免疫印迹法检测肝纤维化组织基质金属蛋白酶抑制因子-1表达水平

目的 观察实验性肝纤维化过程中金属蛋白酶组织抑制因子－1（TIMP－1）蛋白表达水平的动态变化。方法 建立四氯化碳中毒性大鼠肝纤维化模型,采用免疫印迹方法（Western blot法）,测定肝纤维化不同阶段TIMP－1的蛋白表达水平。结果 正常大鼠肝组织可见TIMP－1的蛋白表达。在肝纤维化的发生、发展过程中,TIMP－1蛋白表达逐渐增强,到肝硬化阶段达到高峰。结论 TIMP－1可能是促进和影响肝纤维化、肝硬化形成的重要因素。     

肝硬化病人血清、肝组织中金属蛋白酶组织抑制因子的表达及意义

目的 探讨金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP）在肝硬化病人肝组织中的定位及表达状态,以及肝组织TIMP与血清TIMP的相关性。方法 应用自行建立的固相致敏红细胞吸附试验方法,检测106例肝硬化病人血清中的TIMP－1和TIMP－2。以TIMP－1和TIMP－2单克隆抗体为试剂,应用免疫组织化学方法,检测30例肝硬化病人活检肝组织中TIMP－1和TIMP－2相关抗原的表达,并与病人自身血清检测结果对比。另检测10例正常肝组织作对照。结果 106例肝硬化病人血清中TIMP－1和TIMP－2阳性率分别为74％和61％。30例肝硬化病人肝组织中TIMP－1和TIMP－2相关抗原表达阳性率为100％,TIMP－1表达强度高于TIMP－2（P＜0．01）;阳性信号主要位于肝细胞胞质内,未见细胞核表达;血清检测结果为TIMP－1阳性率100％,TIMP－2阳性率77％（23／30）。正常肝组织无一例有TIMP相关抗原表达。结论 TIMP定位于肝硬化病人的肝细胞胞质内,在肝硬化组织内呈程度不等的阳性表达;血清中TIMP与肝组织中TIMP表达有明显相关性,故血清中TIMP－1和TIMP－2可作为肝纤维化较为有用的诊断指标。     

肝灵对胆汁淤积性肝硬化大鼠肝组织MMP-13、TIMP-1和NF-κBp65表达的影响

目的探讨肝灵抗大鼠胆汁淤积性肝硬化的作用机制。方法利用胆总管结扎术(BDL)制备大鼠肝脏胆汁淤积性肝硬化模型,于造模第4周起ig给予肝灵8g/(kg·d),连续2周,第5周末股动脉放血处死大鼠,取左叶肝组织石蜡包埋,制作组织芯片。免疫组化SP法检测肝组织中MMP13、TIMP1和NFκBp65蛋白的表达,并用显微图像分析系统对免疫组化结果进行定量分析。结果与假手术对照组相比,胆汁淤积性肝硬化模型组的大鼠肝组织MMP13、TIMP1和NFκBp65蛋白的表达均明显增强(P<0.01),肝灵可使BDL诱导的胆汁淤积性肝硬化大鼠升高的肝组织TIMP1、NFκBp65蛋白表达明显降低(P<0.01);同时促进升高的肝组织MMP13表达增强(P<0.01),上调其低下的MMP13/TIMP1的比值。结论肝灵通过调节BDL诱导的肝硬化大鼠肝组织MMP13和TIMP1的异常表达而提高MMP13/TIMP1的比值,加速ECM分解,发挥抗肝纤维化和使肝纤维化逆转的作用;肝灵还可通过抑制肝硬化组织NFκBp65蛋白的表达发挥其抗肝纤维化作用。     

还原型谷胱甘肽对大鼠肝星状细胞TIMP—1表达的影响

目的 研究还原型谷胱甘肽对大鼠肝星状细胞（hepatic stellate,cells,HSC)中金属蛋白酶1组织抑制因子（TIMP－2）表达的影响。从分子和蛋白水平探讨还原型谷胱甘肽对大鼠肝纤维化的作用和可能机制。方法 采用50％CCl4制备大鼠肝纤维化模型，在造模过程中给予还原型谷胱甘肽进行干预。应用RT－PCR才Western Blot技术，在分子和蛋白水平检测体外分离大鼠HSC中的TIMP－1的表达情况。结果 还原型谷胱甘肽干预组与模型组和正常对照组相比，HSC中TIMP的表达降低（P＜0．05）。结论 还原型谷胱甘肽的干预可下调大鼠HSC中TIMP－1的表达，对实验性肝纤维化起到减轻作用。     

