姜黄素诱导肾癌786-O细胞G2/M期阻滞及其分子机制的研究

目的研究姜黄素对肾癌786-O细胞生长抑制作用及其分子机制。方法 MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测姜黄素对肾癌细胞786-O生长影响;流式细胞术分析姜黄素对786-O细胞周期的影响;免疫印迹检测细胞周期相关靶基因表达水平。结果姜黄素能够呈浓度依赖方式显著抑制肾癌786-O细胞生长活力;细胞周期分析表明姜黄素对786-O细胞具有G2/M期阻滞效应;免疫印迹结果证明姜黄素处理后786-O细胞P53、P21蛋白均上调表达,相应Cyclin B1蛋白表达维持较低水平。结论姜黄素作用于786-O细胞导致细胞周期G2/M期阻滞,其机制可能依赖于P53和P21蛋白信号通路。     

白藜芦醇诱导肾癌细胞凋亡的分子机制研究

目的研究白藜芦醇对肾癌786-O细胞周期和凋亡的影响及其分子机制。方法 CCK-8检测细胞活力;propidium iodide(PI)染色-流式细胞仪分析细胞周期和PI/AnnexinⅤ双染-流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫印迹法检测细胞周期和凋亡相关靶蛋白表达水平。结果白藜芦醇能够呈浓度依赖方式显著抑制786-O细胞生长活力(P0.05,与正常组比较);周期图谱显示白藜芦醇引起G1期的786-O细胞比例减少,G2/M期的细胞比例增多,周期蛋白Cyclin和周期蛋白依赖激酶抑制子p21表达上调;另外,白藜芦醇呈药物浓度依赖诱导786-O细胞凋亡,促凋亡蛋白Bax和凋亡切割蛋白Caspase-3表达上调。结论白藜芦醇能抑制肾细胞癌786-O细胞增殖,使其阻滞在G2M期,并且诱导786-O细胞凋亡。p21和Bax参与了白藜芦醇诱导786-O细胞凋亡。     

隐丹参酮对宫颈癌Hela细胞增殖及细胞凋亡的影响

目的:研究隐丹参酮对人宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响。方法:MTT法检测不同浓度隐丹参酮分别在24,48,72 h对Hela细胞的抑制作用;流式细胞仪(FCM)检测隐丹参酮对Hela细胞周期和凋亡的影响;Western blot法检测E6,p53,p21蛋白的表达。结果:不同质量浓度(0.5~16 mg.L-1)隐丹参酮对Hela细胞的毒性均有明显剂量和时间依赖性,其24,48,72 h的IC50值分别为17.8,8.17,6.55 mg.L-1;隐丹参酮可使Hela细胞细胞周期的构成发生明显的变化并诱导细胞凋亡。Western blot表明,隐丹参酮作用Hela细胞后HPV E6的蛋白水平表达逐渐降低,p53和p21的蛋白水平表达逐渐升高。结论:隐丹参酮对宫颈癌Hela细胞有较强的细胞毒性,其作用机制可能是使Hela细胞生长停滞在G0/G1期并诱导细胞凋亡,使S期细胞比例降低;抑制HPV E6的蛋白的表达,使p53功能恢复,启动凋亡,从而起到杀伤肿瘤的作用。     

白藜芦醇诱导鼻咽癌CNE-1细胞凋亡及其分子机制

目的 探讨白藜芦醇诱导鼻咽癌CNE-1细胞凋亡及其分子机制。方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;活细胞染色法(PI)流式细胞仪分析细胞周期和PI-AnnexinV双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫印迹检测蛋白表达水平。结果 MTT结果表明白藜芦醇呈浓度和时间依赖性抑制鼻咽癌CNE-1细胞活力,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P < 0.01);PI单染流式细胞仪分析表明白藜芦醇引起S期的CNE-1比例明显增多,相应免疫印迹结果显示细胞周期蛋白Cyclin E和Cyclin A显著下调,呈药物浓度依赖;PI-Annexin V双染流式细胞仪分析表明白藜芦醇呈药物浓度依赖诱导CNE-1细胞凋亡;免疫印迹分析显示抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,而促凋亡蛋白Bax表达上调。结论 白藜芦醇能抑制鼻咽癌CNE-1细胞的增殖,使其阻滞在S期,并可能通过线粒体介导的凋亡通路诱导其凋亡。     

