14-3-3σ基因影响人低分化鼻咽癌细胞CNE-2的信号通路

目的探讨14-3-3σ对鼻咽癌CNE-2细胞的信号通路的影响。方法通过反相蛋白质阵列检测14-3-3σ转染鼻咽癌CNE-2细胞前后特定蛋白质表达量的变化。结果10种蛋白的表达量在14-3-3σ转染CNE-2细胞的前后发生了大于15％的变化,分别是Akt与pAkt（S473）,mTOR与pmTOR,ERK2,p-p38,pSTAT3（Y705）与pSTAT3（S727）及Rb与p—Rb。结论14-3-3σ在鼻咽癌CNE．2细胞中所起的作用可涉及4条信号通路,分别是Akt通路、MAPK通路、JAK-STAT通路及Rb—E2f通路。     

14-3-3β蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨14-3-3β蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义。方法利用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测85例非小细胞肺癌14-3-3β蛋白的表达,并与临床病理因素及预后进行统计分析。结果14-3-3β蛋白在非小细胞肺癌中总的阳性表达率为47%,在肺鳞癌中的表达显著高于腺癌中的表达(57%vs32%,P0.05);14-3-3β蛋白表达阳性患者及阴性患者中位生存期分别为56个月和42个月,二者有显著统计学差异(P0.05);14-3-3β蛋白的表达与年龄、性别、吸烟状况、肿瘤大小、淋巴结状态、肿瘤分期无关。结论14-3-3β蛋白在非小细胞肺癌中存在阳性表达,14-3-3β蛋白在鳞癌中表达高于腺癌,且阳性表达者预后好于阴性表达者。     

14-3-3蛋白在神经退行性变疾病诊断中的应用

14-3-3蛋白是分布十分广泛的真核生物蛋白质。在脑组织中含量丰富。哺乳动物中，14-3-3蛋白主要包括7个亚型，在体内发挥诸多重要的生物学功能。目前，14-3-3蛋白检测主要用于对克一雅病(CJD)的辅助诊断。14-3-3蛋白也可在一些其他的神经系统退行性变疾病中检出，如某些病毒性脑炎、急性脑梗塞、中风等。随着针对14-3-3蛋白各亚型抗体的制备以及14-3-3蛋白检测技术的改进，为神经退行性变疾病之间的鉴别诊断提供了可能，同时也为进一步研究14-3-3蛋白的作用机制提供了有效的手段。     

胰腺癌中14-3-3蛋白各亚型的表达及其临床意义

目的探讨14-3-3蛋白各亚型在人胰腺导管腺癌组织中的表达情况及其临床意义。方法采用石蜡包埋组织进行免疫组化染色,分析14-3-3蛋白各亚型在30例胰腺癌和19例胰腺癌旁正常组织中的表达状态,探讨其与胰腺癌临床病理参数之间的关系。结果 14-3-3蛋白β、γ、ε、ζ、η、θ和σ7个亚型在胰腺癌组织原发灶中表达阳性率分别为70%(21/30)、83.33%(25/30)、26.67%(8/30)、73.33%(22/30)、33.33%(10/30)、30%(9/30)和43.33%(13/30)。其中癌旁正常胰腺组织的β、γ、ζ、η和σ亚型阳性率与胰腺癌组织比较差异显著(P0.05),ε和θ亚型阳性率比较差异不显著(P0.05);14-3-3蛋白阳性表达率与胰腺癌的分化程度、恶性级别及淋巴结转移均无明显关系(P0.05)。结论 14-3-3蛋白7个亚型中有5个在胰腺癌组织中高表达,表明该蛋白在胰腺癌的发生过程中具有重要作用,并且有可能成为胰腺癌基因治疗新的靶点。     

14-3-3σ逆转录病毒载体的构建及稳定转染HaCat细胞系的建立

目的:构建14-3-3σ逆转录病毒载体,并建立高表达14-3-3σ的HaCat细胞系.方法:以人基因组为模板,通过PCR扩增出14-3-3σ基因的编码序列,定向插入到pLEGFP-N1质粒中,并在STBL3内进行扩增,刷选阳性克隆,酶切和测序验证后,转染293vr细胞进行病毒包装、扩增、纯化、获取逆转录病毒栽体.将逆转录病毒载体感染HaCat细胞后Western、实时荧光定量PCR法检测14-3-3σ的表达情况.结果:连接重组后经酶切和测序筛选出pLEGFP-N1-14-3-3σ;稳定转染的HaCat细胞系在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光.Western和实时荧光定量PCR法表明14-3-3σ表达明显增强.结论:成功构建了14-3-3σ逆转录病毒载体,并构建了英稳定转染的HaCat细胞系.     

