Src酪氨酸激酶抑制剂对表皮生长因子诱导的肺腺癌细胞生长的作用及机制

目的 探讨Src酪氨酸激酶抑制剂对表皮生长因子（EGF）诱导的肺腺癌细胞生长浸润的作用及其机制。方法 选用PC-9和A549细胞进行培养,分别给予不同浓度的Src酪氨酸激酶抑制剂和EGF,利用MTT比色法和Boyden-chamber法检测PC-9和A549细胞增殖及浸润情况,台盼蓝染色检测细胞活力,蛋白质印迹检验Src蛋白的表达和磷酸化及其下游信号磷酸化情况。结果 抑制Src酪氨酸激酶可以在不影响细胞活力的情况下抑制PC-9和A549细胞的增殖浸润,EGF可以增强EGF受体（EGFR）、Src、促丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）及AKT的磷酸化,Src酪氨酸激酶抑制剂可以抑制这种磷酸化。结论 抑制Src酪氨酸激酶可以通过调节EGFR及其下游信号通路抑制肺腺癌细胞的增殖浸润。     

Src激酶抑制剂-1对人软骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的探讨Src激酶抑制剂-1对人软骨肉瘤SWl353细胞生长、凋亡和迁移等生物学行为的影响及其机制。方法体外培养人软骨肉瘤SWl353细胞，分为对照组和实验组，分别采用MTT法、流式细胞术和细胞迁移实验观察Src激酶抑制剂-1对人软骨肉瘤SWl353细胞生长、凋亡和迁移等生物学行为的影响，并通过Western—blot检测Src激酶抑制剂-1作用后Src及下游信号通路蛋白的影响。结果0．5、1、5、10μmol／L的Src激酶抑制剂-1均能明显抑制SWl353细胞的增殖（P〈0．01）；1、5、10μmol／L的Src激酶抑制剂-1均能明显促进SWl353细胞的凋亡（P〈0．01）；Sre激酶抑制剂-1能明显限制SWl353细胞的迁移；Sre激酶抑制剂-1能明显抑制SWl353细胞Src（Tyr416）及下游信号ERK，bAkt和FAK（F397）的磷酸化。结论Src激酶抑制剂-1具有抑制人软骨肉瘤SWl353细胞生长和迁移的能力，可能对软骨肉瘤具有一定的治疗效果，这是通过直接抑制Src酪氨酸激酶的活性，进而抑制其下游信号通路的激活来实现的。     

PP60c-Src在血管紧张素Ⅱ对大鼠血管平滑肌细胞信息转导中的作用

目的：通过观察c—Src在AngⅡ对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)活性和c—fos蛋白表达的影响，以进一步了解AngⅡ促VSMC增殖的细胞内信息转导机制。方法：原代和传代培养SD大民主动脉VSMC，以脂质体包裹反义c—Src寡脱氧核夺酸(Oligodeoxynucleotides ODNs)转染培养的VSMC以抑制c—Src蛋白表达和激酶活性。以未转染的VSMC为对照，观察10^7mol/L AngⅡ刺激对转染的VSMC的MAPK活性和c—fos蛋白表达的影响。蛋白免疫沉淀和酶自身磷酸化率测定c—Src激酶活性；髓鞘碱性蛋白(MBP)底物磷酸化率测定MAPK放酶活性；Western blot免疫印迹法测定c—Src和c—fos蛋白表达情况。始果：转染不同浓度反义c—Src()DNs的VSMCc—Src蛋白含量至浓度依赖性降低，0.2μmol/L、0.5μmol/L、1．0μmol／L和2．0μmol/L分别为对照的68．2％、34．7％、30。3％和15．8％，经方差分析具有显著性意义(P＜0.01)。c—Src激酶活性也显著抑制；以AngⅡ刺激经转染反义c—Src DNs的VSMC，c—Src激酶活性增幅仅为对照组的8．7％；MAPK活性仅为对照的1．6％；c—fos蛋白表达的增幅为对照组的30．0％。结论：AngⅡ可诱导VSMC c—Src激活和细胞内信息转导，且AngⅡ引起的MAPK和c—fos的激活依赖于c—Src的激活，提示c—Src是AngⅡ促血管平滑细胞增殖的重要信息分于。     

