家蝇幼虫抗菌蛋白诱导黑色素瘤A375细胞凋亡的探讨

目的 观察家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤A375细胞凋亡的诱导，探讨其抗肿瘤作用机制。方法 流式细胞仪测定家蝇幼虫抗菌蛋白对细胞周期和细胞凋亡的影响；HE染色法观察细胞凋亡形态，并测定细胞凋亡指数（AI）。结果 在0．10％组A375的G／M期升高，S期降低。0．50％组G0／G1期、G2／M期和AI／PI（增殖指数）显著增加，S期及PI明显减少。2．50％组S期、PI、AI／PI及细胞凋亡率（Ap）显著增高，G0／G1期大大减少。12．50％组G2／M期、PI、AI／PI及Ap显著增高，G0／G1期和S期明显下降。结论 家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤A375细胞有明显的抑杀作用；家蝇幼虫抗菌物质可能系通过细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡而抑制黑色素瘤A375细胞生长。     

家蝇幼虫抗菌蛋白对子宫内膜癌细胞生长影响

目的 探讨家蝇幼虫抗菌蛋白对子宫内膜癌细胞(JEC)的影响.方法 细胞计数法、四甲基偶氨噻唑蓝(MTT)法测定家蝇幼虫抗菌蛋白对JEC细胞生长的影响;MTT法测定家蝇幼虫抗菌蛋白对正常人牙周膜细胞生长的影响;苏木素一伊红(HE)染色法观察细胞凋亡,并计算细胞凋亡指数(AI).结果 高浓度组JEC细胞数及吸光度(A)值明显降低,细胞增殖抑制率随浓度的增加而增大;各浓度组正常人牙周膜细胞的A值和细胞增殖抑制率与对照组比较差异均无统计学意义;HE染色见细胞凋亡,各浓度组AI均明显高于对照组.结论 家蝇幼虫抗菌蛋白可能是通过诱导细胞凋亡来抑制JEC细胞生长.     

家蝇幼虫抗菌蛋白的抗菌特性及其组成

目的观察不同诱导源诱导家蝇幼虫产生抗菌蛋白的抗菌特性及其蛋白组分.方法取5种诱导源诱导后提取抗菌蛋白,用不同细菌进行抑菌实验,观察5种诱导源诱导组抗菌蛋白的抗菌特性;5种诱导源诱导组抗菌蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,观察抗菌蛋白的组分变化.结果各诱导组产生的抗菌蛋白均能抗多种G＋菌、G-菌和耐药菌株,但对不同细菌的抗菌活性有所差别.各诱导组抗菌蛋白中有2条电泳带与对照组完全相同,但含量高于对照组;各诱导组与对照组比较均出现不同的新的蛋白带.结论家蝇幼虫诱导后产生的抗菌蛋白抗菌谱广;不同诱导源可诱导家蝇幼虫产生相同蛋白及不同的新蛋白.     

家蝇幼虫抗菌蛋白的诱导及抗菌特性

目的用不同诱导源诱导家蝇幼虫,观察抗菌蛋白产生的规律及其抑菌特性,为进一步研究家蝇幼虫抗菌蛋白的产生及应用提供实验依据.方法用4种诱导源诱导后不同时间的组织匀浆提取抗菌蛋白进行抑菌实验,观察不同诱导源诱导后抗菌蛋白产生的高峰时间及各诱导组抗菌蛋白的抑菌特性.结果各诱导组抗菌蛋白的抑菌活性明显高于对照组,各诱导组抗菌蛋白的产生在诱导后36～48h达高峰;各诱导组产生的抗菌蛋白均能抑制几种革兰阴性菌、一种革兰阳性菌和耐药菌株,但对不同细菌的抑菌活性有差别.结论不同诱导源诱导家蝇幼虫后抗菌蛋白产生的高峰时间不同、产生的抗菌蛋白抗菌谱广.     

