脂多糖结合蛋白多抗对内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子的影响

目的　研究脂多糖结合蛋白 (lipopolysaccharidebindingprotein ,LBP)多抗对内毒素 (lipopolysaccharide ,LPS)急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子表达的影响 ,探讨LBP多抗对LPS炎症反应减敏作用的部分机制。方法　将从 4 0只大鼠分离、培养的肺泡巨噬细胞随机分为 4组 ,A组为正常对照组 ,B组为LPS刺激组 ,C组为LBP LPS刺激组 ,D组为LBP多抗 LBP LPS组。运用RT -PCR和ELISA的方法 ,分别检测LBP多抗对LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后IL - 1β ,IL - 18的mRNA表达与TNF -α分泌量的变化。 结果　B组细胞分泌的TNF -α和IL -1β,IL - 18的mRNA表达显著高于正常对照A组 ,而C组细胞显著高于B组 ,D组却低于C组。LBP多抗显著减少LPS刺激的大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子TNF -α的分泌和IL - 1β ,IL - 18mRNA表达。 结论　LBP多抗可能降低LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后炎症因子表达 ,减少炎症因子分泌 ,对LPS炎症反应起减敏作用     

苦金片对脂多糖诱导巨噬细胞炎症反应的影响

目的 以脂多糖（LPS）刺激小鼠单核巨噬细胞建立炎症反应细胞模型,探讨苦金片对炎症反应的影响及可能机制。方法 细胞分为对照组、LPS组、苦金片组,LPS组细胞予LPS（终浓度1μg/ml）刺激12 h,苦金片组于LPS刺激后加苦金片（1 mg/ml）刺激4 h,对照组不予特殊处理。检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β（TGF-β）、自噬相关蛋白5(ATG5)、膜型微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）m RNA及TNF-α、caspase-3、LC3Ⅱ、p62蛋白。结果 与对照组比较,LPS组IL-6、TNF-α、TGF-β、ATG5、LC3Ⅱm RNA表达水平显著增加,差异有统计学意义（P <0.05）;与对照组比较,LPS组TNF-α、LC3Ⅱ、p62和caspase-3蛋白表达水平增加,差异有统计学意义（P <0.05）。苦金片组IL-6、TNF-α、TGF-β、ATG5、LC3Ⅱm RNA表达水平明显低于LPS组,差异有统计学意义（P <0.05）;苦金片组TNF-α、LC3Ⅱ、p62和Caspase-3蛋白表达水平明显...     

穿心莲内酯对巨噬细胞炎症因子表达的影响

目的研究穿心莲内酯对小鼠巨噬细胞氧化亚氮（NO）、肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）生成的影响。方法培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,分别加入脂多糖（lipopolysaccharide,LPS,终质量浓度1μg/mL）和不同浓度的穿心莲内酯（终浓度1、10、50μmol/L）进行干预,并设空白组和穿心莲内酯单独作用组作为对照。取培养24h细胞上清,用Griess法检测NO产量;用Elisa法检测TNF-α、IL-6浓度。结果与空白组比较,LPS明显促进了RAW264.7细胞NO、TNF-α、IL-6等炎症因子的生成;穿心莲内酯单独作用不影响炎症因子的表达,但穿心莲内酯能显著下调LPS诱导的炎症因子表达,与LPS组差异有显著性。结论穿心莲内酯可明显降低LPS诱导的巨噬细胞炎症因子表达,抑制炎症反应。     

骨髓间充质干细胞对巨噬细胞分泌炎症因子的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞对脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞分泌炎症因子IL-10、TNF-α的影响.方法 体外分离、培养、鉴定骨髓间充质干细胞与巨噬细胞,分PBS、BMSCs、Macrophage、Macrophage+ BMSC、BMSCs+ LPS、Macrophage+ LPS、Macrophage+BMSCs+LPS 7组进行细胞共培养实验.收集不同时间点培养基上清液,ELISA检测其炎症因子IL-10、TNF-α的含量.结果 B(BMSCs)组与E(BMSCs+LPS)组相比,IL-10与TNF-α的含量没有明显变化;F(Macrophage+LPS)组IL-10、TNF-α的含量均高于C组(Macrophage);G(Macrophage+BMSCs+LPS)组与F(Macrophage+LPS)组相比,TNF-α明显降低、IL-10明显升高.结论 BMSCs可以减轻LPS对巨噬细胞分泌炎症因子的刺激作用,减轻炎症反应的程度.     

