞孵育24h,裸鼠随机分为VEGFASODN组、错义序列组和对照组,将上述处理的Namalwa细胞(5×106溶于PBS液20μl)接种于裸鼠皮下,4周后处死全部裸鼠,测定肿瘤大小,标本采用链酶菌抗生素蛋白-过氧化酶免疫组化法(SP法)检测肿瘤组织微血管密度(MVD)。结果第28天VEGFASODN组、错义序列组和PBS组肿瘤体积的大小分别为(212.6±196.5)、(468.2±161.3)和(473.1±166.7)mm3。VEGFASODN组微血管密度(12.26±0.78)较对照组(24.13±1.21)显著减少。结论VEGFASODN对裸鼠淋巴瘤的生长及其新生血管的生成有明显的抑制作用。     

PCNA的反义寡核苷酸抑制血管内皮剥脱后SMC增殖的研究

本研究采用增殖细胞核抗原(PCNA)的反义寡核苷酸,探讨其抑制大鼠血管内皮剥脱1周时平滑肌细胞(SMC)的增殖反应(每只大鼠给200μg寡核苷酸).结果发现:PCNA的正义寡核苷酸及Pluronic F127(用于转移寡核苷酸)对大鼠血管内皮剥脱1周时SMC的增殖无显著影响(与内皮剥脱组相比,P>0.05).PCNA的反义寡核苷酸一定程度地抑制大鼠血管内皮剥脱1周时SMC的增殖(与内皮剥脱组相比,P<0.01,与正常组相比,P<0.01.说明PCNA的反义寡核苷酸抑制大鼠血管内皮剥脱后SMC的增殖.     

血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸对小鼠Lewis肺癌生长和转移的抑制作用

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对小鼠Lewis肺癌生长和转移的抑制作用。方法复制小鼠Lewis肺癌模型24只,随机分为对照组、VEGF反义寡核苷酸(ASODN)组、VEGF错义寡核苷酸(MSODN)组,每组8只,接种肿瘤细胞24h内分别给予生理盐水、VEGF-ASODN、VEGF-MSODN皮下注射,隔日一次,共15次。检测皮下移植瘤的变化和肺转移率,并用免疫组织化学的方法检测肿瘤组织微血管密度(MVD),及用Western blot的方法检测肿瘤组织VEGF蛋白表达。结果ASODN组和MSODN组的抑瘤率分别为47.34%和7.28%,具有显著差异(P<0.01);ASODN组肺转移率为37.5%,低于MSODN组(75.0%)和对照组(87.5%);ASODN组MVD为12.29±2.06,低于MSODN组(17.38±3.24)和对照组(20.14±3.90)(P<0.05);且ASODN组VEGF蛋白表达亦明显减弱。结论VEGF-ASODN可抑制小鼠Lewis肺癌的生长和转移,为肺癌的治疗提供新的方法。     

胰岛素样生长因子-1受体中的寡核苷酸反义链对血管平滑肌细胞增殖的影响

为了研究胰岛素样生长因子-1受体在血管平滑肌细胞生长调节中所起的作用，用其寡核苷酸反义链和配链对鼠主动脉平滑肌细胞的作用进行研究。用寡核苷酸反义链处理的血管平滑肌细胞中，氚标脱氧胸腺嘧啶核苷的掺入率较对照组下降64％，用结合实验测定胰岛素样生长因子-1受体数目下降52％。在用反义链处理细胞时，随加入胰岛素样生长因子-1浓度的增加，氚标脱氧胸腺嘧啶核苷掺入率也与剂量成反比的下降。反义键的剂量为20μg／L时，氚标脱氧胸腺嘧啶核苷掺入率下降64％。反义链处理的细胞对加入血管紧张素Ⅱ无反应。受体数目无变化。这一发现提示了配体一受体系统对血管平滑肌细胞反应的重要性。受体的密度对血管平滑肌细胞的生长起到关键作用。用反义链能使胰岛素生长因子-1受体数目减少是由于胰岛素样生长因子-1受体的mRNA减少，这一假说在核酸酶保护实验中得到证明。     