不同诱导源诱导家蝇幼虫抗菌蛋白效果的比较

目的比较5种诱导源所诱导产生家蝇幼虫抗菌蛋白的抗菌活性,观察不同诱导源对家蝇幼虫抗菌蛋白产生的诱导效果.方法用金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、大肠埃希菌脂多糖、紫外线及热诱导家蝇幼虫,在诱导后不同时间提取抗菌蛋白进行抑菌实验,观察不同诱导源诱导后抗菌蛋白产生的高峰时间,并比较各诱导组高峰时间产生抗菌蛋白的抗菌活性.结果各诱导组诱导家蝇幼虫产生抗菌蛋白达最大活性时间为诱导后36～48 h（热诱导后家蝇幼虫很快化蛹,未观察抗菌蛋白产生高峰时间）;金黄色葡萄球菌诱导后的抗菌蛋白抗菌活性最佳,热诱导后的抗菌蛋白抗菌活性也较未诱导组好.结论各诱导源诱导后抗菌蛋白产生的高峰时间不同;细菌诱导的抗菌蛋白抑菌效果最好,热诱导也是一种较理想的诱导方法.     

诱导家蝇幼虫抗菌蛋白的提取及动力学研究

目的 比较两种方法提取家蝇幼虫抗菌蛋白抑菌活性，并观察两种诱导源所诱导家蝇幼虫血淋巴中抗菌蛋白产生的动力学变化。方法 用金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌诱导家蝇幼虫，在诱导后12，24，36，48，60h收集家蝇幼虫，80℃热水处死，分别用血淋巴、组织匀浆提取抗菌蛋白后进行抗菌活性的测定。结果 用组织匀浆提取的抗菌蛋白抑菌效果明显好于血淋巴；金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌诱导家蝇幼虫产生抗菌物质达最大活性时间分别为诱导后48，36h。结论 用组织匀浆提取家蝇幼虫抗菌蛋白是一种较好的方法；诱导后36～48h的抗菌蛋白活性最大。     

家蝇幼虫中与抗菌功能相关的蛋白和多肽的分析

目的　研究家蝇幼虫体内与抗菌功能相关的蛋白和多肽。方法　对家蝇 3龄幼虫进行针刺、带菌针刺、热激、超声 4种处理 ,于处理后 6、16、2 4、4 8、6 5h分别收集提取耐热水溶蛋白 ,比浊法测定抗菌活性 ,经逐步回归分析确定抗菌相关蛋白和多肽。结果　 4种处理均能诱导家蝇幼虫产生抗菌物质 ,其中表观分子量为 2 0kDa、2 2kDa的蛋白对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌均有抗菌作用 ,13kDa、16kDa、2 6kDa蛋白只对上述两种菌中的一种有作用 ,37kDa、4 4kDa的蛋白对抗菌作用具有显著负贡献。结论　家蝇幼虫经过诱导后 ,会有多种与抗菌活性相关的蛋白和多肽开始表达或加强表达 ,它们彼此合作 ,共同建立一个完整的防御体系。     

有机锗GeM_(10)对体外培养黑色素瘤细胞DNA合成的抑制作用

ＧｅＭ１０是一种抗癌生物碱——金属配位药物。动物试验发现ＧｅＭ１０对实验肿瘤Ｓ１８０肉瘤有抑制作用，能明显延长艾氏腹水癌药瘤小鼠的存活时间。本实验用体外细胞培养技术检测了ＧｅＭ１０对Ａ３７５黑色素瘤细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入的影响，结果发现：ＧｅＭ１０能抑制Ａ３７５黑色素瘤细胞ＤＮＡ合成（Ｐ＜０．０１），浓度为１８０μｇ／ｍｌ时抑制率最大，可达７３％（Ｐ＜０．０１）；作用时间２４ｈ，各浓度ＧｅＭ１０抑制效果最强。该实验结果提示，ＧｅＭ１０可以通过对肿瘤细胞的直接抑制作用而产生抗癌活性     