金属蛋白酶及其抑制剂在大鼠正常及纤维化肝脏中的表达

目的：了解膜型基质金属蛋白酶1（MT1－MMP）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP1）在大鼠正常及纤维化肝脏中的表达。方法：用60％CCl4加5％乙醇制作大鼠肝纤维化模型,利用原位杂交及免疫组化的方法检测MT－MMP,MMP2,TIMP1的表达并与正常对照组比较。结果：在纤维化肝脏中,MT1－MMP,MMP2,TIMP1主要表达在成纤维细胞、肌成纤维细胞中,以纤维间隔及汇管区最明显,血管内皮细胞有低水平表达。而正常组中仅有内皮细胞有低表达,明显弱于肝纤维化组。结论：在肝纤维化中,成纤维细胞及肌成纤维细胞是MT1－MMP、MMP2、TIMP1表达的主要细胞。     

银杏叶提取物对实验性肝纤维化逆转的影响

目的 研究银杏叶提取物对大鼠肝纤维化逆转的影响及其可能的机制。方法 应用CCI4诱导大鼠肝纤维化模型。造模完成后给予银杏叶提取物干预肝纤维化的逆转，应用H＆E、Masson和Gordon-Sweet染色观察肝组织病理纤维化分级，生化法检测肝功能指标。RT-PCR法测定肝组织中基质金属蛋白酶-13（MMP-13）表达，免疫组化法检测肝组织中αSMA表达。结果 给予银杏叶提取物可以促进肝纤维化的逆转（P〈0．05），改善肝功能（P〈0．05）．增加恢复过程中肝组织MMP-13的表达（P〈0．05），使αSMA阳性细胞数减少（P〈0．05）。结论 银杏叶提取物可促进CCh肝纤维化的逆转，可能与银杏叶提取物增加肝组织中MMP-13表达、抑制肝脏星状细胞活化、促进活化星状细胞凋亡有关。     

实验性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2和组织型金属蛋白酶抑制剂-1mRNA表达及姜黄素的作用

目的探讨大鼠肝纤维化过程中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、组织型金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）mRNA表达及姜黄素汤对其的影响。方法复制大鼠四氯化碳（CCl4）肝纤维化模型,分别以高、中、低剂量姜黄素处理,检测血清透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、三型前胶原（PCⅢ）和四型胶原（IVC）水平,检测肝组织纤维化程度和MMP-2及其抑制因子TIMP-1mRNA表达。结果CCl4成功诱导肝纤维化大鼠模型,姜黄素治疗能够降低血清肝纤维化指标及肝组织纤维化程度,姜黄素可以抑制CCl4诱导的MMP-2和TIMP-1mRNA表达,并能恢复MMP-2／TIMP-1的动态平衡。结论姜黄素可以通过减少MMP-2及其TIMP-1表达抑制肝纤维化。     

实验性肝纤维化过程中基质分解素-1酶原的表达变化

目的：研究实验性肝纤维化过程中基质分解素-1(MMP-3)酶原蛋白表达的动态变化。方法：建立四氯化碳中毒性大鼠肝纤维化模型，采用半定量Western免疫印迹方法，对肝纤维化不同阶段肝内MMP-3的酶原蛋白的表达水平进行了检测。结果：在正常大鼠肝组织中有MMP-3的酶原表达。在肝纤维化发生发展过程中MMP-3酶原蛋白表达水平逐渐增强，至肝纤维化中期到达最高峰，到肝纤维化晚期及肝硬化阶段其表达较中期下降，但仍高于正常对照水平。结论：MMP-3在肝纤维化的发生、发展直至肝硬化形成过程中可能发挥着重要作用。     

