头针透刺对脑出血大鼠脑组织ICAM-1表达影响的研究

目的:通过对细胞间粘附因子( ICAM -1)的研究探讨头穴透刺对急性脑出血(ICH)炎症反应的干预作用.方法:按完全随机设计将96只健康雄性Wistar大鼠平均分为模型组、针刺组和西药组.每组观察6h、24 h、48 h、72 h和168 h共5个时间点,每个时间点6只大鼠,另设6只大鼠作为空白对照组.制备ICH大鼠模型,采用免疫组化技术观察不同时间点头穴透刺对ICH大鼠脑组织ICAM -1表达的影响.结果:针刺组大鼠脑内ICAM -1表达在不同时间点均有显著下调,与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05).结论:针刺可抑制ICAM -1表达及其所致的继发性脑损伤.     

头穴透刺法对急性期脑出血大鼠脑组织Beclin1和BNIP3L蛋白表达的影响

目的通过对急性期脑出血模型大鼠进行头穴透刺法干预,观察脑组织自噬蛋白Beclin1和BNIP3L的表达情况。方法选用雄性SD大鼠90只随机分为假手术组、模型组、3-MA组、针刺组、针刺+3-MA组,每组再分为6 h、1 d和7 d 3个亚组,每个亚组各6只。脑出血模型为自体血注入法,头穴透刺选择百会穴透曲鬓穴。造模成功后各组进行神经功能评分测定,并在各自时间点取材,采用免疫化分析法观察脑组织内Beclin1和BNIP3L的表达。结果头穴透刺法可以降低急性期脑出血模型动物的神经功能评分,并随着时间递减7 d达到最低。Beclin1和BNIP3L在大鼠脑出血后6 h表达开始增多,7 d达高峰。针刺组各时间点阳性细胞数均比模型组高(P 0.05)。针刺组与针刺+3-MA组比较差异有统计学意义(P 0.05)。结论头穴透刺法能够提高Beclin1和BNIP3L蛋白的表达,促进急性期脑出血后脑组织自噬水平,减轻脑出血后的继发性损伤,达到减轻神经功能缺损的目的。     

针刺“百会”透“曲鬓”对实验性大鼠脑出血后灶周组织PAR-1和NF-κBp65表达的影响及其相关性分析

目的:探讨针刺对急性脑出血(Intracerebral hemorrage,ICH)后凝血酶受体-1(PAR-1)和核转录因子(NF-κBp65)动态表达的影响,并探讨两者的相关性。方法:选取健康雄性Wistar大鼠96只,将其中90只随机分为模型组、针刺组、茴拉西坦组(简称西药组)3组。每组又分为6h、1d、2d、3d和7d 5个时间点,每个时间点6只大鼠,另设空白对照组6只大鼠。制备ICH大鼠模型,采用Western-blot免疫印迹技术观察不同时间点头穴透刺治疗对ICH大鼠脑组织PAR-1、NF-κBp65蛋白表达的影响,并对两者进行相关性分析。结果:针刺组大鼠脑内PAR-1、NF-κBp65蛋白表达在不同时间点均有显著下调,与模型组比较PAR-1均有显著性差异(P<0.05),具有统计学意义。相关性分析两者呈正相关。结论:针刺百会透曲鬓穴可抑制ICH后凝血酶引起的毒性作用,进而下调NF-κBp65的表达,抑制了核转录因子-κB的炎症因子转录作用,达到减轻炎症级联反应程度,防治继发性脑损伤的作用。     

针刺“百会”透“曲鬓”对实验性大鼠脑出血后灶周组织NF-κBp65表达的影响

目的：探讨针刺＂百会＂透＂曲鬓＂对急性脑出血（ICH）后核转录因子-κB（NF-κBp65）表达的影响。方法：选取96只健康雄性W istar大鼠,将其中90只随机分为模型组、针刺组、茴拉西坦组（简称西药组）3组。每组再分为6 h、1天、2天、3天和7天等5个时间点,每个时间点随机分配6只大鼠,另设空白对照组6只大鼠。制备ICH大鼠模型,采用W estern免疫印迹技术观察不同时间点头穴针刺治疗对ICH大鼠脑组织NF-κBp65蛋白表达的影响。结果：针刺组显示大鼠脑内NF-κBp65蛋白表达在不同时间点均有显著下调,与模型组比较均有显著性差异（P〈0.05）,具有统计学意义。结论：头穴透刺可抑制NF-κBp65表达及其转录作用,从而抑制ICH后炎症反应所致的继发性脑损伤。     

