联合免疫磁珠与逆转聚合酶联反应在肝细胞癌患者外周血癌细胞检测中的应用

目的 研究联合免疫磁珠分类与巢式逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）在肝细胞癌患者外周血癌细胞检测中的应用价值。方法 分别收集肝细胞癌（45例）、肝硬化（16例）、肝炎（20例）患者及健康人（18例）的外周血，以CD15和Ber-EP4免疫磁珠富集血液中的癌细胞，用巢式RT-PCR检测其外周血甲胎蛋白（AFP）mRNA水平。结果 AFPmRNA在肝细胞癌、肝硬化和肝炎患者的检出率分别为72．1％．43．8％和25．0％，肝细胞癌组与肝硬化组和肝炎组比较的差异均有显著性意义（P〈0．05和P〈0．01）。结论 联合免疫磁珠分类与巢式RT-PCR法可提高肝细胞癌患者外周血AFPmRNA的检出率。     

肝癌患者术前外周血甲胎蛋白mRNA检测与术后复发的关系

【目的】探讨肝细胞癌患者的外周血中甲胎蛋白（AFP）mRNA的检测在肝癌术后预后中的应用价值。【方法】应用巢式PCR和TaqManMGB探针法定量PCR技术，检测105例肝细胞癌患者和30例健康志愿者外周血AFPmRNA的表达情况。【结果】肝细胞癌患者术前外周血AFPmRNA的阳性率43.8％（46／105）高于健康对照10．0％（3／30），有显著性差异（P〈0．001）。术前血中AFPmRNA的表达与各项肿瘤侵袭性指标显著相关，包括肿瘤数目、大小、有无肉眼及镜下血管侵犯。AFPmRNA阴性患者1、2、3年生存率以及1、2、3年无瘤生存率均显著比AFPmRNA阳性患者术后高（两者均P=0．004）。多因素分析也指出术前外周血中是否表达AFPmRNA是预测术后复发的独立因素。【结论】肝癌患者术前外周血中是否表达AFPmRNA与肿瘤侵袭性相关，对于预测术后复发具有重要价值。     

肝癌患者手术前后外周血AFP mRNA定量检测的临床意义

目的：研究肝细胞肝癌患者手术前后外周血AFP mRNA表达量的变化，分析其作为微转移标记物的可行性及与复发转移的关系．方法：使用实时荧光定量RT—PCR检测64例肝细胞癌患者手术前后外周血AFP mRNA表达量，并进行平均6mo以上的随访；同时以8例肝硬化患者、4例肝增生患者、8例肝血管瘤患者和10例健康志愿者作为对照组，对比检测其外周血单核细胞AFP mRNA的表达量．结果：复发34例．HCC组的术前AFP mRNA表达量明显高于对照组．术前外周血AFP mRNA相对HCC的灵敏度为85．9％，特异性为90．3％，准确率为87．4％．HCC患者术后外周血AFP mRNA表达量明显高于术前．HCC组外周血术前、术后AFP mRNA水平表达量与术后复发转移有明显相关性，与TNM分期、血管癌栓或侵犯有相关性，但与术时肿瘤数目、癌细胞分化程度、包膜完整性均与血清AFP浓度无相关．术后HCC组外周血AFP mRNA表达量与肿瘤大小有相关性．结论：实时荧光定量RT—PCR法检测HCC患者外周血AFP mRNA表达量有很高的敏感性和特异性，可以反映HCC患者血中是否存在肝癌细胞．手术可促进部分HCC细胞脱落人血．监测外周血AFP mRNA水平对术后早期复发转移有预测价值．     

原发性肝癌患者外周血甲胎蛋白mRNA表达水平与临床参数的关系

目的　了解肝细胞癌患者外周血甲胎蛋白 (AFP)mRNA的表达水平与不同临床参数的关系。方法　采用realtimeRT -PCR技术 ,定量检测 5 6例肝细胞癌、17例慢性活动性肝炎、2 1例肝硬化和 2 0名健康志愿者外周血AFPmRNA的表达水平。结果　 5 6例肝癌患者外周血AFPmRNA的平均表达水平为 34 6 44 .6± 9490 5 .4copies/μgRNA ,其中 2 9例为阳性 ;17例慢性活动性肝炎、2 1例肝硬化患者和 2 0名健康志愿者外周血均未检测到AFPmRNA的表达。结论　肝癌患者外周血AFPmRNA表达水平与肝癌分期、门静脉癌栓及肝外转移密切相关 ,与肿瘤直径、数目及血清AFP水平无明显相关 ,可作为预测肝癌发生远处转移的一个可靠指标     