Src酪氨酸激酶抑制剂对人胃癌细胞SGC7901上皮-间质转变相关基因的作用及机制

目的:探讨Src酪氨酸激酶抑制剂对人胃癌细胞SGC7901上皮-间质转变相关基因的作用及机制。方法:以Src酪氨酸激酶抑制剂作用前后的SGC7901细胞为研究对象,应用Western blot及real time PCR观察细胞内p-Src及上皮间质转变标志物E-钙黏素(E-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)表达的变化,报告基因技术检测Snail在转录水平表达的变化。结果:Src酪氨酸激酶抑制剂可上调E-cadherin在mRNA和蛋白水平变化,下调β-catenin在mRNA和蛋白水平变化及Snail的启动子活性。结论:Src酪氨酸激酶抑制剂可抑制人胃癌细胞SGC7901上皮间质转变相关基因表达,其机制可能与其下调SGC7901细胞Snail的启动子活性有关。     

Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促进人胃癌细胞迁移和侵袭中的作用及相互关系

目的 探讨Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促进人胃癌细胞迁移和侵袭中的作用及相互关系.方法 实验设正常对照组(细胞未作其他处理)、人乙酰肝素酶重组蛋白处理组(5、10 μg/ml)以及提前3 h加入Src激酶特异性抑制剂pp2(5 μmol/L)或p38激酶特异性抑制剂SB 203580(1 μmol/L)再加入人乙酰肝素酶重组蛋白(10 μg/ml)作用24 h组.利用划痕损伤实验和Transwell小室基质侵袭实验分别检测各处理组对人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot法检测各处理组对人胃癌MGC-803细胞、高表达乙酰肝素酶的人胃癌SGC-7901细胞和乙酰肝素酶表达被下调的SGC-7901-Heparanasel(-)细胞中Src激酶、p38激酶、磷酸化Src激酶(p-Src)和磷酸化p38激酶(p-p38)蛋白表达的影响.结果 与正常对照组比较,5和10 μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白均能明显增强人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力(P<0.05);与未加抑制剂的人乙酰肝素酶重组蛋白比较,抑制剂pp2和SB 203580均能削弱人乙酰肝素酶重组蛋白增强的人胃癌MGC-803细胞的迁移和基质侵袭能力(P<0.05).10 μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白促进人胃癌MGC-803细胞Src激酶和p38激酶的磷酸化,而SGC-7901-Heparanasel(-)细胞中磷酸化的Src激酶和p38激酶表达水平较SGC-7901细胞明显下调(P<0.01);抑制剂pp2和SB 203580对人胃癌SGC-7901细胞中乙酰肝素酶蛋白表达无明显影响;在人胃癌SGC-7901细胞和MGC-803细胞中,Src激酶的抑制剂pp2抑制磷酸化p38蛋白的表达,而p38激酶的抑制剂SB 203580对磷酸化Src蛋白表达无明显影响.结论 乙酰肝素酶可能通过促进Src激酶磷酸化或p38激酶的磷酸化或先促进Src激酶磷酸化再促进p38激酶的磷酸化,从而促进人胃癌细胞迁移和侵袭能力.乙酰肝素酶-Src激酶磷酸化-p38激酶磷酸化可能是人胃癌细胞内存在的与细胞迁移和侵袭有关的信号转导通路.     

胆固醇合成抑制剂洛伐他汀对MCF-7乳腺癌细胞MAPK活性的影响

目的 探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀对MCF-7乳腺癌细胞丝裂泵活化蛋白激酶MAPK活性的影响。方法 4、8、16μmol／L终浓度的洛伐他汀处理上皮来源的MCF-7乳腺癌细胞，Western blotting分析ERKl和p38^MAPK蛋白表达，激酶活性分析ERKl和p38^MAPK的磷酸化水平。结果 不同剂量的洛伐他汀处理48～72h，对ERKl蛋白表达无显著影响，但在72h后能下调p38^MAPK蛋白表达，同时洛伐他汀处理48-72h均能明显降低ERKl和p38^MAPK磷酸化水平，二者具有相同趋势。结论 洛伐他汀处理MCF-7乳腺癌细胞可能通过抑制细胞的甲羟戊酸途径，或影响胞内酪氨酸激酶磷酸化水平等，下调细胞MAPK活性。     

