系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞toll样受体7mRNA及α干扰素mRNA表达的水平及意义

目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)患者与正常人外周血单一核细胞toll样受体7(TLR7) mRNA及α干扰素(IFN-α)mRNA表达的水平及其意义.方法:运用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量方法检测35例SLE患者(其中活动期21例,稳定期14例)外周血单一核细胞TLR7、IFN-αmRNA表达水平,并与正常人20例作对照.结果:SLE患者外周血单一核细胞 TLR7 mRNA及IFN-α mRNA表达水平活动期较正常人和稳定期均有显著升高(均P＜0.01),但稳定期与正常人相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:SLE患者活动期TLR7及IFN-α mRNA表达水平升高,两者成正相关;TLR7及IFN-α在SLE的发病中可能起一定的作用.     

高迁移率族蛋白1、Toll样受体4和血管细胞黏附因子1与狼疮性肾炎血脂异常的关系

目的探讨高迁移率族蛋白1(high mobility group protein,HMGB-1)、Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)和血管细胞黏附因子1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)与狼疮性肾炎(LN)血脂异常和动脉粥样硬化(atheroscleros,AS)的关系。方法收集20例正常健康人、30例系统性红斑狼疮(SLE)无肾脏损害和35例LN患者外周静脉血,检测血脂水平、HMGB1mRNA、TLR-4mRNA、血清HMGB1蛋白水平、外周血单核细胞CD14+/VCAM-1表达。结果 LN组患者血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)明显高于SLE组和正常对照组(P0.01);LN组患者血清中HMGB1表达量(9.86±1.54)g/L高于正常对照组(7.85±0.75)g/L和SLE组(7.46±1.53)g/L;HMGB1mRNA和TLR4mRNA表达亦升高(P0.01),SLE组和正常对照组差异无统计学意义;与SLE组和正常对照组比较,LN组单核细胞中CD14+/VCAM-1表达明显增强;在LN组患者外周血中HMGB1表达与TLR4、血脂(TG、LDL-C)呈正相关(r=0.915、0.536、0.448,P0.05或0.01)。结论在LN发病过程中晚期炎症介质HMGB1可能通过与TLR4结合,促进单核细胞表面VCAM-1表达,从而引起血脂异常,参与AS的形成。     

系统性红斑狼疮患者生长激素释放肽与胰岛素抵抗的相关性研究

目的:初步探讨初治SLE患者生长激素释放肽(Ghrelin)表达水平及其与胰岛素抵抗的关系。方法:选择30例初治SLE患者为观察组,另选择30名健康志愿者为正常对照组。分别检测两组外周血单个核细胞(PBMC)中ghrelin mRNA表达水平和空腹血清ghrelin水平,计算两组胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),利用Pearson相关系数进行相关分析。结果:SLE组HO-MA-IR明显高于正常对照组(P<0.01);SLE组PBMC ghrelin mRNA表达比正常对照组明显减弱,其血清ghrelin水平亦明显低于正常对照组(P<0.01),且SLE组低水平的ghrelin与HO-MA-IR呈负相关关系(r=-0.60,P<0.01)。结论:SLE患者存在胰岛素抵抗(IR),ghrelin表达水平低下可能与SLE患者IR相关。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中Brn-3a mRNA表达水平的研究

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞中Brn-3a mRNA 表达及其与疾病活动性的关系.方法 以β-actin为内参照,建立逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法,在Light Cycler Real time PCR检测仪上检测92例SLE患者(活动期46例,缓解期46例)、其他结缔组织病(CTD)患者30例(疾病对照组)、健康体检者30例(正常对照组)外周血单个核细胞(PBMCs)中Brn-3a mRNA 的表达水平和含量.以ΔCt=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)来比较基因表达水平的高低.结果 活动期SLE患者Brn-3a mRNA表达水平明显高于缓解期SLE患者(P<0.01);活动期SLE患者Brn-3a mRNA表达水平明显高于正常对照组与疾病对照组(P<0.01);缓解期SLE患者Brn-3a mRNA表达水平与正常人及疾病对照组差异无统计学显著性意义(P>0.05).结论 活动期SLE患者Brn-3a mRNA表达水平显著高于正常人、疾病对照组和疾病缓解期,提示Brn-3a的表达与SLE的发生发展存在一定关联性,可能参与了SLE的发病过程并与疾病的活动性有关.     

