博安霉素诱导人鼻咽癌细胞凋亡作用

目的：探讨博安霉素（博苯霉素Ａ６）抗人鼻咽癌作用的机理。方法：应用荧光显微镜、流式细胞仪及琼脂糖凝胶电泳等方法检测博安霉素诱导人鼻咽癌ＳＵＮＥ－１细胞凋亡的作用。结果：当博安霉素浓度为５０μｇ／ｍｌ，作用于ＳＵＮＥ－１细胞１０小时，荧光显微镜下ＳＮＵＥＬ０１细胞出现典型的ＤＮＡ梯状条带。结论：博安霉素具有体外诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用，而诱导凋亡为其抗肿瘤作用的机制之一。     

阿霉素诱导细胞凋亡过程中的信号传递

目的探讨阿霉素诱导人涎腺癌细胞凋亡的分子机制。方法通过光镜和电镜观察不同作用时间后细胞的形态学改变，ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳，流式细胞仪分析ＤＮＡ含量和细胞周期，并检测细胞内Ｃａ(２＋)浓度的变化。结果阿霉素作用于ｍＥｃ－１细胞后出现了细胞凋亡的特征，细胞内Ｃａ(２＋)浓度明显增力。。结论Ｃａ(２＋)参与细胞凋亡过程可能是阿霉素诱导ＩＥＣ－１细胞凋亡的机制之一。     

8-Br-CAMP诱导入食管癌细胞凋亡的研究

目的：本文主要研究人食管癌１０９细胞株经８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ诱导后细胞凋亡的发生。方法：用ＴＵＮＥＬ法观察诱导后细胞凋亡情况。结果：人食管癌１０９例细胞株自发凋亡率为１０．３％，经８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ诱导后倾向细胞增加。结论：８－Ｂｒ－ｃＤＮＡ具有促进人食管癌细胞凋亡倾向的效应。     

茶多酚诱导鼻咽癌细胞caspase-3活化

目的：探讨茶多酚能否诱导鼻咽癌细胞系ＣＮＥ１－ＬＭＰ１凋亡及凋亡发生的分子机制。方法：用不同浓度的茶多酚处理ＣＮＥ１－ＬＭＰ１细胞,分别用荧光显微镜、ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳、ＭＴＴ和流式细胞仪等方法,观察细胞生化和形态学改变;同时,确定茶多酚诱导细胞凋亡过程中ｃａｓｐａｓｅ－３活性的动力学变化。结果：茶多酚处理后,荧光显微镜下可见ＣＮＥ１－ＬＭＰ１细胞在形态学上出现细胞核固缩、核碎裂、凋亡小体等凋亡细胞的形态学改变;琼脂糖凝胶电泳ＤＮＡ呈典型的“梯状”条带;ＭＴＴ测定发现茶多酚处理后细胞生长受到不同程度的抑制。同时,ＣＮＥ－ＬＭＰ１细胞在凋亡过程中ｃａｓｐａｓｅ－３活性的升高,呈明显的时效关系。结论：茶多酚能诱导ＣＮＥ１－ＬＭＰ１细胞凋亡,可能通过ｃａｓｐａｓｅ－３的活化诱导细胞凋亡。     

手霉素对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨手霉素对食管癌细胞Eca109体外增殖活性的影响及其作用机制。方法：用不同浓度的手霉素（10、20、40、80、120txmol／L）处理Eca109细胞24、48和72h后,采用MTT方法测定肿瘤细胞生长抑制率;吉姆萨染色和透射电镜技术观察手霉素对食管癌细胞Eca109形态变化的影响;流式细胞分析技术检测手霉素对Eca109细胞周期和凋亡的影响。结果：不同浓度的手霉素对Eca109细胞增殖均有明显的抑制作用,与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0．05）;Giemsa染色及透射电镜结果显示手霉素诱导Eca109细胞出现较典型的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变;流式细胞分析结果显示,10、20、40、80和120μmol／L的手霉素作用Eca109细胞48h后的细胞凋亡率分别为4．520％±1．035％、14．490％±1．707％、28．883％±4．299％、35．107％±2．276％、47．940％±8．126％,与对照组凋亡率（1．370％±0．028％）相比,差异均具有统计学意义（p均〈0．05）;且凋亡率呈明显的剂量依赖关系;而细胞周期分布显示G2／M期细胞显著增多。结论：手霉素体外可显著抑制人食管癌细胞Eca109增殖,诱导细胞凋亡可能是其重要途径。     

