聚合酶链反应技术在病理诊断中检测DNA的应用

聚合酶链反应技术在病理诊断中检测ＤＮＡ的应用韦新荣陈晓金兰新田凤英李志萍张吉生（新疆医学院病理解剖教研室）（新疆石油局职工总院）聚合酶链反应技术作为一种快速、特异性高的ＤＮＡ片断体外扩增技术已逐渐地应用于临床病理诊断中。我们就应用聚合酶链反应（ＰＣＲ...     

正交试验在选择聚合酶链反应最适条件中的应用

正交试验在选择聚合酶链反应最适条件中的应用孙晨光，罗超权，伍新尧，杨英浩，扶庆国（中山医科大学生化教研室；广州，５１００８９）主题词聚合酶链反应；研究设计中图号０３．３聚合酶链反应（ＰＣＲ）是８０年代兴起的一种体外ＤＮＡ扩增技术。它能快速特异地扩增目...     

聚合酶链反应对淋球菌,衣原体及支原体三联检测的诊断价值

聚合酶链反应对淋球菌、衣原体及支原体三联检测的诊断价值王积安，杨红起，刘继英，张爱民，杨树屏（东营市胜利石油管理局中心医院，东营市２５７０３４）关键词聚合酶链反应；淋球菌；衣原体；支原体聚合酶链反应（ＰＣＲ）是一种体外ＤＮＡ扩增技术。我院自１９９３年...     

聚合酶链反应检测脑膜炎奈瑟菌DNA片段

聚合酶链反应检测脑膜炎奈瑟菌ＤＮＡ片段刘长云童祥华苗乃法冯永堂李在连我们采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对该菌染色体中一段核苷酸作为靶ＤＮＡ进行扩增，并对部分确诊病例的临床标本进行了检测，效果满意，现报道如下。一、材料与方法１．脑膜炎奈瑟菌的体外培养与...     

现代分子生物学技术系列讲座（三）聚合酶链反应（PCR）

现代分子生物学技术系列讲座（三）聚合酶链反应（ＰＣＲ）杜卫东（病理学教研室）聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｌｉａｉｎＲ－ｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）是体外选择性扩增特异性核酸（ＤＮＡ或ＲＮＡ）片段的一项新技术。Ｍｕｌｌｉｓ１９８３年发明，１９８５年...     

聚合酶链反应检测HBV DNA及其临床意义

聚合酶链反应检测ＨＢＶ　ＤＮＡ及其临床意义王金花，武菲菲，靳安佳，于方治聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）是近年发展起来的体外特异性ＤＮＡ扩增技术，可使极微量单拷贝特定核苷酸片段在２～４ｈ内扩增到上百万倍，有利于检测...     

聚合酶链反应检测HBV一DNA与乙型肝炎病毒血清学标志的关系

聚合酶链反应检测ＨＢＶ一ＤＮＡ与乙型肝炎病毒血清学标志的关系樊晓明，曾辉，李修岑，杨玉秀，李怀斌聚合酶链反应（ＰｏｆｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）是一种特异性体外基因扩增技术，我们用ＰＣＲ检测了４７５例病人血清的ＨＢＶ一ＤＮＡ，与其...     

PCR技术的临床应用进展

ＰＣＲ技术的临床应用进展附院检验科韦建能聚合酶链反应（简称ＰＣＲ）是一种在体外扩增特异性ＤＮＡ序列的技术，１９８５年由Ｍｕｌｌｉｓ发明，Ｓａｉｋｉ等首先应用于临床￣［１］。由于它在很短时间内可使靶ＤＮＡ序列扩增２×１０￣５～１０￣６倍，具有快速、简便...     

应用聚合酶链反应检测宫腔滋养细胞DNA的研究

目的：依据孕妇宫腔内存在滋养细胞的理论，寻找一种非创伤性产前基因诊断的新方法。方法：用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对１５例孕６～１２周孕周初产妇宫腔胎儿脱落细胞的ＤＮＡ进行特异扩增，扩增的基因为Ｙ染色体短臂单拷贝基因片段（ＤＹＳ１４）。扩增片段的大小为２３９ｂｐ。结果：８例妊娠男性胎儿中７例出现特异扩增带，检出率为８７．５％。７例妊娠女性胎儿未出现扩增带，无假阳性。本次研究的符合率为９３．３％。结论：聚合酶链反应检测孕妇宫腔滋养细胞ＤＮＡ具有较高的灵敏度和特异性，孕早期宫腔冲洗作为非创伤性产前基因诊断的一种取材方法可应用于临床。     

聚合酶链反应检测沙眼衣原体的方法建立与临床应用

聚合酶链反应检测沙眼衣原体的方法建立与临床应用郭津津王欣夏志军１崔波２（第二临床学院病毒室，１１０００３）关键词聚合酶链反应；沙眼衣原体生殖泌尿系的衣原体感染日渐增多。我们参考文献［１］建立了沙眼衣原本ＤＮＡ的聚合酶链反应检测法（ＰＣＲ），直接检测尿...     