14-3-3蛋白功能的研究进展

<正>14-3-3蛋白家族是一组高度保守的可溶性酸性蛋白质,相对分子质量为(28~33)×103,广泛分布于各种真核细胞中。14-3-3蛋白有多个亚型,并且各亚型都有其特殊的功能,通常形成同二聚体或异二聚体而发挥作用,能够特异性地与磷酸化丝氨酸或苏氨酸肽段结合,参与多种信号转导途径。14-3-3蛋白参与细胞内众多的重要生命活动过程,功能涉及到细胞周期调控、信号转导、细胞凋亡、细胞生长、肿瘤生长、应激反应、疾     

14-3-3蛋白在人类疾病中的研究

14—3—3蛋白最早由MooreBW等提出,用来描述酸性的高丰度的脑特异蛋白。根据其在DAEA纤维色谱上的组分数和淀粉凝胶电泳的迁移位置而命名。在哺乳动物中,该家族至少存在7个由不同基因编码的高度保守的亚型。近年来有研究表明各亚型均分别与人类常见疾病有密切关系,作者对14—3—3蛋白在人类疾病中的研究进展进行综述。     

PI3K蛋白和mRNA在鼻咽癌组织中的表达及意义

目的观察鼻咽癌组织中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase PI3K)的表达与临床病理的关系,探讨其可能参与的鼻咽癌的侵袭转移过程的机制。方法采用免疫组化S-P法及Q-RT-PCR分别在蛋白质与核酸水平检测鼻咽癌标本肿瘤组织与鼻咽正常上皮组织中PI3K的表达。并探讨其表达与临床指标的关系,及其在鼻咽癌侵袭转移中的作用。结果 (1)鼻咽正常上皮组织PI3K的表达显著低于鼻咽癌组,两者差异有统计学意义(P<0.05)。(2)PI3K的表达与患者的年龄、性别以及肿瘤原发部位和大小均无关(P>0.05),而与分化程度、浸润深度和TNM分期等临床病理指标之间的差异比较则显示统计学意义显著(P<0.05)。结论 PI3K在鼻咽癌的恶性表型及侵袭和转移中起促进作用,它的表达同TNM分期呈正向关。     

日本血吸虫(中国大陆株)14-3-3信号蛋白的真核表达

目的从日本血吸虫成虫cDNA中扩增出信号蛋白Sj14-3-3编码基因，并亚克隆至真核表达载体pcDNA3．1( )，旨在制备重组诊断抗原和分子疫苗。方法提取日本血吸虫成虫总RNA，分离mRNA，RT-PCR法制备cDNA．并扩增出Sj-4-3-3编码基因，通过线性TA克隆载体pGEM-T连接，亚克隆至真核表达载体pcDNA3．1( )，经转染至COS-7细胞中表达，Western blotting鉴定。结果RT-PCR产物、pGEM-T-Sj14-3-3及pcDNA3．1( )-Sj14-3-3分别经双酶切后均获得一特异性基因片段，经SDS-PAGE及Western blotting鉴定后的分子量为29kD。结论真核表达重组质粒pcDNA3．1( )-Sj14-3-3在COS-7细胞中的表达产物是一分子量为29kD的蛋白，并能被抗Sj14-3-3单克隆抗体识别。     

乳腺癌14-3-3 sigma基因表达及其临床意义

目的 探讨乳腺癌14—3—3sigma基因表达及其临床意义。方法 采用RT—PCR和western—blot方法,分别对40例乳腺癌患者肿瘤组织和18例乳腺良性病变的乳腺组织,半定量检测14—3—3sigma基因的表达情况。结果 40例乳腺癌患者中,有35例（35／40,87．5％）没有检测出14—3—3sigma mRNA;western—blot也证明,40例中有32例14—3—3sigma蛋白表达缺失（32／40,80．0％）,两种试验同时阴性的有31例（77．5％）,另各有2例低表达。而在18例乳腺良性病变的患者,RT—PCR和western—blot均检测出14—3—3sigma基因表达。结论 14—3—3sigma基因表达缺失或低表达是乳腺癌的经常性事件,研究乳腺癌14—3—3sigma基因表达情况,可为乳腺癌的诊断提供实验室依据。     