一贯煎对CCl_4诱导的肝纤维化大鼠肝组织胶原代谢的影响

目的：探讨一贯煎对四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）诱导的肝纤维化大鼠肝脏胶原代谢的影响。方法：腹腔注射CCl49周制备大鼠肝纤维化模型,于造模第3周、第6周末各处死6只大鼠作动态观察,自第7周起将模型大鼠随机分为模型对照组和干预组。干预组于继续造模的同时给予一贯煎灌胃3周,正常组与模型对照组大鼠给予同体积蒸馏水灌胃。第9周末处死全部大鼠,采集肝组织标本,检测肝组织组织金属蛋白酶抑制剂1（tissue inhibitor ofmetalloproteinase-1,TI MP-1）、-2,基质金属蛋白酶13（matrix metalloproteinase-13,MMP-13）、-14,α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）,Ⅰ型胶原（collagen typeⅠ,ColⅠ）等的蛋白表达以及MMP-2、-9的活性。结果：与正常大鼠比较,造模第3、6和9周时肝纤维化大鼠肝组织胶原纤维增生程度增加,肝组织α-SMA、ColⅠ、TI MP-1、TI MP-2、MMP-13、MMP-14蛋白表达和MMP-2、MMP-9活性逐渐升高（P〈0.05或P〈0.01）;与9周模型组比较,一贯煎组大鼠胶原纤维增生程度显著减轻（P〈0.05）,肝组织α-SMA、ColⅠ、TI MP-1、TI MP-2、MMP-13和MMP-14蛋白表达及MMP-2、MMP-9活性显著降低（P〈0.01）。结论：一贯煎可以抑制肝星状细胞活化,抑制胶原的合成,促进过度增生的胶原纤维的降解,从而抑制CCl4诱导大鼠肝硬化的形成。     

抗纤抑癌方对肝纤维化大鼠细胞外基质代谢的影响

目的研究抗纤抑癌方对肝纤维化大鼠细胞外基质代谢的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法以二乙基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化模型,设复方鳖甲软肝片和秋水仙碱为对照药,观察抗纤抑癌方对该模型大鼠肝脏组织病理的影响,并通过免疫组化方法测定各组大鼠肝脏Ⅰ型胶原（Collagen Ⅰ）、Ⅳ型胶原（CollagenⅣ）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）和金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP—1）的表达．、结果抗纤抑癌方组MMP-1表达明显高于模型对照组和鳖甲软肝片组,CollagenI、TIMP-1表达明显低于模型对照组,CollagenⅣ表达明显低于模型对照组和鳖甲软肝片组。结论抗纤抑癌方具有明显的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与增加MMP—1表达．降低TIMP-1表达．促进细胞外基质降解,减少胶原沉积等有关。     

All-trans retinoic acid diminishes collagen production in a hepatic stellate cell line via suppression of active protein-1 and c-Jun N-terminal kinase signal

Following acute and chronic liver injury,hepatic stellate cells (HSCs) become activated to undergo a phenotypic transformation into myofibroblast-like cells and lose their retinol content,but the mechanisms of retinoid loss and its potential roles in HSCs activation and liver fibrosis are not understood.The influence of retinoids on HSCs and hepatic fibrosis remains controversial.The purpose of this study was to evaluate the effects of all-trans retinoid acid (ATRA) on cell proliferation,mRNA expression of collagen genes [procollagen α1 (Ⅰ),procollagen α1 (Ⅲ)],profibrogenic genes (TGF-β 1,CTGF,MMP-2,TIMP-1,TIMP-2,PAI-1),fibrolytic genes (MMP-3,MMP-13) and the upstream element (JNK and AP-1) in the rat hepatic stellate cell line (CFSC-2G).Cell proliferation was evaluated by measuring BrdU incorporation.The mRNA expression levels of collagen genes [procollagen α1 (Ⅰ),procollagen α1 (Ⅲ)],profibrogenic genes (TGF-β 1,CTGF,MMP-2,TIMP-1,TIMP-2,PAI-1),and fibrolytic genes (MMP-3,MMP-13) were quantitatively detected by using real-time PCR.The mRNA expression of JNK and AP-1 was quantified by RT-PCR.The results showed that ATRA inhibited HSCs proliferation and diminished the mRNA expression of collagen genes [procollagen α1 (Ⅰ),procollagen α1 (Ⅲ)] and profibrogenic genes (TGF-β 1,CTGF,MMP-2,TIMP-1,TIMP-2,PAI-1),and significantly stimulated the mRNA expression of MMP-3 and MMP-13 in HSCs by suppressing the mRNA expression of JNK and AP-1.These findings suggested that ATRA could inhibit proliferation and collagen production of HSCs via the suppression of active protein-1 and c-Jun N-terminal kinase signal,then decrease the mRNAs expression of profibrogenic genes (TGF-β 1,CTGF,MMP-2,TIMP-1,TIMP-2,PAI-1),and significantly induce the mRNA expression of MMP-3 and MMP-13.     

