苓甘姜味辛夏仁汤在过敏性肺炎小鼠模型中的抗流感病毒作用

材料与方法:①体内抗流感病毒实验:BALB/c小鼠,雌性。小鼠腹腔内注射戊巴比妥钠麻醉,于鼻腔滴入1μl pH为7.2且含0.1％牛血清的小鼠敏感流感病毒A/PR/8/34的PBS悬液,于3～7d后感染从鼻腔粘膜扩散至肺部。②建立过敏性肺炎小鼠模型:BALB/c小鼠,雌性,6周龄。腹腔内注射含有卵白蛋白(OVA)8μg和明矾2mg的生理盐水注射液0.5ml,5d后明矾OVA注射液加强注射1次,未致敏动物只使用明矾。致敏7d后,每隔4h让动物吸     

愈宁散对CITP模型小鼠外周血共刺激分子CD86影响的实验研究

[目的]通过观察应用愈宁散后CITP模型小鼠外周血中血小板计数及共刺激分子CD86水平的变化,初步探讨愈宁散对CITP模型小鼠的作用机理。[方法]采用注射豚鼠抗小鼠血小板血清(APS)的免疫造模方法,建立BALB/c小鼠CITP模型;应用愈宁散对模型小鼠进行实验研究,全自动血细胞计数仪检测CITP模型小鼠血小板计数;流式细胞仪测定CITP模型小鼠外周血CD86的水平。[结论]愈宁散能升高模型小鼠外周血小板数,降低CITP模型小鼠外周血中CD86水平,对BALB/c小鼠CITP动物模型具有较好的治疗效果。     

平喘方对支气管哮喘模型小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α水平及CD86分子表达的实验研究

目的通过研究哮喘模型小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α水平及CD86分子表达的影响,探索平喘方防治支气管哮喘的作用机制。方法通过对BALB/C小鼠用卵蛋白等腹腔注射致敏、雾化吸入激发,建立支气管哮喘小鼠模型。150只BALB/C小鼠随机分为5组,在激发哮喘7d、14d、21d时,用双抗体夹心ABC-ELISA法检测外周血和BALF中巨噬细胞炎性蛋白-1α（MIP-1α）水平,直接免疫荧光流式细胞术检测外周血和BALF中CD86＋、CD3-CD86＋细胞百分率,观察肺组织病理学改变。结果哮喘激发7d：各治疗组外周血和BALF中MIP-1α水平、CD86＋细胞百分率均明显低于模型组（P〈0.01）;外周血CD3-CD86＋细胞百分率明显均明显低于模型组（P〈0.01）;哮喘激发14d：各治疗组外周血和BALF中CD3-CD86＋细胞百分率均明显低于模型组（P〈0.01）;平喘方常规剂量组、地塞米松组外周血和BALF中MIP-1α水平均明显低于模型组（P〈0.01）;哮喘激发21d：各治疗组外周血和BALF中MIP-1α水平、CD3-CD86＋细胞百分率均明显低于模型组（P〈0.01）。肺组织病理显示,各治疗组细支气管壁结构完好,管腔内少量炎性渗出物,管周少量炎细胞浸润。肺组织胶原染色图像分析显示,各治疗组面积与光密度乘积较模型组明显减少（P〈0.01）。结论平喘方能显著降低MIP-1α水平、下调CD86分子表达、减轻气道黏膜上皮损伤,减少气道炎细胞浸润,减轻支气管壁及周围间质充血、水肿,具有减轻哮喘发病症状,改善哮喘气道炎症的作用。     

麻杏石甘汤加味治疗喘息性支气管炎实验研究

目的：探讨麻杏石甘汤加味对喘息性支气管炎小鼠的治疗作用.方法：随机将32只小鼠分成中药治疗组,正常对照组,西药治疗组,模型对照组,用卵清蛋白OVA腹腔注射和雾化吸入联合免疫的方法复制小鼠支气管哮喘模型,以麻杏石甘汤加味进行治疗,并检测小鼠用药前后的外周血嗜酸性粒细胞的变化及小鼠对致敏因子的耐受时间.结果：哮喘小鼠的嗜酸性粒细胞明显增高,而治疗组小鼠的嗜酸性粒细胞比治疗前明显降低（P＜0.01）,且小鼠治疗后对致敏因子卵清蛋白的耐受时间也显著的延长.结论：麻杏石甘汤加味能通过降低喘息性支气管炎小鼠的嗜酸性粒细胞从而缓解小鼠哮喘的发作.     

