微小RNA-146a在脂多糖诱导肺泡巨噬细胞中的表达

目的 观察脂多糖(LPS)诱导对NR8383肺泡巨噬细胞微小RNA-146a(miRNA-146a)表达的影响.方法 将体外培养的肺泡巨噬细胞株NR8383分成LPS刺激组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,培养6 h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测细胞miRNA-146a的表达.结果 LPS刺激组细胞培养上清液中TNF-α含量(ng/L)较PBS对照组明显升高(650.26±40.53比6.23±1.76,P<0.01),细胞miRNA-146a表达水平较PBS对照组上调了约(5.33±0.81)倍(P<0.01).结论 LPS刺激后,miRNA-146a在NR8383细胞中表达增高,其可能参与了NR8383肺泡巨噬细胞的炎症反应调控.     

乙酰胆碱酯酶在脂多糖诱导肺泡巨噬细胞中的变化

目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激大鼠肺泡巨噬细胞NR8383后乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,ACHE)的表达变化,为研究胆碱能抗炎通路的调控提供新的实验依据.方法 将体外去致热源培养的NR8383细胞分为对照组及LPS(1μg/mL)刺激组,于刺激后3、6、12、24 h各时间点分别离心收集上清液及细胞沉淀,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA)测定上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的变化,实时定量PCR检测细胞中AChE mRNA的表达改变,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞中AChE蛋白的表达变化,乙酰胆碱酯酶T-CHE测试盒检测上清液中AChE活性的变化.组间多重比较采用单因素方差分析,进一步采用LSD-t检验进行两两比较,P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 与对照组相比,TNF-α的含量在LPS刺激NR8383细胞后3h开始显著上升(P＜0.05),12 h达高峰,24 h下降但仍明显高于对照组水平(P＜0.05).与对照组相比,AChE mRNA于刺激后3h开始上升,升高(3.19±0.44)倍(P＜0.05),6h后达高水平并维持于此水平,6、12、24 h分别上调[(5.65±0.63)、(5.40±0.71)、(5.35±0.77)[倍(与对照组相比,均P＜0.05);AChE蛋白的表达及上清液中AChE的活性在LPS刺激后12 h与各自对照组相比均上升[AChE蛋白:(1.37±0.01) vs.(1.05±0.02),P＜0.05; AChE活性:(6.14±1.13) U/mLvs.(2.64±0.85) U/mL,P＜0.05],随后呈下降趋势,于LPS作用24 h时均低于各自对照组[AChE蛋白:0.65±0.05,P＜0.05,AChE活性:(0.56±0.19)U/mL,P＜0.05].结论 LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后,AChE的表达增加,提示其可能参与肺泡巨噬细胞炎症反应的调控;LPS刺激后24 h,AChE mRNA仍处于高表达水平,AChE蛋白及活性却下降,提示在肺泡巨噬细胞炎症反应中可能存在AChE转录后水平的调控.     

耗竭巨噬细胞抑制脂多糖诱导小鼠肾脏及全身炎症损伤的作用研究

目的:采用选择性集落刺激因子1受体抑制剂GW2580耗竭小鼠体内巨噬细胞,观察该作用对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠肾脏及全身炎症损伤的影响.方法:将9只雄性小鼠分为3组(每组3只),在GW2580(160 mg/kg)给药第0、4、7天分别处死1组小鼠,制备脾脏单细胞悬液后,采用流式...     

山莨菪碱对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响

目的 探讨山莨菪碱对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞（AM）氧化应激损伤的影响。方法 采用支气管肺泡灌洗和细胞差速贴壁的方法分离犬鼠肺泡巨噬细胞，在20μg／mL脂多糖干预基础上，分别给予10^-9-10^-6mol／L山莨菪碱，测定AM培养上清液丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性和乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果 在20μg／mL脂多糖干预基础上，山莨菪碱使大鼠AM培养上清液MDA含量显著降低，SOD、LDH活性显著升高，并且具有浓度依赖性。结论 山莨菪碱对脂多糖诱导的AM脂质过氧化损伤具有一定保护作用，这可能是山莨菪碱防治内毒素引起的肺部炎症反应失控和急性肺损伤的机制之一。     