Src酪氨酸激酶抑制剂逆转人胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP的作用及机制

目的探讨Src酪氨酸激酶抑制剂逆转人胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP的作用及机制。方法以Src酪氨酸激酶抑制剂逆转前后的人胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP为研究对象,应用Western blot观察细胞内p-Src表达的变化,MTS法检测细胞的药物敏感性,流式细胞仪检测细胞Rh123外排及P-gp表达的水平。结果 Src酪氨酸激酶抑制剂可下调SGC7901/DDP细胞中p-Src表达,在5μmol/L及10μmol/L Src酪氨酸激酶抑制剂作用下,SGC7901/DDP细胞对顺铂的药物敏感性分别提高了1.52倍和3.96倍,细胞中Rh123含量分别提高了1.24倍和2.64倍,P-gp表达水平分别降低了65.8%和47.4%。结论 Src酪氨酸激酶抑制剂可逆转SGC7901/DDP细胞多药耐药性,其耐药表型的逆转可能与降低细胞Rh123外排及P-gp表达水平有关。     

Src蛋白在肝癌HepG2细胞增殖凋亡中作用的初步研究

目的研究Src蛋白在人肝癌细胞株HepG2细胞增殖凋亡过程中的作用。方法应用Src蛋白酪氨酸激酶抑制剂PP2不同浓度处理HepG2细胞前后,使用免疫组化、流式细胞术、MTT法检测Src蛋白的表达以及HepG2细胞增殖和凋亡情况。结果Src蛋白在HepG2细胞中高表达,用不同浓度PP2处理HepG2细胞后,能够显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖,增加凋亡。结论Src蛋白在人肝癌细胞株HepG2细胞的增殖凋亡过程中起着重要作用。     

Src激酶在骨肉瘤U2OS细胞失巢凋亡中的作用

【摘要】 目的 探讨Src激酶在骨肉瘤U2OS细胞失巢凋亡中的作用。方法 采用超低黏附板构建骨肉瘤U2OS细胞失巢凋亡抵抗模型,Western blot检测骨肉瘤U2OS细胞和失巢凋亡抵抗细胞中Src激酶蛋白的水平。加入Src激酶抑制剂,Western blot检测U2OS细胞中Src激酶蛋白的水平变化,并利用TUNEL染色和流式细胞双染技术检测细胞凋亡率。结果 成功构建骨肉瘤失巢凋亡抵抗模型细胞（U2OSar）,在骨肉瘤失巢凋亡过程中,p Src的蛋白水平逐渐升高;与骨肉瘤U2OS细胞相比,U2OSar细胞中,p Src/Src蛋白灰度比值023上升至091（P＜005）;加入Src激酶抑制剂PP2后, 骨肉瘤U2OS细胞的p Src的蛋白水平明显降低,凋亡率从4666%下降至2832%（P＜005）。结论 Src激酶参与调控骨肉瘤失巢凋亡,抑制肿瘤细胞凋亡,促进其失巢凋亡抵抗。     

PI-3K和MEK1/ERK信号通路在碱性纤维母细胞生成因子诱导乳腺癌细胞低氧诱导因子活化中的作用及机制

目的 探讨碱性纤维母细胞生成因子(bFGF)活化低氧诱导因子(HIF—1)的机制及其参与的信号通路,为抗肿瘤血管生成的研究提供新的实验依据。方法 以人乳腺癌细胞系T47D为对象,采用Western印迹方法检测细胞内HIF-let及磷酸化Akt,ERK1／2,p38蛋白质的表达;采用双萤光素酶系统检测HIF-1转录活性。结果 bFGF以时间和剂量依赖性的方式诱导HIF—1α蛋白表达,同时激活PI-3K／Akt和MEK1／ERK信号通路。分别应用FGFR1阻断剂SU5402以及PI-3K激酶抑制剂LY294002,MEK1激酶抑制剂PD98059,p38激酶抑制剂SB203580可以明显阻断bFGF对PI-3K／Akt,MEK1／ERK及p38信号通路的激活,但只有SU5402和LY294002可以阻断bFGF对HIF-1α蛋白表达的刺激作用,阻断效率达100％。bFGF增加HIF-1的转录活性,这一作用分别被PI-3K和MEK1激酶抑制剂抑制,抑制率分别为94．8％和81．7％。结论bFGF对HIF-1有明显活化作用。PI-3K／Akt和MEK1／ERK信号通路以不同机制共同调节这一过程,其中PI-3K／Akt信号通路起着更为重要的调节作用。     