三种血清因子水平在晚期血吸虫病肝纤维化诊治中的意义

目的探讨转化生长因子β1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）和基质金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）在晚期血吸虫病（晚血）患者肝纤维化诊断中的作用及意义。方法采用ELISA法检测45例晚血、30例健康人血清TGF-β1、MMP-1、TIMP-1水平;采用常规HE染色结合Masson三色、苦味酸天狼猩红特殊染色法,对晚血患者的肝活检组织进行肝纤维化程度分期。结果与对照组比较,晚血组血清TGF-β1、TIMP-1水平及TIMP-1/MMP-1值明显增高（P均〈0.01）,而且血清TGF-β1含量和TIMP-1/MMP-1值与肝纤维化程度呈正相关（P均〈0.05）,但血清MMP-1含量与肝纤维化程度差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 TGF-β1、MMP-1、TIMP-1与晚血肝纤维化的发生、发展密切相关,三者联合检测可作为晚血肝纤维化的诊断和疗效评估指标。     

实验性肝纤维化间质胶原酶基因表达的研究

为了解实验性肝纤维化间质胶原酶（ＭＭＰ１）基因表达的动态变化，建立了四氯化碳中毒性及人血白蛋白免疫损伤性２种大鼠肝纤维化模型。采用逆转录定量ＰＣＲ方法，测定肝纤维化不同阶段间质胶原酶基因表达水平。结果表明：正常大鼠肝组织有间质胶原酶的基因表达。在肝纤维化的发生、发展过程中，肝组织间质胶原酶基因表达逐渐增强；到肝硬化阶段ＭＭＰ１基因表达较肝纤维化阶段下降；在肝硬化的自发逆转过程中ＭＭＰ１基因表达保持在明显高于正常对照的水平。提示肝纤维化过程中ＭＭＰ１基因表达与酶活性的变化一致，酶活性的变化是其基因表达改变的结果     

干扰素-α对CCl4诱导的大鼠肝纤维化疗效研究

目的:观察干扰素-α (interferon α,IFN-α)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的治疗效果,并探讨其可能的机制.方法:45只Wistar大鼠随机分为正常组(n=15)、模型组(n=15)、IFN-α治疗组(n=15).正常组大鼠予以橄榄油2 mL/kg腹腔注射,每周注射2次,共8周;模型组及IFN...     

肝炎平对家兔血吸虫肝纤维化MMP-2、 TIMP-1表达的影响

目的　研究肝炎平抗家兔血吸虫肝纤维化的作用, 探讨其抗肝纤维化的可能机制。方法　实验分为3 组:正常对照组(N组)、血吸虫感染 吡喹酮组(A组) 及血吸虫感染 吡喹酮 肝炎平治疗组(B组)。采用苏木精伊红染色及Masson染色, 观察肝组织病理学改变; 采用免疫组织化学SP 法检测各组肝组织基质金属蛋白酶2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制因子- 1 (TIMP- 1) 的表达水平。结果　B组肝组织胶原纤维含量低于A组(P<0 05); B组MMP 2、TIMP -1的表达水平均低于A组(P<0 .01, P<0 .05)。结论　在抗血吸虫治疗后使用肝炎平,能通过减少肝组织MMP- 2、TIMP- 1的表达而发挥抗血吸虫肝纤维化的作用。     