丹参的抗补体活性及其对哮喘小鼠炎症的抑制作用

目的评价丹参的抗补体活性及其对哮喘小鼠炎症的抑制作用,探讨丹参治疗哮喘的新机制。方法采用补体溶血实验来评价丹参的抗补体活性;30只BALB/c雌性小鼠随机分成正常对照组、哮喘组、丹参治疗组;除正常对照组外,其他两组采用卵清蛋白(OVA)和脂多糖(LPS)联合致敏建立中性粒细胞型哮喘小鼠模型。计数支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数并分类,HE染色行肺组织病理学观察。结果丹参具有抗补体活性,作用于补体C3、C4与C5组分;其抗补体活性部位显著降低哮喘小鼠BALF白细胞、嗜酸性粒细胞及中性粒细胞数量,改善肺组织炎症细胞浸润。结论丹参可减轻中性粒细胞型哮喘小鼠炎症,其机制可能与抑制补体系统激活有关。     

补肾方对哮喘缓解期小鼠EOS祖细胞分化的干预研究

目的:通过观察补肾方对哮喘小鼠外周血中免疫球蛋白IgE、白细胞介素-5(IL-5)、嗜酸细胞活化趋化因子(Eotaxin)的表达、肺组织病理学改变、骨髓悬液中嗜酸粒细胞(EOS)、嗜酸粒细胞祖细胞(CD3+4)、及趋化因子(CD34+/CCR3+)表达的影响,研究补肾方对嗜酸粒细胞祖细胞的干预作用,并探讨其影响EOS分化的可能机制。方法:选健康雌性BALB/c小鼠50只,随机分5组:空白对照组、模型组、醋酸泼尼松组、补肾方组、补肾方+醋酸泼尼松组,于缓解期用药处理,观察哮喘小鼠的一般情况,外周血IgE、IL-5、Eotaxin表达,骨髓悬液EOS、CD3+4、CD3+4/CCR3+细胞的表达,分析补肾方的疗效、治疗机制。结果:3组治疗组小鼠外周血IgE、IL-5、Eotaxin表达均较模型组明显降低,但各治疗组间无差异;3组治疗组小鼠骨髓悬液EOS计数与模型组相比明显减少,但补肾方组较醋酸泼尼松组小鼠骨髓悬液EOS计数增多,两组间有显著性差异;3组治疗组小鼠CD3+4细胞数、CD3+4/CCR3+细胞计数与模型组相比明显降低,而3组治疗组组间无差异。结论:缓解期服用补肾方可减轻哮喘小鼠复发症状;缓解期服用补肾方对哮喘小鼠气道炎症有一定的抑制作用;缓解期联合应用补肾方和醋酸泼尼松可减少醋酸泼尼松的不良反应;缓解期服用补肾方可能降低哮喘小鼠体内炎症因子水平,抑制EOS的趋化、募集,从而减少CD3+4祖细胞向EOS的分化,最终减轻EOS在肺组织局部的浸润。     

清肺止哮汤对哮喘小鼠气道炎症的抑制及Th1/Th2平衡的影响

目的：探讨中药复方清肺止哮汤对哮喘小鼠气道炎症和外周血Th1/Th2平衡的影响。方法：用卵白蛋白（OVA）致敏、激发建立哮喘小鼠模型。末次抗原激发后48h收集血、支气管肺泡灌洗液（BALF）和骨髓标本,计数细胞总数和嗜酸性细胞（Eos）,检测外周血Th1/Th2反应,以及肺组织学检查。结果：清肺止哮汤可明显减少BALF中Eos数,能使肺组织中细支气管、血管周围的Eos浸润和黏液的过度分泌得到控制,但和布地奈德（BUD）组相比仍有显著性差异（P〈0.01）。经中药干预后外周血总的CD3^＋T细胞表达IL-4的细胞群/表达IFN-γ的细胞群与OVA组相比有显著性差异（P〈0.05）,其中Tc2/Tc1,Th2/Th1呈明显下降趋势。结论：清肺止哮汤能部分抑制哮喘小鼠气道炎症,并使外周血CD3^＋T表达IFN-γ的细胞群增加,对于哮喘时Th1/Th2失衡具有一定的纠偏作用。     