针刺“百会”透“曲鬓”对ICH大鼠脑水含量及IL-1β mRNA表达的影响

目的:观察"百会"透"曲鬓"针刺法对脑出血大鼠脑水含量及白介素-1β(IL-1β)表达的影响。方法:采用自体血输注法制备SD大鼠脑出血模型,将雄性SD大鼠162只,随机分为3组(假手术组、模型组及针刺组),模型组与针刺组再按照6 h、12 h、24 h、72 h时间点分为四个亚组。针刺组选取"百会""曲鬓"穴进行头穴透刺。分别在相应时间点进行神经功能评分和脑水含量测定。并观测大鼠脑组织IL-1βm RNA及血清中IL-1β水平变化。结果:与假手术组相比,相同时间点模型组大鼠的神经功能明显下降,脑水含量及IL-1β表达量显著升高(P0.05);与模型组相比,相同时间点针刺组m NSS评分显著减小,IL-1β表达水平显著降低(P0.05);与24 h、72 h模型组相比,相同时间点针刺组脑水含量显著降低(P0.05)。结论:针刺"百会"透"曲鬓"可降低脑出血大鼠IL-1β表达,减轻脑水肿,改善神经功能。     

针刺对脑出血大鼠NLRP3炎性小体的影响

目的:观察针刺"百会"透"曲鬓"穴对脑出血(ICH)大鼠NLRP3炎性小体的影响,探究针刺促进ICH大鼠神经功能恢复的作用机制。方法:将40只SPF级6周龄雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、非穴位组、针刺组,每组10只。模型组、非穴位组、针刺组采用自体血注入法制备ICH大鼠模型,假手术组仅行各种手术操作但不注入自体血。造模后约3 h,针刺组予针刺"百会"透患侧"曲鬓"穴,每12小时1次,连续干预7 d;非穴位组取患侧非穴位(平行"百会"穴,距正中线1 cm处)向前进行透刺,余同针刺组操作。干预结束后,评价每组大鼠复合神经功能评分;HE染色法观察大鼠出血半暗带区脑组织形态学变化;免疫组织化学法检测大鼠脑组织Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体的表达;Western blot法检测大鼠脑组织NLRP3、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)蛋白相对表达水平。结果:干预7d后,与假手术组比较,模型组大鼠复合神经功能各分项评分及总评分均明显降低(P0.01,P0.05),脑组织神经元水肿、固缩,部分细胞坏死及炎性细胞浸润;与模型组和非穴位组比较,针刺组复合神经功能总评分及肢体对称运动(LS)和触须本体感觉(VP)2个分项评分升高(P0.01,P0.05),并能减轻细胞坏死和炎性细胞浸润。与假手术组比较,模型组大鼠脑组织NLRP3炎性小体及蛋白相对表达和IL-1β、IL-18蛋白相对表达增高(P0.01);与模型组、非穴位组比较,针刺组脑组织NLRP3炎性小体及蛋白相对表达和IL-1β、IL-18蛋白相对表达较低(P0.01)。结论:针刺"百会"透"曲鬓"穴能下调ICH大鼠脑组织NLRP3、IL-1β、IL-18蛋白表达,抑制炎性反应,进而促进大鼠神经功能恢复。     