博安霉素诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡及其对细胞周期的影响

背景与目的：有研究报道博安霉素（boanmycin,BAM)是通过抑制肿瘤细胞的蛋白质合成来发挥抗人食管癌作用,但目前尚不清楚博安霉素是否还通过其他机制来实现其抗人食管癌作用。本文研究博安霉素诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡及其对Eca-109细胞周期的影响。方法：运用形态学观察,流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳多种方法检测Eca-109细胞凋亡以及细胞周期分布的改变。结果：在经博安霉素处理的裸鼠移植瘤组织中,用电镜观察到不同阶段的凋亡细胞形态学改变;在体外实验中,博安霉素（50-125μg/ml）作用Eca-109细胞30-36h,用电镜观察到不同阶段的凋亡细胞形态学改变;在体外实验中,博安霉素（50-125μg/ml）作用Eca-109细胞30-36h,可以诱导Eca-109细胞凋亡并出现DNA梯形条带。作用42h后将其细胞周期阻断于G2/M期。结论：博安霉素能诱导Eca-109细胞凋亡将其细胞周期阻断于G2/M期。     

藤梨根提取物对人食管癌Eca-109细胞生长和凋亡的调节

[目的]探讨藤梨根提取物对人食管癌Eca-109细胞生长和凋亡的调节作用。[方法]MTT比色法检测藤梨根正丁醇提取物及乙酸乙酯提取物在不同浓度及不同时间对Eca-109细胞生长的抑制作用：用TUNEL法检测藤梨根不同提取物对诱导肿瘤细胞凋亡效应。[结果]藤梨根正丁醇提取物及乙酸乙酯提取物对人食管癌Eca-109细胞的生长具有明显的抑制作用．并具有浓度依赖性和时间依赖性：其中正丁醇提取物对肿瘤细胞的抑制作用较乙酸乙酯提取物更为明显。两种提取物均能明显地诱导肿瘤细胞的凋亡。[结论]藤梨根提取物有较好的抗肿瘤作用．抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡可能是藤梨根抗肿瘤作用的机制之一。     

全反式维甲酸对CNE—2Z细胞增殖的影响及凋亡诱导

目的：了解全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）对ＣＮＥ－２Ｚ细胞增殖生长及凋亡有无影响。方法：采用ＭＴＴ法、细胞核染色、ＤＮＡ裂解率及电泳分析。结果：（１）用ＡＴＲＡ诱导细胞至７２ｈ，细胞增殖抑制率随浓度升高而增加。（２）在终浓度为５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞５天，可见部分细胞体积变小，核浓缩及核碎裂；ＤＮＡ裂解率（４４．２０±６．３２）明显高于对照组（１５．４１±５．５０），差别有显著性，Ｐ＜０．０１；ＤＮＡ琼脂糖电泳，出现不连续的典型梯状ＤＮＡ条带。片段大小为２００ｂｐ或其倍数。（３）在浓度为５×１０－７ｍｏｌ／Ｌ诱导５天和５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ诱导４天时，均无明显细胞凋亡出现。结论：ＡＴＲＡ对ＣＮＥ－２Ｚ细胞增殖有抑制作用，且随浓度增加而增强；ＡＴＲＡ可诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞发生凋亡，但表现出明显的剂量和时间依赖性。     