MAPK途径在大鼠肝干细胞增殖调控中的作用

目的探讨ERK1／2、p38-MAPK、PI3K／AKT等信号途径在HGF介导的肝干细胞增殖信号中的作用及其信号转导途径之间的相互联系和作用机制。方法通过western blotting检测ERK、p38MAPK、Akt信号分子及磷酸化蛋白的表达；通过^3H—TdR掺入DNA的方法来检测细胞的增殖细胞。结果在WB细胞。HGF确实能够激活ERK、p38MAPK、PI3K／AKT途径。ERK途径在HGF刺激5min后发生磷酸化，并且完全磷酸化发生在HGF作用15min。1h后逐渐消失。Akt也在HGF作用5min后发生磷酸化，15min后达到完全磷酸化并且持续至少2h。P38MAPK途径也在5min后开始激活．在30min后逐渐减少，持续大约3h；我们还发现，用MAPK抑制剂U0126，SB23580处理后能够明显减低HGF诱导的增殖效应，但是用Ly294002处理阻断PI3K／AKT途径后则并不影响HGF诱导的增殖效应。表明，ERK1／2、p38MAPK途径的激活参与HGF介导的细胞增殖效应，而PI3K／AKT途径则并不参与HGF介导的细胞增殖调控。结论在WB细胞，HGF能够激活ERK、p38MAPK、PI3K／Akt等信号途径。ERK1／2和p38MAPK途径的激活参与HGF介导的细胞增殖效应，而PI3K／AKT途径则并不参与HGF介导的细胞增殖调控。     

重楼皂苷Ⅱ联合喜树碱对肺癌H460、H446细胞凋亡及信号通路的影响

[目的]观察重楼皂苷Ⅱ（PSⅡ）联合化疗药物喜树碱（CPT）对肺癌细胞的作用及机制。[方法]采用噻唑蓝（MTT）法检测PSⅡ联合CPT对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞（H460）以及小细胞肺癌（SCLC）细胞（H446）的抑瘤效果。平板克隆法观察PSⅡ联合CPT作用于肺癌细胞后的细胞克隆形成率;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测PSⅡ联合CPT对肺癌细胞蛋白激酶B（AKT）、细胞外信号调节酶（ERK）、p38 MAPK的磷酸化活性及抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤（Bcl）-2、Bcl-XL的表达。[结果]MTT实验结果显示PSⅡ联合CPT对肺癌细胞有细胞毒活性并呈现剂量依赖性,且在细胞克隆实验中观察到两者具有很强的协同作用;两者联合增加了H460、H446细胞的晚期凋亡率,且显著增加了H446的早期凋亡率（70.10±3.44）%。Western blot结果显示,PSⅡ联合CPT作用于H460细胞,能明显上调p38 MAPK和ERK的磷酸化蛋白表达,对AKT磷酸化无明显作用,并下调了Bcl-2和Bcl-XL蛋白的表达。PSⅡ联合CPT作用于H446细胞,上调了AKT、p38 MAPK和ERK的磷酸化蛋白表达,并下调了Bcl-2蛋白的表达,对Bcl-XL无明显作用。[结论]PSⅡ可以作为CPT的增敏剂用于肺癌的治疗,为PSⅡ用于肺癌的治疗提供了依据。     

乳腺癌耐药性中MAPK信号转导通路与EGR-1关系的研究

目的探讨乳腺癌细胞阿霉素耐药中p38MAPK通路与EGR-1活性的关系。方法用流式细胞术、四甲基偶氮唑蓝（MTT）、RT—PCR及Western Blot等方法分别检测SB203580（15μmol／L）干预后细胞的凋亡、细胞内阿霉素浓度及细胞对阿霉素敏感性的改变;EGR-1 mRNA表达及P—gP、磷酸化p53蛋白及p38蛋白表达情况。结果经SB203580（15μmol／L）干预,流式细胞仪检测见MCF-7／Adr细胞发生显著凋亡,并呈一定时间依赖性;细胞内阿霉素浓度显著增加;MCF-7／Adr细胞对阿霉素药物的耐受性显著降低;伴随p38MAPK通路活性抑制和EGR—1mRNA表达增加,磷酸化p53蛋白表达显著上调,而P—gP蛋白显著下调。结论提示p38MAPK通路与乳腺癌细胞阿霉素耐药密切相关,p38MAPK通路调控的EGR—1激活参与乳腺癌细胞阿霉素耐药的形成。     

丝裂原活化蛋白激酶对佛波酯诱导滋养细胞MMP-9基因表达的影响

目的 探讨佛波酯(PMA)诱导细胞滋养层细胞(CTB)MMP-9基因表达的调控机制。方法 用细胞ELISA法测定CTB细胞的蛋白激酶活性变化；用反转录聚合酶链反应检测CTB中MMP-9的基因表达。结果 100nmol／L PMA能迅速激活CTB中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-jun氨基末端激酶(JNK)以及p38 MAPK激酶的活性。100nmol／L PMA刺激CTB引起MMP-9 mRNA表达显著增加，能被ERK或p38 MAPK的特异性抑制剂所抑制。结论 ERK和p38 MAPK可能是PMA诱导CTB中MMP-9基因表达增加的重要调节物质。     