甲氨蝶呤对寻常型银屑病外周血TLR4及TLR9表达调控的研究

目的:研究甲氨蝶呤(MTX)对寻常型银屑病患者外周血Tol1样受体(TLR)4和TLR9表达的影响。方法:利用荧光定量聚合酶链反应法测定22例寻常型银屑病患者治疗前后外周血及20例正常对照者外周血中TLR4mRNA及TLR9mRNA的定量表达。结果:银屑病外周血中TLR4mRNA及TLR9mRNA的表达均高于正常对照者外周血的表达水平(t=11.26,P<0.001;t=8.39,P<0.001)。银屑病患者经过MTX治疗4w后,病情明显改善,外周血中TLR4mRNA及TLR9mRNA的表达水平低于患者治疗前的表达水平(t=3.49,P=0.0015;t=7.75,P<0.001),但与正常对照者的表达水平差异无统计学意义(t=1.76,P=0.0925;t=1.38,P=0.1741)。结论:TLR4及TLR9的表达增高与银屑病的发病有关。MTX能抑制寻常型银屑病外周血TLR4mRNA及TLR9mRNA的过度表达,这可能是MTX治疗银屑病的作用机制之一。     

微小RNA-155在系统性红斑狼疮外周血单个核细胞中的表达

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中miRNA-155的表达水平及其对SLE预后的意义。方法收集我院2013年9月-2016年3月确诊并治疗的SLE患者61例,根据SLE疾病活动指数分为轻度组26例,中重度组35例,同期选择30例健康体检者作为对照组。应用实时荧光定量PCR技术对入选者PBMC中miRNA-155的表达水平进行检测,对比分析各组表达情况。结果与对照组相比,轻度活动组的miRNA-155表达水平无统计学差异(P0.05);中重度活动组miRNA-155水平明显高于对照组(P0.05)。抗dsDNA抗体、24h尿蛋白与SLE患者miRNA-155表达水平显著相关(P0.05);与无狼疮肾组相比,狼疮肾阳性组SLE患者miRNA-155水平显著升高(P0.05);与血液系统正常组SLE患者相比,异常组miRNA-155水平显著升高(P0.05)。结论中重度活动SLE患者PBMC中miRNA-155表达升高;miRNA-155表达与抗dsDNA抗体及24h蛋白尿相关;miRNA-155在狼疮肾、血液系统异常中呈高表达。     

ABCA1 DNA甲基化水平与AS及血脂的关系

目的探讨动脉粥样硬化(AS)患者血中三磷酸腺苷结合盒运转体A1(ABCA1)DNA甲基化水平与AS的发生、发展及血脂变化的关系。方法用颈动脉多普勒超声对患者检查、用全自动生化分析仪检测患者血脂水平,以确诊AS患者;收集AS组及正常对照组外周血标本各30例,以荧光定量PCR检测2组的ABCA1 mRNA表达,采用巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)法检测其ABCA1 DNA甲基化水平,并分析其与血脂水平相关性。结果与正常组相比,AS组甘油三酯(TG)含量升高2.17倍(P<0.01),胆固醇(CHOL)含量升高1.21倍(P<0.05),高密度脂蛋白(HDL)升高0.83倍,低密度脂蛋白(LDL)升高1.18倍(P<0.05);与正常对照组相比,AS组患者ABCA1 mRNA水平降低了63.3%(P<0.01),ABCA1 DNA甲基化水平,AS组较正常对照组升高了1.38倍(P<0.01);血脂水平与ABCA1 DNA甲基化水平呈正相关(r=0.489 8,P<0.01)。结论外周血中ABCA1 DNA高甲基化与AS的发生、发展密切相关。     

系统性红斑狼疮患者IRF5基因表达的研究

目的探讨SLE人群和正常对照干扰素调节因子5(IRF5)基因表达的差异。方法收集92例活动期的SLE病例与88名正常对照,提取外周血总RNA并反转录为cDNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应扩增IRF5基因,获得扩增体系的Ct值后,用公式2-⊿⊿Ct计算SLE组和正常对照组的IRF5的mRNA表达水平。SLE患者抗ds-DNA抗体检测采用免疫印迹法。结果利用实时荧光定量聚合酶链反应扩增得到了预期大小的IRF5基因片段;SLE组、正常对照组外周血IRF5mRNA的表达水平分别为0.232±0.076、0.081±0.040,SLE组IRF mRNA表达水平升高(P0.05)。SLE患者抗ds-DNA抗体阳性组IRF5基因表达水平有增高的趋势,但与阴性组相比没有差异。结论系统性红斑狼疮SLE患者外周血IRF5表达异常,可能在系统性红斑狼疮组发病中起一定作用。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中ISG15 mRNA表达水平的研究