Cryptophycin诱导肾癌细胞凋亡的研究

目的 探讨诱导肾癌细胞凋亡的新方法及其机制。方法 采用ＨＥ滩色、荧光染色、琼脂糖电池等方法，分别对Ｃｒｙｔｏｐｈｙｃｉｎ（ＣＰＰ）不同的药物浓度（０，１，５，１０，５０ｐｍｏｌ／Ｌ）和不同增减时间段（４～２４ｈ）所诱导的凋亡细胞形态、出现时间和密度比例进行观察和比较。结果 在光镜下能观察到ＣＰＰ诱导的肾癌细胞凋亡的典型形态，用ＡＯ／ＥＢ荧光染色能区分出４种不同细胞，ＤＮＡ电泳证实有ＤＮＡ裂解的现象     

三氧化二砷对人食管癌细胞株凋亡的诱导作用

目的研究三氧化二砷对人食管癌细胞株凋亡的诱导作用。方法癌细胞株Ｅ８７１２和ＥＣ１７１贴壁生长,在电镜观察的基础上,用碘化丙啶（ＰＩ）染色和ＴＵＮＥＬ将凋亡细胞反映在流式细胞仪（ＦＣＭ）上。结果经三氧化二砷２μｍｏｌ／Ｌ作用后,电镜下见部分细胞核染色质凝聚,呈半月形;ＦＣＭ细胞ＤＮＡ检得亚Ｇ１细胞峰;部分Ｇ１期细胞ＴＵＮＥＬ标记呈阳性。结论结果表明,三氧化二砷能诱人食管癌细胞株的凋亡,此药对食管癌等实体瘤的治疗有诱入的应用前景。同时表明,ＦＣＭ具有敏感、特异性强及定量等优点     

Inhibition of autophagy by 3-MA potentiates cisplatin-induced apoptosis in esophageal squamous cell carcinoma cells

Cisplatin (DDP)-based adjuvant chemotherapy is widely used for the treatment of esophageal cancer. However, DDP resistance has become more common and thus new approaches are required to be explored. Cisplatin was used to induce autophagy in the human esophageal cancer cell line, EC9706 cells, and the effect of autophagy on the survival of EC9706 cells was investigated using an autophagy inhibitor 3-MA. Cell viability was measured by CCK8 assay. Apoptosis and cell cycle were detected by flow cytometry. Monodansylcadaverine (MDC) was used to detect autophagy. Western blotting assay was used to investigate the molecular changes that occurred in the course of treatment. DDP inhibited cell proliferation, induced cell death and cell cycle arrest at S phage. Moreover, autophagy was activated through class III PI3K pathway. The expression of autophagy-related Beclin1 and LC3-I was up-regulated and part of LC3-I was converted into LC3-II. However, after the combination treatment of 3-MA and DDP, the cell inhibitory rate increased; the apoptosis rate and the numbers of cells in S phase also increased. Furthermore, the accumulation of autophagic vacuoles was decreased; the expression of Beclin1 and LC3 was significantly down-regulated and the release of cytochrome c was decreased. DDP-induced apoptosis in EC9706 cells can be enhanced by the inhibitor of autophagy, 3-MA. Autophagy might play a role as a self-protective mechanism in DDP-treated esophageal cancer cells, and its inhibition could be a novel strategy for the adjuvant chemotherapy of esophageal cancer.     

