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1.
目的 通过对不同冷冻保护剂用于C57BL/6J小鼠精子冷冻后冻融精子体外受精率的比较,建立一套更适合C57BL/6J小鼠精子冷冻的方法.方法 以R18S3为基础液添加不同体积浓度的卵黄和甘油作为冷冻保护剂对C57BL/6J和Y3F小鼠精子进行冷冻,并采用同种方法复苏精子,以体外受精率来评价精子冷冻的效果.结果 以R18S3为基础液分别添加体积浓度为5%、10%、15%、20%、25%卵黄离心后获得的上清液作为冷冻保护剂,C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率分别为18.7%、15.6%、36.0%、40.0%、29.7%,差异显着( P<0.05); 以R18S3为基础液分别添加体积浓度为1%、2%、3%、4%、5%、6%的甘油作为冷冻保护剂, C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率分别为7.8%、10.0%、16.9%、6.0%、10.3%、18.1%,差异显著( P<0.05); 以R18S3+5%卵黄离心后获得的上清液+6%甘油、R18S3+15%卵黄离心后获得的上清液+2%甘油、R18S3+20 %卵黄离心后获得的上清液+1%甘油作为冷冻保护剂,C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率分别为: 16.7%、36.0%、22.9%,差异显著(P<0.05); 以R18S3作为冷冻保护剂,C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率为25%,异常卵裂率为2.6%.Y3F小鼠冻融精子体外受精率为52.2%,异常卵裂率为 5.1%.结论 以R18S3为基础液添加15%或20%的卵黄离心后获得的上清液可以有效提高C57BL/ 6J小鼠冻融精子的体外受精率但添加不同浓度的甘油却降低C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率.添加卵黄和甘油冷冻效果不如卵黄但好于甘油.  相似文献   

2.
目的分析影响小鼠精子冷冻成功的因素。方法用含3%脱脂奶和18%棉子糖的冷冻保护剂分别冷冻C57BL/6J、FVB/NJ、B6D2F1、KM和ICR小鼠精子。复苏后,评价小鼠精子的冷冻效果和受精能力。结果各品系小鼠精子冷冻前后的受精率不同;新鲜精子体外受精时,C57BL/6J、FVB/NJ、B6D2F1,KM和ICR五个品系的小鼠的受精率分别为81.4%、87.2%、90.4%、82.7%和79.4%而冻融精子的体外受精率分别为6.7%、46.0%、76.8%、59.2%和31.9%,差异极显著(P〈0.01)。结论遗传背景不同的小鼠品系,精子的受精能力及对冷冻的耐受能力不同。  相似文献   

3.
目的建立一套比较理想的小鼠精子冷冻复苏的方法。方法采用R18S3和FERTIUPTM-CPA两种保护剂,对DBA/2、C57BL/6J、KM和B6.129S7-Ldlrtm1Her/J四个品系的小鼠精子进行冷冻,冷冻精子用三种方法复苏,以体外受精率来评价精子冷冻的效果。结果以R18S3作为冷冻保护剂,DBA/2(73.3%,88.4%,55.6%)和KM(64.9%,60.2%,39.6%)品系小鼠冷冻精子复苏后体外受精率差异显著(P<0.05),C57BL/6J(3.0%,10.3%,3.7%)和B6.129S7-Ldlrtm1Her/J(0%,5.0%,0%)结果差异不显著(P>0.05);以FERTIUPTM-CPA作为冷冻保护剂,DBA/2(33.6%,14.1%,91.6%)、C57BL/6J(8.4%,21.0%,4.9%)和B6.129S7-Ldlrtm1Her/J(8.2%,10.0%,28.9%)品系小鼠冷冻精子复苏后体外受精率差异显著(P<0.05),而KM(48.1%,48.0%,48.1%)小鼠冷冻精子复苏后体外受精率差异不显著(P>0.05)。结论对于DBA/2和KM品系小鼠来说,用R18S3或FERTIUPTM-CPA冷冻精子,选择一种恰当的复苏方法,均可以得到较理想的体外受精率,而C57BL/6J和B6.129S7-Ldlrtm1Her/J品系小鼠无论采用哪种冷冻保护剂,选择何种方法复苏精子,得到的体外受精率都较低。  相似文献   

