CD44v3在透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞体外粘附和侵袭中的作用

目的:研究CD44v3在透明质酸诱导A549细胞体外粘附和侵袭中的作用。方法:设计和构建能产生针对CD44v3的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)的RNA干扰质粒,转染A549细胞,以RT-PCR和Westernblot检测A549细胞转染前后CD44v3表达,以平板粘附模型和波登氏小室模型检测A549细胞转染前后粘附和侵袭能力。结果:和转染前相比,转染了RNA干扰质粒的A549细胞CD44v3mRNA和蛋白表达以及受透明质酸诱导而粘附于平板和穿过波登氏小室隔膜的细胞数皆明显减少(P<0.01)。结论:CD44v3介导了透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞体外粘附和侵袭行为。     

Layilin的RNAi对透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响

目的：研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制透明质酸受体layilin表达,对透明质酸(hyaluronan,HA)诱导人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响。方法：构建能表达针对layilin的短发夹RNA(shRNA)的阳性RNA干扰(posi- tive RNAi,Pi)质粒和表达不针对任何已知mRNA的shRNA的阴性RNAi(negative RNAi,Ni)质粒,分别转染至A549细胞,以RT-PCR和Western blot检测A549细胞转染前后layilin表达,并用新霉素抗性筛选得到layilin表达受抑制的阳性RNAi(Pi)细胞和layilin表达未受影响的阴性RNAi(Ni)细胞。分别在存在或不存在外源性透明质酸的培养条件下,以MTT实验和软琼脂细胞集落形成实验比较正常(control,C)、Pi、Ni组细胞体外增殖能力。结果：在不存在外源性透明质酸的培养条件下,C、Pi、Ni组A549细胞体外增殖能力无显著差异(P＞0．05),在存在外源性透明质酸的培养条件下,Pi和C组相比,体外增殖能力显著降低(P＜0．01),Ni和C组相比,体外增殖能力无显著差异(P＞0．05)。结论：抑制layilin表达能抑制透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞体外增殖。     

RNAi抑制Layilin表达对肺腺癌A549细胞体外侵袭和荷瘤鼠体内淋巴转移的影响

背景与目的：透明质酸参与了多种肿瘤细胞的侵袭行为，Layilin是一种新发现的特异性透明质酸受体。本研究在发现Layilin表达于人肺腺癌A549细胞株的前期工作基础上，观察用RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术抑制Layilin表达后，对人肺腺癌A549细胞体外侵袭和体内淋巴道转移的影响。方法：构建能表达针对Layilin的小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）的RNAi质粒（Layilin siRNA plasmid）和表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照RNAi质粒（control siRNA plasmid），分别转染A549细胞，新霉素抗性筛选得到Layilin表达受抑制的A549-siLayilin细胞和Layilin表达未受影响的A549-siControl细胞。针对非转染（A549-nontransfection）、A549-siLayilin、A549-siControl3组细胞，分别采用RT—Realtime PCR和Western blot技术检测Layilin表达，用Boyden小室实验检测细胞体外侵袭能力，用爪垫皮下种植淋巴结转移模型检测淋巴转移能力。结果：与A549-nontransfection组和A549-siControl组相比，A549-siLayilin组细胞Layilin表达减少，体外侵袭能力降低，体内淋巴转移率下降。结论：通过RNAi抑制Layilin表达后，能有效抑制透明质酸所诱导的A549细胞体外侵袭和裸鼠移植瘤淋巴转移。本研究为通过RNAi手段抑制Layilin表达，进而抑制肺腺癌淋巴转移提供了有益的思路．     

