重组腺病毒携带人血管抑素基因抑制胰腺癌血管生成的研究

目的研究重组腺病毒介导的人血管抑素基因(Ad-hAG)对胰腺癌血管生成的抑制作用。方法通过病毒重组技术将人血管抑素K5基因克隆人增殖缺陷型腺病毒基因组中,获得腺病毒滴度达5.5×10~(10)pfu/ml。转染人胰腺癌细胞,Western印迹和ELISA法检测人血管抑素基因的蛋白表达情况,并通过建立荷人胰腺癌的裸鼠动物模型(每组15例),微血管密度计数分析血管抑素对胰腺癌血管形成的影响。结果成功构建了携带血管抑素K5基因的腺病毒Ad-hAG;检测到重组腺病毒载体介导的血管抑素基因在胰腺癌细胞内高表达,微血管密度计数(MVD)治疗组为8.75±2.12,对照组MVD分别为20.52±1.25、18.52±1.36(t=6.165,P<0.05)。结论重组腺病毒介导的血管抑素基因在体内、外均获得高效表达,可明显抑制裸鼠胰腺癌血管形成和肿瘤生长。     

携带人内皮抑素基因的增殖型腺病毒AdTPHre-hE对胰腺癌的体内实验研究

目的通过建立裸鼠胰腺癌肿瘤模型,在体内实验中进一步证实携带人内皮抑素基因的增殖型腺病毒AdTPHre-hE的抗肿瘤作用.方法建立AsPC-1胰腺癌细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型,在瘤体内注射AdTPHre-hE治疗,观察肿瘤生长.ELISA法检测裸鼠血清中人内皮抑素浓度,肿瘤组织行Hexon单克隆抗体免疫组化染色及微血管免疫组化染色.结果AdTPHre-hE抑制肿瘤生长的作用显著强于Ad-hE(P＜0.01)和对照组(P＜0.01).随着治疗时间的延长,裸鼠血清中内皮抑素表达量不断增加,明显高于Ad-hE组(P＜0.01)和对照组(P＜0.01).病毒Hexon免疫组化染色显示,AdTPHre-hE治疗组移植瘤内可见片状或弥漫性分布的阳性染色,AdTPHre-hE治疗组瘤组织中微血管密度为16.3±4.3明显少于Ad-hE组的33.8±6.2(P＜0.01)和对照组的36.8±4.6(P＜0.01).结论增殖型腺病毒AdTPHre-hE介导人内皮抑素的表达,具有明显抑制肿瘤细胞生长的作用.     

硫酸昆布多糖在仓鼠胰腺癌肝转移模型中抑制作用的研究

目的观察硫酸昆布多糖(laminarinsulfate,LS)对仓鼠胰腺癌肝转移模型的抑制效果,阐明其抑制肿瘤机制。方法建立仓鼠胰腺癌肝转移模型,利用三种不同剂量LS对实验各组进行干预,应用昆布多糖、生理盐水作为对照组;对各组转移肿瘤重量、转移部位数、微血管密度(microvesseldensity,MVD)、抑瘤率进行比较。结果实验组三组肝转移癌平均称重(g)为3164±0577、315±0911、2905±1043;肿瘤转移部位数(个)为143±076、1438±0727、1368±0684;微血管密度(/hpf)分别为26143±447、21186±6327、18474±4903。对照组肝转移癌平均称重为昆布多糖组4867±0868,生理盐水组5147±094;肿瘤转移部位数昆布多糖组2167±1030;生理盐水组为189±099;微血管密度分别为昆布多糖组37583±7077,生理盐水组3429±7087。实验组抑瘤率分别为35%、353%、403%。经统计学分析表明实验组和对照组在肿瘤重量、肿瘤转移部位数、微血管密度等指标方面均存在显著差异(P<001)。抑瘤效果也随硫酸昆布多糖剂量增大渐增加。结论硫酸昆布多糖对肿瘤生长、转移、血管生成有明显抑制作用。     