4.
目的 比较精子冷冻前后体外受精率的变化,以及卵子经过激光打孔后,与新鲜精子及冷冻复苏精子体外受精,比较受精率的变化.方法 冷冻2个近交系小鼠和5个品系的基因工程小鼠的精子,比较新鲜精子和冷冻复苏精子与C57BL/6J小鼠卵子做体外受精的结果;然后对C57BL/6J卵子做激光打孔,再与新鲜及冷冻复苏精子体外受精结果进行比较.结果 (1)新鲜C57BL/6J精子受精率为50.4%,C57BL/6N的受精率为48.6%,远高于冷冻精子复苏后的受精率(17.7%和15.4%);卵子打孔后,再与C57BL/6J及C57BL/6N的新鲜精子或冷冻复苏精子受精,受精率分别为64.6%,59.7%和60.4%,48.3%,冷冻精子复苏后的体外受精率提高显著;(2)5个基因工程小鼠新鲜精子和冷冻精子复苏后与C57BL/6J卵子的受精率分别为:91.5% vs 28.6%,77.4%vs 52.3%,40.7% vs 12.7%,56.5% vs 14.6%,65%vs 6.5%;这5个品系的小鼠新鲜精子和冷冻精子复苏后与C57BL/6J打孔卵子的受精率分别为75% vs 50.8%,74.3% vs 35.6%,75.7% vs32.7%,79.5% vs 48.9%,59.5% vs 46.3%,冷冻精子复苏后的受精率较之不打孔卵子,提高显著.结论 激光打孔技术用于冷冻复苏精子的辅助体外受精,可以显著提高冷冻精子复苏后的受精率,使得精子保种更加经济有效.  相似文献   

5.
目的 探讨三种不同冷冻保护剂对C57BL/6J小鼠附睾冷冻的效果。方法 性成熟并交配过的6-8周龄C57BL/6J雄鼠附睾,分别用3种不同冷冻保护剂二甲基亚砜 (DMSO)、丙二醇 (PROH)、R18S3进行玻璃化冷冻、复苏和精子采集,观察比较三个实验组的复苏精子形态、存活率以及生殖能力。结果 三组冷冻复苏分离后的精子形态完整,具有镰刀头状结构;荧光染色后PROH组精子存活率为 (88.17±3.43)%,明显高于DMSO组:(61.17±10.65)% 和R18S3组(16.83±6.49)%(P<0.05);经辅助体外受精后均具有受精能力。获得的胚胎移植后可得到正常子代小鼠 (DMSO : PROH : R18S3 = 13 : 8 : 17)。结论 3种冷冻保护剂均适用于C57BL/6J小鼠附睾冷冻,但PROH冷冻效果较好。  相似文献   

6.
目的 探讨遗传工程小鼠精子冷冻、复苏及体外受精率的效果,建立简便、经济的遗传工程小鼠保种体系.方法 采用精子冷冻、体外受精和胚胎移植技术,比较了精子获能培养液、雄鼠周龄及精子冻存液等因素对于遗传工程小鼠精子冷冻保存的影响.结果 用CPA精子冻存液冷冻保存精子,精子复苏后用PM精子培养液获能培养,体外受精率在82.49%~91.43%,而HTF精子培养液的体外受精率为14.46%~27.38%,同品系间差异极显著(P<0.01);10~35周龄的雄鼠精子均能成功冷冻、受精,移植后产仔;使用R18S3,CPM,CPA三种不同精子冻存液冷冻遗传工程小鼠精子,复苏后采用PM精子培养液体外受精,受精率分别是75.85%、88.89%和94.27%,移植后得到阳性小鼠;体外受精后的胚胎成功冷冻保存,移植后产仔.结论 采用CPA精子冻存液冷冻保存精子,精子复苏后用PM精子培养液体外受精,能够更有效地保存遗传工程小鼠.  相似文献   