补骨脂酚诱导人乳腺癌MCF-7细胞S期周期阻滞及机制研究

目的研究补骨脂酚对人乳腺癌MCF-7细胞生长抑制作用及其机制。方法采用噻唑蓝法(MTT法)考察补骨脂酚对MCF-7细胞生长的影响;采用流式细胞术检测补骨脂酚处理后细胞周期分布情况及活性氧(ROS)的产生;利用荧光显微镜观察补骨脂酚对MCF-7细胞核的影响;采用蛋白免疫印迹法检测补骨脂酚作用下MCF-7细胞凋亡、周期相关蛋白和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族蛋白的表达;引入ROS清除剂及MAPK家族蛋白抑制剂考察其在补骨脂酚作用下对MCF-7细胞生长抑制率和细胞周期相关蛋白表达的影响。结果补骨脂酚可以呈时间、剂量依赖性抑制MCF-7细胞生长,其抑制作用明显强于阳性药5-氟尿嘧啶。补骨脂酚可诱导MCF-7细胞产生ROS,同时上调p-p53及p21蛋白表达水平,下调细胞周期相关蛋白CDK2和CyclinA2表达水平,进而引起细胞发生S期阻滞。而上述影响可被ROS清除剂Tiron逆转,表明ROS参与补骨脂酚诱导的S期阻滞。加入p38MAPK抑制剂SB203580后,细胞产生的ROS水平降低,表明ROS的产生依赖于p38MAPK途径。结论补骨脂酚抑制MCF-7细胞增殖的作用与其引起细胞发生S期阻滞有关,ROS参与S期阻滞过程。     

18β-甘草次酸抑制人结肠癌HT29细胞增殖的研究

目的 观察18 -甘草次酸(18 -glycyrrhetinic acid,GA)对人结肠癌HT29细胞增殖的影响,并从细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白(p16,p21,p27)表达丰度探讨可能的机制.方法 以不同浓度的GA作用结肠癌HT29细胞后,噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot分别检测细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白(p16,p21,p27)变化.结果 GA作用HT29细胞后,增殖受到明显抑制.GA处理组细胞阻滞于G1/S期,并出现p16,p21,p27蛋白水平上调.结论 GA可抑制人结肠癌细胞增殖,其机制与上调p16,p21,p27蛋白有关.     

鸦胆子油乳抑制胃癌细胞增殖及其机制的研究

目的研究鸦胆子油乳体外对人胃癌细胞BGC-823抑制增殖的作用及对细胞周期、细胞凋亡及p53表达的影响．探讨其抗肿瘤机制。方法：MTT法检测鸦胆子油乳对BGC-823细胞的毒性作用：漉式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布；免疫细胞化学染色检测p53表达。结果：鸦胆子油乳对人胃癌细胞有显著的增殖抑制作用，且有时间和浓度依赖性：0．10g/L鸦胆子油乳作用12、24、48h后，凋亡率明显上升，细胞周期被阻滞于G0／G1期；p53表达水平增高。结论：鸦胆子油乳体外对胃癌细胞BGC-823有显著的抑制增殖作用，上调p53的表达从而能诱导凋亡、阻滞细胞周期于C0／C1期是其重要机制。     

连翘苷经PI3K/Akt信号通路干预肾细胞癌的机制研究

目的探讨连翘苷抑制人肾细胞腺癌786-0细胞生长、迁移及侵袭的作用机制。方法体外培养786-0细胞,在其中加入不同浓度连翘苷进行干预。MTT法检测细胞生存活力,AO/EB法检测细胞凋亡,划痕实验与Transwell实验分别考察细胞迁移、侵袭能力。Western blotting法检测细胞内PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、FOXO3a、p-FOXO3a、p21、p27、Fasl、Bim、MMP-2及MMP-9蛋白表达情况。结果连翘苷可有效抑制肾癌细胞生长、促进凋亡,干扰细胞周期,上调p21、p27、Fasl及Bim表达水平,与对照组比较差异明显(P0.05、0.01);与对照组比较,不同浓度连翘苷可明显抑制肾癌细胞迁移与侵袭,减少MMP-2、MMP-9合成(P0.05、0.01);同时连翘苷能明显抑制PI3K、Akt、FOXO3a磷酸化(P0.05、0.01),且呈浓度依赖性。结论连翘苷可通过PI3K/Akt信号通路调控786-0细胞凋亡与细胞周期、抑制肾癌细胞生长;同时连翘苷经PI3K/Akt通路可有效削弱肾癌细胞迁移与侵袭能力。     