茯苓多糖对小鼠肠道分泌型免疫球蛋白A, CD80,CD86表达的影响

目的:观察茯苓多糖对卵清白蛋白(OVA)诱导的小鼠肠道黏膜免疫应答的影响,探讨其对黏膜免疫的调节作用及其相关机制。方法:BALB/c小鼠随机分为2组:对照组和茯苓多糖组,对照组口服给予等体积生理盐水,茯苓多糖组每日按体重口服给药1次,剂量为200 mg·kg-1,2组小鼠给药1周后,1次性给予每只小鼠口服抗原卵清白蛋白(OVA)5 mg进行免疫,分别于免疫后1,2,3周,收集小鼠粪便样本,ELISA检测小鼠粪便OVA特异性分泌型免疫球蛋白A(sIgA);2组小鼠给药1周后,分离小鼠派氏结,流式细胞术检测派氏结(Peyer’s patches)中B淋巴细胞共刺激分子CD80,CD86表达。结果:对照组小鼠粪便中OVA特异性sIgA在1,2,3周时分别为(19.39±2.89),(17.60±5.65),(14.48±4.55)μg·L-1,茯苓多糖组为(28.44±3.72),(42.24±5.14),(26.29±4.82)μg·L-1,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。对照组小鼠派氏结B细胞CD80,CD86表达率(%)分别为1.84±0.11和16.50±1.47;茯苓多糖组表达为2.76±0.29,22.02±1.89,高于对照组,有统计学意义(P<0.05)。结论:茯苓多糖对肠道sIgA分泌具有调节作用,这与其活化派氏结B淋巴细胞有关。     

“从肠论治”对哮喘小鼠BALF炎症细胞及血清IgE含量的影响

目的:观察"从肠论治"对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞及血清Ig E含量的影响,为探讨"肺与大肠相表里"理论提供实验依据。方法:采用卵清蛋白(OVA)致敏激发方法制备过敏性哮喘小鼠模型,芒硝灌胃刺激,进行小鼠气道反应性试验,肺组织形态学观察,肺支气管肺泡灌洗液细胞分类计数、血清Ig E含量检测。结果:与正常组相比,OVA组小鼠气道阻力增加,肺组织出现炎性病理改变,肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞总数明显增加,血清Ig E含量均明显升高;经芒硝从肠干预后,芒硝组小鼠气道阻力明显降低,肺组织形态结构有一定程度的改善,肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞总数明显减少,血清Ig E含量显著降低。结论:芒硝刺激大肠,有助于改善气道通气功能,抑制哮喘小鼠气道炎症,改善气道免疫微环境。     

固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠肺组织STAT1的调控作用

目的:研究固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠肺组织中转录激活因子和信号转导子1(STAT1)的调控作用。方法:用卵蛋白(OVA)和RSV对BALB/c小鼠反复致敏刺激复制哮喘缓解期小鼠模型(正常组除外),随机分为模型组、预防组、固本防哮饮组和孟鲁司特钠组(每组15只)。观察各组小鼠的一般行为活动和病理学变化特点,用Real-time PCR法测定肺组织STAT1、IL-5 m RNA表达,Western Blot检测肺组织STAT1蛋白表达。结果:模型组小鼠肺组织可见支气管壁水肿、增厚,周围有嗜酸性粒细胞和中性粒细胞浸润。预防组、固本防哮饮组及孟鲁司特钠组小鼠肺脏病理改变显著改善,支气管壁充血水肿减轻,管壁和平滑肌厚度减小,且嗜酸性粒细胞和中性粒细胞浸润也显著减少。模型组肺组织中STAT1、IL-5 m RNA及STAT1蛋白显著高表达(P<0.01),预防组、固本防哮饮组及孟鲁司特钠组均能降低其表达,且孟鲁司特钠组降低肺组织STAT1 m RNA及蛋白表达更明显。结论:固本防哮饮可以降低哮喘缓解期小鼠肺组织IL-5、STAT1 m RNA及STAT1蛋白表达,减轻气道炎症,抑制哮喘发作并能预防哮喘的发作。     