7.
小鼠卵母细胞玻璃化冷冻的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 对小鼠卵母细胞玻璃化的方法和冷冻液进行研究。方法 用两种玻璃化冷冻液EFS4 0 (高钠 )、DEFS4 0 (低钠 )对ICR、C57BL 6J小鼠卵母细胞进行冷冻 ,0 5mol L蔗糖液解冻 ,体外授精前对部分解冻后的C57BL 6J小鼠卵母细胞进行透明带切割。结果 DEFS4 0冷冻液冷冻效果明显高于EFS4 0冷冻液 ,ICR小鼠卵母细胞解冻后成活率达 75 2 %、体外授精率 (2 4 6 % )与对照组相比差异无显著性 ,C57BL 6J小鼠卵母细胞解冻后成活率为 87 1%、卵母细胞切割后体外受精率 (36 0 % )与对照组相比差异也无显著性。结论 冷冻液中钠离子浓度影响小鼠卵母细胞冷冻效果 ,用DEFS4 0 (低钠 )冷冻液进行玻璃化冷冻可以取得理想的冷冻效果。  相似文献   

8.
目的 探讨不同品系小鼠的体外受精、胚胎和精子的低温保存效果。方法 本实验分别在中国科学院上海实验动物中心 (SLAC)和日本熊本大学动物资源开发中心 (CARD)对 13个品系小鼠 (C57BL 6J、BALB c、C3H HeJ、ICR、KM、FVB、MRL、NOD、CBA、DBA 2、CD 1、BDF1、B6C3F1)的体外受精 (IVF)率、胚胎培养及移植成绩进行了比较研究。结果 各品系小鼠新鲜精子的IVF率 15 1%~ 87 9% ,冻融精子的IVF率 8%~ 80 % ;冷冻胚胎的复苏率4 2 6 %~ 83 9% ;冻融胚胎移植后的产仔率在 17 8%~ 5 1 8%。结论 遗传背景不同的小鼠体外受精率、冷冻胚胎复苏率和胚胎移植的产仔率差异有显著性。但同一品系两个实验室间的新鲜精子的IVF率、冷冻胚胎的复苏率及移植产仔率差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;冻融精子的体外受精率CARD明显高于SLAC(P <0 0 1)。  相似文献   

9.
小鼠精子冷冻的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:探索、建立一套小鼠精子冷冻方法。方法:通过CPS和RS318两种冷冻液对比试验;进行不同解冻法试验;对B6DF1、CD-1、DBA、C57BL/6四种品系小鼠精子分别进行快速冷冻和缓速冷冻,将解冻精子、鲜精与卵母细胞进行体外受精,并进行体外培养、胚胎移植,通过受精率和受孕率对冷冻方法进行筛选。结果:两种冷冻液试验、不同解冻法试验的受精率差异均无显著性。B6DF1、CD-1、C57BL-6品系小鼠快速冷冻精子解冻后与卵母细胞的体外受精率(35%、34%、17%)显著低于鲜精(60%、59%、34%)、缓速冷冻精子的受精率(62%、58%、30%),此三种品系小鼠快速、缓速冷冻精子体外受精试验的受孕率均显著低于鲜精试验的受孕率。结论:缓速冷冻法是小鼠精子冷冻的适宜方法,干解冻法和稀释法处理冷冻液可简单有效地解冻精子。  相似文献   

10.
目的 建立小鼠胚胎与配子冷冻库,以安全、有效地保存小鼠资源.方法 选择不同遗传背景(近交系、远交群、免疫缺陷、疾病模型和基因改变等)的实验小鼠,系统进行了超数排卵、体外受精(IVF)率、胚胎与精子的冷冻复苏效果、卵巢冷冻与移植、辅助体外受精等比较研究.结果 ①小鼠年龄和遗传背景的不同,其超数排卵的结果也不同(P<0.01).三个日龄段中,28日龄最好,其次为112日龄,56日龄最差;不同遗传背景小鼠的超数排卵结果显示,封闭群和大部分近交系小鼠优于转基因小鼠(P<0.05),自发性疾病小鼠和基因剔除小鼠的结果最差;②不同品系小鼠的新鲜精子和冻融精子的体外受精率差异有显著性(P<0.05),特别是C57BL/6J 小鼠冻融精子的IVF率(10.3±4.2%)与新鲜精子(89.8±4.8%)相比,差异极显著(P<0.01);③不同品系小鼠的胚胎复苏率,除MRL/mp小鼠的复苏率略低外,其他小鼠品系均有较高的冷冻胚胎复苏率(58.2%~83.9%),表明,不同遗传背景小鼠之间差异有显著性(P<0.05),但均可以达到有效保存小鼠资源的目的.④小鼠的遗传背景、年龄等对小鼠精子的冷冻效果都有影响,采用改良的FERTIUP冷冻保护剂和细胞质内单精注射(ICSI)技术可有效提高以C57BL/6J为背景的基因改变小鼠的精子冷冻复苏率.⑤卵巢冷冻保存可以改善雌性小鼠的繁殖困难或不孕.结论 小鼠资源的安全保存,除了长期连续繁殖保种外,最好的或最保险的方法是低温保存.通过将胚胎、配子、卵巢等长期保存在液氮(-196℃)中避免遗传性状的改变,并在将来复苏后获得正常的小鼠后代,以用于生物学和医学等研究.  相似文献   