辣椒素对胰腺癌SW1990细胞作用的研究

目的:探讨辣椒素对胰腺癌细胞株SW1990细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法:不同浓度的辣椒素(0,100,150,200,250,300μmol·L-1)作用胰腺癌SW1990细胞12,24,48 h后,CCK-8法检测胰腺癌细胞株SW1990细胞的增殖作用;辣椒素(0,150,200,250μmol·L-1)作用胰腺癌SW1990细胞24 h后,采用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡细胞的比率,分光光度法检测Caspase-3(半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3)酶活性,Western blot方法检测SW1990细胞中p38和p53蛋白水平表达。结果:辣椒素对胰腺癌细胞SW1990具有明显的生长抑制作用,并呈现时间、剂量依赖性;流式细胞仪检测结果显示,细胞周期被阻滞在G1/G0期,细胞凋亡率随药物浓度的增加而增加;磷酸化的p38,p53蛋白的表达量增加。结论:辣椒素可通过阻滞G1/G0细胞周期和诱导凋亡抑制胰腺癌细胞SW1990的生长,其分子机制可能是通过上调p38及其下游p53的表达,并进一步激活Caspase-3,从而促进SW1990细胞发生凋亡。     

氧化应激促进舌苔形成相关细胞模型凋亡的分子机制研究

目的撤血清培养舌鳞癌细胞TCA-8113模拟舌苔细胞凋亡过程,过氧化氢(hydrogen dioxide,H_2O_2)刺激探讨氧化应激影响舌苔形成相关细胞模型凋亡的分子机制。方法撤血清培养舌鳞癌细胞TCA-8113,H_2O_2作用舌鳞癌细胞TCA-8113模拟氧化应激,MTT法检测细胞增殖活性,PI染色结合流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC细胞凋亡检测,蛋白免疫印迹(western blot)检测蛋白表达,ELISA检测培养上清PGE2含量。结果 H_2O_2作用后,撤血清舌鳞癌TCA-8113细胞增殖活性显著下降并具有剂量和时间依赖性;细胞周期分布变化显著,促进细胞凋亡;下调撤血清舌鳞癌细胞NF-κB p50、Bcl-2和Bax的表达水平,上调撤血清舌鳞癌细胞NF-κB p65和COX-2的表达水平;同时,舌鳞癌细胞PGE2分泌量也表现为剂量依赖效应。结论氧化应激可以促进舌苔形成相关细胞凋亡。     

Activation of p53 signaling and inhibition of androgen receptor mediate tanshinone IIA induced G1 arrest in LNCaP prostate cancer cells

Our group previously reported that tanshinone IIA induced apoptosis via a mitochondria dependent pathway in LNCaP prostate cancer cells. In the present study, the roles of androgen receptor (AR) and p53 signaling pathways were investigated in tanshinone IIA-induced G1 arrest in LNCaP cells. Tanshinone IIA significantly inhibited the growth and proliferation of LNCaP cells by colony formation and BrdU incorporation assays, respectively. Tanshinone IIA induced cell cycle arrest at G1 phase and down-regulated cyclin D1, CDK2 and CDK4. Furthermore, tanshinone IIA activated the phosphorylation of p53 at Ser 15 residue and its downstream p21 and p27. Additionally, tanshinone IIA suppressed the expression of AR and prostate specific antigen (PSA). Conversely, silencing p53 using its specific siRNA reversed cyclin D1 expression inhibited by tanshinone IIA. However, knockdown of AR had no effect on the p53/p21/p27 signaling pathway activated by tanshinone IIA in LNCaP cells. In AR siRNA-transfected cells, tanshinone IIA did not cause cell cycle arrest and reduce cyclin D1, implying that AR is essential to induce G1 arrest by tanshinone IIA in LNCaP cells. Taken together, the findings suggest that tanshinone IIA induces G1 arrest via activation of p53 signaling and inhibition of AR in LNCaP cells.     