血管生成抑制剂SU5416对大鼠胰腺癌生长和转移的抑制作用

目的研究血管生成抑制剂SU5 4 16对大鼠胰腺癌生长和转移的抑制作用。方法采用二甲基苯丙葱直接置入大鼠胰腺 ,建立临床类似胰腺癌的大鼠模型。将 6 0只胰腺癌SD大鼠随机分为 4组 ,分别自腹腔注射生理盐水 (对照组 )、5氟脲嘧啶 (5 Fu组 )、SU5 4 16制剂 (SU5 4 16组 )和5 Fu SU5 4 16联合用药 (联合组 ) ,隔日 1次。连续 13周后处死大鼠 ,剖腹测量原位肿瘤瘤重、抑瘤率、肿瘤微血管密度、胰腺癌细胞凋亡指数 ,同时观察腹膜、肝脏及毗邻脏器转移和腹水情况。结果对照组、5 Fu组、SU5 4 16组和 5 Fu SU5 4 16联合组诱发肿瘤瘤重分别为 (1 15± 0 2 1)g、(0 6 8±0 4 2 ) g、(0 31± 0 11)g、(0 19± 0 0 6 ) g ;抑瘤率分别为 0、4 8%、80 %、85 % ;肿瘤微血管密度分别为12 3± 3 2、11 4± 3 8、2 1± 1 5、1 8± 1 1;凋亡指数分别为 (2 6± 1 9) %、(5 7± 3 1) %、(13 2±4 3) %、(2 1 1± 7 2 ) % ;腹膜转移率分别为 83%、4 6 %、2 5 %、0 ;肝转移率分别为 6 7%、2 7%、17%、0。实验组与对照组比较差异具有显著意义 (P <0 0 5 )。结论SU5 4 16因能抑制依赖于血管表皮生长因子刺激的血管表皮细胞增殖而抑制胰腺癌的生长和转移 ,化疗药物联合应用具有协同作用。     

增殖型腺病毒介导的人内皮抑素基因治疗胰腺癌

目的 观察携带人内皮抑素基因的双重调控增殖型腺病毒(AdTPHre-hEndo)对胰腺癌的治疗作用.方法 通过病毒重组技术将人内皮抑素基因克隆入双重调控增殖型腺病毒基因组中,获得腺病毒滴度为3.25×1010pfu/ml;通过建立SW-1990胰腺癌细胞Balb/c裸鼠皮下移植瘤模型,分析基因转导后胰腺癌组织中内皮抑素的表达情况及对肿瘤血管的抑制作用.结果 构建了AdTPHre-hEndo;AdTPHre-hEndo组荷瘤裸鼠肿瘤体积显著低于携带人内皮抑素基因的重组腺病毒(Ad-hEndo)组(P＜0.01)和选择性增殖型腺病毒(ONYX-015)组(P＜0.05);AdTPHre-hEndo组内皮抑素表达量明显高于Ad-hEndo组和对照组(P＜0.01).AdTPHre-hEndo组肿瘤微血管密度(MVD)为6.8±2.5,Ad-hEndo组和对照组MVD分别为16.0±4.6(P＜0.01)、47.2±10.0(P＜0.01).结论 所构建的AdTPHre-hEndo可有效表达具有生物学活性的内皮抑素,使肿瘤内微血管生成减少,肿瘤细胞增殖减慢,具备应用于胰腺癌临床治疗的潜力.     

腺病毒介导的人血管抑素基因治疗胰腺癌

目的观察腺病毒介导的人血管抑素基因对胰腺癌的治疗作用。方法通过病毒重组技术将人血管抑素基因克隆入增殖缺陷型腺病毒基因组中,获得腺病毒滴度达5．5×10~(10) pfu/ ml,观察转染表达后的生物学活性,通过建立裸鼠动物模型(每组数n=15例),分析基因转导后胰腺癌组织中血管抑素的表达情况及对肿瘤血管的抑制作用。结果构建了血管抑素的重组腺病毒载体pCA13-hAG；检测到血管抑素在体外mRNA水平和蛋白质水平表达率分别为87%和81%,得到279 bp电泳条带和38 000大小的蛋白条带；荷瘤裸鼠体内肿瘤体积显著低于对照组(P＜0．05),治疗组MVD为9．85±1．20,两对照组肿瘤微血管密度(MVD)分别为20．35±2．15、17,66±2．34 (P＜0．05)。结论所构建的pCA13-hAG重组腺病毒载体可有效表达具有生物学活性的血管抑素,使肿瘤内微血管生成减少,肿瘤细胞增殖减慢,为抗血管生成治疗实体瘤的临床应用奠定基础。     

胰腺癌血管生成特征对肿瘤血供的影响

肿瘤内新生血管生成在恶性实体瘤的发生、发展和转移中起重要作用,它既是一个多种因子调控的复杂过程,又影响肿瘤的血供。既往的血管生成研究显示胰腺癌组织中微血管密度升高,但介入放射学检查显示胰腺癌却表现为乏血管肿瘤。为进一步研究胰腺癌的血管生成特征,我们应用免疫组化方法并利用计算机图像分析系统(IAS)测定组织中微血管密度(MVD)和总血管面积(TVA),探讨血管生成特征对肿瘤血供的影响及临床意义。1.材料和方法:(1)研究对象:胰腺癌(20例)和慢性胰腺炎(10例)标本为温州医学院附一院1997～2001年住院外科手术病例标本,术前均未接…     