家蝇幼虫血淋巴纯化蛋白对Hela肿瘤细胞抑制作用的形态学观察

目的 研究家蝇幼虫血淋巴纯化蛋白(anticancer protein from Musca domestica larva hemolymph,MAC-1)对体外培养的人官颈癌Hela细胞抑制作用引起的形态学改变.方法 应用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法、光学显微镜、HE和吖啶橙(AO)染色、透射电镜(SEM)的方法检测MAC-1对体外培养的人宫颈癌Hela细胞的抑制作用及形态学改变.结果 MAC-1对人宫颈癌Hela细胞株的增殖抑制作用呈剂量依赖性,同时呈时间依赖性.MAC-1 12.5 μg/ml作用12h后在倒置显微镜、HE及AO染色和透射电镜均观察到典型细胞凋亡形态变化.结论 MAC-1对人宫颈癌Hela细胞株具有抑制增殖及诱导凋亡作用.     

家蝇幼虫分泌型抗菌肽对大肠埃希菌抑制作用

目的探讨家蝇幼虫分泌型抗菌肽的抗菌机制。方法利用透射电镜、十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及流式细胞仪等技术初步探索了家蝇幼虫分泌型抗菌肽对大肠埃希菌作用机理。结果经20、40及80μg/mL抗菌肽作用后,大肠埃希菌液的A570值分别增加了0.170、0.032、-0.030,对照组增加了0.363;菌体外胞内酶含量各组分别增加0.148、0.230、0.324,对照组无变化;电镜观察显示抗菌肽可使菌体皱缩,细胞内容物外泄;SDS-PAGE检测发现,作用后菌体的某些蛋白条带浓度降低或消失,有新的条带出现;流式细胞仪显示抗菌肽作用后处于细胞周期中复制期(R期)的细菌量只占总数的11.89%,而对照组占45.25%,比实验组高33%。结论家蝇幼虫分泌型抗菌肽可通过改变细菌细胞膜的通透性,抑制细菌某些蛋白的合成等发挥抗菌作用。     

家蝇幼虫抗菌肽对肿瘤细胞的作用效果观察

目的研究家蝇幼虫抗菌肽对肿瘤细胞的作用效果。方法针刺感染大肠杆菌诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,经研磨、离心、层析等步骤提取其抗菌肽,所提取的抗菌肽作用于肿瘤细胞K562、Daudi、109及T24,以流式细胞仪检测其作用效果。结果抗菌肽对4种肿瘤细胞的有效杀伤力M1均在85%以上。结论家蝇幼虫抗菌肽可作为潜在的抗肿瘤药物开发。     

滞育对家蝇幼虫蛋白质和核酸的影响

目的观察家蝇3龄幼虫滞育前后血淋巴中蛋白质及组织匀浆脱氧核糖核酸（DNA）、核糖核酸（RNA）的变化,探讨家蝇幼虫滞育发生的生化机制。方法低温诱导家蝇3龄幼虫滞育,经SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳观察非滞育组及各滞育组血淋巴蛋白组分变化;紫外分光光度计测定非滞育组及各滞育组RNA和DNA含量。结果（1）滞育组和非滞育组家蝇幼虫蛋白条带数目无变化,只是滞育20d组的蛋白含量明显高于非滞育组,其中以85kd处最明显,光密度值为203475．69。（2）各滞育组DNA均比非滞育组明显降低;滞育10d组、15d组RNA明显降低,滞育20d组则明显升高;RNMDNA在滞育10d组、15d组明显降低分别为0．598、0．546μg／mg,滞育20d组则明显升高为1．337μg/mg。结论滞育家蝇幼虫体内可能无滞育关联蛋白（DAP）的存在,RNA／DNA比值的降低和升高可作为家蝇幼虫滞育开始及滞育结束的信号。     

