单克隆抗体夹心斑点免疫金银染色法诊断恶性疟的初步研究

用单克隆抗体(McAb)夹心斑点免疫金银染色法(Dot-IGSSA),对采自海南省的30价原虫血症范围为0.015-0.58％的恶性疟病人血和30份正常人血进行了检测。当用McAb 11G_5、13A_2、13A_1分别与金标记McAb 14D_9夹心时,其阳性检出率分别为96.7％、93.3％和93.3％,假阳性反应约为3.3％,最低可检测出约0.0001％的疟原虫血症。其中11G_5、13A_1分别与金标记14D_9夹心时,对体外培养的云南和安徽的恶性疟红内期抗原呈阳性反应,但其McAb与诺氏疟原虫和伯氏疟原虫均无交叉反应。McAb 13A_1与14D_9夹心时,对食蟹猴疟原虫和间日疟病人感染血中的疟原虫抗原有部分交叉反应。     

高脂血清及异搏定对培养的动脉平滑肌细胞增殖周期的影响

高脂血清取自实验性高脂血症的家兔。平滑肌细胞(SMC)取自家兔主动脉,并用含20％小牛血清的培养基培养。用流式细胞术(FCM)对SMC增生各期的DNA含量进行测定,研究5％高脂血清在24、36和48小时,0.5mg/L异搏定在48小时对SMC周期进程的影响。结果表明,高脂血清可使更多的SMC从G_0/G_1期进入S期及G_2/M期,从而促进SMC增生;异搏定则抑制上述过程。     

用肝癌细胞系培养伯氏疟原虫红外期

为了进一步探讨疟原虫红外期培养,以类似肝细胞的肝癌细胞系(Hep G2-A16)培养伯氏疟原虫红外期。子孢子悬液的制备:取感染伯氏疟原虫 (ANKA株)后18～21天的斯氏按蚊唾腺,置于经加热灭活(56℃×30min)的鼠血清中(每5对唾腺加10μl鼠血清),用18G针反复抽吸捣碎备用。培养:将长有Hep G2-A16的盖玻片置于含10%小牛血清的MEM培养液中。另加50 IU/ml青霉素,50μg/ml链霉素,于37℃及含5%CO_2气体的条件下培养2～3天。然     

供体内研究用的恶性疟原虫和间日疟原虫红内期的冰冻保存法

曾经报道不用保护剂或用甘油或二甲基亚砜作保护剂冰冻保存恶性疟原虫红内期。本文报道用含7.5%甘油的Alsevers溶液低温保存恶性疟原虫和间日疟原虫红内期的结果。这种新的保护剂含有9份Alsevers液和1份甘油。以1.5ml分装于一种特制的小管内,高压消毒后,贮存5℃备用。冰冻时每管加入0.5ml抗凝含虫猴血,混匀,先置于含酒精的干冰中速冻,而后将小管贮存于-70℃冷冻箱,以供体内研究用。复苏时,用自来水冲洗解冻。用这种方法冰冻保存5株恶性疟原虫和2株间日疟原虫红内期均获成功。其中恶性疟原虫越南Oak Knoll株和间日疟原虫溪桑     

大黄素在体外诱导人肝癌Hep3b细胞凋亡的作用及机制

目的了解大黄素在体外诱导人肝癌Hep3b细胞凋亡的作用及机制。方法采用MTT法测定不同浓度大黄素对人肝癌Hep3b细胞的抑制作用,不加大黄素作为对照组;采用流式细胞仪检测大黄素作用后的Hep3b细胞的增殖周期,计算细胞增殖指数(PI);Western印迹法检测Hep3b细胞凋亡相关蛋白AKT、Bcl-2、p-AKT和酶切caspase-3的相对表达量。结果 1、5、25、125μmol/L大黄素作用24 h后的OD值均低于对照组(t=1.694、6.129、13.400、34.739,P均<0.05);随着大黄素浓度的升高,它对Hep3b细胞的抑制率呈上升趋势;作用24 h时,大黄素对Hep3b细胞的半抑制浓度(IC50)为21.08μmol/L。25、125μmol/L大黄素作用24、36 h后,Hep3b细胞的G_0/G_1期比例增高(P<0.05),S期比例、PI降低(P<0.05),因而表现出浓度、时间依赖性。大黄素作用时间增加后,抑制细胞凋亡的Bcl-2(24 h:t=2.610;36 h:t=5.713)、p-AKT蛋白(12 h:t=2.075,24 h:t=5.157;36 h:t=12.926)的表达量呈下降趋势(P均<0.05),促进细胞凋亡的酶切caspase-3蛋白的表达量呈上升趋势(6、12、24、36 h:t=2.487、3.327、5.276、8.137,P均<0.05)。结论大黄素在体外通过诱导细胞凋亡而抑制人肝癌Hep3b细胞的增殖,大黄素是通过AKT信号途径诱导Hep3b细胞凋亡。     