缺氧/放射活化Epo/e9增强子调控layilinsiRNA表达以抑制人肺腺癌A549细胞侵袭的研究

背景与目的:Layilin是一种新发现与肺腺癌侵袭转移有密切联系的特异性透明质酸受体.本研究旨在观察缺氧/放射条件下活化缺氧/放射双敏感性增强子(Epo/e9),调控针对layilin的小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)表达,探讨其对人肺腺痛A549细胞受透明质酸诱导侵袭的影响.方法:构建携带Epo/e9增强子和U6启动子且表达针对layilin的siRNA的RNA干扰载体(Epo/e9-siLay plasmid)和阴性对照RNA干扰载体(Epo/e9-siCtrl plasmid),分别转染A549细胞,新霉素抗性筛选得到layilin表达受抑制的A549Epo/e9-siLay细胞和layilin表达未受影响的A549Epo/e9-siCtrl细胞.针对非转染A549(A549untransfected)、A549EPo/e9-SiLay、A549Epo/e9-siCtrl三组细胞,在缺氧/放射处理下,分别采用RT-PCR和Western blot检测layilin mRNA和蛋白表达,用Transwell模型检测细胞侵袭能力.结果:与A549untransfected组相比,A549Epo/e9-siLay组layilin表达显著减弱(P＜0.01),Transwell穿膜细胞数显著减少(P＜0.01);A549Epo/e9-siCtrl组layilin表达、Transwell穿膜细胞数皆和A549untransfected组无显著差异(P＞0.05).缺氧/放射处理能进一步增加RNA干扰的上述效应(P＜0.01).结论:在缺氧/放射条件下,Epo/e9增强子调控layilin siRNA表达能明显抑制A549细胞侵袭行为.     

IL-23促进人肺腺癌A549细胞的迁移和侵袭

背景与目的前炎症因子白细胞介素23(interleukin 23,IL-23)是与慢性炎症和肿瘤微环境相关的一种重要的细胞因子,同时IL-23受体在结直肠癌、肺癌、口腔鳞癌等肿瘤细胞中有表达。本研究旨在探讨IL-23能否促进人肺腺癌细胞A549的迁移和侵袭并探讨其机制。方法用划痕试验和Transwell小室法测定IL-23对A549的迁移和侵袭的影响,用Real-time PCR和ELISA检测IL-23对基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)的mRNA和蛋白表达的影响,通过IL-23中和抗体阻断IL-23的作用,进一步证实IL-23对A549迁移和侵袭的影响。结果 IL-23明显增加了A549细胞的迁移和侵袭能力;同时IL-23能提高A549细胞MMP-9的mRNA表达和其培养上清中MMP-9的蛋白表达,IL-23中和抗体能有效地阻断IL-23对A549的迁移和侵袭的作用。结论 IL-23可刺激A549细胞表达MMP-9,从而促进A549细胞的迁移和侵袭。     

川芎嗪对人肺腺癌 A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用与机制

目的：探讨川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）对人肺腺癌 A549细胞增殖及侵袭的影响。方法：川芎嗪治疗组分别用0.1μg/ ml、1μg/ ml、10μg/ ml、100μg/ ml、250μg/ ml 浓度的川芎嗪干预 A549细胞,同时设无药的阴性对照组及加顺铂的阳性对照组。24、48、72、96小时后,MTT 法检测川芎嗪对 A549细胞株增殖的抑制作用,划痕实验和 Transwell 法观测川芎嗪对 A549细胞株迁移侵袭能力的影响,采用细胞流式术检测川芎嗪对 A549细胞周期和凋亡的干预作用。结果：川芎嗪显著抑制 A549细胞的增殖,抑制 A549的迁移和侵袭,流式细胞术显示川芎嗪诱导 A549细胞发生 G1期阻滞和早期凋亡（P <0.05）。结论：川芎嗪对非小细胞肺癌A549细胞的抑制作用可能是通过诱导 G1期细胞阻滞和早期凋亡引起的。     

黄连素对肺腺癌A549细胞增殖、迁移与黏附的影响

背景与目的：研究表明,黄连素在清热解毒、抗菌消炎的同时,还具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,但最近的研究认为黄连素还能抑制肿瘤细胞的转移和扩散。为了进一步探讨黄连素对肿瘤细胞转移的作用及机制,本研究对黄连素作用后的肺腺癌A549细胞的增殖、迁移及黏附能力进行了检测。方法：应用MTT法检测不同浓度黄连素作用后细胞增殖情况;通过划痕试验和黏附试验测定黄连素作用前后细胞迁移和黏附能力;半定量RT-PCR法检测MMP2、MMP9的mRNA表达;明胶酶谱法测定MMP2、MMP9的活性。结果：黄连素能显著抑制A549增殖,并呈现一定的量效和时效关系（P〈0.05）;细胞的迁移率和黏附率明显降低,并且呈现剂量依赖性（P〈0.05）;经黄连素作用后的A549细胞,MMP2和MMP9的mRNA的表达明显降低,MMP2和MMP9降解明胶的能力下降,尤以100μg/mL的作用最为明显（P〈0.05）。结论：黄连素能够抑制A549细胞的迁移和黏附能力,其机制可能与下调MMP2和MMP9的mRNA表达,从而降低其活性有关。     