凯素灵对家蝇的实验室药效试验观察

目的观察在国内长时间广泛用于防制卫生害虫的凯素灵对家蝇的杀灭效果。方法采用强迫接触法对凯素灵在不同板面、不同剂量、不同处理时间对家蝇杀灭效果进行观察。结果以30 mg/m2的有效剂量,在玻璃板面上持效可达到90 d;以50 mg/m2的有效剂量,在清漆板面上持效可达到90 d;以100 mg/m2的有效剂量,在水泥板面上持效可达到60 d。结论在国内长期应用的凯素灵对家蝇仍具有良好的杀灭效果和持效作用。     

湖北省家蝇抗药性调查及防制对策的研究

目的掌握湖北省不同地区家蝇对常用杀虫剂的抗性状态，并研究防制对策。方法微量点滴法。结果2005-2007年湖北省家蝇对敌敌畏的平均LD50分别为0．2256、0．1908和0．4428μg，只；2006年和2007年对高效氯氰菊酯的平均LD50分别为0．0841和0．1102μg/只；2005年和2007年对溴氰菊酯的平均LD50分别为0．0371和0．0825μg／只；2005年和2006年对胺菊酯的平均LD50分别为0．3952和0．2894μg／只；2005年和2007年对三氯杀虫酯的平均LD50分别为0．3264和0．3487μg/只。结论湖北省家蝇对有机磷类和拟除虫菊酯类杀虫剂在已产生较强抗性的基础上抗药性仍然在继续增加，而对20世纪90年代已停止使用的三氯杀虫酯的抗性处于敏感水平状态。提倡轮换或混合用药，控制家蝇抗性的发展。     

家蝇信息素对家蝇引诱效果观察

目的 :了解家蝇信息素对家蝇的引诱效果。方法 :在实验室用强迫接触法测试快速击杀效果及 2 4h死亡率 ,用方箱法测试引诱效果 ;在现场观察 2种药物的持续效果。结果 :KT50 氨基甲酸酯类涂抹剂是 2 .17min ,新型有机磷类涂抹剂是 1.92min ,2种涂抹剂 2 4h均为 10 0 %。引诱试验 (3 0min引诱家蝇只数 ) ,氨基甲酸酯类涂抹剂 2 2只 ,颗粒剂 12只 ,单纯氨基甲酸酯类药剂 3只 ;新型有机磷类涂抹剂 2 3只 ,颗粒剂 11只 ,单纯新型有机磷类药剂 4只。现场用涂抹剂及颗粒剂观察持效 ,观察第 1、5、10、2 0、3 0d记录 ,氨基甲酸酯类涂抹剂是 192、15 4、73、47、1只 ,颗粒剂是 178、10 2、41、19、2只 ;新型有机磷类涂抹剂是 2 0 9、172、117、88、5 4只 ,颗粒剂是 160、14 6、10 5、5 0、2 4只。结论 :2种涂抹剂对家蝇都具有较好速杀效果和较强的引诱能力 ,涂抹剂中加入引诱剂后诱杀效果提高了 5倍。     

家蝇幼虫血细胞荧光染色法的形态观察

目的用荧光染色法结合相差显微镜观察家蝇3龄幼虫血细胞的形态、分类。方法应用吖啶橙和碘化丙啶对家蝇3龄幼虫血细胞进行染色，荧光显微镜结合相差显微镜观察血细胞形态特征并进行分类。结果（1）家蝇3龄幼虫血细胞可分为原血胞、浆血胞、粒血胞、珠血胞、类绛血胞5类。其中浆血胞又分为大核浆血胞和小核浆血胞2种。（2）家蝇幼虫原血胞在相差显微镜下容易辨认，通过荧光染色后特征不显著。（3）家蝇幼虫粒血胞与大核浆血胞、珠血胞与小核浆血胞在相差显微镜下容易混淆，但在荧光显微镜下很好区分。结论用荧光染色法结合相差显微镜能揭示未知的昆虫血细胞特征，并能正确地将家蝇3龄幼虫血细胞分为5类。