肝癌患者术前外周血甲胎蛋白mRNA检测与术后复发的关系

[目的]探讨肝细胞癌患者的外周血中甲胎蛋白(AFP)mRNA的检测在肝癌术后预后中的应用价值。[方法]应用巢式PCR和TaqMan MGB探针法定量PCR技术,检测105例肝细胞癌患者和30例健康志愿者外周血AFP mRNA的表达情况。[结果]肝细胞癌患者术前外周血AFP mRNA的阳性率43.8%(46/105)高于健康对照10.0%(3/30),有显著性差异(P< 0.001)。术前血中AFP mRNA的表达与各项肿瘤侵袭性指标显著相关,包括肿瘤数目、大小、有无肉眼及镜下血管侵犯。AFP mRNA阴性患者1、2、3年生存率以及1、2、3年无瘤生存率均显著比AFP mRNA阳性患者术后高(两者均P=0.004)。多因素分析也指出术前外周血中是否表达AFP mRNA是预测术后复发的独立因素。[结论]肝癌患者术前外周血中是否表达AFP mRNA与肿瘤侵袭性相关,对于预测术后复发具有重要价值。     

原发性肝癌患者外周血中肝细胞特异性AFP mRNA检测及意义

【目的】寻找一种敏感的方法以检测原发性肝癌患者外周血中肝细胞特异性AFPmRNA。【方法】巢式RT PCR检测外周血有核细胞成分中AFPmRNA。【结果】 49例肝癌中 17例检出AFPmRNA ,阳性率 35 % ,其中 9例证实有转移的 6例阳性 (6 7% )。 19例肝硬化、6例急性肝炎、8例慢性肝炎、5例肝良性肿瘤、6例肝内胆管癌、11例肝转移癌、13例健康对照组均为阴性。外周血细胞AFPmRNA的存在与肝内肿癌灶的数目、是否有门静脉癌栓形成、远处器官转移与肿瘤的TMN分期密切相关 ,与血清AFP浓度无关。【结论】检测肝癌患者外周血AFPmRNA ,可帮助早期发现肝癌细胞的血行播散。     

肝癌及肝炎、肝硬化患者外周血甲胎蛋白mRNA定量检测

目的:探讨肝癌患者外周血甲胎蛋白(AFP) mRNA水平与肝癌临床病理特征的关系.方法:外周血样本(5 ml) 分别采自32例原发性肝癌、23例肝炎肝硬化、6例转移性肝癌、7例肝脏良性肿瘤患者及16例健康自愿受试者,外周血有核细胞AFP mRNA采用PCR辅助转录滴定系统(PATTY)进行定量检测.结果:原发性肝癌患者外周血AFP mRNA阳性率为65.6％(21/32),AFP mRNA水平为(1.6×106±34.4) copy/μg RNA,外周血AFP mRNA水平与门静脉癌栓及是否存在肝外转移明确相关(P<0.05),与肝癌大小、分化程度及血清AFP浓度无关.肝炎、肝硬化患者外周血AFP mRNA阳性率为8.7％(2/23),AFP mRNA水平皆为1×103 copy/μg RNA,明显低于原发性肝癌患者(P<0.01).其余受试者外周血AFP mRNA全部阴性.结论:外周血AFP mRNA定量检测有助于循环肝癌细胞与肝细胞的相对区分,高水平AFP mRNA可作为循环肝癌细胞的特异性标记物.肝癌患者外周血AFP mRNA水平仅与门静脉癌栓及是否存在肝外转移密切相关,可能成为预测肝癌转移复发的有效指标.     