聚岩藻多糖对小鼠巨噬细胞分泌炎症因子的影响及其机制

目的：探讨聚岩藻多糖对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌炎性因子的影响,并阐明其免疫调节作用。方法：取对数生长期RAW264.7细胞,分为对照组、LPS组和LPS+聚岩藻多糖组,采用CCK-8法检测各组细胞存活率,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组细胞培养上清中白细胞介素6 (IL-6)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、单核细胞趋化因子1 (MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白（MIP）-1α和MIP-1β水平。结果：与对照组比较,LPS组和LPS+聚岩藻多糖组细胞存活率明显升高（P<0.01）,细胞培养上清中IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β水平均明显升高（P<0.01）。与LPS组比较,LPS+聚岩藻多糖组细胞存活率明显降低（P<0.01）,细胞培养上清中IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β水平明显降低（P<0.01）。结论：聚岩藻多糖可抑制小鼠巨噬细胞对炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β分泌的影响,具有潜在的免疫调节作用。     

脂多糖诱导C57BL/6J小鼠急性炎症对听力损失的影响

目的 采用脂多糖(LPS)腹腔注射的方法诱导C57BL/6J小鼠机体产生急性炎症,观察急性炎症期小鼠听力情况,并分析其相关机制。方法 将C57BL/6J小鼠30只随机分为空白组、LPS组及对照组,每组10只,LPS组予以2.5 mg/kg的LPS,对照组输注相等体积的生理盐水,其余生活条件保持一致。注射LPS 3、7、15 d后,通过听性脑干反应(ABR)评估小鼠听力情况。冰冻耳蜗组织切片HE染色观察耳蜗组织形态学变化。ELASA方法观察小鼠体内TNF-α、IL-1β、IL-6的变化。同时观测小鼠饮水、饮食及体质量的变化。结果 与对照组比较,LPS组在注射3、7 d后的听力阈值均明显升高,P<0.05,但是注射15 d后两组听力阈值比较,差异无统计学意义,其余频率下阈值变化不明显。注射LPS 3 d后,LPS组的TNFα,IL-6及NF-κB水平明显高于对照组,P<0.05,IL-1β无明显变化。LPS组螺旋神经节细胞有丢失,血管纹部分空泡化,形态异常。但是,LPS不影响小鼠的饮食饮水及体质量。结论 LPS可以引发小鼠耳蜗急性炎症,造成听力损失,主要表现为高频听力损失。     

下调PALM3表达抑制脂多糖诱导的巨噬细胞炎性反应

目的 探讨抑制paralemmin-3（PALM3）表达对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肺泡巨噬细胞系（NR8383）炎性反应的影响。方法 将NR8383细胞并接种至6孔板中,待融合度达70%,加入0.5μg/ml LPS刺激12h,用免疫荧光检测细胞PALM3表达及亚定位;用0.5μg/ml LPS刺激NR8383细胞并在0、3、6、12、24和48h收集细胞提取总RNA,用RT-PCR法检测PALM3 mRNA;同前接种细胞至24孔板,待融合度达70%,将PALM3小干扰核糖核苷酸（siRNA）转染NR8383细胞（PALM3 siRNA转染组）,同时设立正常NR8383细胞组和对照转染组（转染control siRNA）,转染48h后,提细胞总蛋白用Western blot法检测PALM3蛋白水平;3组细胞给予LPS刺激12h,收集培养上清和核蛋白,用ELISA法检测培养上清中IL-8、IL-6的水平及核转录因子（NF-κB）转录活性。结果 PALM3分子在NR8383细胞中有表达,LPS可诱导PALM3表达;PALM3 siRNA转染后成功下调PALM3蛋白表达,予LPS刺激后,与正常细胞及对照转染组比较,PALM3 siRNA转染组培养上清中白介素-8（IL-8）和IL-6含量减少,PALM3 siRNA转染组细胞中NF-κB转录活性亦被抑制。结论 NR8383细胞中有PALM3表达,LPS可诱导NR8383细胞中PALM3的蛋白表达,下调PALM3表达可抑制LPS诱导的炎性反应。     