针刺“百会”透“曲鬓”穴拮抗急性脑出血大鼠炎性损伤的机制研究

目的:探讨针刺"百会"透"曲鬓"穴拮抗急性脑出血大鼠炎性损伤的作用机制。方法:54只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组及针刺组,每组按造模后1、3、7d分为3个亚组,每组6只。采用自体血注入法建立脑出血大鼠模型。针刺组取"百会"透患侧"曲鬓"进行治疗,24h治疗1次。采用Longa评分法及肢体对称实验评分法对脑出血后大鼠神经功能进行评估,采用免疫组化法检测脑出血组织Toll样受体4(TLR-4)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素(IL)-6的阳性表达。结果:模型组大鼠脑出血损伤后出现不同程度的神经功能缺损症状表现,术后3d大鼠神经功能缺损最重;针刺后神经功能缺损明显减轻,针刺组各时间点与模型组比较差异有统计学意义(P0.01)。在各时间点假手术组大鼠脑组织可见少量TNF-α、TLR-4、IL-6阳性表达;模型组在各时间点TNF-α、TLR-4、IL-6阳性表达均高于假手术组(P0.01);针刺组在各时间点与模型组比较,TNF-α、TLR-4、IL-6阳性表达明显下调(P0.01)。TLR-4与IL-6表达呈正相关,TLR-4与TNF-α表达呈正相关。结论:针刺"百会"透"曲鬓"穴可以抑制TLR-4蛋白的表达,降低血肿组织中炎性因子TNF-α、IL-6的含量,减轻脑出血后炎性损伤,改善大鼠神经功能缺损表现。     

针刺对脑缺血再灌注损伤大鼠外周血清IL-1β、IL-6表达的影响

目的:探讨针刺百会和足三里穴对脑缺血再灌注损伤大鼠外周血清不同时间点白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)表达的干预作用。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和针刺组3个大组,每大组再按再灌注后时间分为12 h、24 h、48 h、72 h、96 h和144 h等6个亚组,每亚组8只大鼠;另设正常对照组8只。以大脑中动脉线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型,用酶联免疫吸附测定法测各组大鼠外周血清IL-1β、IL-6的表达。结果:IL-1β在针刺组表达强度低于模型组,以24 h组和96 h组最显著(P<0.05);IL-6在针刺组的表达低于模型组和假手术组,其中24 h和48 h组具有显著性差异(P<0.05)。结论:针刺百会和足三里穴可抑制脑缺血损伤早期炎症反应,延缓组织损伤。     

头穴透刺对脑出血大鼠脑组织p-Akt影响的实验研究

目的:通过百会透曲鬓穴针刺治疗脑出血急性期大鼠,观察其脑组织中p-Akt蛋白表达的变化,探讨百会透曲鬓对脑出血后脑神经的保护作用。方法:选用雄性Wistar大鼠54只,随机分为3组,模型组、针刺组(模型+针刺组)、针刺组+抑制剂组(针刺组+LY294002),每组18只;按文献方法建立模型;针刺组采用百会穴向曲鬓穴透刺,头部顶区向颞叶、额叶透刺;造模,治疗后于1、3、7天3个时间点,取大鼠脑组织,免疫组化法检测脑组织中p-Akt蛋白表达。结果:p-Akt在大鼠脑出血后1天表达增多,3天达高峰后迅速减少,7天仍有表达。与模型组比较,针刺组各时间点p-Akt表达明显增多,(P0.01);与针刺+抑制剂组比较,有统计意义(P0.05)。结论:针刺百会透曲鬓穴能够增加脑出血急性期大鼠脑组织p-Akt蛋白的表达,而这一作用可被LY294002阻断,提示本针刺方法能够激活AKT通路,起到脑保护作用。     