地塞米松对肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞释放肿瘤坏死因子-α和白细胞介素6的影响

目的：观察博莱霉素（ＢＬＭ）诱发大鼠肺损伤后肺泡巨噬细胞（ＡＭ）释放肿瘤坏死因子 α（ＴＮＦ α）和白细胞介素 ６（ＩＬ ６）的变化及地塞米松（ＤＭ）对ＡＭ 释放ＴＮＦ α和ＩＬ ６的影响。方法：采用生物活性法测定ＴＮＦ α和ＩＬ ６。结果：灌注ＢＬＭ 后ＡＭ 释放ＴＮＦ α〔（５８．９５±１３．２１）ｋＵ／Ｌ〕和ＩＬ ６〔（３５．００±１０．００）ｋＵ／Ｌ〕明显高于对照组〔ＴＮＦ α为（２３．６３±５．５０）ｋＵ／Ｌ,Ｐ＜ ０．００１;ＩＬ ６ 为（２１．１７±６．０４）ｋＵ／Ｌ,Ｐ＜０．０１〕,ＤＭ 能够抑制ＡＭ 释放ＴＮＦ α和ＩＬ ６,并且与其剂量相关（随ＤＭ 浓度的增加,ＡＭ 分泌ＴＮＦ α和ＩＬ ６ 水平逐渐降低）。ＢＬＭ 组支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中细胞总数（４．８８±０．６５）×１０６ 也明显高于对照组〔（１．４７±０．４１）×１０６,Ｐ＜ ０．００１〕。结论：ＤＭ 能以剂量依赖方式抑制ＡＭ 释放ＴＮＦ α和ＩＬ ６     

B16F10黑素瘤细胞培养上清液对脂多糖刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α和一氧化氮的影响

目的 探讨B16F10黑素瘤细胞培养上清液对脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放肿瘤坏死因子-α (TNF-α)和一氧化氮(NO)的影响.方法 体外培养同基因小鼠腹腔巨噬细胞,分为实验组和空白对照组.实验组加入B16F10黑素瘤细胞培养上清液,空白对照组加入RPMI 1640完全培养基,分别用LPS刺激后继续培养24 h,采用免疫细胞化学染色法及L929细胞抑制实验[四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法]检测巨噬细胞TNF-α的表达及活性,Griess法检测NO的含量.结果 实验组TNF-α阳性表达较空白对照组明显减少,TNF-α活性较空白对照组明显降低[吸光度(A值):0.746±0.049比0.387±0.030,P＜0.01];巨噬细胞释放NO的水平明显低于空白对照组(μmol/L:4.830± 1.384比11.455±0.175,P＜0.01).结论 B16F10黑素瘤细胞培养上清液对LPS诱导的同基因小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、NO具有抑制作用.     

山莨菪碱干预急性肺损伤家兔肺泡巨噬细胞中核因子κB和肿瘤坏死因子αmRNA的表达

目的：观察山莨菪碱对创伤性急性肺损伤家兔肺泡巨噬细胞中核因子κB活化和下游基因肿瘤坏死因子αmRNA表达的影响。 方法：实验于2004-03／2005-02在解放军第四军医大学西京医院检验科临床分子生物学实验中心完成。将健康成年家兔72只抽签法随机分为3组（n=24）：①山莨菪碱组：于撞击台上行胸壁撞击（冲击速度5．7m／s，力75．8N／cm^2，冲撞能量约204J）后，立即静脉注射大肠杆菌脂多糖50μg／kg，建立创伤性急性肺损伤模型，造模后立即予以山莨菪碱2mg／kg静注，随后以1mg／（kg&;#183;h）静脉维持。②急性肺损伤组：造模同山莨菪碱组，造模后以等量生理盐水静注和维持。③正常对照组：不做胸壁撞击，静注等量生理盐水代替脂多糖，其余处理同急性肺损伤组。各组动物分别于模型建立后1，2，3，4h放血处死6只，留取支气管肺泡灌洗液，分离肺泡巨噬细胞，分别用凝胶电泳迁移率改变分析法和半定量反转录-聚合酶链反应法检测肺泡巨噬细胞中核因子κB的活性变化及肿瘤坏死因子αmRNA的表达水平，以相对吸光度表示。 结果：67只兔进入结果分析。①核因子κB的活性：急性肺损伤组于模型建立后1-4h内均明显高于正常对照组（P〈0．01），在2h达到高峰，其相对吸光度值，是同期正常对照组的8倍；山莨菪碱组高于正常对照组（P〈0．01），显著低于急性肺损伤组（P〈0．01），其中2h降幅最大，达30．19％。②肿瘤坏死因子αmRNA的表达水平：急性肺损伤组在模型建立后1h其表达即开始上升，两三小时达到高峰，3h最高，其相对吸光度值，是同期正常对照组的5倍，4h其表达较前有所下降，但仍明显高于正常对照组（P〈0．01）；山莨菪碱组各时间的表达显著低于急性肺损伤组（P〈0．01，0．05），最大降幅出现在2h，达34．48％。 结论：①机体遭受创伤及脂多糖刺激后，肺泡巨噬细胞被激活导致核因子κB的活化是肺泡巨噬细胞大量释放肿瘤坏死因子α等前炎细胞因子的关键环节。②山莨菪碱可能是通过抑制肺泡巨噬细胞核中核因子κB活性，在基因转录水平抑制其介导的一系列细胞因子和炎症递质的表达（肿瘤坏死因子α等），阻断细胞因子和炎症递质的失控性释放来实现对急性肺损伤的治疗作用的。     