miR-203对LPS诱导的肺泡巨噬细胞释放炎症因子和氧化应激的影响

目的 研究miR-203对脂多糖(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞释放炎症因子和氧化应激的影响.方法 将肺泡巨噬细胞分为Control组(空白对照)、LPS组(LPS处理)、LPS+NC组(转染mimics control,LPS处理)、LPS+miR-203组(转染miR-203 mimics,LPS处理).采用qRT-P...     

RORα在脂多糖所致小鼠巨噬细胞炎症反应中的表达变化与作用实验研究

目的:探讨RORα在脂多糖所致小鼠巨噬细胞炎症反应过程中的表达变化与作用。方法:取小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs),加入100 ng/ml脂多糖(LPS)处理不同时间点后,利用荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞中炎症因子白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),以及RORα的转录水平变化,进一步利用Western blot检测RORα蛋白水平变化;分别采用RORα激动剂SR1078和拮抗剂SR3335预处理细胞24 h后,LPS处理2 h,利用ELISA法检测细胞上清中炎症因子IL-1β,TNF-α和IL-6的含量。结果:100 ng/ml LPS在不同时间点均可显著促进BMDMs炎症因子IL-1β和TNF-α的转录水平表达(P<0.05),而在LPS处理1～12 h显著抑制了RORα的转录水平(P<0.05),同时蛋白表达水平也明显降低(P<0.05)。与LPS处理组相比,SR1078预处理,可显著抑制炎症因子的释放,而SR3335进一步激活了细胞炎症因子的释放(P<0.05)。结论:RORα对脂多糖所致小鼠巨噬细胞炎症反应具有调节...     

磷脂酶A2抑制剂对内毒素诱导巨噬细胞释放肿瘤坏死因子的影响

磷脂酶Ａ２抑制剂对内毒素诱导巨噬细胞释放肿瘤坏死因子的影响崔忻１郝秀华２颜光涛２关键词磷脂酶Ａ类；巨噬细胞；内毒素；肿瘤坏死因子中国图书资料分类法分类号Ｒ３９２．１１材料和方法１．１材料巨噬细胞由小白鼠腹腔渗出液中分离获得。实验动物：小白鼠２６只，雌...     