肝癌患者外周血AFP mRNA和TSGF的检测及意义

目的：检测原发性肝细胞癌(PHC)患者外周血单个核细胞表达AFP mRNA情况和血清肿瘤特异性生长因子(TSGF)的含量及探讨其临床意义。方法：采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测86例PHC患者外周血AFP mRNA，同时采用TS-GF试剂盒检测患者血清TSGF含量。结果：PHC患者外周血AFP mRNA阳性率为53．5％(46／86)，血清TSGF阳性率为80．2％(69／86)，AFP mRNA阳性率与TSGF含量呈显著正相关(r＝0．6415，P＜0．05)。外周血AFP mRNA阳性率、血清TSGF含量及阳性率均与肿瘤分期、癌灶大小及肝癌肝外转移显著正相关(均为P＜0．05)。结论：PHC患者外周血AFP mR—NA阳性率与血清TSGF水平呈显著正相关，两者均与肿瘤分期、癌灶大小及癌转移呈显著正相关。检测外周血AFP mRNA和血清TSGF含量对判断肝癌细胞发生肝内外转移的风险可能有较重要的参考价值。     

AFP mRNA检测外周血游离癌细胞预测肝癌微转移的初步评价

目的　探讨原发性肝癌患者外周血单个核细胞AFPmRNA表达与其微转移的相关性。方法　应用巢式逆转录聚合酶链反应 (NestedRT -PCR)技术检测 10 2例原发性肝癌、2 2例非原发性肝癌及其他恶性肿瘤 ,6 4例慢性乙型肝炎、35例肝硬化和 4 0例健康献血员外周血单个核细胞AFPmRNA表达水平。结果　AFPmRNA在健康献血员、非原发性肝癌及其他恶性肿瘤、慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中均为阴性 ;在原发性肝癌组外周血单个核细胞中AFPmRNA的检出率 (5 6 86 % ,5 8/ 10 2 )明显高于肝硬化组 (8 5 7% ,3/ 35 ,P <0 0 5 )。外周血单个核细胞AFPmRNA的表达与临床分期、门静脉癌栓、肝内转移、远处转移明显相关 (P <0 0 5 ) ,而与肿瘤直径、数目及血清AFP浓度无明显相关 (P >0 0 5 )。结论　巢式RT -PCR检测原发性肝癌患者外周血单个核细胞AFPmRNA是一种早期发现肝细胞癌血道播散的可靠而又敏感的实验方法。     

甲胎蛋白异质体和甲胎蛋白信使核糖核酸用于诊断肝细胞癌

目的:探讨联合检测2种血清肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP)异质体(AFP-L3)和甲胎蛋白信使核糖核酸(AFPmRNA)诊断肝细胞癌价值及评估肝癌预后的意义。方法:对2005年4-7月收治的82例肝细胞癌(HCC)、11例慢性乙型肝炎肝硬化合并门脉高压和19例肝脏良性肿瘤患者应用酶联吸附法及荧光定量PCR联合检测AFP-L3和AFPmRNA水平,对比其阳性率;并对术后1个月的肝癌患者检测AFP-L3和AFPmRNA水平,统计作出生存曲线。结果:术前不同肿瘤指标的检测结果:AFP-L3联合AFPmRNA检测阳性率为64.3%,明显高于AFP、AFP-mRNA单独检测的阳性率(50.9%、40.2%),差异均有统计学意义(P0.05);术前、术后AFP-L3联合AFPmRNA检测均阳性的患者术后3年生存率较低。结论:术前联合检测APF-L3和AFPmRNA两项指标可提高HCC、尤其是AFP阴性HCC的诊断率,而术后联合检测又对评估HCC的预后有一定的指导意义。     

肝癌外周血AFP mRNA的测定及意义

目的 建立一种灵敏的巢式逆转录聚合酶链反应法（ＲＴ－ＰＣＲ）,用于检测外周血中的ＡＦＰ ｍＲＮＡ。方法 将患者分成四组：原发性肝细胞癌组３８例,慢性肝炎组９例,肝炎后肝硬化组１２例,正常对照组１０例。通过采肝素抗凝外周血、分离单个核细胞、抽提ＲＮＡ、逆转录合成ｃＤＮＡ、设计ＡＦＰ基因引物来进行巢式ＰＣＲ扩增。 结果 所有正常人外周血中ＡＦＰｍＲＮＡ全部阴性,原发性肝细胞癌组的外周血中ＡＦＰ ｍＲＮ     