芍药甘草汤防治支气管哮喘机理研究

目的：探讨芍药甘草汤防治支气管哮喘模型小鼠的作用机制。方法：采用卵蛋白（OVA）致敏剂制备小鼠哮喘模型,随机分正常对照组、模型对照组、地塞米松组、芍药甘草汤低、中、高剂量组6组,流式细胞术检测外周血中调节性T细胞CD4＋CD25＋百分比,观察肺组织形态学的改变,肺泡灌洗液（BLAF）中的细胞计数及分类。结果：模型组小鼠肺组织有明显炎性细胞浸润,渗出物增加,水肿明显,说明造模成功。芍药甘草汤中、高剂量组CD4＋CD25＋T细胞比例显著升高（P〈0.05）,低剂量组与模型对照组比较没有统计学意义。病理学组织观察示芍药甘草汤中剂量组、地塞米松组炎症性变化较芍药甘草汤高、低剂量组及模型组明显减轻。芍药甘草汤中、高剂量组与模型对照组相比较,细胞总数及EOS、Lym比例均降低（P〈0.05）。芍药甘草汤低剂量组与模型对照组比较没有差异（P〉0.05）。结论：芍药甘草汤可以抑制OVA致敏支气管哮喘小鼠各类炎性细胞的增生,调节肺组织中氧化/抗氧化系统的平衡,减轻氧自由基对肺组织结构的氧化损伤程度,调节哮喘小鼠体内CD4＋CD25＋T的优势表达,芍药甘草汤对支气管哮喘有一定的预防及治疗作用。     

益气养阴方对Graves病合并白细胞减少小鼠骨髓细胞CD45分子表达的影响

目的观察Graves病（GD）小鼠外周血白细胞计数和小鼠骨髓CD45分子的表达及益气养阴方对其的影响,探讨益气养阴方对GD合并白细胞减少的作用机制。方法基因枪造模建立GD小鼠模型,应用中药益气养阴方治疗后,观察小鼠外周血白细胞计数和小鼠骨髓细胞CD45分子的表达的变化。结果中药益气养阴方高、中剂量组CD45分子阳性率及荧光强度较低剂量组和模型组差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论益气养阴方对GD病合并白细胞减少有较好的治疗作用,其作用机制可能与通过上调CD45分子的表达有关。     

小叶女贞对免疫功能损伤小鼠B淋巴细胞和NK细胞的影响

目的 探讨小叶女贞对免疫功能损伤小鼠B淋巴细胞、NK细胞免疫功能的影响。方法 以环磷酰胺致免疫功能损伤小鼠为研究对象,将BALB/C实验小鼠60只按随机数字表法随机分为5组,每组12只,分别为生理盐水(NS)对照组、环磷酰胺(Cy)对照组、Cy+小叶女贞水煎液小剂量组（小叶女贞小剂量组）、Cy+小叶女贞水煎液大剂量组（...     