补阳还五汤对氧化应激诱导心肌细胞凋亡及5-LOX表达的影响

目的探讨补阳还五汤对氧化应激诱导乳鼠心肌细胞凋亡及5脂氧合酶(5-LOX)表达的影响。方法 SD乳鼠心肌细胞原代培养,不同剂量补阳还五汤预处理24 h后过氧化氢(H2O2)诱导心肌细胞氧化损伤。采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况,Western-blot检测5脂氧合酶(5-LOX)、Bax和Bcl-2的表达。结果 MTT结果显示,与对照组及补阳还五汤组比较,H2O2组心肌细胞活力显著降低(P0.01);与H2O2组相比,补阳还五汤组心肌细胞活力显著提高(P0.01)。流式细胞仪分析显示,H2O2组心肌细胞凋亡率为(19.47±1.31)%,明显高于对照组的(1.36±2.30)%,差异有统计学意义(P0.01);补阳还五汤低、中、高剂量组的细胞凋亡百分率分别为(13.25±2.84)%、(11.50±3.43)%、(9.94±4.01)%,明显低于H2O2组(19.47±1.31)%,差异有统计学意义(P0.01)。Western-blot结果显示,H2O2组心肌细胞Bcl-2蛋白表达比对照组及补阳还五汤组减少,5-LOX及Bax蛋白表达比对照组及补阳还五汤组高,差异均有统计学意义(P0.01)。不同剂量的补阳还五汤组Bcl-2蛋白表达高于H2O2组,5-LOX及Bax蛋白表达比H2O2组少(P0.01)。结论补阳还五汤能显著抑制氧化应激诱导的乳鼠心肌细胞凋亡,并且呈剂量依赖性,补阳还五汤抑制心肌细胞凋亡的作用可能与抑制5-LOX表达有关。     

构建LPS诱导的急性炎症小鼠模型用于IDO1抑制剂药效动力学评价

 目的 构建急性炎症小鼠模型用于吲哚胺2, 3-双加氧酶1（indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1）抑制剂的药效动力学评价。方法 采用尾静脉注射或腹腔注射给予小鼠脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）,构建IDO1活性上调的急性炎症小鼠模型。模型小鼠灌胃给予IDO1抑制剂L-1-甲基色氨酸（L-1-methyl-tryptophan,L-1-MT）或TQ016,给药后不同时间点取血,HPLC检测小鼠血清中色氨酸（tryptophan,Trp）和犬尿氨酸（kynurenine,Kyn）含量,计算Kyn/Trp比值。采用IDO1活性上调引起的Trp浓度降低、Kyn浓度升高及Kyn/Trp比值增大,来评价IDO1抑制剂L-1-MT和TQ016对急性炎症小鼠血清中上调的IDO1活性的抑制效果。结果 尾静脉注射0.66 mg/kg LPS或腹腔注射5 mg/kg LPS均显著上调小鼠血清中IDO1活性。100 mg/kg L-1-MT在灌胃给药4 h后显著抑制模型小鼠血清中上调的IDO1活性。100 mg/kg TQ016在灌胃给药1、6、12、24和30 h后均显著抑制模型小鼠血清中上调的IDO1活性。TQ016呈剂量依赖性抑制模型小鼠血清中上调的IDO1活性。结论 LPS诱导的急性炎症小鼠模型适用于IDO1抑制剂的药效动力学评价。IDO1抑制剂TQ016具有良好的IDO1活性抑制效果。     

巨噬细胞移动抑制因子及巨噬细胞在糖尿病大鼠肾脏的表达及其意义

目的研究糖尿病大鼠肾组织巨噬细胞移动抑制因子(MIF)蛋白和巨噬细胞标记抗原(ED-1)以及肾组织MIF与ED-1的相关关系,探讨巨噬细胞(ED-1 细胞)与MIF在糖尿病大鼠肾脏的表达及其意义。方法将实验动物分为正常对照组大鼠16只(A),糖尿病大鼠8周组8只(B1),糖尿病大鼠16周组8只(B2)。分别于8周、16周后检测各组大鼠尿白蛋白排泄率、内生肌酐清除率、血糖、血脂、HE及PAS染色观察肾脏病理改变,采用微波免疫组织化学染色及双标记技术检测肾组织中MIF及ED-1 细胞的表达。将MIF在糖尿病大鼠肾脏组织中的表达水平与巨噬细胞浸润、肾脏病理改变、肾功能损害的程度进行相关性研究。结果MIF在正常肾组织中基本不表达,在糖尿病大鼠肾组织高表达正常大鼠肾组织基本未见ED-1 细胞分布,糖尿病大鼠肾脏组织中明显增多,ED-1 细胞在肾组织分布与MIF表达明显相关,且与肾小管间质病变程度及血肌酐显著相关。结论MIF尤其巨噬细胞参与了糖尿病大鼠肾脏病变的免疫病理损伤,且巨噬细胞浸润糖尿病肾病(DN)肾组织可能与MIF介导有关。     