脂多糖结合蛋白抑制肽对内毒素诱导的U937细胞TLR4的影响

目的 研究脂多糖结合蛋白(LBP)抑制肽对内毒素(LPS)诱导的人单核巨噬细胞株U937细胞TLR4的影响。方法 佛波脂(PMA)诱导U937成熟后分为5组，即正常对照组；LPS组；低剂量抑制肽组；中剂量抑制肽组；高剂量抑制肽组。用RT-PCR和蛋白定量方法(Westem blot)测定TLR4 mRNA和蛋白的表达，ELISA测定培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果 LBP抑制肽组TLR4的mRNA，蛋白的OD值，TNF-α的浓度均较LPS组低，较正常组高。结论 LBP抑制肽通过抑制由TLR4介导的LPS信号跨膜转导和TNF-α的分泌，对LPS所致疾病如脓毒血症、急性肺损伤可能有潜在的治疗作用。     

白介素-10对肺泡巨噬细胞致炎效应的调节作用

目的 :探讨白介素 10 (IL 10 )对肺泡巨噬细胞致炎效应的影响。方法 :内毒素 (L PS)刺激体外培养的小鼠肺泡巨噬细胞 ,观察 IL 10对肺泡巨噬细胞释放细胞因子的影响。结果 :肺泡巨噬细胞受 10 mg/LL PS刺激后 6、12和 2 4小时 ,肿瘤坏死因子α(TNFα)、IL 1β和 IL 6释放达峰值 ,浓度分别为 (1790±985 ) ng/L、(986± 35 7) ng/L 和 (42 33± 6 5 7) ng/L,与 L PS刺激 0时比较 ,P均 <0 .0 5。IL 10在 L PS刺激后 8小时持续升高〔(2 38± 87) ng/L〕,2 4小时达到峰值 ,浓度为 (16 0 0± 5 2 1) ng/L(P<0 .0 5 )。 15 0 μg/L IL 10单克隆抗体抑制内源性 IL 10释放后 ,导致 TNFα、IL 1β、IL 6释放明显增加 ,分别达 (16 89± 36 4) ng/L、(12 0 0± 2 5 3) ng/L 和 (5 2 6 9± 112 7) ng/L。给予外源性重组 IL 10 (5 0 μg/L) ,则明显抑制 L PS诱导的TNFα、IL 1β、IL 6释放 ,浓度分别降低 5 2 %、84%和 39%。结论 :IL 10对炎症性细胞因子释放具有明显抑制作用 ,补充外源性 IL 10有助于控制肺泡巨噬细胞的异常炎症反应。     

miRNA-146a真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞恶性增殖的影响

目的 构建miRNA-146a真核表达质粒,探讨其在宫颈癌HeLa细胞株中的表达及对HeLa细胞恶性表型的影响.方法 人工合成miRNA-146a基因序列,将miRNA-146a基因克隆到的真核表达载体pGeneSil-1中,构建成重组质粒pGeneSil-miR-146a.将miRNA-146a重组表达载体瞬时转染宫...     

重度脑外伤患者血清miR-146a水平与继发性癫痫的相关性分析

目的 探讨重度脑外伤患者血清微小RNA-146a(miR-146a)水平与继发性癫痫的相关性.方法 选取2018年1月至2020年2月该院重度脑外伤住院患者104例为研究对象,按照是否继发癫痫分为重度脑外伤继发性癫痫组61例,单一重度脑外伤组43例,同期选择该院体检健康者70例为对照组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA...     

The association between miR-146a gene rs2910164 polymorphism and gastric cancer risk: A meta-analysis

PurposeStudies have demonstrated that single nucleotide polymorphisms (SNPs) in miRNAs may lead to varying functional outcomes by altering miRNAs expression, even leading to the development of cancers. The association between a single nucleotide polymorphism (SNP) in miR-146a rs2910164 and susceptibility to gastric cancer has been studied during the recent years, but the results are still inconclusive and inconsistent. We performed a meta-analysis to evaluate the relationship between miR-146a rs2910164 polymorphism and the risk of gastric cancer.Materials and methodsThe databases of PubMed, MEDLINE and Web of Science were searched for suitable studies. A total of 8 published case–control studies on miR-146a rs2910164 polymorphism and gastric cancer risk including 4308 cases and 6370 controls were included.ResultsOverall, significant association was observed between rs2910164 and gastric cancer risk in allele model (OR = 1.11, 95% CI = 1.02–1.21); homozygote model (OR = 1.26, 95% CI = 1.10–1.43) and dominant model (OR = 1.21, 95% CI = 1.09–1.34). Stratified analysis by ethnicity showed significant association between rs2910164 polymorphism and gastric cancer susceptibility in Asians (OR = 1.10, 95% CI = 1.00–1.23 for G vs. C; OR = 1.25, 95% CI = 1.09–1.43 for GG vs. CC; OR = 1.19, 95% CI = 1.07–1.33 for GG vs. GC+CC, respectively). When stratified by genotyping methods and sample size, increased gastric cancer risk was only observed with the method by TaqMan and the sample size more than 1000.ConclusionIn summary, this meta-analysis indicated that miR-146a rs2910164 polymorphism was associated with the susceptibility to gastric cancer, especially in Asian population.     