Tanshinone IIA Induces Autophagic Cell Death via Activation of AMPK and ERK and Inhibition of mTOR and p70 S6K in KBM‐5 Leukemia Cells

Although tanshinone IIA (Tan IIA) from Salviae miltiorrhizae was known to induce apoptosis in various cancers, its underlying mechanism of autophagic cell death was not reported yet. Thus, in the present study, the molecular mechanism of autophagic cell death by Tan IIA was investigated in KBM‐5 leukemia cells. Tan IIA significantly increased the expression of microtubule‐associated protein light chain 3 (LC3) II as a hallmark of autophagy in western blotting and immunofluorescence staining. Tan IIA augmented the phosphorylation of adenosine monophosphate‐activated protein kinase (AMPK) and attenuated the phosphorylation of mammalian target of rapamycin (mTOR) and p70 S6K in a dose‐dependent manner. Conversely, autophagy inhibitor 3‐methyladenine partly reversed the cytotoxicity and the phosphorylation of AMPK, mTOR and p70 S6K induced by Tan IIA in KBM‐5 leukemia cells. In addition, Tan IIA dramatically activated the extracellular signal regulated kinase (ERK) signaling pathway including Raf, ERK and p90 RSK in a dose‐dependent and time‐dependent manner. Consistently, ERK inhibitor PD184352 suppressed LC3‐II activation induced by Tan IIA, whereas PD184352 and PD98059 did not affect poly (ADP‐ribose) polymerase cleavage and sub‐G1 accumulation induced by Tan IIA in KBM‐5 leukemia cells. Furthermore, Tan IIA could induce autophagy via LC3‐II activation in various cancer cells such as prostate (PC‐3), multiple myeloma (U266), lung (NCI‐H460), and breast (MDA‐MB‐231) cells. Overall, these findings suggest that Tan IIA induces autophagic cell death via activation of AMPK and ERK and inhibition of mTOR and p70 S6K in KBM‐5 cells as a potent natural compound for leukemia treatment. Copyright © 2013 John Wiley & Sons, Ltd.     

Tanshinone IIA combined with cisplatin synergistically inhibits non‐small‐cell lung cancer in vitro and in vivo via down‐regulating the phosphatidylinositol 3‐kinase/Akt signalling pathway

Cisplatin represents one of the first‐line drugs used for non‐small‐cell lung cancer treatment. However, considerable side effects and the emergence of drug resistance are becoming critical limitations to its application. Combinatorial strategies may be able to extend the use of cisplatin. Both Tanshinone IIA and cisplatin inhibit non‐small‐cell lung cancer cell growth in a time‐ and dose‐dependent manner. When Tanshinone IIA was combined with cisplatin at a ratio of 20:1, they were observed to exert a synergistic inhibitory effect on non‐small‐cell lung cancer cells. The combination treatment was shown to impair cell migration and invasion, arrest the cell cycle in the S phases, and induce apoptosis in A549 and PC9 cells in a synergistic manner. KEGG pathway analysis and molecular docking indicated that Tanshinone IIA might mainly influence the phosphatidylinositol 3‐kinase‐Akt signalling pathway. In all treated groups, the expression levels of Bax and cleaved Caspase‐3 were up‐regulated, whereas the expression levels of Bcl‐2, Caspase‐3, p‐Akt, and p‐PI3K proteins were down‐regulated. Among these, the combination of Tan IIA and cisplatin exhibited the most significant difference. Tanshinone IIA may function as a novel option for combination therapy for non‐small‐cell lung cancer treatment.     

丹参酮ⅡA诱导白血病细胞凋亡过程中端粒酶活性的改变

目的观察丹参酮Ⅱ_A(TanⅡ_A)对HL60,K562细胞端粒酶活性的抑制作用和对凋亡相关基因的影响,探讨丹参酮Ⅱ_A对造血细胞的作用机理。方法以HL60,K562为靶细胞,应用细胞培养技术,流式细胞术,透射电镜观察TanⅡ_A对HL60,K562细胞的作用,利用PCRTRAP方法检测TanⅡ_A处理前后HL60,K562细胞端粒酶活性的改变。结果经05μg·mL^-1TanⅡ_A作用6d后,HL60,K562细胞生长明显受到抑制,生长抑制率分别为756%和563%。经丹参酮诱导后,HL60,K562细胞发生凋亡,出现亚二倍体峰;同时显著下调HL60及K562细胞的cmyc,bcl2基因表达,上调cfos基因表达。HL60,K562细胞在TanⅡ_A作用后,端粒酶活性受到抑制,端粒酶活性抑制率分别为308%,508%。结论TanⅡ_A可明显抑制HL60和K562细胞的增殖和细胞端粒酶活性,并诱导细胞凋亡。     