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??OBJECTIVE To explore the antitumor effect and immunity change of Periplaneta americana C??3 and related synthetic peptide HFDT1 in mice and to provide a base for clinical application of the materials. METHODS Sixty BALB/c mouse tumor model with leukemia L1210 were established and divided into five groups. The mice were treated with Periplaneta americana C??3 high dose, low dose, HFDT1, CTX and normal saline for 10 d, respectively. Twelve mice were as normal control group. The tumor inhibition rates and weight of body were observed in different groups. Then the results were observed including thymus and spleen index, the numbers of immune cells in peripheral blood, the ratio of splenic total lymphocytes, splenic B cell(CD45R⁺)and T cell(CD3⁺), T cell subset(CD3⁺CD4⁺ and CD3⁺CD8⁺ T cell), and the levels of IgG, IgA and IgM in serum through weight, auto-analysis of blood cell, flow cytometry, sandwich-antibody ELISA from thymus, spleen, peripheral blood in the mice. RESULTS The results showed that C??3 and HFDT1 inhibited the growth of mouse L1210 tumor and maintained the mouse weights. They increased the mouse thymus indexes and spleen indexes effectively and the numbers of peripheral blood immune cells. They maintained the spleen lymphocyte and regulated the ratio of T and B lymphocytes, CD3⁺CD4⁺ T cell and CD3⁺CD8⁺T cell. They increased the levels of serum IgG, IgA and IgM. CONCLUSION Periplaneta americana extract C??3 and related synthetic peptide HFDT1 have a strong inhibition effect to tumor. The antitumor effect of C??3 and HFDT1 may be achieved through to improve immune function. They are hoped to become efficient and low toxicity antitumor drugs. Especially HFDT1, it has an extensive application because it can be synthesized by artificial methods.     

中药复方对辐射损伤小鼠骨髓细胞周期素基因及粘附分子表达的作用

目的探讨中药复方——地甘口服液对辐射损伤小鼠骨髓细胞周期素基因及造血干细胞和基质细胞粘附分子CD45 VCAM-1表达的作用。方法建立辐射损伤模型(一次性用直线加速器给予7．0GY的X线照射)。喂饲100％地甘口服液每次0．2mL／10g小鼠，每日2次。第10天用原位杂交法检测小鼠骨髓单个核细胞cyclin D1 mRNA的表达，用免疫组化SABC法检测骨髓VCAM-1的表达，用流式细胞仪检测CD45的含量。结果地甘口服液组表达明显高于模型组，前两者与正常组无明显差异，CD45的表达仍未达到正常水平。结论中药复方——她甘口服液能增强辐射损伤小鼠骨髓细胞周期素基因和造血细胞及基质粘附分子(CD45 VCAM-1)的表达，促进造血细胞的增生。     

慢性再生障碍性贫血患者共刺激分子及Fas表达与中医辨证分型的关系

目的:探讨慢性再生障碍性贫血(chronic aplastic anemia,CAA)患者外周血共刺激分子CD28及Fas的表达与中医辨证分型的关系。方法:采用流式细胞仪技术,分别测定CAA患者45例、健康对照人群20名的外周血T细胞CD4+及CD8+中共刺激分子CD28及Fas分子表达水平。结果:①CAA组患者与健康对照组相比较,CD2+8、CD8+CD2+8/CD8+CD2+8(P<0.05)及CD4+CD2+8/CD4+CD2-8(P<0.01)、CD8+CD2+8均明显升高(P<0.001),CD9+5、CD3+CD9+5、CD8+CD9+5低于健康对照组(P<0.05)。②肾阴虚与肾阳虚组相比较,肾阴虚组共刺激分子高表达更明显,两组CD2+8、CD3+CD2+8、CD4+CD2+8、CD8+CD2+8比较均具显著差异(P<0.001),两证型CD4+CD2+8/CD4+CD2-8、CD8+CD2+8/CD8+CD2-8相比肾阴虚组数值升高明显(P<0.05);两组CD9+5、CD3+CD9+5指标差异显著(P<0.01),肾阴虚组异常更甚,两证型间CD4+CD9+5、CD8+CD9+5亦有差别(P<0.05)。结论:①CAA患者外周血共刺激分子CD28异常高表达,Fas下降,提示CD28、Fas失调可能在CAA免疫发病中起重要作用。②CAA患者外周血CD28,Fas的表达水平测定可以作为CAA辨证分型的参考指标,肾阴虚患者的免疫紊乱较肾阳虚患者严重。     