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中ISG15 mRNA表达及其与疾病活动性的关系.方法 采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)的方法,在Light Cycler Real time PCR检测仪上检测89例SLE患者(活动期50例、缓解期39例)、结缔组织病(CTD)患者34例(疾病对照组)、健康体检者35名(健康对照组)外周血PBMCs中ISG15 mRNA 的表达水平和含量.以ΔCt=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)来比较基因表达水平的变化.结果 活动期SLE患者ISG15 mRNA表达水平(ΔCt=2.04±1.07)明显高于缓解期SLE患者(ΔCt=5.48±1.72,t=11.572,P＜0.01);活动期SLE患者ISG15 mRNA表达水平(ΔCt=2.04±1.07)明显高于疾病对照组(ΔCt=5.90±1.72,t=12.69,P＜0.01)和正常对照组(ΔCt=5.66±1.63,t=12.359,P＜0.01);缓解期SLE患者ISG15 mRNA表达水平与正常人及疾病对照组的差异无显著性(P＞0.05).SLE患者PBMCs中 ISG15 mRNA的表达水平与SLE疾病活动评分指数(SLEDAI)评分及抗双链DNA抗体呈显著正相关(均P＜0.01),与补体C3、C4呈显著负相关(均P＜0.01).结论 活动期SLE患者ISG15 mRNA表达水平显著高于正常人、疾病对照组和疾病缓解期,提示ISG15的表达可能参与了SLE的发病过程并与疾病的活动性显著相关.     

过敏性紫癜患儿外周血单个核细胞TLR6表达及其与Th1、Th2和Th17细胞免疫应答相关性研究

目的探讨TLR6在过敏性紫癜(HSP)患儿外周血单个核细胞(PBMC)的表达及其与Th1、Th2和Th17细胞免疫应答的相关性,探讨TLR6与HSP发病机制的关系。方法选取我院住院的急性期HSP患儿42例为研究对象,另选取健康儿童30例作为正常对照组。采用流式细胞术检测外周血单个核细胞TLR6蛋白表达,实时荧光定量PCR技术检测外周血单个核细胞MyD88mRNA的基因相对表达量,ELISA法检测血浆IFN-γ、IL-4、IL-17水平。结果 (1)HSP患儿外周血单个核细胞TLR6蛋白表达(TLR6阳性细胞百分率及平均荧光强度)显著高于正常对照组(t'=9.40,P<0.01;t'=10.49,P<0.01),HSP组外周血单个核细胞MyD88 mRNA相对表达量显著明显高于正常对照组(t'=2.46,P<0.01)。(2)HSP组血浆IL-4水平显著高于对照组(t'=3.44,P<0.01),IFN-γ水平高于对照组(t'=2.44,P<0.05),IFN-γ/IL-4比值低于对照组(t'=2.27,P<0.05),IL-17水平显著高于对照组(t'=2.64,P<0.01)。(3)HSP组单个核细胞TLR6蛋白表达与MyD88 mRNA呈显著正相关(r=0.79;P<0.01);与血浆IL-4水平呈显著正相关(r=0.69,P<0.01);与IFN-γ/IL-4比值呈负相关(r=-0.38,P<0.05);与IL-17水平呈正相关(r=0.36,P<0.05);与血浆IFN-γ水平不存在相关性(P>0.05)。结论 TLR6活化可能参与了HSP的免疫发病机制;HSP患儿体内存在Th1/Th2失衡,Th17异常活化,活化的TLR6可能通过上调Th2、Th17免疫应答介导HSP的免疫发病机制。     

系统性红斑狼疮患者IRF5、TLR-9基因表达的研究

目的 研究IRF5、TLR-9基因表达水平与系统性红斑狼疮的相关性.方法 收集92例SLE患者与88名正常对照人群的外周血,提取总RNA并反转录为cDNA,以实时荧光定量聚合酶链反应方法检测患者组和对照组的IRF5、TLR-9的mRNA表达水平.结果 SLE患者外周血IRF5、TLR-9 mRNA的表达分别是0.232±0.076、0.189±0.054,与对照组相比,SLE患者IRF5、TLR-9 mRNA表达水平升高（P〈0.05,P〈0.05）.结论 SLE患者外周血IRF5、TLR-9表达异常,可能在SLE发病中起一定作用.     