造血干细胞移植对肝癌术后复发转移的影响及其与外周血AFP mRNA和VEGF-C mRNA关系的初步研究

目的 探讨异基因造血干细胞移植对SCID鼠肝癌切除术后复发转移的影响,以及SCID鼠外周血甲胎蛋白(AFP) mRNA和血管内皮生长因子(VEGF-C) mRNA水平与肝癌复发转移的关系.方法 SCID小鼠随机分为程序移植(A)组、单次移植(B)组及对照(C)组,行人脐带血造血干细胞移植后6周,将肝癌细胞株(HCCLM6)肿瘤组织块原位接种于受鼠肝脏,10 d后切除荷瘤肝叶,4周后处死小鼠,摘眼球取血,实时荧光定量PCR 检测各组外周血AFP mRNA和VEGF-C mRNA的表达,观察肝内复发和肝外转移的情况.结果 移植瘤切除后A、B、C各组肝内复发率均为100%,但复发瘤体积大小[(367.18±31.86) mm~3、 (648.26±155.22) mm~3、 (811.38±127.36) mm~3,P<0.01]、肺转移率(14.3%、66.7%、 100%,P<0.01)差异有统计学意义,A、B两组的抑瘤率分别为54.7%和20.1%.AFP mRNA (1.95±0.92、 5.23±1.96、 6.36±3.38,P=0.02)及VEGF-C mRNA(2.48±2.25、3.45±2.81、6.60±5.81,P=0.27)在各组的相对表达量亦不相同,提示外周血AFP mRNA和VEGF-C mRNA的水平与术后复发转移有相关关系.结论 造血干细胞移植对肝癌根治性切除术后的复发和转移显示出一定的抑制作用,并且随着人源细胞嵌合率的增加,抗肿瘤效应也相应得到提高.     

血液AFP mRNA在复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌中的诊断意义

目的：探讨血液AFP mRNA在复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌中的表达及意义。方法：应用巢式RT-PCR检测40例复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌血液AFP mRNA。结果：21例伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌血液AFP mRNA均表达阳性（100％）,19例复发性肝癌患者中有7例血液AFP mRNA表达阳性（36.8％),两组比较差异有显著性意义(P<0.01）。结论：血液AFP mRNA有希望成为判断肝癌复发或预测肝癌远处器官转移的客观性指标之一。     

血液AFP mRNA在复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性 …

目的：探讨血液ＡＦＰｍＲＮＡ在复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌中的表达及意义。方法：应用巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测４０例复发性肝癌及伴有远外器官转移的原发性肝癌血液ＡＦＰｍＲＮＡ。     

RT-PCR法检测肝癌患者周围和肝静脉血AFP mRNA及其临床意义

目的：通过对外周静脉因和肝静脉血AFPmRNA表达检测的比较，旨在寻找一种比较好的监测肝癌细胞转移的方法，并了解肝癌细胞在体内的转移机制。方法：抽取肝癌患者外周及肝静脉血，采用RT－PCR方法检测AFPmRNA，比较二者的阳性率。结果：在肿瘤直径＞5cm的肝癌患者，其外周血，肝静脉血AFPmRNA表达差异无显著性（P＝0．618），而在直径＜5cm的肝癌患者，其二处血AFPmRNA表达差异有显著性（P＝0．028）。结论：肝癌直径＜5cm的患者，直接检测肝静脉血能更准确地反映肝癌细胞肝内播散的情况。肝癌直径＞5cm的患者中，外周血，肝静脉血AFPmRNA表达差异无显著性，这部分患者的外周血AFPmRNA可代表其肝静脉血中AFPmRNA的状况。     

用nested RT-PCR法检测肝癌患者外周血癌细胞

目的：寻求一种高灵敏的检测肝癌患者外周血中癌细胞的方法。方法：采用nestedRT－PCR法检测外周血中的肝癌细胞。结果：能从2ml人外周静脉血中检测到10个左右肝癌细胞表达的人甲胎蛋白mRNA。结论：此方法特异性强，灵敏度高，可作为一种理想的临床检测手段。