胰岛素样生长因子Ⅱ激活宫颈癌细胞株ERK1/2信号通路并诱导其增殖

目的 探讨胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF—Ⅱ）激活宫颈癌SiHa细胞株ERK1／2（p42／44MAPK）信号通路的模式变化及对其增殖的影响。方法 用MTT法观察细胞增殖，用Western blot测定细胞p42／44MAPK磷酸化表达。结果 IGF—Ⅱ可诱导SiHa细胞增殖，并呈剂量依赖性；用IGF—IR单克隆抗体（1，5，10μmol／L）预处理30min可显著抑制IGF-Ⅱ（20ng／mL）诱导的SiHa细胞增殖，并呈剂量依赖性。IGF—Ⅱ（100ng／mL）可诱导SiHa细胞p42／44MAPK磷酸化表达，20min达到高峰；IGF—IR单克隆抗体可显著抑制IGF—Ⅱ诱导的Siha细胞p42／44MAPK磷酸化。结论IGF—Ⅱ可激活宫颈癌SiHa细胞株p42／44MAPK信号通路，并可能通过p42／44MAPK信号通路调控SiHa细胞增殖。     

环孢素引起肾小管上皮细胞培养液中肾损伤分子-1水平升高的机制

目的：探讨环孢素（CsA）引起人肾小管上皮细胞(HKC)培养液中肾损伤分子-1（KIM-1）水平升高的作用机制,阐明KIM-1表达与p38 MAPK通路和EKR1/2 MAPK通路的关系。方法：将处于对数生长期的HKC分为空白组、CsA损伤组、CsA与p38激酶抑制剂合用组、p38激酶抑制剂组、CsA与ERK1/2激酶抑制剂合用组和ERK1/2激酶抑制剂组。MTT法检测各组HKC增殖抑制率,ELISA法测定各组HKC上清液中KIM-1水平,流式细胞术检测各组细胞存活率、细胞凋亡率和细胞坏死率。结果：与空白组比较,CsA损伤组细胞上清液中KIM-1水平显著升高（P<0.05）,细胞存活率显著降低（P<0.05）,细胞凋亡率和细胞坏死率显著升高（P<0.05）;p38激酶抑制剂组和ERK1/2激酶抑制剂组中细胞存活率、细胞凋亡率和细胞坏死率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与CsA损伤组比较,CsA与p38激酶抑制剂合用组、CsA与ERK1/2激酶抑制剂合用组细胞上清液中KIM-1水平显著降低（P<0.05）,细胞存活率显著升高（P<0.05）,细胞凋亡率和细胞坏死率显著降低（P<0.05）。结论： p38 MAPK通路和ERK1/2 MAPK通路参与CsA素引起肾小管上皮细胞培养液中KIM-1水平升高的过程,KIM-1的表达可能成为临床监测CsA肾毒性的生化指标。     

刺糖多糖对小鼠腹腔巨噬细胞核转录因子、丝裂原活化蛋白激酶及氨基末端激酶信号通路相关基因和蛋白表达的影响

目的探讨刺糖多糖对小鼠腹腔巨噬细胞中核转录因子(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)及cJun氨基末端激酶(JNK)信号通路相关基因和蛋白表达水平的影响。方法将处于对数生长期的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264. 7按1×108L-1接种至24孔细胞培养板中,24 h后更换细胞培养液。将细胞分为0. 0、12. 5、50. 0、100. 0 mg·L-1刺糖多糖组,每组细胞加入相应浓度的刺糖多糖干预24 h。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中p38、NF-κB p65、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、JNK1/2/3 mRNA的表达,采用Western blot法检测各组细胞中磷酸化p38 (p-p38)、p38、磷酸化NF-κB p65 (p-NF-κB p65)、NF-κB p65、磷酸化ERK1/ERK2 (p-ERK1/ERK2)、ERK1/ERK2、磷酸化JNK1/2/3(p-JNK1/2/3)及JNK1/2/3蛋白的表达。结果刺糖多糖干预巨噬细胞24 h后,与0. 0 mg·L-1刺糖多糖组比较,50. 0、100. 0 mg·L-1刺糖多糖组细胞中ERK1、NF-κB p65 mRNA表达量显著升高(P <0. 05); 12. 5、50. 0、100. 0 mg·L-1刺糖多糖组细胞中p38 mRNA表达量显著升高(P <0. 05)。与12. 5 mg·L-1刺糖多糖组比较,50. 0、100. 0 mg·L-1刺糖多糖组细胞中ERK1、p38、NF-κB p65 mRNA表达量显著升高(P <0. 05)。与0. 0、12. 5 mg·L-1刺糖多糖组比较,50. 0、100. 0 mg·L-1刺糖多糖组细胞中p-p38、p-NF-κB p65、p-ERK1/ERK2、ERK1/ERK2蛋白表达量显著升高(P <0. 05)。结论刺糖多糖能上调p38、NF-κB p65、ERK1/2蛋白的磷酸化水平,从而激活MAPK信号通路和NF-κB信号通路;刺糖多糖的免疫机制可能与NF-κB p65、p38、ERK1mRNA表达上调有关。     