VEGF反义寡核苷酸抑制人膀胱癌细胞VEGF表达的作用和效果

目的　观察 VEGF反义寡核苷酸对膀胱癌细胞 VEGF表达的抑制情况。方法　采用免疫组化法观察反义寡核苷酸对膀胱癌细胞VEGF表达的影响 ,并观察条件培养液对内皮细胞生长的抑制作用。结果　 VEGF反义寡核苷酸对膀胱癌细胞的 VEGF表达有明显的抑制作用。结论　 VEGF反义寡核苷酸能够抑制膀胱癌细胞的 VEGF表达 ,故对临床膀胱癌抗血管生成的治疗极具潜力和应用前景。     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制甲状腺癌血管生成的效应

目的探讨反义寡核苷酸(ASODN)抑制甲状腺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达及内皮细胞生长的效应。方法设计合成靶向VEGF的ASODN转染人髓状甲状腺癌细胞系(TT)细胞,并制备相应条件培养基作用内皮细胞ECV304,设正义寡核苷酸(SODN)和空白对照组进行比较。观察细胞生长状态,RT PCR、免疫细胞化学法检测TT细胞VEGFmRNA和蛋白表达,四氮唑蓝法检测TT和ECV304细胞生长抑制率(IR),流式细胞仪、吖啶橙/溴化乙锭染色法检测ECV304细胞凋亡状态。结果ASODN组TT细胞VEGFmRNA和蛋白表达显著低于SODN和对照组(P<0.01),但IR差异无统计学意义(P>0.05);各转染组ECV304细胞IR差异亦无统计学意义(P>0.05);而经各ASODN组TT细胞条件培养基作用的ECV304细胞生长明显受抑,IR(分别为0.21±0.03、0.31±0.01、0.42±0.22)显著高于SODN组(0.05±0.03,P<0.01),并伴明显细胞凋亡,上述效应呈浓度依赖性。结论ASODN可通过特异性封闭甲状腺癌细胞VEGF表达,抑制内皮细胞生长,干扰肿瘤血管生成。     

血管内皮生长因子反义脱氧寡核苷酶对实体瘤血管生成的抑制

血管新生是恶性肿瘤细胞生长、增殖、转移不可或缺的重要条件之一。血管内皮生长因子(VEGF)为促进血管内皮细胞有丝分裂的细胞因子，是血管新生的正调控因子，在肿瘤血管新生中起重要作用。VEGF反义脱氧寡核苷酸(ASODN)可抑制实体瘤的血管生成，是治疗实体瘤的一种新策略。近年来有关研究表明VEGF ASODN也．可抑制血液系统恶性肿瘤的血管生成。现将近几年的研究进展综述如下。     

血管内皮生长因子C反义脱氧寡核苷酸对肺癌A-549细胞株侵袭力的影响

目的研究血管内皮生长因子C(VEGF-C)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxyribonucleotide,ASODN)对人肺癌细胞株A-549体外侵袭力的影响。方法应用脂质体介导的VEGF-C正义、反义寡核苷酸转染人肺癌细胞株A-549细胞,并设对照组,检测癌细胞的侵袭力变化。结果经VEGF-CASODN转染的A-549细胞株黏附能力显著降低(P0.01),对重组基底膜体外侵袭能力明显减弱(P0.01)。结论 VEGF-CASODN能够明显抑制肺癌细胞株A-549体外侵袭力。     

反义c—myc寡核苷酸对AVP诱导鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：探讨ＡＶＰ对鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响和反义ｃ－ｍｙｃ寡核苷酸对ＡＶＰ作用的干预效应。方法：以培养ＳＤ大鼠ＶＳＭＣ为模型,采用培养细胞计数,蛋白质定量和细胞周期分析方法及ｍＲＮＡ打点杂交技术,动蛋白质定量和细胞周期分析方法及ｍＲＮＡ打点杂交技术,动态观察ＡＶＰ对ＶＳＭＣ增殖的影响和反义ｃ－ｍｙｃ寡核苷酸的干预效果。结果：（１）ＡＶＰ促ＶＳＭＣ数目增加,在４８ｈ时与对照组比较,有统     

血管再狭窄防治的新策略

血管内皮生长因子是特异性的强有力的促内皮生成因子，在缺血性疾病的治疗中它是重要的促进血管新生的因子，同时它还有抗再狭窄作用，这一作用与血管内皮生长因子介导的内皮修复密切相关。本文对血管内皮生长因子抗狭窄作用的机理及研究进展作一综述。