针刺对急性期脑出血大鼠M1型小胶质细胞的影响

摘要：目的：探讨针刺“百会”透“曲鬓”穴对急性期脑出血大鼠M1型小胶质细胞的影响,为临床治疗本病提供实验基础。方法：实验1：将120只Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和针刺组,每组按6h、1、3、7d时间点再分为4个亚组,每亚组均10只大鼠。采用自体血注入法建立脑出血大鼠模型,依据Berderson评分法判定造模成功大鼠纳入实验。假手术组进行脑出血模型制备的各项手术操作,但不注血。模型组仅进行脑出血模型制作,不做任何干预治疗。针刺组大鼠采用针刺百会穴透刺至患侧曲鬓穴进行治疗,以190±10 r/min 的速度进行左右交替旋转,持续刺激5min后休息5min,连续治疗3次。采用改良的神经功能缺损评分(mNSS)评估各组大鼠神经功能,以HE染色法观察各组大鼠脑组织病理学变化。实验2：随机选取30只Sprague-Dawley雄性大鼠分为假手术组、模型组和针刺组,每组各10只。采用Westernblot法检测各组大鼠脑组织中CD86、iNOS蛋白表达。采用免疫荧光染色法观察CD86、iNOS。采用ELISA试剂盒检测IL-1β表达。结果：mNSS评分：针刺组与模型组比较,各时间点大鼠神经功能评分均明显降低(P＜0.01)。HE染色：模型组大鼠在造模6h后可见大量血细胞溢出,神经纤维肿胀,神经元数量减少。1d时大量血细胞溢出,炎性细胞增多;3d时,大量炎性细胞浸润,大量血细胞溢出。术后7d时,出血范围及炎性细胞减少。与模型组相比,针刺组各时间点上述病理情况均有所减轻。Western blot检测：模型组CD86、iNOS蛋白表达明显增高。与模型组相比,针刺组CD86、iNOS蛋白表达明显降低(P＜0.05)。免疫荧光双染：三组大鼠均有CD86、iNOS共表达阳性细胞;与模型组比较,针刺组CD86、iNOS共表达阳性细胞数明显减少。ELISA试剂盒：假手术组大鼠脑组织IL-1β表达较低;与假手术组比较,模型组、针刺组脑组织IL-1β表达明显升高(P＜0.01);与模型组比较,针刺组脑组织IL-1β表达明显降低(P＜0.01)。结论：针刺能减轻脑出血大鼠神经功能缺损症状,可能通过抑制CD86、iNOS蛋白表达,减轻M1型小胶质细胞造成的炎症损伤,发挥脑保护作用。     

针刺对实验性大鼠脑出血后灶周组织NF-κBp65表达和脑水含量的影响及其相关性分析

目的：探讨针刺对急性脑出血（Intracerebral hemorrage,ICH）后核转录因子-κB（NF-κBp65）动态表达及脑水含量变化的影响,并探讨两者的相关性。方法：实验选用Wistar健康雄性大鼠96只,随机将其中90只分为模型组、针刺组、西药组（茴拉西坦组）。每组又分为6h、1天、2天、3天和7天5个时间点,每个时间点随机分配6只大鼠,另设6只大鼠做空白对照。制备ICH大鼠模型,采用蛋白免疫印迹技术观察针刺在不同时间点对ICH大鼠脑组织中NF-κBp65蛋白表达及脑水含量的影响,并对两者做相关性分析。结果：针刺组大鼠脑内NF-κBp65蛋白表达在不同时间点均有显著下调,与模型组比较有显著性差异（P〈0.05）,相关性分析提示,脑水肿与NF-κBp65表达呈正相关。结论：ICH后NF-κBp65阳性表达是加重脑水肿的一个重要因素,针刺可下调ICH后血肿周围脑组织内NF-κBp65蛋白表达,减轻脑水肿程度,防治ICH后继发性脑损伤。     

针刺对实验性脑出血大鼠脑组织bFGF表达的影响

目的:探讨急性脑出血后碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的动态表达及针刺的干预作用。方法:选取健康的雄性Wistar大鼠96只,随机分为模型组、模型加针刺组(针刺组)、模型加忆立福组(西药组)3组。每组又分为6h、24h、48h、72h和168h 5个时相点,每个时相点有6只大鼠,制备脑出血大鼠模型,采用Western免疫印迹技术观察头穴针刺治疗对脑出血bFGF的表达水平。结果:针刺组大鼠脑内bFGF蛋白表达在不同时相点均有显著上调,与模型组比较,均有显著性差异(P0.01),具有统计学意义。结论:上调脑内bFGF可能是有关针刺治疗脑出血一个机制,针刺可能通过使血肿周围脑组织内bFGF蛋白水平增加,从而减轻神经元损伤并促进神经修复与再生。     