新型雌激素受体GPR30激活HER2-ERK1/2促进乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭

目的 探讨G蛋白耦联受体30 (GPR30)受体在低表达表皮生长因子受体2(HER2)的乳腺癌MCF-7细胞中激活HER2的分子机制和生物学意义.方法 用Western blot的方法检测17-p-雌二醇(E2)、三苯氧胺(TAM)的活性代谢产物(4-OHT)或GPR30激动剂(G-1)作用于乳腺癌MCF-7细胞后HER2和下游信号分子ERK1/2磷酸化水平的变化.在MCF-7细胞被不同的抑制剂GPR30拮抗剂(G-15)、EGFR酪氨酸激酶抑制剂(AG1478)、HER2酪氨酸激酶抑制剂(AG825)、Src家族激酶抑制剂(PP2)或MMP抑制剂(GM6001)预处理2h后,再次检测HER2和ERK1/2的磷酸化水平变化.最后用Transwell方法检测G-1引起的MCF-7细胞迁移和侵袭能力的变化.结果 MCF-7细胞在用E2、4-OHT和G-1处理后,HER2和ERK1/2的磷酸化水平增加,该变化在用G-15、AG1478、AG825、PP2或GM6001预处理后受到抑制.而G-1引起的MCF-7细胞迁移和侵袭能力的增强也能被G-15、AG1478、AG825、PP2或GM6001抑制.结论 GPR30通过激活HER2-ERK1/2信号转导途径可促进MCF-7细胞的迁移和侵袭.     

阻断酪氨酸蛋白激酶Src表达对蛋白磷酸酯酶2A活性和tau蛋白磷酸化的影响

研究细胞内酪氨酸蛋白激酶Src对蛋白磷酸酯酶2A（PP2A）酪氨酸307位点（Y307）磷酸化和活性以及tau蛋白磷酸化的影响，为阿尔茨海默病脑内PP2A活性下调和tau蛋白异常磷酸化机制提供实验依据。体外培养小鼠成神经瘤N2a细胞，转染特异性阻断Src表达的siRNA，检测转染不同时间点PP2A Y307的磷酸化水平、PP2A的活性以及tau蛋白在不同位点的磷酸化水平。     

尾加压素Ⅱ对自发性高血压大鼠胸主动脉的收缩效应及其对血管平滑肌细胞内ERK1/2磷酸化的影响

目的 观察尾加压素Ⅱ(U-Ⅱ)对不同血压水平的自发性高血压大鼠(SHR)胸主动脉的收缩效应和U-Ⅱ对血管平滑肌细胞(VSMC)内ERK1/2和p38MAPK磷酸化的影响,以进一步明确U-Ⅱ对SHR的血管效应及其可能机制.方法 离体血管灌流实验测定U-Ⅱ对胸主动脉张力的影响,采用免疫荧光标记UT受体在VSMC的表达,并通过蛋白质印迹的方法观察U-Ⅱ对VSMC内ERK1/2和p38MAPK磷酸化的作用.结果 U-Ⅱ受体分布在VSMC上,累积浓度的U-Ⅱ对成年SHR去除内皮的胸主动脉环收缩效应明显强于WKY大鼠;在VSMC细胞内,U-Ⅱ可以浓度依赖性地激活VSMC内ERK1/2磷酸化,但对p38MAPK没有作用;ERK1/2阻断剂的应用不能阻断(肌凝蛋白轻链)MLC的磷酸化.结论 U-Ⅱ对SHR离体血管表现出较强的收缩作用,可能通过ERK1/2及p38MAPK以外的其他通路参与了MLC的磷酸化以及VSMC的收缩效应.