有关瘢痕形成机制研究:不同皮肤成纤维细胞对羊水的反应

目的:研究正常皮肤和胎儿皮肤成纤维细胞体外培养时对羊水的不同反应,探讨瘢痕形成的机制。方法:采用成纤维细胞体外培养技术,比较正常皮肤成纤维细胞与胎儿皮肤成纤维细胞对羊水的不同反应。结果:羊水对胎儿皮肤成纤维细胞无明显影响,刺激正常皮肤的成纤维细胞。结论:体外培养的正常皮肤成纤维细与胎儿皮肤成纤维细胞生长率相同,对羊水的反应不同。     

成纤维细胞培养与瘢痕形成

1人正常皮肤和瘢痕疙瘩成纤维细胞的培养及生物学差异,见2010年50期9341页。 2姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞周期及其核转录因子KB信号转导通路的影响,见2011年     

肌成纤维细胞与瘢痕

目的:总结肌成纤维细胞在瘢痕生长增殖及收缩方面的多样性功能,为进一步认识肌成纤维细胞的功能以及开展肌成纤维细胞的相关研究提供新思路。资料来源:应用计算机检索Medline1990-01/2006-05相关的文章,检索词为“scar,myofibroblast”,限定文章语言种类为English。资料选择:对检索到的文献进行初审,选取有关肌成纤维细胞生物学特性、与创面收缩和病理性瘢痕的关系、表达调控机制的文献,共收集到88篇,排除重复性研究。资料提炼:选择其中有代表性的30篇进行综述,涉及到肌成纤维细胞的结构特征、来源、与瘢痕成纤维细胞收缩功能的关系以及收缩的调控等。资料综合:①人们最初在伤口愈合处的肉芽组织中经显微镜检查发现肌成纤维细胞,作为成纤维细胞和平滑肌细胞的中间细胞,它具有成纤维细胞和平滑肌细胞的双重特性。②肌成纤维细胞的分化是一个复杂的过程,受细胞因子、细胞外基质复合物及机械拉力的影响。③肌成纤维细胞是伤口愈合及纤维化过程中组织塑形的关键细胞,它与创伤愈合关系的研究作为一个崭新的领域正受到关注。结论:在伤口愈合、瘢痕形成和收缩方面,肌成纤维细胞起着重要的作用。     

成纤维细胞培养与瘢痕形成

1人正常皮肤和瘢痕疙瘩成纤维细胞的培养及生物学差异,见2010年50期9341页。2姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞周期及其核转录因子KB信号转导通路的影响,见2011年     

丹参对增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响及其机制研究

目的：研究丹参对增生性瘢痕成纤维细胞(fibroblast，FB)胶原合成的影响并探讨其发生机制，为增生性瘢痕的中药治疗提供理论依据。方法：体外培养增生性瘢痕组织的FB，用DMEM及含丹参0．1，0．25,0．5，1．0，2．5，5．0g／L的DMEM培养液培养48h后，通过3H-脯氨酸掺入法检测FB胶原合成，反转录聚合酶链反应(reverse tranacript polymerase chain reaction，RT-PCR)检测Ⅰ型前胶原mRNA水平，流式细胞仪行FB计数，PCNA免疫组织化学染色法检测FB增殖状况。结果：与对照组比较，丹参6个剂量组对FB胶原合成均有一定影响，其中0．25g／L以上剂量组显著抑制FB的胶原合成(t=3．579～5．486，P&;lt;0．01)；0．1g／L以上剂量组FB的Ⅰ型前胶原mRNA水平受到了显著影响，低于正常水平(t=3．247～6．324，P&;lt;0．01)；0．25g／L以上剂量组流式细胞仪细胞计数显示FB数量显著减少(t=3．785～6．478，P&;lt;0．01)，PCNA阳性率显著降低(t=3．652～6．117，P&;lt;0．01)。结论：0．25g／L以上剂量组丹参能显著抑制增生性瘢痕FB的胶原合成能力，其抑制胶原合成与丹参作用后FB数量减少、FB细胞增殖率降低有关。     

碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕成纤维细胞生物学特性的影响

目的：研究增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞基因表现型的差异，以及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对其的影响。方法：测定细胞生长曲线；应用液闪计数测定成纤维细胞胶原蛋白的合成。结果：增生性瘢痕成纤维细胞增殖速度比正常皮肤成纤维细胞慢；胶原蛋白的合成高于正常皮肤成纤维细胞。bFGF对两种成纤维细胞的增殖具有强烈的刺激作用，对增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白的合成具有抑制作用。结论：增生性瘢痕成纤维细胞是一种特殊基因表现型的成纤维细胞，它具有自己特殊的生物学特性。bFGF可以使增生性瘢痕成纤维细胞的生物学特性趋于正常皮肤成纤维细胞。     

本期专题：成纤维细胞培养与瘢痕形成

6紫外线照射皮肤成纤维细胞表皮生长因子受体的表达 刘垠（昆明医学院第一附属医院整形外科，云南省昆明市6500321     

瘢痕成纤维细胞的分化与凋亡

目的：研究正常皮肤、增生性瘢痕（ＡＴＳ）及瘢痕疙瘩成纤维细胞（ＦＢ）向肌成纤维细胞（ＭＦＢ）的分化、ＦＢ凋亡，以及它们与瘢痕的关系。方法：正常皮肤、ＨＴＳ、瘢痕疙瘩各取１０例培养ＦＢ，利用流式细胞仪测定ＭＦＢ比例以及ＦＢ凋亡率。结果正常皮肤、ＨＴＳ、瘢痕疙瘩培养ＦＢ的ＭＦＢ分化比例无差异；正常皮肤与ＨＴＳＦＢ凋亡率无差异，瘢痕疙瘩培养ＦＢ凋亡率较正常皮肤及ＨＴＳ低。结论：ＨＴＳ、瘢痕疙瘩ＦＢ向ＭＦ     

缺氧对瘢痕成纤维细胞缺氧诱导因子1α表达的影响

目的：探讨缺氧程度与瘢痕成纤维细胞缺氧诱导因子1α表达的关系。方法：实验于2004—01／03在湘雅医学院中心实验室完成。选择烧伤患者创面愈合后3-6个月的瘢痕为取材对象。取体外分离培养的皮肤瘢痕成纤维细胞，分别在体积分数为0、2，0．1，0、05，0．015的氧浓度下培养24h后，采用免疫组织化学染色和Western Blot方法检测缺氧诱导因子1α的表达。 结果：①免疫组织化学染色：细胞核和细胞质均有缺氧诱导因子1α表达，体积分数为0．2，0、1，0．05，0．015的氧浓度下缺氧诱导因子α表达的信号强度分别为47．50&;#177;9．29，96．00&;#177;18．29，209．17&;#177;19.64，263．83＋13．24，各浓度比较差异显著（F=261．01，P〈0．01）。体积分数为0．2的氧浓度下缺氧诱导因子1α部分为弱阳性，体积分数为0．1的氧浓度下缺氧诱导因子1α基本弱阳性，体积分数为0．05的氧浓度下缺氧诱导因子1α以阳性表达为主，体积分数为0．015的氧浓度下缺氧诱导因子1α基本为阳性。②Western Blot印迹检测：体积分数为0．2，0．1，0．05，0．015的氧浓度下缺氧诱导因子1α蛋白表达相对含量分别为0．02，0．26，0．39，0．97，呈逐渐增高趋势，均明显高于体积分数为0．2的氧浓度条件下的缺氧诱导因子1α蛋白表达。 结论：随着氧浓度的降低，皮肤瘢痕成纤维细胞的缺氧诱导因子1α表达强度逐渐增强。缺氧诱导因子1α的表达强度可间接反映瘢痕组织内的氧浓度。     

苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

目的：研究苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(fibroblast，FB)作用的机制。方法：实验于2000-01／2004-06在武装警察部队总医院烧伤整形科实验室完成。将苦参碱以不同浓度梯度作用于体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞，采用四唑盐比色法检测苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响，采用免疫组织化学检测增殖性细胞核抗原(proliferativecell nuclear antigen，PCNA)的表达，采用流式细胞仪对异硫氰荧光素一连接素V／碘化丙啶双染情况(FITC-Armexin V／PI)检测细胞凋亡率。结果：苦参碱在O．10-10g／L对人瘢痕疙瘩成纤维细胞呈剂量依赖性增殖抑制作用；增殖性细胞核抗原经苦参碱作用后表达明显减弱；FTTC-Armexin V／P1示苦参碱组的凋亡率为40．7，对照组为1．6(P＜O．01)。     

碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕成纤维细胞生物学特性的影响

目的:研究增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞基因表现型的差异,以及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对其的影响。方法:测定细胞生长曲线;应用液闪计数测定成纤维细胞胶原蛋白的合成。结果:增生性瘢痕成纤维细胞增殖速度比正常皮肤成纤维细胞慢;胶原蛋白的合成高于正常皮肤成纤维细胞。bFGF对两种成纤维细胞的增殖具有强烈的刺激作用,对增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白的合成具有抑制作用。结论:增生性瘢痕成纤维细胞是一种特殊基因表现型的成纤维细胞,它具有自己特殊的生物学特性。bFGF可以使增生性瘢痕成纤维细胞的生物学特性趋于正常皮肤成纤维细胞。     

兔胚胎皮肤伤口无瘢痕愈合机制研究

目的：观察胎兔皮肤创口愈合过程，探讨胚胎皮肤无瘢痕愈合机制。方法：建立兔胚胎皮肤伤口愈合模型，采用光镜、偏光镜、电镜观察伤口愈合过程，氯胺-T法测定伤口渗出液中羟脯胺酸含量。结果：兔胚胎皮肤伤口伤后3d即完全愈合，真皮层呈纤细网状，嗜银染色阳性，渗出液中羟脯胺酸含量低下；而成兔皮肤6d开始愈合，早期真皮层偏光镜下呈弱双折光性纤细的Ⅲ型胶原，晚期呈黄红色Ⅰ型胶原，电镜下见成纤维细胞具肌成纤维细胞特征，渗出液中羟脯胺酸含量高。结论：兔胚胎皮肤伤口愈合机制与成兔不同，参与两种愈合过程的成纤维细胞内在特性不同。     

表皮细胞水化对成纤维细胞及瘢痕挛缩的影响

目的：观测表皮细胞水化对成纤维细胞及瘢痕挛缩的影响，探索其作用机制，方法：以表皮细胞与成纤维细胞分层培养为研究模型，采用放免、免疫组化及图像分析等方法，观测对表皮细胞水化处理后，成纤维细胞形态、胶原合成及细胞因子表达的影响。结果：采用水化处理后，成纤维细胞胶原合成、转化生长因子－β1、转化生长因子－R（I）和α-SM actin阳性表达水平明显下降。结论：通过对表皮细胞的水化，可抑制成纤维细胞的胶原合成及瘢痕挛缩。     

碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕与正常皮肤成纤维细胞胶原、纤维连接蛋白表达的影响

背景:碱性成纤维细胞生长因子能促进愈合伤口产生胶原蛋白、纤维连接蛋白和基质酶的基质成分.然而,细胞增殖、细胞外基质及新生血管的形成或伤口基质重塑过程失调,会导致瘢痕组织过度增殖.目的:观察碱性成纤维细胞生长因子在正常皮肤创面愈合和增生性瘢痕形成中的作用.方法:从5例进行瘢痕修复手术患者身上同时取正常皮肤和增生性瘢痕组织,分离培养正常人皮肤成纤维细胞和增生性瘢痕成纤维细胞.应用RT-PCR和酶联免疫吸附法检测两种成纤维细胞胶原、纤维连接蛋白基因表达和蛋白合成.采用JC-1染色和流式细胞术测定成纤维细胞线粒体膜电位改变,采用化学发光法检测细胞内ATP水平改变.观察碱性成纤维细胞生长因子对两种细胞的上述指标的影响.结果与结论:不同浓度碱性成纤维细胞生长因子可减慢增生性瘢痕成纤维细胞生长,抑制增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原表达和合成(P<0.05).碱性成纤维细胞生长因子对正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞Ⅲ型胶原表达和合成均无影响.然而可上调正常皮肤成纤维细胞表达纤维连接蛋白(P<0.05).此外,10,100 μg/L碱性成纤维细胞生长因子处理后增生性瘢痕成纤维细胞线粒体膜电位呈去极化趋势,正常皮肤成纤维细胞中ATP水平显著增高(P<0.05).结果表明,碱性成纤维细胞生长因子在正常皮肤创面愈合和增生性瘢痕形成中可能有不同的作用和机制.     