苯丁酸钠对体外人肺腺癌细胞A549的影响

目的观察苯丁酸钠（PB）对体外人肺腺癌细胞A549的影响。方法采用MTT法观察不同浓度PB对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用,流式细胞术分析不同浓度PB对生长期人肺腺癌细胞A549的细胞周期及凋亡情况的影响。结果 PB作用后人肺腺癌细胞A549的生长缓慢,细胞阻滞于G0/G1期（P〈0.05）,凋亡增加（P〈0.05）,其抑制作用呈时间和浓度依赖性。结论 PB能抑制人肺腺癌细胞A549的生长,促进其凋亡。     

TOB1高表达抑制肺癌A549细胞体外迁移和侵袭

目的:探讨TOB1 (transducer of ErbB 2,1)高表达对人肺癌A549细胞体外迁移和侵袭的影响.方法:应用RT-PCR法检测人支气管上皮细胞HBE和10种肺癌细胞中TOB1、PTEN (phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)、乳腺癌转移抑制基因1(breast cancer metastasis suppressor 1,BRMS1)、RHOC(ras homolog gene family,member C)和NME1 (non-metastatic cells 1)mRNA的表达水平;将重组表达载体质粒pcDNA3.0-TOB1和“空载体”质粒pcDNA3.0转染到A549细胞中,建立TOB1高表达的A549/TOB1细胞和对照组A549/PC3细胞,应用体外划痕和Transwell实验检测细胞的体外迁移和侵袭能力,RT-PCR法检测细胞中PTEN、BRMS1、RHOC和NME1 mRNA的表达,蛋白质印迹法检测细胞中α-N-catenin、β-catenin、γ-catenin、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和MMP9蛋白的表达.结果:10种肺癌细胞中TOB1 mRNA的表达水平明显低于HBE细胞(P＜0.05),不同细胞株中TOB1 mRNA与PTEN、BRMS1和NME1 mRNA的表达水平间呈正相关(P＜0.05).A549/TOB1细胞的体外迁移和侵袭能力明显低于A549细胞(P＜0.05).A549/TOB1细胞中PTEN、BRMS1和NME1 mRNA的表达水平明显高于A549细胞(P＜0.05),而RHOC mRNA的表达水平明显低于A549细胞(P＜0.05); A549/TOB1细胞中α-N-catenin、β-catenin、γ-catenin、MMP2和MMP9蛋白的表达水平明显低于A549细胞(P＜0.05).结论:外源性TOB1高表达可以明显抑制肺癌A549细胞的体外转移和侵袭,其机制可能与TOB1调控PTEN、BRMS1、RHOC和NME1的表达,进一步下调α-N-catenin、β-catenin、γ-catenin、MMP2和MMP9蛋白的表达水平有关.     

低氧对人肺腺癌A549细胞迁移和黏附的影响

目的：探讨低氧对人肺腺癌A549细胞迁移以及与血管内皮细胞黏附的影响。方法：细胞划痕实验和Transwell实验检测低氧对A549细胞迁移和浸润的影响；细胞黏附实验检测低氧对A549细胞与血管内皮细胞黏附的影响；免疫荧光法观察低氧对A549细胞中E-cadherin、β-catenin、纤维状肌动蛋白（F-actin）分布的影响；荧光素酶报告基因检测低氧对A549细胞中依赖于缺氧诱导因子-1（hypoxia-inducible factor-1，HIF-1）的转录活性的影响。结果：低氧可以促进A549细胞的迁移、浸润和与血管内皮细胞的黏附，影响A549细胞中E-cadherin和β-catenin的分布及F-actin细胞骨架的重排，上调A549细胞中依赖于HIF-1的报告基因的表达。结论：低氧促进A549细胞的迁移、浸润和与血管内皮细胞的黏附可能是通过调控A549细胞中依赖于HIF-1基因的表达，进而影响细胞中E-cadherin和β-catenin分布和F-actin细胞骨架的重排。     