中药姜黄素对肿瘤细胞周期及自由基的影响

姜黄素是中药姜黄根茎中的主要成份,具有抗炎、抗氧化和抗肿瘤等药理作用。早期研究认为,姜黄素能抑制体外淋巴瘤细胞的生长和体内由TPA、PMA、AOM等诱导的动物肿瘤的形成。本文探讨了姜黄素对人结肠癌细胞LoVo体外生长、细胞周期及其细胞内自由基的影响。MTT结果表明姜黄素对LoVo细胞具有细胞毒作用。20μM、40μM浓度的姜黄素对细胞的抑制率分别是为41.9％、78.1％。5-10μM浓度抑制作用小,姜黄素对LoVo细胞的IC_(50)为21.8μM。姜黄素处理24h时,主要使细胞阻滞于S,G_2 M期,使此期细胞比例增加。而G_(0/1)期的细胞比例减少。处理48h后,G_2 M期的细胞比例反而降低,部分可能由于G_2 M期细胞并发凋亡所致。姜黄素对肿瘤细胞内自由基形成的抑制作用结果表明,浓度大于10μM的不同姜黄素处理组和对照组比较MDA含量明显下降(p<0.01),各处理组间则无显著性差异(p>0.05),而5μM姜黄素无抑制作用。结论:姜黄素可抑制结肠癌LoVo细胞的生长。其机制可能与干扰细胞周期及抑制细胞内自由基的生成有关。     

用γ射线照射致弱的红内期及红外期疟原虫疫苗接种鸡以抵抗鸡疟原虫感染

本文企图进一步研究γ射线对鸡疟红内期的作用,确定γ射线照射红内期和红外期疟原虫在鸡诱发的保护性兔疫程度,并找出这种免疫是否为期的特异性。作者采用一日龄的白莱克鸡,疟原虫为鸡疟原虫8B,用连续血液传代保种,每月经埃及伊蚊周期性转种,红内期疟原虫取自稀释浓度为每毫升10~7虫数的小鸡血液。红外期(EE)疟原虫采用经孢子体感染的小鸡的脑悬液,钴~(60)照射强度为2Kci,产生γ射线平均能量为1.25MeV照射量。小鸡4周内,     

HBx 基因转染对人肝癌细胞系 HepG2细胞增殖的影响

目的探讨HBx基因转染对人肝癌细胞系Hep G2细胞增殖的影响。方法用脂质体转染法将HBx真核表达载体pc DNA3/HBx瞬时转入Hep G2细胞(转染HBx细胞组);以转染空载体细胞组和未转染Hep G2细胞组作为对照。以流式细胞仪及荧光显微镜观察各组肝癌细胞增殖情况。结果转染HBx细胞组的Hep G2肝癌细胞生长较其他两组密集。流式细胞仪检测显示转染HBx细胞组的Hep G2细胞较多处于增殖期(G2期细胞占5.68%)。荧光显微镜图像显示转染HBx细胞组处于增殖期的Hep G2细胞比率为47%,转染空载体细胞组为28%,未转染Hep G2细胞组为25%;转染HBx细胞组Hep G2细胞处于增殖期的比率与其他两组比较有统计学差异(P均<0.05)。结论 HBx基因转染能促进人肝癌细胞系Hep G2细胞增殖。     