大豆异黄酮诱导人食管癌裸鼠移植瘤细胞凋亡

[目的]研究大豆异黄酮诱导裸鼠EC-7906移植瘤凋亡的机制.[方法]建立人食管癌EC-7906裸鼠移植瘤模型,采用不同剂量的大豆异黄酮进行瘤旁注射,并设生理盐水和二甲亚砜(DMSO)两个对照组,用透射电镜和TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况,免疫组织化学法和RT-PCR法检测肿瘤组织的凋亡相关基因bcl-2和bax的表达情况.[结果]透射电镜和TUNEL法发现大豆异黄酮导致移植瘤内大量细胞发生凋亡;免疫组织化学法发现大豆异黄酮注射组瘤组织的bcl-2蛋白表达阳性率降低,bax蛋白表达阳性率明显提高;RT-PCR法发现大豆异黄酮注射组的bcl-2 mRNA条带密度随剂量的增大而递减,bax mRNA条带密度递增,[结论]大豆异黄酮对人食管癌EC-7906裸鼠移植瘤具有抑制作用,通过下调bcl2的表达和上调bax的表达而诱导食管癌移植瘤细胞发生凋亡.     

活性氧水平与食管癌细胞对As2O3促凋亡作用敏感性关系研究

目的 :探索食管癌细胞株 EC/ CU HK1、EC/ CU HK1(As- )对三氧化二砷 (As2 O3 )促凋亡作用敏感性与细胞活性氧 (reactive oxygen species,ROS)水平的关系。方法 :以二甲萘醌(DMNQ)孵育 EC/ CU HK1、EC/ CU HK1(As- )细胞 ,双氢 -乙酰乙酸二氯荧光黄 (2 ,7- dichlorodihy-drofluorescein diacetate,DCFH- DA)及双氢罗丹明 12 3(dihydrorhodamine12 3,DHR)捕获 ROS,流式细胞仪检测两种细胞 ROS水平的差异。 As2 O3 单独或联用 DMNQ孵育 EC/ CU HK1、EC/ CUHK1(As- )细胞 ,流式细胞仪 Tunel法分析两种细胞凋亡敏感性的差异及其在用药前后的变化。结果 :EC/CUHK1的 ROS水平明显高于 EC/ CUHK1(As- ) ,DMNQ可提高 EC/ CU HK1、EC/ CU HK1(As- )的ROS水平 ,诱发 EC/ CUHK1(As- )对 As2 O3 的敏感性 ,增强 As2 O3 促 EC/ CU HK1(As- )细胞凋亡的效应。过氧化氢酶 (catalase)可逆转 DMNQ的效应。结论 :食管癌细胞株 EC/ CUHK1、EC/ CUHK1(As- )对 As2 O3 促凋亡的敏感性决定于细胞固有的 ROS水平     

维生素E琥珀酸酯对人食管癌TE-1和Eca-109细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨维生素E琥珀酸酯(VES)对人食管鳞癌低分化细胞株TE-1以及高分化细胞株Eca-109增殖的抑制作用及诱发凋亡的作用。方法:不同浓度(0、5、10、15、20 μg/mL)VES分别处理TE-1及Eca-109细胞24 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况;光镜下观察细胞形态;DAPI染色观察细胞核凋亡形态,Western blot方法检测细胞中凋亡标志蛋白多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的表达情况。结果:与对照组比较,MTT检测结果显示随着VES剂量增加,两种细胞株均出现了不同程度的增殖抑制,在20 μg/mL VES组细胞增殖率均达到最低(TE-1:15.89%±6.22%;Eca-109:13.78%±4.89%)。光镜下细胞形态随着VES剂量增加发生明显改变,TE-1细胞在10 μg/mL VES组开始出现细胞变圆、体积缩小、漂浮死亡等形态;Eca-109细胞在15 μg/mL VES组开始出现细胞变圆、体积缩小、漂浮死亡等形态。DAPI染色结果显示,VES高剂量组(20 μg/mL)两株细胞的细胞核均出现明显的凋亡形态。Western blot显示,随着VES剂量增加,凋亡标记蛋白PARP裂解激活,在20 μg/mL VES处理组达到最大裂解程度。结论:VES对低分化及高分化人食管癌细胞的增殖均有抑制作用并诱导细胞发生凋亡。     