CD44v3短发夹RNA对透明质酸诱导人结肠癌SW480细胞体外粘附和侵袭的抑制作用

目的:研究CD44v3的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对体外培养的人结肠癌SW480细胞CD44v3表达及透明质酸诱导的粘附侵袭行为的抑制作用。方法:设计和构建带有U6启动子的CD44v3基因特异性的shRNA干扰表达质粒,转染至SW480细胞,以RT-PCR和Western blot检测SW480细胞转染前后CD44v3表达,以平板粘附模型和Boyden小室模型检测SW480细胞转染前后粘附和侵袭能力。结果:和转染前相比,转染了RNA干扰表达质粒的SW480细胞CD44v3mRNA和蛋白表达、以及受透明质酸诱导而粘附于平板和穿过Boyden小室隔膜的细胞数皆显著减少(P<0.01)。结论:针对CD44v3的短发夹RNA能显著抑制透明质酸诱导人结肠癌SW480细胞体外粘附和侵袭行为。     

针对Twist的短发夹RNA抑制A549细胞上皮-间充质转分化及体外侵袭

背景与目的:上皮-间充质转分化在胚胎发育和肿瘤转移过程中起重要作用。在发现人肺腺癌A549细胞高表达转录因子Tw ist的基础上,本实验研究了针对Tw ist的短发夹RNA(short hairp in RNA,shRNA)对体外培养的人肺腺癌A549细胞上皮-间充质转分化和体外侵袭能力的影响。方法:构建能表达针对Tw ist mRNA的shRNA的阳性RNA干扰(RNA i)质粒和表达不针对任何已知mRNA的shRNA的阴性RNA i质粒,分别转染至A549细胞,新霉素抗性筛选得到Tw ist表达受抑制的阳性RNA i细胞(P i组)和Tw ist表达未受影响的阴性RNA i细胞(N i组)。针对正常(C组)、P i、N i三组A549细胞,分别采用RT-PCR和W estern b lot技术检测Tw is、tα-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘素表达,用Boyden小室模型检测细胞体外侵袭能力。结果:C组:Tw ist和α-SMA表达强阳性,E钙-粘素表达弱阳性,Boyden小室穿膜细胞数为57.4±3.4;P i组:和C组相比,Tw ist和α-SMA表达显著减弱(P<0.01),E钙-粘素表达显著增强(P<0.01),Boyden小室穿膜细胞数显著减少(P<0.01);N i组:Tw is、tα-SMA和E-钙粘素表达,及Boyden小室穿膜细胞数皆和C组无显著差异(P>0.05)。结论:针对Tw ist的shRNA能有效地抑制A549细胞上皮-间充质转分化及体外侵袭能力。     

针对CD44V3的短发夹RNA抑制肺癌A549细胞体外增殖

目的研究针对CD44 V3的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对体外培养的人肺腺癌A549细胞CD44 V3表达及增殖能力的影响.方法设计和构建带有U6启动子的、能产生针对CD44V3的shRNA的RNA干扰表达质粒,转染至A549细胞,以RT-PCR和Western blot检测A549细胞转染前后CD44 V3表达,以MTT实验和软琼脂细胞集落形成实验比较A549细胞转染前后增殖能力.结果和转染前相比,转染了RNA干扰表达质粒的A549细胞CD44V3 mRNA和蛋白表达、以及增殖能力皆明显降低.结论针对CD44V3的短发夹RNA能明显抑制人肺腺癌A549细胞体外增殖能力.     

针对CD44V3的短发夹RNA抑制肺癌A549细胞体外增殖

目的：研究针对CD44V3的短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）对体外培养的人肺腺癌A549细胞CD44V3表达及增殖能力的影响。方法：设计和构建带有U6启动子的、能产生针对CD44V3的shRNA的RNA干扰表达质粒，转染至A549细胞，以RT—PCR和Western blot检测A549细胞转染前后CD44V3表达，以MTT实验和软球脂细胞集落形成实验比较A549细胞转染前后增殖能力。结果：和转染前相比，转染了RNA干扰表达质粒的A549细胞CD44V3 mRNA和蛋白表达、以及增殖能力皆明显降低。结论：针对CD44V3的短发夹RNA能明显抑制人肺腺癌A549细胞体外增殖能力。     