11.
目的研究胚胎冷冻在抗菌肽转基因FVB小鼠保种传代中的应用。方法对6~8周正常雌性FVB小鼠进行超排分别与雄性杂合子抗菌肽转基因FVB小鼠交配,收集2-cell胚胎,进行胚胎冷冻。1周后进行胚胎复苏移植,通过PCR方法对仔代鉴定。结果冻存胚胎140枚,复苏获得存活胚胎98枚,移植85枚,产仔38只,获得阳性后代12只。结论通过胚胎冷冻技术保种及复苏移植技术可对抗菌肽转基因小鼠进行传代。  相似文献   

12.
目的比较卵子冷冻复苏后、以及复苏卵子经过激光打孔后,与新鲜精子、冷冻复苏精子体外受精,受精率的变化。方法 (1)通过免疫荧光染色技术,判断卵子冷冻前后透明带糖蛋白-2、微丝以及细胞核的变化;(2)冷冻C57BL/6J小鼠卵子,复苏后一部分卵子打孔,一部分不打孔,然后与9个品系的新鲜精子和冷冻精子体外受精,比较各组受精率的变化。结果 (1)新鲜卵子组透明带糖蛋白-2、微丝及细胞核结构清晰,而冷冻组以及冷冻剂处理组,微丝结构略有变化,透明带糖蛋白-2受到不同程度的损伤,而细胞核在冷冻前后无明显变化;(2)9个品系的新鲜精子与C57BL/6J复苏卵子受精率为17.6%~42.9%,平均为29.6%;新鲜精子与复苏打孔卵子受精率为29.1%~72.3%,平均为49.7%,差异显著(P<0.05);9个品系复苏精子与复苏卵子体外受精率为5.4%~23%,平均为15.5%;复苏精子与复苏打孔卵子受精率为16.7%~48.6%,平均为28.8%,差异显著(P<0.05)。结论 (1)冷冻对卵子的透明带糖蛋白-2有较大的损伤,对微丝有一定的影响,但是对染色体没有影响;(2)冷冻卵子复苏后,体外受精率下降明显,但是复苏卵子经过激光打孔后,可以显著提高体外受精率。  相似文献   

13.
目的 利用活体保种、精子冷冻技术及辅助生殖技术建立一套安全的综合性保种体系.方法 以单侧睾丸摘除方法获得ICR、BDF1、C57BL/6J和GFP四种小鼠的附睾精子进行冷冻保存实验,术后恢复的公鼠继续用于自然繁育.如果无法自然繁育,则将冻融精子用于体外受精(IVF).如果冻融精子仍无法受精获得后代,则需要借助卵胞质内单精子注射技术(ICSI)进行胚胎构建,胚胎移植,直至获得后代.结果 单侧睾摘除的BDF1、C57BL/6J的公鼠可以继续繁育;不育的ICR和GFP小鼠的冻融精子IVF后,只有ICR小鼠可以得到正常的胚胎和子鼠;而以C57BL/6J 为遗传背景的GFP小鼠,其冻融精子只有采用ICSI技术,才可以得到子代.结论 精子冻融小鼠的遗传背景是影响IVF成功与否的关键性因素,同时还建立了一种以小鼠精子为主导的综合性保种体系,既可以达到品系保存的目的,同时又可以最大限度地利用小鼠品系.  相似文献   