百会透曲鬓对脑出血急性期大鼠血清中VEGF、ICAM-1含量的影响

目的 通过观察百会透刺曲鬓针刺法对脑出血急性期模型大鼠血清中血管内皮生长因子（VEGF）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的动态变化的影响,探讨头穴透刺治疗脑出血可能的作用机制。方法 选取60只健康雄性Wistar大鼠,将其中54只随机分为模型组、模型＋针刺组（针刺组）、模型＋茴拉西坦组（西药组）3组。每组再分为出血后1 d、3 d和7 d3个时间点,每个时间点随机分配6只大鼠,制备脑出血（ICH）大鼠模型,剩余6只大鼠作为备用。采取酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中VEGF和ICAM-1水平。结果 针刺组与模型组相比,大鼠血清内VEGF在3 d、7 d均有显著上调（均P＜0.05）。针刺组与西药组相比,出血后1 d,西药组对大鼠血清内VEGF上调显著大于针刺组（P＜0.05）;出血后7 d,针刺组对大鼠血清内VEGF上调显著大于西药组（P＜0.05）。针刺组与模型组相比,大鼠血清内ICAM-1在不同时间点均有显著下调（P＜0.05）。针刺组在出血后3 d、7 dICAM-1较西药组有显著下调（P＜0.05）。结论 百会透曲鬓针刺法可以调整脑出血大鼠血清中VEGF、ICAM-1的含量,是针刺百会透刺曲鬓治疗脑出血的可能机理之一。     

“百会透曲鬓”针刺法对脑出血模型大鼠脑组织IL-6蛋白表达影响的实验研究

目的:通过观察"百会透曲鬓"针刺法对脑出血急性期大鼠模型脑组织中白介素-6(IL-6)蛋白表达的影响,研究本针刺法对脑出血后继发性脑损伤的神经保护机制,从而指导临床实践。方法:选用60只雄性Wistar大鼠,随机分为空白组、模型组、针刺组、西药组(脑复康)。分别于脑出血急性期大鼠模型造模成功后6h,2天,7天三个时间点并完成相应治疗,治疗后进行神经功能学评分,然后处死大鼠,取大鼠脑组织,用免疫组化分析法(IHC)检测脑组织中IL-6蛋白表达的平均灰度值,在光镜下观察脑组织形态学变化。结果:针刺治疗能减少神经功能缺损评分,造模后2天及7天后,针刺组与模型组比较有显著性差异(P0.01);针刺治疗能降低IL-6阳性细胞平均灰度值,造模后2天及7天后,针刺组与模型组比较有显著性差异(P0.01);光镜下脑组织病理改变结果显示,针刺组与模型组有差异。结论:"百会透曲鬓"针刺法可明显改善大鼠的神经功能学评分,有利于脑出血后肢体运动功能的恢复。在脑出血急性期,针刺"百会透曲鬓"穴可以通过下调IL-6的蛋白表达,减轻脑出血后炎性反应导致的继发性脑损伤程度,从而改善脑组织缺血缺氧状态及保护受损伤的神经元细胞。     

刺五加注射液对脑出血大鼠血肿周围组织含水量、SOD、MDA水平的影响

目的观察刺五加注射液（AS）对脑出血（ICH）大鼠血肿周围组织含水量、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平的影响,探讨AS治疗ICH机制,为AS临床应用提供实验依据。方法定量胶原酶注入大鼠尾状核建立大鼠ICH模型。125只雄性Wistar大鼠随机分为正常组（6只）、假手术组（30只）、模型组（30只）和AS治疗组（60只）。治疗组又分为AS大剂量组（30只）和AS小剂量组（30只）,分别采用AS干预。假手术组、模型组和AS治疗组分别于术后不同时间点处死大鼠,检测脑匀浆中SOD活性、MDA水平和脑组织含水量。结果AS治疗组于1d、3d、7d时SOD活性明显高于模型组（P〈0．01）;AS治疗组于12h、1d、3d、7d时MDA水平明显低于模型组（P〈0．05或P〈0．01）;治疗组于12h、1d、3d、7d脑组织含水量明低于模型组（P〈0．05或P〈0．01）。结论AS干预可降低ICH大鼠脑组织中MDA含量,提高SOD活性,减少自由基产生,减轻脑水肿。可能是AS发挥脑保护作用、治疗ICH的作用机制之一。     