H_2O_2致PC12细胞凋亡与细胞内14-3-3蛋白表达水平下调的关系

目的:探讨用H2O2处理PC12细胞制作PD氧化应激细胞模型的最佳浓度与最适处理时间,以及H2O2致PC12细胞凋亡与14-3-3蛋白表达水平的关系。方法:采用MTT法、荧光分光光度计、流式细胞术及免疫印迹技术分别检测PC12细胞活力、Caspase酶活性、细胞凋亡率以及14-3-3蛋白表达量。结果:当H2O2浓度为100μmol/L时Caspase活性最高;100μmol/LH2O2处理PC12细胞24h时细胞凋亡率最高;PC12细胞的凋亡率与14-3-3蛋白表达的水平呈显著负相关。结论:100μmol/L和24h分别为用H2O2制作PD氧化应激模型的最佳浓度和处理时间,H2O2致PC12细胞的凋亡与细胞内14-3-3蛋白表达水平下调有关。     

日本血吸虫信号蛋白14-3-3在虫卵的定位及其免疫诊断价值初探

目的探讨日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3)在虫卵内的定位和重组Sj14-3-3(rSj14-3-3)的免疫诊断价值。方法从日本血吸虫尾蚴感染42 d的兔肝脏中分离虫卵,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Sj14-3-3基因在虫卵期的转录水平;兔肝组织石蜡切片免疫组化染色,观察内源性Sj14-3-3在虫卵内的分布和表达丰度。利用纯化的rSj14-3-3和可溶性虫卵抗原(SEA),采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清。结果RT-PCR从日本血吸虫成熟虫卵中检出760 bp左右的基因片断;免疫组化显示Sj14-3-3主要分布在虫卵内毛蚴的体壁和两边的侧腺。检测急性、慢性患者和正常人血清抗rSj14-3-3抗原的抗体阳性率分别为91.0%、78.9%、0.0%;上述标本中抗SEA抗体的阳性率分别为97.4%、88.9%和2.5%。结论用ELISA检测抗SEA抗体和rSj14-3-3抗体诊断血吸虫病具有高度的特异性和敏感性,而Sj14-3-3在成熟虫卵阶段高表达,可能是SEA的主要组分,具有实用价值。     

日本血吸虫信号蛋白14-3-3在虫卵的定位及其免疫诊断价值初探

目的探讨日本血吸虫信号蛋白14—3—3（sj14—3—3）在虫卵内的定位和重组Sj14—3-3（rsj14—3—3）的免疫诊断价值。方法从日本血吸虫尾蚴感染42d的兔肝脏中分离虫卵,用逆转录聚合酶链反应（1it—PCR）检测sj14．3．3基因在虫卵期的转录水平;兔肝组织石蜡切片免疫组化染色,观察内源性Sj14—3—3在虫卵内的分布和表达丰度。利用纯化的rSj14-3-3和可溶性虫卵抗原（SEA）,采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清。结果RT-PCR从日本血吸虫成熟虫卵中检出760bp左右的基因片断;免疫组化显示Sj14-3-3主要分布在虫卵内毛蚴的体壁和两边的侧腺。检测急性、慢性患者和正常人血清抗rSj14-3—3抗原的抗体阳性率分别为91．0％、78．9％、0．0％;上述标本中抗SEA抗体的阳性率分别为97．4％、88．9％和2．5％。结论用ELISA检测抗SEA抗体和rSj14-3-3抗体诊断血吸虫病具有高度的特异性和敏感性,而Sj14—3-3在成熟虫卵阶段高表达,可能是SEA的主要组分,具有实用价值。     

nm23和p53蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其意义

目的:探讨肿瘤抑制基因nm23、p53蛋白产物在鼻咽癌组织中异常表达与肿瘤临床分期、病理分级和淋巴结转移等肿瘤的生物学特征的关系。方法:应用免疫组织化学ABC方法检测42例鼻咽癌活检标本中nm23、p53蛋白的表达水平。结果:鼻咽癌组织中nm23和p53蛋白表达的阳性率分别为50.0%和45.2%,nm23蛋白表达与临床分期和病理分级呈正相关,而与鼻咽癌的淋巴结转移呈负相关(P<0.05)。p53蛋白表达与鼻咽癌的临床分期和分化程度呈正相关,而与肿瘤的淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:nm23、p53蛋白的表达在鼻咽癌的侵润转移中起重要作用,p53表达与鼻咽癌组织临床分期、分化程度有关,鼻咽癌的淋巴结转移可能与多基因异常改变有关。     