RSV下呼吸道感染患儿血清miR-146a、 miR-155的表达及意义

目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV)下呼吸道感染患儿血清微小RNA-146a(miR-146a)、miR-155的表达及意义.方法 选取该院97例RSV下呼吸道感染患儿作为试验组,同时随机选取101例健康儿童作为对照组.检测2组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-10、超敏C-反应蛋白(hs-C...     

miR-146a靶向调控MIF基因对胶质瘤细胞增殖的影响

目的研究微小RNA-146a(miR-146a)靶向调控巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因对胶质瘤细胞增殖的影响。方法回顾性收集2017年6月至2019年7月济南市人民医院收治的经手术病理证实的胶质瘤患者36例,取胶质瘤组织和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测miR-146和MIF表达水平。体外培养U87胶质瘤细胞系,检测U87中miR-146a水平,并将U87细胞株分为转染miR-146a模拟物组(miR-146a mimic组)和miR-146阴性对照组(NC组)。采用双荧光素酶检测系统和集落形成实验分析miR-146a与MIF 3’UTR基因靶向关系。采用RT-PCR检测U87细胞转染miR-146a mimic和NC后,MIF mRNA和蛋白表达水平。结果脑胶质瘤组织miR-146a水平为0.30±0.13,显著低于癌旁组织(0.63±0.19),MIF水平为0.54±0.08,显著高于癌旁组织(0.41±0.15),差异均有统计学意义(P <0.05)。miR-146a mimics+pGL3-MIF 3’UTR-Wt共转染组荧光信号为0.43...     

miR-124a和miR-449a对非小细胞肺癌的诊断价值

目的 探讨微小RNA-124a(miR-124a)和微小RNA-449a(miR-449a)对非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断价值.方法 选取行手术切除肿瘤的NSCLC患者90例(NSCLC组),出院随访36个月,根据术后复发情况分为复发组(56例)和未复发组(34例).另选取肺部良性结节患者60例(良性结节组)、健康...     

中国人群miR-146a基因rs2910164多态性与缺血性脑卒中易感性的meta分析

目的探讨中国人群miR-146aC>G（rs2910164）位点单核苷酸多态性与缺血性脑卒中遗传易感性。方法检索2015年12月前中国生物医学文献数据库（CBM）、中国期刊全文数据库（CNKI）、维普中文科技期刊数据库（VIP）、万方数据库及PubMed、Ovid、Cochrane Library、EMBASE等数据库,搜集有关中国人群miR-146aC>G（rs2910164）位点多态性与缺血性脑卒中（IS）研究,采用NOS工具评价纳入相关性研究的质量,提取科学合理有效数据,采用Review Manager 5.0软件进行Meta分析。结果共纳入6篇文献,共有IS患者1945例,健康对照者2456例,Meta分析尚未发现miR146a rs2910164 G/C基因多态性与缺血性脑卒中易感性具有相关性：基因型G vs C：OR=0.97,95%CI（0.89~1.06）,P=0.06;基因型GG vs CC：OR=0.99,95%CI（0.82~1.18）,P=0.88;基因型GC vs CC：OR=1.02,95%CI（0.90~1.17）,P=0.75;基因型GG+GC vs CC：OR=1.01,95%CI（0.90~1.15）,P=0.82。结论本研究尚未发现中国人群miR-146aC>G（rs2910164）位点多态性与缺血性脑卒中易感性之间具有相关性。     

高血压脑出血患者血肿周围脑组织miR-146a表达与自噬及短期预后的关系

目的:研究高血压脑出血患者血肿周围脑组织miR-146a表达与自噬及短期预后的关系.方法:在我院接受血肿清除术并完成术后3个月随访的高血压脑出血患者204例纳入脑出血组,另取尸检的非脑出血病例18例纳入对照组.收集患者临床资料;检测血肿周围脑组织及对照组正常脑组织中的miR-146a及自噬基因Beclin-1、组织蛋白...