柠檬酸钠与三氧化二砷联合应用对胃癌SGC-7901细胞的作用

目的探讨柠檬酸钠(sodium citrate,CT)与三氧化二砷(As_2O_3,,AS)联合应用对胃癌SGC-7901细胞凋亡及作用机制。方法用sodium citrate(终浓度为5 mmol/L,CT5)和As_2O_3(终浓度依次为5 μmol/L,AS5)处理体外传代培养的胃癌SGC-7901细胞株。应用DAPI细胞核染色和流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化;RT-PCR法观察抗凋亡相关基因bcl-2表达的变化。结果 sodium citrate与As_2O_3联合应用相对于单用sodium citrate或As_2O_3可显著提高诱导胃癌细胞凋亡率(P0.05);与空白组相比,用药后G_0/G_1期细胞比例下降,G_2/M期细胞比例上升,细胞周期阻滞于G_2/M期,抗凋亡基因bcl-2表达明显下降。结论 sodium citrate与As_2O_3联合应用具有协同抗胃癌细胞的作用,其机制可能与细胞周期阻滞、增强诱导胃癌细胞凋亡以及调控凋亡相关基因的表达有关。     

丙型肝炎病毒抗原在人肝癌细胞系Hep3B中的表达

目的:研究HCV-NS3和NS5在体外感染的人肝痛细胞系Hep3B中的表达情况。方法:用定量的HCV RNA阳性血清感染Hep3B细胞,应用SABC免疫组化法检测HCV-NS3和HCV-NS5抗原在其感染细胞中的表达情况。结果:在感染后的72小时,第1、2、3和4用的Hep3B细胞膜、细胞浆或细胞核上发现HCV-NS3和HCV-NS5抗原的阳性信号。结论:HCV能够在Hep3B细胞系中表达NS3和NS5抗原。     

急性白血病流式细胞计DNA含量测定及其意义

本文用流式细胞计对34例成年初治急性白血病人,16例完全缓解病人及20例骨髓大致正常者进行了骨髓细胞DNA含量测定,并结合临床进行了探讨.结果表明:初治病人骨髓细胞G_1/G_0期77.49±7.76％,S期13.91±5.93％,G_2/M期3.75±1.85%.S期比值在急淋病人和急非淋病人之间无显著差异(P=0.8)。初治病人骨髓细胞S期比值低于缓解后病人(15.91±2.75)及骨髓大致正常者(16.42±3.52).治疗前S期比值低时缓解率低,诱导化疗时间长,但缓解后维持时间较长;S期比值高缓解率高且总体生存期长.非整倍体出现率32％,这类病人诱导化疗效果较好.     

蚊期和红内期持续表达绿色荧光蛋白的重组约氏疟原虫

目的 构建蚊期、红内期持续表达绿色荧光蛋白（GFP）的约氏疟原虫BY265株。 方法 用SacⅡ酶酶切含有伯氏疟原虫ssu-rrna基因和GFP基因的重组质粒pl0017使之线性化,用电转化的方法将该重组质粒转化入红内期约氏疟原虫BY265株,获BY265-EGFP重组疟原虫,尾静脉注射感染昆明小鼠,24～30 h后用乙胺嘧啶饲喂小鼠5～6 d,鼠尾静脉采血涂片观察原虫感染率。以疟原虫基因组DNA为模板,PCR鉴定转染重组质粒pl0017的约氏疟原虫。斯氏按蚊叮咬感染BY265-EGFP重组疟原虫的小鼠,按蚊血餐后第7天和第16天解剖蚊胃和唾液腺,观察疟原虫能否在蚊体内正常发育。 结果 荧光显微镜观察到呈绿色荧光的红内期各期形态正常的约氏疟原虫。PCR检测结果表明,GFP和ssu-rrna基因已成功整合到约氏疟原虫基因组中。按蚊感染实验证实重组BY265株能在蚊体内正常发育。 结论 构建了蚊期、红内期持续表达绿色荧光蛋白的约氏疟原虫。     

左归降糖清肝方含药血清对脂肪酸孵育的HepG2细胞脂肪变性的影响

目的探讨左归降糖清肝方含药血清对脂肪酸孵育的人肝细胞株(Hep G2)细胞内甘油三酯(TG)含量的影响。方法用混合脂肪酸孵育的Hep G 2细胞建立细胞脂肪变性模型;将实验分为正常组,模型组,5%、10%、15%含药血清组,油红O染色法检测细胞内脂质沉积,同时定量检测细胞内TG含量。结果 0.5 mmol/L混合脂肪酸孵育Hep G2细胞24 h,可诱导细胞内TG大量沉积,而10%、15%左归降糖清肝方含药血清可抑制脂肪酸这一效应,使细胞内TG含量明显下降(P0.01)。结论左归降糖清肝方含药血清可改善脂肪酸诱导的Hep G2细胞脂肪变性。     