14.
FVB小鼠精子冷冻及体外受精的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:探索FVB小鼠及FVB遗传工程小鼠种系保存的新途径.方法:用孕马血清和人绒毛膜促性腺激素(HCG)超排FVB小鼠,并分别用复苏精子和新鲜精子进行体外受精并将受精卵移植到假孕雌鼠输卵管中,比较两种精子的受精率;对注射HCG后13,15,17h不同时间采集FVB小鼠的卵母细胞进行体外受精,比较其受精率及体外培养至2细胞情况.结果:新鲜精子的受精率(62.4%)略高于冷冻复苏精子的受精率(58.1%);在注射HCG 13~15 h后取FVB小鼠卵母细胞其受精率效果较好,受精率(60.2%、61.6%)显著高于17h取卵的受精率(51%),但13,15,17 h采集卵母细胞体外受精后胚胎发育至2细胞及异常卵数无显著性差异.结论:本研究将为FVB小鼠及FVB遗传工程小鼠的种系保存、繁殖提供了基础.  相似文献   

15.
目的 研究甘油作为冷冻保护剂、不同基因型小鼠对胚胎玻璃化冷冻的影响。方法 采用 6 5mol L的甘油作为冷冻保护剂 ,采用二步法对CBA、NOD、C57BL 6J、ICR及CD1小鼠 3 5d的胚胎进行玻璃化冷冻 ,并比较了不同品系小鼠胚胎的复苏率及移植受孕率。结果和结论 CBA、NOD、C57BL 6J,ICR及CD1的复苏率分别为 5 7 6 %、4 8%、31 3%、86 5 %及 88% ,移植受孕率为 2 1%、2 3 5 %、11%、38%和 35 5 % ,封闭群小鼠的胚胎复苏率、移植受孕率均显著高于近交系小鼠。这提示胚胎的复苏率及移植受孕率可能与小鼠的不同基因型有关。五个品系中 ,桑椹胚及早期囊胚的体外复苏率均显著高于扩张囊胚。这说明不同基因型及胚胎的不同发育阶段对胚胎玻璃化冷冻效果有影响  相似文献   

16.
目的 建立C57-ras癌症转基因小鼠模型胚胎的冷冻保种技术.方法 通过直接收集体内发育的2-细胞胚或者通过体外受精方法获得2-细胞胚,采用玻璃化冷冻法冷冻、复苏、移植,后代经PCR检测.结果 体内发育至2细胞期胚胎90枚,解冻后的平均复苏率是67.78%,移植产仔率是21.31%,后代的阳性率是23.08%;体外受精的2细胞期胚胎203枚,解冻复苏60枚,平均复苏率是63.33%,移植产仔率是15.78%,后代的阳性率是33.33%.结论 两种胚胎冷冻途径均获得了C57-ras癌症转基因动物模型阳性小鼠,建立了该模型动物的低温保存方法.  相似文献   

17.
目的探讨重组表达的MnSOD或CuZnSOD对野生小家鼠精子冷冻损伤的保护作用。方法以R18S3为基础冷冻保护剂,分别添加不同浓度重组表达的MnSOD或CuZnSOD,通过对各组ICR小鼠冻融精子的活力、质膜完整性、DNA损伤的比较,筛选出两种SOD的合理浓度,并将其添加于野生小家鼠的精子冷冻保护液中,观察添加SOD后,冻融野生小家鼠精子活力、质膜完整性、DNA损伤以及体外受精率的变化。结果添加100UCuZnSOD和200UMnSOD后野生小家鼠冻融精子的活力以及质膜完整性都有显著性提高(P〈0.05);添加200UMnSOD野生小家鼠冻融精子的体外受精率与对照组相比有显著提高(P〈0.05),而添加100UCuZnSOD体外受精率则无显著变化。结论在小鼠精子冷冻培养液中添加200U重组表达的MnSOD浓度,对野生小鼠精子冷冻损伤具有一定的保护作用。  相似文献   