强直性脊柱炎患者Toll样受体4表达和sTRAIL、TNF-α、IL-12水平的研究

目的探讨Toll样受体（toll-like receptor,TLR）4、可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（soluble TNF-related apoptosis-inducing ligand,sTRAIL）、白介素（interleukin,IL）-12、肿瘤坏死因子（tumornecrosis factor,TNF）-α在强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,AS）发病中的作用。方法采用ELISA双抗体夹心法检测110例AS患者和60例正常对照的血清IL-12、TNF-α及sTRAIL水平,并采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测两组对象外周血单个核细胞TLR4基因水平,同时采用两点终点法测定C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）、Wintnobe法检测红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate,ESR）,分析各指标与AS的关联。结果 AS患者TLR4 mRNA表达、血清sTRAIL含量均明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。但TNF-α、IL-12与AS发病的相关性无统计学意义（P〉0.05）。AS患者组中,血清sTRAIL与CRP（r=0.445,P〈0.05）、TNF-α与ESR（r=0.622,P〈0.01）均呈正相关。结论 TLR4通路异常及sTRAIL水平增高可能在AS的发病及炎症反应中发挥一定的作用。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中MBD4 mRNA表达水平的研究

目的探讨系统性红斑狼疮（SEE）患者外周血单个核细胞中MBD4 mRNA表达及其与疾病发病机制、疾病活动性的关系。方法以pactin为内参照,建立逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）方法,在LightCycler RealtimePCR检测仪上检测70例SLE患者（活动期32例、缓解期38例）、其他结缔组织病（CTD）患者30例（疾病对照组）、健康体检者30例（正常对照组）外周血单个核细胞（PBMCs）中MBD4 mRNA的表达水平和含量。以△Ct=Ct（待测基因）-Ct（内参基因）来比较基因表达水平的高低。结果SLE患者PBMC中MBD4mRNA表达水平高于正常对照组与疾病对照组（P〈0．05）,且疾病不同病期（活动期与缓解期）MBD4 mRNA表达水平差别有统计学意义（P〈0．01）。结论结果显示SLE患者PBMC中MBD4 mRNA表达水平显著高于正常人、疾病对照组,提示MBD4 的表达与SLE的发生发展存在一定关联性,可能参与了SEE的发病过程并与疾病的活动性有关。     

过敏性紫癜患儿外周血单核细胞TLR2、TLR4、TLR6及与Treg相关细胞因子的表达

背景：Toll样受体介导的信号通路转导及调节性T细胞异常活化在过敏性紫癜发病中的作用不清楚。目的：研究Toll样受体TLR2、TLR4、TLR6在过敏性紫癜患儿外周血单核细胞的表达及调节性T细胞（Treg）的免疫应答,探讨TLR及Treg活化在敏性紫癜发病机制中的作用。方法：选择处于过敏性紫癜急性期的患儿42例为观察对象,另选取15名门诊健康查体儿童为正常对照组。采用流式细胞术检测外周血单核细胞的TLR2、TLR4、TLR6的蛋白表达量;应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及实时荧光定量PCR检测外周血单核细胞TLR信号途径分子MyD88 mRNA的基因相对表达量;ELISA法测Treg细胞分泌的转化生长因子β、白细胞介素10的血浆水平;两组间比较采用独立样本t或t’检验,相关性分析采用Pearson相关检验。结果与结论：过敏性紫癜患儿外周血单核细胞的TLR2、TLR4、TLR6蛋白的表达及MyD88 mRNA基因的相对表达量均显著高于对照组（P〈0.01）;过敏性紫癜患儿血浆中转化生长因子β、白细胞介素10均高于对照组（P〈0.05）;过敏性紫癜患儿TLR2、TLR4、TLR6的蛋白表达量与Myd88 mRNA的基因相对表达量呈正相关（P〈0.01）,与血浆白细胞介素10、转化生长因子β水平无明显相关（P〉0.05）。提示TLR2、TLR4、TLR6活化后可能通过MyD88依赖的途径参与敏性紫癜的发病,而过敏性紫癜急性期Treg代偿性活化可能为机体的保护性免疫应答。     