PCR-SSP快速HLA-DR基因分型法的建立及临床初步应用

采用序列特异性引物聚合酶链反应（ＰＣＲＳＳＰ）方法，对２２份国际标准细胞株ＤＮＡ及２３例临床血标本ＤＮＡ进行ＨＬＡＤＲ基因分型，扩增条件为９４℃，３０ｓ，５８℃，３０ｓ共３０个循环，对各个标准ＤＮＡ的分型结果显示，符合率为１００％，无假阳性及假阴性，提示本方法快速、准确，适合于临床应用     

TaqDNA聚合酶一步法获得TGF-β_1基因片段的RT-PCR扩增产物

以组织细胞中提取的总ＲＮＡ为模板，加入ＴａｑＤＮＡ聚合酶和一对以ＴＧＦβ１ｃＤＮＡ为模板设计的引物，经变性、退火、延伸共３０次循环后，可以得到以ｃＤＮＡ为模板的扩增产物。实验证实ＴａｑＤＮＡ聚合酶具有逆转录酶活性，用一步常规聚合酶链反应即可获取逆转录聚合酶链反应的ＴＧＦβ１４６８ｂｐ扩增产物。     

聚合酶链反应在HBV检测中的应用

聚合酶链反应在ＨＢＶ检测中的应用本院附院检验科王凤超，吕美荣，钱宛馨，钱明珍，汤依群聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）是一种ＤＮＡ体外扩增技术，自１９８８年应用于检测乙肝病毒［１］．我们采用该技术，检测６８例乙肝患...     

PCR—SSP快速HLA—DR基因分型法的建立及临床初步应用

采用序列特异性引物聚合酶链反应（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，对２２份国际标准细胞株ＤＮＡ及２３例临床血标本ＤＮＡ进行了ＨＬＡ－ＤＲ基因分型，扩增条件为９４℃，３０ｓ，５８℃３０ｓ共３０个循环，对各个标准ＤＮＡ的分型结果显示，符合率为１００％，无假阳性及假阴性，提示本方法快速，准确，适合于临床应用。     

用尿嘧啶－DNA－糖基化酶控制聚合酶链反应的产物污染

聚合酶链反应（ＰＣＲ）灵敏度极高，痕量的ＰＣＲ产物能污染新的ＰＣＲ体系（称为产物污染）导致假阳性结果，我们通过在所有的ＰＣＲ扩增中掺入ｄＵＴＰ使ＰＣＲ产物含“ｄＵ”，在以后的ＰＣＲ扩增前用尿嘧啶－ＤＮＡ糖基化酶（Ｕｒａｃｉｌ－ＤＮＡ－Ｇｌｙｃｏｌａｓｅ，ＵＤＧ）处理，然后加热去除ＵＤＧ活性防止了产物污染。ＵＤＧ切割磷酸糖骨架上的尿嘧啶，可阴止ＤＮＡ聚合酶对它的复制，而对普通ＤＮＡ（即含”ｄＴ”）无影响。因为ＵＤＧ不与ｄＵＴＰ反应，而且在ＰＣＲ扩增前加热变性失活，使含尿嘧啶的污染物的污染得到很好控制。     

2.2.15细胞中HBV DNA前C和C区PCR扩增及其产物测序

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及其扩增产物的直接测序技术对２．２．１５细胞中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因前Ｃ和Ｃ区进行测序。结果表明，根据ａｙｗ亚型ＨＢＶ基因设计的引物能够扩增２．２．１５细胞中ＨＢＶＤＮＡ扩增产物位于２２１－２９８碱基对之间，而对ａｄｒ亚型ＨＢＶＤＮＡ无扩增作用，说明ＰＣＲ扩增是特异性的，所测到的１３２个碱基序列与ａｗｙ１亚型ＨＢＶＤＮＡ完全符合，提示２．２．１５细胞中ＨＢＶＤＮＡ属ａ     

应用嵌套式PCR法检测结核杆菌DNA

应用嵌套式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）法检测结核菌ＤＮＡ，所用内、外两对寡核苷酸引物衍生于３７．７ｕ（３８ｋＤａ）蛋白抗原ｂ的编码（Ｐａｂ）ＤＮＡ序列。对６种抗酸分枝杆菌和１０种非分枝杆菌ＤＮＡ进行扩增，经琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色证实，只有人型结核杆菌、牛型结核杆菌和卡介苗（ＢＣＧ）出现３２２ｂｐ特异扩增带，而其他菌种未见此种扩增。第１步和第２步ＰＣＲ分别检测到的最低限量为１０ｐｇ和１０ｆｇ的靶ＤＮＡ。采用此法检测７２份临床标本，结果显示：该技术具有特异性强、敏感性高、快速简便的优点，尤适用于肺内外结核的早期诊断。     

微波处理标本用于聚合酶链反应检测淋病奈瑟氏菌

微波处理标本用于聚合酶链反应检测淋病奈瑟氏菌阮月芹韩兆东高乐俊（附属医院检验科，滨州市２５６６０３）关键词微波；聚合酶链反应；淋病奈瑟氏菌聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测泌尿、生殖道炎患者分泌物中淋病奈瑟氏菌ＤＮＡ（ＮＧ－ＤＮＡ）是诊断淋球菌感染的一种快速...     

DNA聚合酶链反应对结脑的诊断价值

ＤＮＡ聚合酶链反应对结脑的诊断价值王伟，王文汇，曲仪庆山东医科大学附属医院（２５００１２）ＤＮＡ聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术是在基因水平上检测结核菌的有效方法［１］。本文对ＰＣＲ技术对结核性脑膜炎（结脑）...     

TaqDNA聚合酶一步法获得TGF—β1基因片段的RT—PCR扩增产物

以组织细胞中提取的总ＲＮＡ为模板，加入ＴａｑＤＮＡ聚合酶和一对以ＴＧＦ－β１ｃＤＮＡ为模板设计的引物，经变性，退火，延伸共３０次循环后，可以得到ｃＤＮＡ为模板的扩增产物，实验证实ＴａｑＤＮＡ聚合酶具有逆转录酶活性，用一步常规聚合酶锭反应即可获取逆转录聚合酶链反应的ＴＧＦ－β１４６８ｂｐ扩增产物。