血管内皮生长因子反义核糖核酸对人肺癌的抗血管生成作用

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义RNA封闭内源性VEGF表达对人肺癌裸鼠皮下移植瘤血管生成的影响。方法采用30只裸鼠建立人肺癌皮下移植瘤模型,通过原位分子杂交法测定VEGFmRNA、免疫组织化学法测定VEGF表达和微血管密度计数,比较治疗组和空载组、对照组间的差异,研究以脂质体介导VEGF反义cDNA经局部多点注射封闭内源性VEGF表达的抗血管生成作用。结果治疗组肿瘤组织的VEGFmRNA阳性细胞数为(21.83±13.47)个/0.05mm2、VEGF蛋白阳性细胞数(20.76±15.69)个/0.05mm2、微血管密度计数(MVD)为(2.30±1.95)条/0.20mm2,与对照组、空载组的差异均有统计学意义(P<0.01),VEGF反义RNA治疗能够有效的封闭内源性VEGF的生成、使肿瘤组织微血管生成减少,实验结束时瘤体大小与对照组和空载组的差异均有统计学意义(P<0.001)。结论VEGF反义RNA治疗是一种有效的肿瘤抗血管生成基因治疗方法。     

抑癌基因VHL治疗实体肿瘤的实验研究

目的探讨抑癌基因VHL治疗EL-4实体肿瘤的效果。方法皮下注射EL-4淋巴瘤细胞建立C57BL/6小鼠实体肿瘤模型。当肿瘤生长至直径分别为0.1cm和0.4cm时,将小鼠随机分为治疗组和对照组,每组各6只。治疗组瘤体内采用脂质体法注射pcDNA3-VHL基因,对照组注射空载体,观察肿瘤生长情况。用免疫组织化学(免疫组化)和(或)Western印迹方法检测VHL基因、血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、抗凋亡因子(bcl-2)在瘤组织内的表达,测定肿瘤的微血管密度(MVD);TUNEL法测定肿瘤的凋亡指数(AI)。结果VHL基因治疗能够根除小的肿瘤(直径0.1cm),但只能减慢而不能消除较大肿瘤(直径0.4cm)的生长。治疗组VHL基因在瘤组织内高表达,VEGF、HIF-1α和Bcl-2的表达显著低于对照组,MVD明显低于对照组(P<0.05),AI显著高于对照组(P<0.01)。结论VHL基因疗法对小鼠EL-4实体肿瘤的生长有显著的抑制作用。     

血管生长抑制因子对兔耳增生性瘢痕的作用及意义

目的通过观察血管生长抑制因子(内皮抑素)对兔耳增生性瘢痕的新生毛细血管及血管内皮细胞的影响,探讨内皮抑素防治病理性瘢痕的可能性。方法选取新西兰大耳兔16只,在兔耳腹侧面制作直径为6mm全层皮肤缺损创面,每耳4孔,共计128孔,建立增生性瘢痕模型,随机分为内皮抑素治疗组、生理盐水对照组;观察瘢痕变化。结果经内皮抑素局部注射治疗后的瘢痕持续时间缩短,同期瘢痕面积小于对照组(P<0.01)。治疗组病理组织切片光镜下同期微血管数少于对照组(P<0.01)。治疗组电镜下发现血管内皮细胞凋亡,细胞核核膜不完整、固缩,染色质分布不均、边聚,线粒体肿胀变性,嵴突破坏;对照组内皮细胞大多结构完整。结论内皮抑素可能通过抑制血管内皮细胞增殖及新生血管的形成,V诱发内皮细胞凋亡,起到一定防治瘢痕的作用,可能为临床治疗病理性瘢痕提供一条新的途径。     

四肢火器伤骨缺损修复方法的选择

分析了５６例四肢火器伤骨缺损的发生原因，总结了２８例吻合旋髂深血管的髂骨移植的优点及１５例吻合腓血管的长段腓骨移植的适应证和９例肩胛骨皮瓣移植方法的经验。强调指出半环槽式外固定架在四肢长骨火器伤骨缺损治疗中具有独特的优越性，它将成为四肢火器伤骨折、骨不连及骨缺损治疗的首选方法。     

前臂背侧血管分布特点与皮瓣设计

目的：通过成人前臂背侧血管的解剖学观测，为临床选用皮瓣提供依据。方法：用５０例上肢标本，对前臂背侧血管的分支分布和吻合进行详细的解剖学观察和分析。结果：骨间后动脉和骨间前动脉腕背支是前臂背侧的营养血管，动脉间以及与尺、桡动脉腕背支相吻合。结论：本研究为下述血管为蒂的三种逆行皮瓣，提供了可靠的解剖学依据：（１）以桡动脉腕背支为蒂前臂背侧中下段皮瓣；（２）以骨间前动脉腕背支的尺侧骨皮支为蒂前臂背侧中下段尺侧皮瓣；（３）以骨间前动脉腕背支的桡侧骨皮支为蒂前臂背侧中下段桡侧皮瓣。上述皮瓣可携带骨膜、骨质，用于手部创伤的修复。     