慢性再生障碍性贫血CD8~+T细胞CD28表达与中医辨证分型关系的探讨

目的 探讨慢性再生障碍性贫血(chronic aplastic anemia,CAA)患者外周血CD8^+T细胞CD28分子的表达与中医辨证分型的关系、方法采用流式细胞仪技术,测定门诊和住院CAA患者45例、健康对照人群24名的外周血CD8^+T细胞CD28分子的表达水平,从免疫学角度讨论其与中医分型关系一结果(1)CAA患者的CD8、CD28、CD8^+CD28^+表达水平及CD8^+CD28^+／CD8^+CD28均高于健康对照组(P<0．01,P<0．05)。(2)CAA肾阴虚患者CD28、CD8^+CD28^+表达水平及CD8^+CD28^+／CD8^+CD28均高于肾阳虚患者(P<0．01,P<0．05)。结论 (1)CAA患者外周血共刺激分子CD28异常高表达,提示CD28失调可能在CAA免疫发病中起重要作用、(2)CAA患者外周血CD28、CD8^+CD28^+的表达水平及CD8^+CD28^+／CD8^+CD28可以作为CAA辨证分型的参考指标,肾阴虚患者的免疫紊乱较肾阳虚患者严重。     

姬松茸多糖对树突状细胞Dectin-1、Syk及CARD9基因表达和T淋巴细胞增殖的影响

目的:探讨低相对分子质量姬松茸多糖(low molecular weight polysaccharide isolated from Agaricus blazei Murill,LMPAB)对树突状细胞C型植物血凝素1(Dectin-1),脾酪氨酸激酶(Sky)和胱天蛋白募集域蛋白9(CARD9)基因表达和T淋巴细胞增殖的影响。方法:体外培养ICR小鼠骨髓来源的树突状细胞;通过流式细胞术检测树突状细胞表面CD11c和CD86分子的表达;采用WST方法检测LMPAB增强树突状细胞对T淋巴细胞的增殖作用;应用实时定量PCR方法检测Dectin-1,Sky和CARD9 mRNA的表达水平。结果:树突状细胞表面CD11c表达98.6%,CD86表达96.97%;与正常组(4.84±0.21)比较,LMPAB+OVA组(6.59±0.19)可增强树突状细胞对T淋巴细胞的增殖作用(P<0.05);与正常组Dectin-1(6.13±0.27),Sky(0.36±0.11)和CARD9(1.85±0.20)比较,LMPAB+OVA组Dectin-1(8.25±0.19),Sky(1.63±0.16)和CARD9(4.40±0.19)明显升高,统计学具有显著意义(P<0.05)。结论:所培养的髓系细胞为树突状细胞;LMPAB可通过调控树突状细胞Dectin-1,Sky和CARD9 mRNA的表达增强树突状细胞的免疫效能。     

电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠骨髓及外周血CD34~+内皮祖细胞的影响

目的:观察电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠骨髓及外周血CD 34+内皮祖细胞(EPCs)数量、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)表达的影响,探讨电针动员骨髓CD 34+EPCs入血,促进脑缺血修复的机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组。采用线栓法制备局灶脑缺血/再灌注大鼠模型,局灶脑缺血2h后将各组分为再灌注12、24、48h3个时间点,每个时间点12只大鼠。取大鼠"百会"穴及左侧"四关"穴("合谷"/"太冲")为电针穴位,刺激时间30min,每日1次。采用神经行为学评分法评价大鼠神经功能缺损情况,流式细胞术检测骨髓及外周血CD 34+EPCs数量,Western blot法检测骨髓p-AKT蛋白的表达。结果:模型组再灌注后各时间点均有不同程度的神经功能缺损,电针可明显改善大鼠再灌注后48h神经功能评分(P0.05)。与假手术组比较,模型组各时间点骨髓及外周血CD 34+EPCs数量及骨髓p-AKT蛋白的表达明显增多(P0.01,P0.05);与模型组比较,电针组再灌注后各时间点外周血CD 34+EPCs数量及骨髓p-AKT蛋白的表达亦明显增多(P0.05,P0.01),同时电针组再灌注后12、24h骨髓CD 34+EPCs数量相对模型组明显上调(P0.05,P0.01)。结论:电针可上调局灶脑缺血/再灌注大鼠骨髓及外周血CD 34+EPCs数量,促进骨髓CD 34+EPCs动员入血,其作用可能与电针进一步激活骨髓磷脂酰肌醇-3-激酶/AKT通路相关。