瘢痕疙瘩成纤维细胞P53基因突变检测

目的探讨瘢痕疙瘩体外培养成纤维细胞是否存在P53基因突变及形成发展机制。方法对所取新鲜组织标本进行细胞培养,设计P53基因外显子4,5,6的引物序列,从所培养各组成纤维细胞中提取细胞总DNA,采用PCR技术对所需基因片段进行扩增,并对目的基因进行测序。结果对PCR产物DNA序列分析后发现,所有体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(6/6)均存在P53外显子4的基因突变,有2例(2/6)P53外显子5存在基因突变,表现为点突变及移码突变,而正常皮肤成纤维细胞则未发现有任何形式的基因突变。结论瘢痕疙瘩成纤维细胞存在P53基因突变,这可引起其细胞增殖凋亡异常。     

不同功率密度氦氖激光照射对培养瘢痕成纤维细胞

目的探讨氦氖激光功率密度与培养瘢痕成纤维细胞生长的关系。方法以632.8nm波长氦氖激光,50、100和150mW/cm2功率密度,分别照射培养的人增生性瘢痕成纤维细胞1、3和5次,1次/d,每次照射10min,然后进行细胞计数和细胞周期分析。结果50mW/cm2照射1次后细胞总数大于对照组（P<0.01）,100mW/cm2照射5次和150mW/cm2照射3、5次,细胞总数都明显少于同期对照组（P<0.05）;细胞周期分析结果与细胞计数结果相一致。结论氦氖激光对细胞生长的双重效应与功率密度密切相关。     

苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

目的:研究苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(fibroblast,FB)作用的机制。方法:实验于2000-01/2004-06在武装警察部队总医院烧伤整形科实验室完成。将苦参碱以不同浓度梯度作用于体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,采用四唑盐比色法检测苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响,采用免疫组织化学检测增殖性细胞核抗原(proliferativecellnuclearantigen,PCNA)的表达,采用流式细胞仪对异硫氰荧光素-连接素V/碘化丙啶双染情况(FITC-AnnexinⅤ/PI)检测细胞凋亡率。结果:苦参碱在0.10～10g/L对人瘢痕疙瘩成纤维细胞呈剂量依赖性增殖抑制作用;增殖性细胞核抗原经苦参碱作用后表达明显减弱;FITC-AnnexinⅤ/PI示苦参碱组的凋亡率为40.7,对照组为1.6(P<0.01)。结论:苦参碱在体外能明显抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖活性,并促进其凋亡。     

常山酮对人瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的影响

目的：探索常山酮以体外培养的人成纤维细胞胶原合成和生物学行为的影响。方法：于2003-03／06在重庆医科大学附属第一医院，采用人瘢痕体外培养的成纤维细胞，分别将不同浓度的常山酮加入培养基中，在不同时相点观察常山酮对成纤维细胞生物学特性的影响．并应用放射免疫法检测Ⅰ，Ⅲ型胶原含量。结果：常山酮在0．1～10mg／L．对成纤维细胞的形态和增殖活性均未见明显影响；常山酮可抑制成纤维细胞合成Ⅰ型胶原，且随浓度增加作用增强．但不影响Ⅲ型胶原的合成。结论：常山酮可抑制人瘢痕成纤维细胞的Ⅰ型胶原合成，对瘢痕的预防和治疗有实用前景。