手术治疗胰体尾癌26例临床分析

目的探讨胰体尾癌外科治疗方法和根治性切除的影响因素。方法回顾性分析手术治疗26例胰体尾癌病例的临床病理资料。结果肿瘤侵犯横结肠者2例,脾脏者2例;侵犯脾动静脉14例,门静脉、肠系膜上静脉2例,肠系膜上动脉、腹腔干8例。肿瘤直径小于4cm11例,4—8cm13例,大于10cm2例,根治性切除组肿瘤直径平均为3．8cm（2例胰腺囊腺癌除外）,姑息性切除组肿瘤直径平均为5．4cm。根治性切除18例,姑息性切除8例,胰体尾切除加脾切除24例,门静脉、肠系膜上静脉局部楔行切除修补2例,胰体尾切除加脾切除加横结肠切除2例。根治性切除组与姑息性切除组中位生存时间分别为18．6个月和10．3个月。结论积极行手术切除肿瘤是胰体尾癌患者获得长期生存的唯一途径,而肿瘤的大小、对重要血管和邻近脏器的侵犯程度是影响肿瘤能否根治性切除的重要因素。     

胰头癌的外科治疗

胰腺癌的发病率近年来有上升趋势 ,据国外资料 ,胰腺癌的发病率近 30年来已增加 3～ 7倍 ,如美国的发病率达 10 /10万人 ,已超过胃癌的发病率 ,其病死率占恶性肿瘤的第 4位。国内统计 ,胰腺癌发病率较低 ,但近年来也呈上升趋势 ,如上海市区 196 3年统计的发病率为 1.16 /10万人 ,1977年增至3 .8/10万人 ,1990年上升至 5 .1/10万人 ,1974年占恶性肿瘤的第 14位 ,至 1984年跃居于第 5位。中国医科大学一院 196 0年 1月至 1984年 12月 ,2 5年间共收治胰腺癌 36 0例 ,196 0年1月至 1972年 12月 13年间收治 86例 ,1973年 1月至 1984年12月 12年间…     

COMPARISON OF SPEED OF ONSET OF ANALGESIC EFFECT OF DIAMORPHINE AND MORPHINE

In a random, double-blind crossover trial using an ischaemiclimb pain model we have assessed the speed of onset of analgesiaafter an i.v. bolus of equipotent doses of diamorphine and morphinein 12 healthy male volunteers. Pain and its subsequent reliefwere assessed by means of a visual analogue scale. Two of thesubjects found diamorphine acted quicker than morphine, onefound no difference and nine found that morphine was quickerthan diamorphine. The mean time to diamorphine effect was 53%greater than for morphine (P < 0.005, Wilcoxon rank sum test).These findings suggest that, for rapid relief of pain, morphineis more suitable than diamorphine.     

胆囊腺肌增生症11例临床分析

目的探讨胆囊腺肌增生症的病因、诊断、恶变倾向及治疗方法。方法回顾11例经病理检查确诊的胆囊腺肌增生症的临床资料,并复习相关文献。患者术前均行B超检查,2例行CT检查。结果11例胆囊腺肌增生症临床表现与慢性胆囊炎、胆石症相似,术前B超明确诊断4例,诊断率为36．36％。在我们的病例中,局限型10例,节段型1例,无弥散型。11例均行胆囊切除,全部合并胆囊炎,6例合并胆囊结石,提示其发病与炎症和结石有关。结论胆囊腺肌增生症是一种胆囊壁增生性疾病,病因尚未十分清楚,其临床诊断困难,确诊需依赖病理检查。结合B超、CT及MRI等综合分析可提高术前诊断的准确性。因其具有恶变的潜在性,特别是60岁以上合并节段型者,故一旦诊断明确,均应手术切除胆囊。     

Cajal间质细胞在大鼠"泻剂结肠"结肠肌电变化中的作用

目的　研究长期服用接触性泻剂对大鼠结肠肌电的影响 ,探讨Cajal间质细胞 (ICC)在“泻剂结肠”肌电变化中的作用。方法　 32只大鼠随机分为 2组 ,实验组饲以含酚酞饲料 ,3个月后测定结肠慢波频率及振幅 ;用碘化锌 锇酸法 (ZIO)观察肌间丛ICC变化 ,透射电镜观察肌间丛神经和ICC的超微结构变化。结果　“泻剂结肠”结肠慢波频率明显减慢 (P <0 .0 5 ) ,肌间丛ICC分布不均匀 ,突起连接杂乱 ;电镜下见肌间丛神经轴突空化 ,ICC样细胞变性。结论　长期服用酚酞可导致结肠慢波频率减慢 ,其可能机理为肌间丛神经及ICC变性所引起