18.
目的 探讨EFS和DAP两种玻璃化冷冻方法对不同品系小鼠胚胎冷冻的效果。方法6个品系小鼠(KM、ICR、BALB/c、C57BL/6J、OB/OB、LAP/rtTA0F59)的2-cell胚胎分别用EFS和DAP两种玻璃化冷冻方法进行冷冻和复苏,比较两种冷冻方法的胚胎复苏率和着床率。结果 6个品系小鼠冷冻胚胎EFS方法的平均复苏率为69.97%(47.9%~83.6%),DAP方法的平均复苏率47.23%(26.3%~76.7%)EFS方法明显优于DAP方法。其中KM、ICR和BALB/c小鼠EFS方法的冷冻复苏率显著高于DAP方法(P<0.01);冻融胚胎移植后EFS方法的平均着床率27.23%(1.75%~45.0%),DAP方法的平均着床率31.43%(7.0%~46.3%)。除KM、ICR小鼠外,其他4个品系小鼠的着床率DAP方法高于EFS方法。结论 KM和ICR远交群小鼠胚胎适合用EFS方法冷冻保存;C57BL/6J、OB/OB、LAP/rtTA0F59三个品系小鼠DAP方法优于EFS方法,但差异不大; BALB/c小鼠两种玻璃化冷冻方法的冻融胚胎着床率均较低,需进一步研究。  相似文献   

19.
小鼠体外受精及其胚胎体外培养的比较研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 通过比较不同品系小鼠体外受精情况以及不同培养液对C57BL/6J小鼠胚胎体外培养效果的实验,进一步完善小鼠体外受精和早期胚胎体外培养体系.方法 对C57BL/6J、DBA/2、FVB/NJ、BALB/c、KM、ICR及BARR Ⅱ小鼠进行超排和体外受精,并对C57BL/6J小鼠体外受精后的2-细胞胚胎用HTF、CZB、KSOM、M16、HECM五种培养液在相同条件下进行体外培养到囊胚,计算4-细胞~囊胚的发育率.结果 各品系小鼠平均排卵数为13.0~38.7个(P<0.01),体外受精率为70.2%~92.8%(P<0.05).不同培养液至4-细胞的发育率为60.3%~95.8%,其中KSOM的4-细胞发育率为95.8%,最适合2-细胞向4-细胞的发育.8-细胞发育率为52.8%~91.1%,桑椹胚发育率为40.6%~87.5%,囊胚发育率为5.1%~75.4%,各阶段胚胎发育率均差异显著.其中适合于金黄仓鼠桑椹胚、囊胚发育的HECM-2并不支持C57BL/6J囊胚的发育,其囊胚发育率只有5.1%,CZB最适合其囊胚的发育.结论 遗传背景是影响小鼠超排及体外受精效果的主要因素之一.葡萄糖的存在不利于克服2-细胞发育阻断,胚胎在8-细胞期以前,主要能源物质不是葡萄糖,直到桑椹胚后期,葡萄糖才是主要的能量物质.磷酸盐可引起胚胎发育阻断.氨基酸和EDTA有利于克服胚胎发育阻滞.  相似文献   

20.
目的 探讨受精液中添加还原型谷胱甘肽(GSH)对C57BL/6J小鼠体外受精的影响.方法 以体外受精液(HTF)作为对照,在HTF液中添加不同浓度(0.25 mmol/L、0.50 mmol/L、0.75 mmol/L、1.00 mmol/L、1.25 mmol/L和1.50 mmol/L)的GSH,对C57BL/6J近交系小鼠进行体外受精实验,观察体外受精和早期胚胎发育情况.同时,用5种C57BL/6J小鼠背景的基因工程小鼠加以验证.结果 与对照组相比,实验组的体外受精率显著升高,浓度为0.50 mmol/L时,体外受精率提高显著(P<0.05),浓度在1.25 mmol/L时,体外受精率最高(P<0.01).受精卵的体外囊胚发育率实验组与对照组无显著性差异(P>0.05).C57BL/6J背景的基因工程小鼠的体外受精率和体外囊胚发育率与C57BL/6J近交系小鼠相似.结论 在HTF中添加一定浓度的GSH能够提高C57BL/6J小鼠及C57BL/6J背景的基因工程小鼠的体外受精效果.  相似文献   

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