白藜芦醇对肺腺癌A549细胞增殖、黏附与侵袭的影响

目的:研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对肺腺癌A549细胞增殖,黏附及侵袭的影响。方法:用不同剂量的Res作用于A549细胞,MTT法测定A549细胞的增殖水平(成纤维3T3细胞为对照),流式细胞仪检测A549细胞的细胞周期和凋亡,体外黏附实验测定A549细胞的黏附能力,Transwell实验测定A549细胞的侵袭能力,荧光免疫细胞化学方法测定A549细胞中MMP-2和TIMP-2蛋白的表达。结果:Res以剂量(20～80μmol/L)依赖和时间(0～72 h)依赖方式抑制A549细胞的增殖,同样条件对3T3细胞增殖无影响。10、20、40、80μmol/L Res作用后,A549细胞的凋亡率分别为(34.9±0.91)%、(41.33±0.13)%、(45.47±0.87)%和(59.46±0.59)%。经20μmol/L Res处理48 h后,S期A549细胞比例为(56.41±1.67)%,细胞周期阻滞在S期。20μmol/L以上的Res可引起A549细胞的黏附力下降、侵袭力降低(P<0.05);同时,A549细胞内MMP-2蛋白表达下调,而TIMP-2蛋白表达增加。结论:Res抑制肺腺癌A549细胞的增殖、黏附和侵袭,其机制可能涉及对MMP-2和TIMP-2表达的双向调控。     

Inhibitory effects of olive oil phenolics on invasion in human colon adenocarcinoma cells in vitro

Studies in human, animal and cellular systems suggest that phenols from virgin olive oil are capable of inhibiting several stages in carcinogenesis, including metastasis. The invasion cascade comprises cell attachment to extracellular matrix components or basement membrane, degradation of basement membrane by proteolytic enzymes and migration of cells through the modified matrix. In the present study, we investigated the effect of phenolics extracted from virgin olive oil (OVP) and its main constituents: hydroxytyrosol (3,4-dihydroxyphenylethanol), tyrosol (p-hydroxyphenylethanol), pinoresinol and caffeic acid. The effects of these phenolics were tested on the invasion of HT115 human colon carcinoma cells in a Matrigel invasion assay. OVP and its compounds showed different dose-related anti-invasive effects. At 25 microg/ml OVP and equivalent doses of individual compounds, significant anti-invasive effects were seen in the range of 45-55% of control. Importantly, OVP, but not the isolated phenolics, significantly reduced total cell number in the Matrigel invasion assay. There were no significant effects shown on cell viability, indicating the reduction of cell number in the Matrigel invasion assay was not due to cytotoxicity. There were also no significant effects on cell attachment to plastic substrate, indicating the importance of extracellular matrix in modulating the anti-invasive effects of OVP. In conclusion, the results from this study indicate that phenols from virgin olive oil have the ability to inhibit invasion of colon cancer cells and the effects may be mediated at different levels of the invasion cascade.     

吗啡对人肺腺癌细胞A549侵袭与迁移的影响及机制研究

目的 探讨吗啡对人肺腺癌细胞A549侵袭和迁移能力的影响。方法 人肺腺癌细胞A549培养板接种培养24 h后,分别加入生理盐水（对照组）、0.3 μg／ml吗啡、3 μg／ml吗啡和30 μg／ml吗啡孵育48 h,采用Transwell法检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western blotting检测基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-9、Ezrin和Fascin蛋白的表达。结果 与对照组比较,3 μg／ml和30 μg／ml吗啡组处理A549细胞48 h后细胞侵袭数增加,差异有统计学意义（P＜0.05）;与对照组比较,3 μg／ml和30 μg／ml吗啡组处理A549细胞48 h后细胞迁移率增加,差异有统计学意义（P＜0.05）;与对照组比较,30 μg／ml吗啡作用A549细胞48 h后,MMP-2、MMP-9、Ezrin和Fascin蛋白表达上调,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 吗啡可增强人肺腺癌细胞A549的侵袭和迁移能力,且呈剂量依赖性;其机制可能与MMP-2、MMP-9、Ezrin和Fascin表达上调有关。