姜黄素对哮喘大鼠肺内粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子表达及气道炎症的影响

目的 通过观察姜黄素对哮喘大鼠肺泡灌洗液总细胞数及嗜酸性粒细胞（Eos）计数、肺组织粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）表达的影响,探讨姜黄素对哮喘的治疗作用。方法 36只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）、姜黄素治疗组（C组）各12只,采用卵蛋白（OVA）致敏大鼠哮喘模型,观察三组动物哮喘发作症状、肺泡灌洗液总细胞数及嗜酸性粒细胞计数情况及原位杂交方法检测肺组织中GM-CSF mRNA含量变化。结果 B组大鼠哮喘发作症状最明显,C组大鼠症状轻,A组无症状。B组肺泡灌洗液总细胞数及嗜酸性粒细胞计数均明显高于其余两组;C组明显少于B组;A组最少。肺组织中GM-CSF mRNA表达A组微弱表达,C组较强,B组表达最强。结论 姜黄素可抑制哮喘大鼠的气道炎症,其作用机制可能是通过抑制GM-CSF的表达而导致嗜酸性粒细胞生成减少及存活时间缩短来实现。     

IL-6下调血管内皮细胞组织因子抑制物表达

目的:观察IL-6对脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达组织因子途径抑制物(TFPI)的影响.方法:应用胰酶消化HUVECs并进行传代培养,用生长良好的第2、3代细胞进行试验.同时应用CCK-8测定不同浓度的IL-6(0.125～2.0 ng/ml,实验组)刺激后细胞活性变化,对照组给予培养液;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞内TFPI mRNA水平.结果:与对照组相比,IL-6(0.125～0.5 ng/ml)对细胞活性没有显著影响(P>0.05);IL-6增加到1 ng/ml后,作用12 h后细胞活力开始下降.IL-6(0.5 ng/ml)作用6～24 h显著下调细胞TFPI mRNA表达(P<0.05),6 h时抑制效果最强(TFPI mRNA/GAPDH mRNA均值仅为0.191),以后抑制效应渐减弱,48 h达到正常水平(TFPI mRNA/GAPDH mRNA均值为0.399).结论:提示IL-6(0.5 ng/ml)对HUVECs的活性不造成直接的影响,同时IL-6(0.5 ng/ml)在6～24 h内可抑制HUVECs的TFPI mRNA表达而诱发凝血系统失衡,这可能与急性炎性反应时相的血液凝固和血栓形成有关.     

激肽释放酶基因过表达对5/6肾切除大鼠肾脏细胞凋亡和炎症的影响和机制

目的探讨凋亡和炎症在人组织型激肽释放酶基因（hum an tissue kallire in,HK）肾脏保护中的作用和机制。方法健康雄性Wistar大鼠32只,随机分为假手术组（sham）、手术组（operation）,手术＋绿色荧光蛋白（GFP）尾静脉注射组（GFP组）以及手术＋人组织型激肽释放酶基因组（HK组）。尾静脉注射病毒后3周,采取5/6肾切除术构建动物模型。术后第12周处死动物,肾组织石蜡切片行HE染色和M asson染色检测肾脏结构和胶原沉积。Tunnel染色和Caspase-3活性测定以检测凋亡细胞。Western blot技术检测肾组织Bcl-2、Bc l-xl、Bax、VCAM-1和MCP-1表达水平。结果 HE染色显示HK过表达明显抑制了5/6肾切除大鼠肾小管扩张和组织节段性硬化。Masson染色表明HK明显抑制了5/6肾切除大鼠肾脏胶原沉积（P〈0.05）。Tunnel染色和Caspase-3活性测定结果显示HK显著减少肾脏细胞的凋亡（P〈0.05）。W estern b lot显示HK明显降低了促凋亡蛋白Bax和炎症相关蛋白MCP-1和VCAM-1的表达,上调了凋亡抑制蛋白Bc l-2和Bc l-xl的表达（P〈0.05）。结论 HK基因的肾脏保护作用至少部分是通过抑制细胞凋亡和炎症。机制至少包括下调促凋亡蛋白Bax和上调凋亡抑制蛋白Bcl-2和Bcl-xl的表达,抑制炎症相关蛋白MCP-1和VCAM-1的表达。     