Galectin-3蛋白在大肠癌中的表达及意义

Galectin-3是一种半乳糖苷结合蛋白，它与特异性细胞表面糖蛋白或糖脂的糖结合域结合。研究显示，Galectin-3在正常细胞及肿瘤中都广泛表达，并起着调节细胞生长与分化、细胞黏附和细胞凋亡的作用，在一些细胞类型中与肿瘤的转化有关。我们采用免疫组化检测55例大肠癌、33例腺瘤及20例正常大肠黏膜组织Galectin-3蛋白的表达，希望能对了解肿瘤转移及判断预后有一定帮助。     

表皮生长因子受体与鼻咽癌的关系

作为发病率居首位的头颈部恶性肿瘤-鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是具有高侵袭性和易转移特征的恶性肿瘤.NPC多发于东南亚国家,尤其是中国南方地区.近年来的研究表明,表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR),一种酪氨酸蛋白激酶受体,在鼻咽癌的发生、发展及预后过程中扮演着重要的角色.EGFR不仅是判断鼻咽癌预后、指导治疗的重要指标,而且成为鼻咽癌治疗的重要靶点之一.本文就近几年来EGFR与鼻咽癌的相关研究及应用做一阐述.     

脑脊液14-3-3蛋白对皮质-纹状体-脊髓变性诊断价值的研究

对皮质 纹状体 脊髓变性 (Creutzfeldt Jakob ,CJD)患者进行脑脊液中 14 3 3蛋白检测 ,以便为CJD提供一个支持临床诊断的有力依据。1　材料和方法1.1　病例的选择①CJD组 :10例CJD ,其中男 3例 ,女 7例 ,年龄 36～ 72岁 ,平均 5 4 .9岁。病程 2 .5～ 84个月 ,平均 17.15月。肯定CJD6例 ,其中经病理证实 1例 ,初步诊断CJD4例。②非CJD组 :伴痴呆症状的其他疾病 5例 :遗传性共济失调、多发脑梗死、癫痫症、CO中毒、白质脑病各 1例 ;2例头痛患者及 2例正常对照。1.2　方法　①标本留取 :脑脊液 1ml于 30℃冰箱备用。②脑脊液中 1…     

LMP1-CTAR3调节CK19和vimentin蛋白在鼻咽上皮与鼻咽癌中的表达

目的 观察LMP1-CTAR3调节的CK19和vimentin蛋白在鼻咽上皮和鼻咽癌中的表达,揭示蛋白质之间的相互作用规律.方法 采用SP免疫组化染色检测LMP1、CTAR3、CK19和vimentin在30例鼻咽上皮组织和60例鼻咽低分化鳞状细胞癌中的表达.结果 ①LMP1在鼻咽上皮组织与鼻咽低分化鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为73.3％和90％;②与LMP1(-)组织比较,CK19蛋白在LMP1(+)的鼻咽上皮组织与鼻咽低分化鳞状细胞癌中的表达降低(P＜0.05);③与LMP1(-)组织比较,vimentin蛋白在LMP1(+)的鼻咽上皮组织与鼻咽低分化鳞状细胞癌的表达升高(P＜0.05).结论 LMP1-CTAR3在鼻咽上皮组织与鼻咽低分化鳞状细胞癌中下调CK19蛋白和上调vimentin蛋白的表达.     

pI3K、p-Akt和PTEN在鼻咽癌中的表达及意义

目的观察鼻咽癌（NPC）组织中pI3K、p-Akt和PIEN表达,探讨它们在鼻咽癌发生中的作用。方法应用免疫组化方法检测60例NPC组织和23例鼻咽部慢性炎症组织中pI3K、p-Akt和PTEN的表达。结果NPC与慢性炎症组pI3K的表达率分别为86．7％（52160）和60．9％（14／23）（P〈0．05）;p-Akt表达率分别为76．7％（46／60）和47．8％（11／23）（P〈0．05）;PIEN的表达率分别为41．7％（25160）和65．2％（15／23）（P〈0．01）。pI3K／p-Akt表达率NPC组明显高于慢性炎症组;PTEN表达率NPC组明显低于慢性炎症组,二组表达均与PTEN表达呈负相关。结论pI3K／Akt信号通路的激活、PrEN的抑制,可能在鼻咽癌的发生中起重要作用。