肝心宁对大鼠肝纤维化α-SMA,MMP-13及TIMP-1蛋白表达的影响

目的研究肝心宁对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）及金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）蛋白表达的影响。方法将68只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组、肝心宁高剂量组、肝心宁低剂量组。采用四氯化碳皮下注射并饲以高脂低蛋白饲料和30%酒精诱导大鼠肝纤维化模型。各组分别处理,6周末用免疫组织化学染色法检测肝组织中α-SMA,MMP-13及TIMP-1蛋白表达情况。结果肝心宁高剂量组、肝心宁低剂量组和秋水仙碱组与模型组相比,α-SMA及TIMP-1均明显降低,P〈0.05;肝心宁高剂量组与肝心宁低剂量组和秋水仙碱组相比,α-SMA及TIMP-1均明显降低,P〈0.05;肝心宁高剂量组、肝心宁低剂量组和秋水仙碱组与模型组相比,MMP-13显著升高,P〈0.05;肝心宁高剂量组与肝心宁低剂量组和秋水仙碱组相比,MMP-13显著升高,P〈0.05。结论肝心宁抑制大鼠肝脏纤维组织的形成可能与其降低α-SMA,TIMP-1蛋白表达并增强MMP-13蛋白表达有关。     

基质金属蛋白酶及其组织抑制物在子痫前期患者胎盘中的基因表达

目的研究子痫前期患者胎盘组织中基质金属蛋白酶(MMP-9、MMP-2)及其组织抑制物(TIMP-1、TIMP-2)基因mRNA表达,探讨其与子痫前期发病、进展的关系.方法采用半定量RT-PCR方法对30例正常晚期妊娠和50例子痫前期患者(包括24例轻度和26例重度)胎盘组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的mRNA水平进行检测.结果子痫前期组胎盘组织的MMP-9基因表达水平显著下降(P＜0.01),重度子痫前期组MMP-9基因表达水平尤低(0.07±0.05).尽管随病情的加重MMP-2mRNA水平呈现逐渐下降趋势,但没有统计学差异(P＞0.05).子痫前期组胎盘组织中的TIMP-1mRNA水平明显高于正常晚期妊娠者(P＜0.01),重度子痫前期组更高(1.49±0.21).子痫前期组胎盘组织TIMP-2mRNA表达显著降低(1.14±0.36),P＜0.01),并有随病情加重逐渐下降的趋势.结论随子痫前期患者病情的加重,胎盘组织的促浸润基因(MMP-2和MMP-9)表达水平降低,抑侵润基因(TIMP-1)的表达水平升高.子痫前期患者浸润相关基因的表达水平与子痫前期病情密切相关.     

干扰素-α对CCl_4诱导的大鼠肝纤维化疗效研究

目的：观察干扰素-α（interferonα,IFN-α）对四氯化碳（CCl4）诱导的大鼠肝纤维化的治疗效果,并探讨其可能的机制。方法：45只Wistar大鼠随机分为正常组（n=15）、模型组（n=15）、IFN-α治疗组（n=15）。正常组大鼠予以橄榄油2 mL/kg腹腔注射,每周注射2次,共8周;模型组及IFN-α治疗组大鼠予以50%CCl4 2 mL/kg腹腔注射造模,每周注射2次,共8周;IFN-α治疗组于第9周予以IFN-α每日10万U/只,皮下注射,共治疗3周。11周末处死所有大鼠。取肝组织进行炎症活动度半定量评分、纤维化半定量评分,检测羟脯氨酸含量,Ⅰ型和Ⅲ型胶原、转化生长因子-β1（transforming growth factorβ1,TGF-β1）、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMPs）及组织金属蛋白酶抑制因子（tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-1）mRNA表达量,以及MMP-9和TIMP-1蛋白表达量。结果：与模型组比较,IFN-α治疗组肝组织炎症活动度半定量评分、纤维化半定量评分显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;羟脯氨酸含量及Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达量显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;TGF-β1,CTGF,α-SMA,TIMP-1 mRNA表达量及TIMP-1蛋白表达量显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）,MMP-9蛋白及mRNA表达量差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：IFN-α可明显减轻CCl4诱导的大鼠肝纤维化及肝脏炎症反应,其作用机制可能为下调促肝纤维化因子TGF-β1和CTGF的表达,抑制肝星状细胞的活化,减少细胞外基质的合成;抑制肝纤维化降解因子TIMP-1的表达,调节细胞外基质的降解。