肾素抑制剂对兔动脉粥样硬化及斑块炎症的影响

目的 探讨肾素抑制剂阿利吉仑的抗动脉粥样硬化(As)作用及对As炎症的影响.方法 通过高脂饲养建立兔As模型,24只新西兰大白兔随机分为单纯高脂组(n=8)、阿利吉仑组(n=8)和正常对照组(n=8).单纯高脂组以高脂饲料(1.5％胆固醇+5％猪油)喂养,阿利吉仑组在高脂饲料喂养的基础上加阿利吉仑(25 mg·kg-1 ·d-1)喂养,正常对照组以常规颗粒饲料喂养.分组喂养16周,处死动物取胸主动脉标本行组织形态学检查,免疫组织化学法检测斑块内巨噬细胞和平滑肌细胞标志物(RAM11和α-actin)及植物血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达,以阳性面积表达率表示.结果 油红O染色组织学检查显示:阿利吉仑组的脂质斑块面积为( 34.38±2.07)％,明显小于单纯高脂组的(47.12±4.16)％(P＜0.01).免疫组织化学检测显示:阿利吉仑组斑块内RAM11和LOX-1蛋白表达阳性细胞百分比分别为(21.13 ±2.10)％和(11.38±1.69)％,均明显小于单纯高脂组的(30.63±2.26)％和(16.75±1.67)％(P＜0.01,P＜0.05).单纯高脂组和阿利吉仑组斑块内均可见α-actin表达阳性的梭形平滑肌细胞,主要分布于内膜及中膜.结论 阿利吉仑抑制了As的进展,具有抗炎症作用.     

尼古丁对脂多糖诱导的大鼠小胶质细胞激活和白细胞介素6表达的影响

目的:观察尼古丁对脂多糖(LPS)诱导的原代大鼠脑皮层小胶质细胞激活的影响及对细胞因子白细胞介素6(IL-6)表达的影响,探讨尼古丁在PD中的可能作用机制.方法:培养原代大鼠脑皮质胶质细胞,纯化小胶质细胞,用尼古丁预处理30 min,再加入LPS,采用ELISA检测小胶质细胞不同时间点分泌IL-6的水平及免疫细胞化学检...     

大鼠闭合性脑损伤后5-LOX、c-fos蛋白、NSE的表达及表达时相的研究

目的探讨5-脂氧合酶(5-LOX)、c-fos蛋白及神经元特异性烯醇化酶(NSE)在闭合性脑损伤后不同时间点的表达情况及其意义。方法 Wistar大鼠55只随机分成正常对照组、假损伤组及损伤后0.5h组、1h组、2h组、4h组、8h组、12h组、24h组、48h组、72h组。用免疫组化(SP)法检测5-LOX、c-fos蛋白和ELISA检测NSE在闭合性脑损伤后不同时间点的表达情况。结果 5-LOX免疫阳性细胞在损伤后8h明显增高,24h达到高峰,然后逐渐降低,损伤72h后仍高于正常值;c-fos蛋白于损伤0.5h后表达明显增高,8h达到高峰,24h降至正常值;血清中的NSE于损伤2h候表达增高,24小时达到高峰,损伤72h后仍高于正常值。结论大鼠闭合性脑损伤后5-LOX、c-fos蛋白及血清中的NSE表达均上调,且各自具有时间规律,有希望为法医学中的颅脑损伤时间的推断提供参考。