蒺藜皂苷对肾癌细胞的实验影响

目的:探讨蒺藜皂苷(简称STT)对体外培养的肾癌细胞(786-O)的影响及其抑癌机制。方法:应用MTT法、Wright染色及AO荧光染色法和流式细胞术(FCM)及结合免疫荧光分别测定STT对细胞的生长抑制作用,细胞凋亡的形态变化,细胞周期及Bcl-2蛋白表达的影响。结果:MTT法显示STT可对786-O产生明显的细胞毒作用;Wright染色及吖啶橙荧光染色法发现STT可诱导786-O在体外产生凋亡;STT可使786-O的S期细胞比例增多;STT能够降低786-O细胞的抗凋亡蛋白Bcl-2及细胞周期蛋白D1的表达。结论:STT对786-O细胞有明显的体外生长抑制作用,并通过影响细胞周期及下调Bcl-2蛋白表达而诱导细胞凋亡。     

Herbal formula Renshenwuweizi decoction induces p53-mediated cell cycle arrest and apoptosis in A549 cells

OBJECTIVE: To investigate the effect of Renshenwuweizi decoction(RSWWZ decoction) on the growth of non-small cell lung cancer cells in vitro.METHODS: A549 non-small cell lung cancer cells were divided into two groups: control and RSWWZ decoction treatment groups. Cell Counting Kit-8 was used to measure the inhibitory effect of RSWWZ decoction on the growth of A549 cells. 4’, 6-diamidino-2-phenylindole staining and Annexin V-fluorescein isothiocyanate/propidium iodide double staining were used to...     

黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响

目的研究黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其阻滞细胞周期和诱导凋亡的机制。方法通过CCK-8法和克隆形成实验检测黄芩素对CNE2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,荧光显微镜观察细胞形态改变,试剂盒检测Caspase-3蛋白活性变化,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测P53、P21、CDK2、Caspase-3m RNA表达情况。结果黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖具有显著的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,与对照组比较,不同浓度的黄芩素作用于CNE2细胞48 h后,细胞出现典型的凋亡特征,并出现周期阻滞,Caspase-3活性增强,P53及其下游基因P21、Caspase-3 m RNA表达水平增高,CDK2 m RNA表达水平下降。结论黄芩素可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖,可能是通过上调P53表达诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期于S期。     

人参皂苷Rg1诱导人白血病K562细胞株衰老的实验研究

目的:观察人参皂苷Rg1(Rg1)诱导人白血病K562细胞株衰老的作用及其机制。方法:MTT比色法检测Rg1对K562细胞增殖的影响,筛选最佳作用浓度及时间(20μmol.L-1,48 h)。流式细胞术检测Rg1对细胞周期的影响;SA-β-Gal染色检测细胞阳性染色百分率;RT-PCR法检测衰老相关基因p16,p53,p21,Rb的表达;电镜观察细胞衰老超微形态学改变。结果:Rg1在体外能明显抑制K562细胞增殖,使细胞阻滞于G2/M期;SA-β-Gal染色阳性细胞百分率显著增高(P<0.05);细胞衰老相关基因的表达上调(P<0.05);超微结构观察显示细胞增大,异染色质凝集、碎裂,线粒体体积增大,溶酶体体积增大、数目增多等衰老形态学变化。结论:Rg1能诱导K562细胞衰老,p53-p21-Rb,p16-Rb信号转导通路在其衰老调控中起重要作用。     

蓝萼甲素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及细胞周期的影响

目的研究蓝萼甲素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及细胞周期的影响及其作用机制。方法采用MTT法检测蓝萼甲素对MDA-MB-231细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期;Western blotting法检测细胞中cyclin B1、cyclin D1、细胞周期素依赖激酶2(CDK2)、CDK4、p53、p21、p27、组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)、组蛋白H3第4位赖氨酸二甲基化(H3K4me2)、组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化(H3K9me2)蛋白表达水平。结果蓝萼甲素能显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;提高G2/M期细胞比例;上调p53、p21、p27、H3K4me2、H3K9me2蛋白表达水平,下调cyclin B1、cyclin D1、CDK2、CDK4、LSD1蛋白表达水平。结论蓝萼甲素抑制MDA-MB-231细胞增殖,阻滞MDA-MB-231细胞周期于G2/M期,其机制可能与激活p53的表达及调控组蛋白的甲基化作用有关。