头针透穴法对脑出血大鼠脑组织中β-catenin表达影响的实验研究

目的：通过观察针刺“百会”透“曲鬓”穴头针疗法对急性脑出血大鼠脑组织形态学及脑组织中β-catenin表达的影响,研究针刺对脑出血后NSCs增殖分化的影响及其与Wnt信号通路关键因子β-catenin的关系,阐明针刺促进脑出血后神经重塑的作用机制。方法：选用雄性Wistar大鼠按随机数字表法随机分为空白组、模型组、针刺组、通路激动剂（SB216763）组;每组再随机分为1天、3天、7天、14天4个亚组。模型组采用立体定向手术自体血注入法制备脑出血模型;针刺组大鼠针刺患侧“百会”透“曲鬓”穴。在光镜下观察各组大鼠脑组织形态学改变;运用蛋白免疫印迹方法检测和免疫组化方法检测各组大鼠脑组织β-catenin的阳性细胞表达以及针刺治疗对它们的影响。结果：针刺及激动剂组可明显改善大鼠神经功能缺损评分,与模型组比较,有显著性差异（P〈0．05）。模型组、针刺组及SB216763组大鼠灶周组织β-eatenin阳性细胞数表达均随时间点变化逐渐增加,3天时达高峰值,7天逐渐减少,14天时仍有表达;针刺组、SB216763组分别与模型组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）;针刺组与SB216763组中β-catenin表达比较无明显差异（P〉0．05）。结论：针刺及通路激动剂均可明显改善脑出血大鼠神经损伤功能评分。“百会”透“曲鬓”针刺法可能具有与通路激活剂SB216763有相类似的作用,可能通过上调β-catenin表达,激活Wnt信号通路,参与调控脑出血大鼠脑组织中神经干细胞的增殖与分化。     

针刺对脑出血急性期大鼠脑损伤及脑水肿拮抗作用的机理研究

目的:探讨针刺对脑出血急性期脑损伤及脑水肿拮抗作用的机理。方法:选取健康雄性W istar大鼠320只随机分为3组:模型组、针刺组、西药组,每组100只大鼠,每组再随机分为6 h、1 d、2 d、3 d、7 d共5个亚组,每个亚组20只大鼠;制备脑出血模型;另设20只正常大鼠作为空白组。针刺组针刺患侧"百会"透"曲鬓"穴。在光镜和电镜下观察各组大鼠脑组织形态学改变;应用干-湿重法测定各组大鼠脑水含量。结果:①针刺组较模型组神经细胞肿胀减轻,线粒体结构破坏较轻,突触结构较清晰。②干-湿重法结果显示,各造模组大鼠术后均出现不同程度的脑水肿现象。模型组大鼠术后6 h出现轻度脑水肿现象;3 d脑水肿达高峰;7 d仍有轻度脑水肿现象。针刺组较模型组和西药组脑水肿程度减轻,与模型组比较在1~7 d时差异明显(P0.01);与西药组比较在1~3 d时差异明显(P0.01)。结论:"百会"透"曲鬓"在脑出血急性期能明显减轻神经细胞损伤及超微结构的破坏、减少炎性细胞浸润、降低血肿周围脑组织脑水肿程度,提示对脑组织损伤及脑水肿有拮抗作用。     

针刺对实验性脑出血大鼠脑组织PAR-1表达的影响

目的:探讨急性脑出血后凝血酶受体-1(PAR-1)的动态表达及针刺的干预作用。方法:选取健康雄性Wistar大鼠96只,随机分为模型组、针刺组、西药组3组。每组又分为6 h、24 h、48 h、72 h和168 h 5个时相点,每个时相点6只大鼠,另设空白对照组6只大鼠。制备脑出血大鼠模型,采用West-ern免疫印迹技术观察不同时相点头穴针刺治疗对脑出血大鼠脑组织PAR-1蛋白表达的影响。结果:针刺组大鼠脑内PAR-1蛋白表达在不同时相点均有显著下调,与模型组比较均有显著性差异(P0.05),具有统计学意义。结论:下调脑内PAR-1蛋白表达可能是针刺治疗脑出血获效的一个重要机制,针刺可能通过下调脑出血血肿周围脑组织内PAR-1蛋白表达,减轻凝血酶所造成的毒性反应,从而达到防治脑出血后继发性脑损伤的作用。