肝移植围手术期并发症的处理

目的探讨肝移植围手术期并发症的发生规律及处理方法。方法回顾性分析44例肝移植病例的并发症及处理。结果32例发生肺部细菌性感染(72％),其中13例合并真菌感染(29．5％)．死亡2例(15．3％);急性肾功能不全(ARF)9例(20．4％),7例须连续肾脏替代(CRRT)治疗,死亡3例(33．3％);大量胸腔积液14例(31．8％),无死亡;急性排斥反应5例(11．3％),无死亡;腹腔内出血5例(11．3％)．死亡2例(40％);胸腔内出血2例(4．5％),无死亡;T管脱出2例(4．5％)．死亡1例(50％)。结论肝移植围手术期死亡主要与并发症有关．早期诊断与处理并发症,是提高肝移植存活率的重要措施。     

恶性疟原虫红内期疫苗研究进展

T淋巴细胞在疟疾免疫中起重要作用,因此在疫苗设计时应注重掺入T细胞表位。活的减毒细菌或病毒载体在携带异源抗原和诱生细胞免疫方面具有重要作用。红内期MSA1,MSA2,RESA和EBA-175抗原等被列为重要疫苗候选抗原,它们的一些保护性表位也已鉴定。SPf.66合成肽疫苗目前受到很大关注,并已进入人体临床试验。本文还展望了红内期疫苗的发展前景。     

间日疟原虫红内期体外培养研究及前景

本世纪初至今,疟原虫红内期体外培养研究经历了几个重要转折和研究发展的历程。本文综述了人间日疟原虫及相关种的研究状况,并对间日疟原虫红内期体外培养中的主要障碍作了讨论。疟原虫红内期体外培养的回顾疟原虫红内期的体外培养始于本世纪初,Ｂａｓｓ等［１］（１９...     

阿托伐他汀调控MMP-9、Cleaved Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达对胃癌细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的探讨阿托伐他汀对胃癌细胞增殖、周期和凋亡的影响及其机制。方法取对数生长期的胃癌SGC-7901细胞,加入终浓度为0、20、60和100μmol/L的阿托伐他汀,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,Western blotting检测细胞中MMP-9、Cleaved Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果阿托伐他汀能够呈时间-浓度依赖性抑制SGC-7901细胞增殖;阿托伐他汀作用48 h后,G_0/G_1期细胞所占比例、细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3蛋白和Bax蛋白的表达浓度依赖性升高,S期细胞比例、G_2/M期细胞比例、MMP-9蛋白和Bcl-2蛋白浓度依赖性降低。结论阿托伐他汀能够抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡,其作用机制可能与诱导细胞G_0/G_1期阻滞、上调Cleaved Caspase-3和Bax蛋白和下调MMP-9和Bcl-2蛋白有关。     

伯氏疟原虫类巨噬细胞移动抑制因子在红内期的表达

目的制备小鼠抗伯氏疟原虫类巨噬细胞移动抑制因子(PbMIF)的抗体,并检测PbMIF在伯氏疟原虫红内期的表达。方法用纯化的PbMIF蛋白免疫BABL/c小鼠,制备小鼠抗PbMIF的抗血清。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体的效价,用免疫印迹(Western blotting)-二氨基联苯胺(DAB)底物显色法检测抗体的特异性。采用免疫印迹增强化学发光(ECL)的方法,用上述制备的抗血清检测PbMIF在红内期伯氏疟原虫的表达情况。结果ELISA测得小鼠抗PbMIF抗体的效价>1∶106,Western blotting显示该抗体可与原核表达的PbMIF蛋白特异性结合。ECL结果表明感染的红细胞中存在PbMIF。结论成功制备了小鼠抗PbMIF的抗体。红内期伯氏疟原虫表达PbMIF。     

肝病与血液学的关系及其研究进展

近年来由于建立了 Hep G_2细胞株,明确肯定肝脏合成多种凝血和抗凝血蛋白。肝病时凝血因子不仅有量的变化,而且也常有质的异常;红细胞不仅有数量的改变,也可发生代谢异常。某些血液病对肝脏也可有特异性影响。