Notch1信号途径在食管鳞癌细胞株EC9706的作用研究

目的：研究Notch1基因在食管癌细胞株中的表达及其对食管鳞癌细胞EC9706凋亡的影响.方法：通过免疫细胞化学检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达.通过RT-PCR扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1,转染EC9706细胞,利用Western blotting检测转染pcDNA3.1-Notch1载体12h,24h,48h,72h的食管癌细胞株与转染空载体食管癌细胞株中Notch1的表达,并观察每一时期食管癌细胞株的凋亡情况.结果：在食管癌细胞株中Notch1基因低表达,此外,转染Notch1后的细胞株Notch1表达量与转染空载体相比有明显差异（F=80.442,P＜0.05）.经组间两两比较,实验组食管癌细胞株的Notch1的表达量在12h时比对照组食管癌细胞株的表达量显著增高（P＜0.01）,前者约为后者的4.6倍.但48h至72h时Notch1表达量实验纽与对照组食管癌细胞株无显著性差异（P＞0.05）.进一步通过倒置显微镜发现48h至72h细胞出现大量凋亡的现象.上述结果说明12h Notch1表达量的增加,使食管癌细胞EC9706中的Notch1信号途径得以激活,该途径激活后导致48h到72h时的细胞大量凋亡.结论：Notch1在食管癌细胞中的激活引起细胞大量凋亡,提示Notch1基因有可能成为治疗食管癌的新靶点.     

全反式维甲酸诱导食管癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导食管癌EC9706细胞凋亡的作用及其机制。方法用不同浓度的ATRA处理EC9706细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测ATRA对EC9706细胞的增殖抑制效应;采用流式细胞仪和原位末端标记(TUNEL)法检测细胞周期的变化和凋亡率;采用免疫组化S-P法,检测凋亡相关基因caspase-3和bcl-2的蛋白表达,并用病理图像分析软件进行半定量分析。结果ATRA对EC9706细胞有增殖抑制和诱导凋亡的作用;流式细胞仪检测显示,在G1期之前可出现Sub-G1峰,凋亡率最高为(32.6±0.4)%,并有浓度和时间依赖性;TUNEL法显示凋亡小体形成;EC9706细胞在凋亡过程中,凋亡相关基因caspase-3的蛋白表达增强,bcl-2的蛋白表达减弱。结论ATRA作用于食管癌EC9706细胞后将引起细胞凋亡的增加,这主要与ATRA能促进caspase-3的活化,并下调bcl-2的蛋白表达有关。     

大蒜素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用

目的： 研究大蒜素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用。方法：0、18 μg/mL大蒜素处理人食管癌EC9706细胞,应用细胞计数、流式细胞仪、Hoechst33258染色、HE染色和电镜观察经大蒜素诱导处理后EC9706细胞的凋亡情况。结果：与对照组比较,经18 μg/mL大蒜素诱导处理7 d后,EC9706细胞的增殖活动受到明显抑制,细胞生长抑制率达75.89％ (P<0.05);细胞周期检测出现亚二倍体 (亚G1期)细胞峰值,细胞凋亡率达23.8％ (P<0.05),并发生G2/M期阻滞;经Hoechst33258 染色出现细胞核浓染及致密的固缩形态和颗粒状荧光;光镜和电镜观察结果均显示,大蒜素处理组细胞体积缩小,细胞核固缩,出现染色质凝聚、边集化等显著的凋亡特征。结论：大蒜素对人食管癌EC9706细胞具有凋亡诱导作用。     

A cyclooxygase-2 inhibitor NS-398-enhanced apoptosis of esophageal carcinoma cell EC9706 by adjusting expression of survivin and caspase-3

The aim of this study is to examine the effect and mechanism of a selective cyclooxygenase-2 (COX-2) inhibitor NS-398 on inducing apoptosis of esophageal cancer cells. After the treatment with NS-398 on esophageal carcinoma EC9706 cell, MTT assay was used to observe the inhibition of EC9706 cell growth and apoptosis was determined by electronic microscopy and flow cytometry. The expression of survivin and caspase-3 was examined using immunocytochemical technique. The dose of 0.01–0.1 mM NS398 showed the inhibitory effect on growth of EC9706 cell lines and induce apoptosis in a dose- and time-effective manner; moreover, NS-398 also downregulated the level of expression of survivin and elevated the expression of capase-3. NS-398 can induce apoptosis of the esophageal carcinoma EC9706 cells by means of adjusting expression of survivin and caspase-3.     