急性髓系白血病患者外周血单个核细胞Toll样受体9以及血清肿瘤坏死因子和凋亡基因FAS的表达

背景：Toll样受体9（TLR9）、肿瘤坏死因子a、Fas可能共同参与白血病的发生发展过程。目的：测定TLR9在急性髓系白血病患者外周血单个核细胞中的表达及血清肿瘤坏死因子α、Fas水平。方法：从急性髓系白血病患者与正常对照组中分离出外周血单个核细胞,采用反转录-聚合酶链反应法检测外周血单个核细胞中TLR9mRNA的表达水平,采用酶联免疫吸附试验法检测血清肿瘤坏死因子α、Fas水平。结果与结论：在急性髓系白血病患者初治组和难治复发组中,外周血单个核细胞中TLR9mRNA表达高于正常对照组（P〈0.01）,化疗后完全缓解组与正常对照组差异无显著性意义（P〉0.05）;各病例组血清肿瘤坏死因子α、Fas水平显著高于正常对照组（P〈0.01）。TLR9mRNA的表达与血清肿瘤坏死因子α、Fas水平均呈正相关。     

B细胞成熟抗原在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞的表达

目的检测B细胞成熟抗原（BCMA）mRNA在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）的表达水平,探讨BCMA在SLE发病中的意义。方法纳入2006年1-11月收治的36例SLE患者,同期17例健康志愿者作为对照组,采用半定量RT-PCR法检测外周血单个核细胞中BCMA mRNA的表达,并与SLE疾病活动指数（SLEDAI）进行相关性分析。结果 SLE患者组BCMA mRNA表达水平（0.598±0.230）均明显高于正常对照组（0.411±0.309）（P〈0.05）。SLE患者BCMA mRNA表达水平与SLEDAI评分无相关性（P=0.590）。结论 SLE患者BCMA mRNA表达水平的增高,可能在SLE的发病机制中具有一定的作用。     

子痫前期患者外周血T-bet mRNA和GATA3 mRNA的表达水平的探讨

目的探讨子痫前期患者外周血中的T-bet mRNA与GATA3 mRNA表达情况,分析其在子痫前期发病中的作用及机制。方法选取2011年1月到2012年12月间的46例子痫前期孕妇为研究组,并选取同期46例正常孕妇为对照组,检测两组外周血中的T-bet mRNA与GATA3 mRNA表达情况。结果 T-bet mRNA表达在两组中表达增强,研究组的T-bet mRNA表达量明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。GATA3 mRNA在两组中表达量减弱,研究组GATA3 mRNA表达量明显的低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。T-bet mRNA/GATA3 mRNA比值在两组中呈现正表达,差异有统计学意义(P0.05)。结论子痫前期患者外周血中的T-bet mRNA呈现高表达,而GATA3 mRNA呈现低表达,二者在子痫前期发病中具有一定作用。     

急性淋巴细胞白血病患者血清PTK7 mRNA和蛋白表达水平及其临床意义

本研究旨在检测不同亚型急性淋巴细胞性白血病患者血清PTK7 mRNA和蛋白的表达水平,探讨其诊断的临床价值.选择2012年5月-2014年4月在本院诊断为急性淋巴细胞白血病（ALL）患者,按照纳入和排除标准共纳入136例患者,按照细胞形态学将他们分成L1组（n=42）、L2组（n=45）和L3组（n=49）,另外选择48例正常儿童为对照组.使用荧光定量PCR检测外周血单个核细胞中PTK7 mRNA转录水平,采用Westem blot检测血清中PTK7蛋白表达量.结果表明,L1组PTK7转录水平显著高于正常组（P=0.000）.L2组PTK7转录水平显著高于L1组（P =0.000）.L3组与L2组之间无显著性差异（P =0.123）.L1组患者PTK7蛋白水平显著高于正常组（仁1.564,P=0.000）,L2组PTK7蛋白水平显著高于L1组（t=1.437,P=0.003）,L3组PTK7蛋白水平与L2组比较无显著差异（t=0.821,P=0.312）.结论：血清PTK7蛋白表达检测具有诊断ALL的潜在临床价值,但对ALL分型不具有型特异性.