紫杉醇对p53缺失型肺癌细胞株H1299的生长抑制作用

背景与目的:评价紫杉醇对p53缺失型肺癌细胞株H1299的生长抑制作用.材料与方法:分别以体外药物敏感试验(Mir法)、流式细胞术观察紫杉醇不同作用浓度、不同作用时间处理H1299细胞后,其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化,并以荧光显微镜观察细胞核形态的改变.结果:紫杉醇对H1299细胞毒性呈时间依赖性(P＜0.05);在紫杉醇1 nmol/L以上各浓度组,随着紫杉醇浓度的增加,H1299细胞的存活率降低,与对照组间差异具有统计学意义(P＜0.05);各实验组H1299细胞的生长被阻滞于Gz/M期,在0.1～1 000 nmol/L浓度范围内呈浓度依赖性(P＜0.05),其细胞凋亡比例在0.1～10 nmol/L浓度范围内随浓度的增加而增高(P＜0.05);在时间依赖性试验中,10 nmol/L作用时,G2/M期的阻滞于12 h达高峰;1 000 nmol/L作用时于24 h达高峰,延长1 000 nmol/L作用时间,H1299出现异常多倍体现象;凋亡发生呈时间依赖性,但高浓度诱导的凋亡较低浓度出现的时间晚.紫杉醇诱导的凋亡和G2/M期阻滞无相关性(P＞0.05).荧光显微镜下可见细胞凋亡与细胞死亡共存现象.结论:紫杉醇可以同时诱导H1299细胞凋亡和死亡,对其生长抑制作用呈时间和浓度依赖性.     

人食管鳞癌EC9706细胞线粒体DNA与凋亡的关系

目的：建立人食管鳞癌EC9706细胞的无线粒体DNA（ρ°）细胞,探讨食管癌线粒体DNA与凋亡的关系。方法：在细胞培养液中加EB 50μg/ml、尿嘧啶50μg/ml、丙酮酸100μg/ml,进行连续传代培养,获得完全缺失mtDNA的细胞（ρ°细胞）;运用实时荧光定量PCR技术,检测EB处理后不同时间的人食管鳞癌细胞EC9706 mtDNA的拷贝数,并采用琼脂糖凝胶电泳对mtDNA进行定性检测;采用TUNEL染色和流式细胞技术,检测EB处理后不同时间人食管鳞癌细胞EC9706的凋亡情况。结果：成功建立了人食管鳞癌细胞EC9706的ρ° 细胞,经实时荧光定量PCR鉴定,发现在EB存在下,随着细胞分裂,mtDNA拷贝数进行性减少,直到12天,mtDNA完全丢失;流式细胞术检测结果显示,EC9706细胞EB处理后,第4天、8天及12天细胞凋亡率（%）分别为（2.78±1.04）、（11.68±1.85）、（26.62±1.06）,与对照组相比,差异均有统计学意义（P<0.05）;TUNEL检测结果与上述一致,从第4天到第12天凋亡也逐渐增加。结论：成功建立了EC9706 ρ° 细胞。随着EC9706细胞mtDNA拷贝数量的逐渐减少,细胞凋亡率逐渐增加,表明mtDNA在诱导细胞凋亡中起着一定调控作用,提示选择性地诱导食管癌细胞mtDNA损伤,使食管癌细胞mtDNA拷贝数量明显减少,进而诱导细胞凋亡,可望成为食管癌生物治疗的一个新靶点。