血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞p38丝裂素激活蛋白激酶通路的作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)激活人脐静脉内皮细胞(HUVECs)p38丝裂素激活蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路的作用。方法用含20%胎牛血清的DMEM培养基与CO_2培养箱(5%CO_2+95%空气)培养HUVECs。待细胞生长至80%融合时,无血清培养16h后分组:(1)AngⅡ不同时点观察组:用AngⅡ(终浓度100 nmol/L)分别刺激细胞0、5、10、15、30、45 min和60 min。(2)AngⅡ不同剂量作用组:分别用终浓度为0、10、100、1000 nmol/L和10 000 nmol/L的AngⅡ刺激细胞15 min。(3)AngⅡ+p38MAPK特异性抑制剂SB202190组:在AngⅡ(终浓度100 nmol/L)刺激前30 min,分别将1000 nmol/L和5000 nmol/L(终浓度)的SB202190加入培养基,共同孵育30 min。上述各组作用一定时间后收集细胞,用Western blot方法测定细胞p38MAPK磷酸化表达。结果 AngⅡ(100 nmol/L)可诱导HUVECs p38MAPK磷酸化表达,15～30 min达到高峰,分别升高2.25和2.51倍(P<0.005,n=5),随时间呈峰形变化;AngⅡ呈剂量依赖性诱导HUVECs p38MAPK磷酸化,在AngⅡ100 nmol/L时p38MAPK磷酸化表达即有明显增强,在AngⅡ刺激剂量为1000 nmol/L和10 000 nmol/L时,p38MAPK磷酸化表达分别增加2.03和2.11倍(P<0.005,n=5);p38MAPK特异性抑制剂SB202190可显著抑制HUVECs p38MAPK磷酸化,且呈剂量依赖性,5000 nmol/L SB202190的抑制率为53.9%(P<0.01,n=6)。结论 AngⅡ可激活人脐静脉内皮细胞p38MAPK信号通路。     

体外研究胰岛素及磷脂酰肌醇3-激酶途径对一氧化氮生成的影响

目的探讨胰岛素及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)途径对NO生成的影响。方法检测胰岛素、葡萄糖以及PI3-K活性不可逆的抑制剂(Wortmannin)对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)PI3-K表达以及NO、超氧阴离子(O_2~-)产生和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响。实验分为对照组、10 mU/L胰岛素组、100 mU/L胰岛素组、甘露醇组、5 mmol/L葡萄糖+10 mU/L胰岛素组(5 mmol/L G1组)、25 mmol/L葡萄糖+100 mU/L胰岛素组(25 mmol/L G2组)、50 nmol/L Wortmannin组(50 nmol/L W组)、50 nmol/L Wortmannin+10 mU/L胰岛素组(50 nmol/L W1组)和50 nmol/L Wortmannin+100 mU/L胰岛素组(50 nmol/L W2组)。结果与对照组比较,不同浓度胰岛素组eNOS活性及NO水平显著升高(P<0.01);25 mmol/L G2组、50 nmol/L W组、50 nmol/LW1组和50 nmol/L W2组eNOS活性及NO水平均显著降低,O_2~-生成明显增加(P<0.01);与对照组比较,不同浓度胰岛组、50 nmol/L W组、50 nmol/L W1组和50 nmol/L W2组PI3-K蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论 PI3-K信号途径对于促进NO产生、维持血管内皮细胞的正常功能具有重要作用,在高糖、高胰岛素状态下该条途径受损并由此引发内皮功能障碍。     

高浓度胰岛素对人树突状细胞分化、成熟及免疫功能的影响

目的:研究高浓度胰岛素对树突状细胞(Dendritic Cell,DC)分化、成熟及免疫功能的影响。方法:采用连续贴壁法分离正常人外周血单核细胞,在含重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF,100ng/ml)和重组人白细胞介素-4(IL-4,100ng/ml)的完全培养基中培养。5天后收集细胞,重新铺板后继续在胰岛素浓度分别为0nmol/L、10nmol/L及100nmol/L的培养基中培养48小时,收集细胞和上清液,采用流式细胞术检测细胞表面CD40、CD80和CD83的表达;用ELISA法检测上清液中细胞因子IL-12、IL-10、TNF-α的浓度;用倒置显微镜动态观察DC形态变化。结果:胰岛素浓度为10nmol/L、100nmol/L组的DC表面标成CD40、CD80和CD83阳性表达率较含胰岛素0nmol/L的对照组升高,培养上清液中细胞因子IL-12、TNF-α的浓度也较对照组升高,而细胞因子IL-10的浓度则较对照组降低。结论:高浓度胰岛素促进了树突状细胞表型CD40、CD80和CD83的表达;促进了DC对细胞因子IL-12和TNF-α的分泌;对IL-10的分泌则起抑制作用。高浓度胰岛素通过促进树突状细胞免疫功能的成熟,可能是其参与动脉粥样硬化免疫炎症反应的发生、发展的机制之一。     

高浓度胰岛素对急性冠状动脉综合征患者外周单核细胞源树突状细胞分化成熟及免疫功能的影响

目的 研究高浓度胰岛素对急性冠状动脉综合征患者外周单核细胞源树突状细胞分化、成熟及免疫功能的影响.方法 采用贴壁法分离急性冠状动脉综合征患者(ACS组)和正常人(正常组)外周血单核细胞,在含粒-巨噬细胞集落刺激因子(100 μg/L)和白细胞介素4(100 μg/L)的RPMI 1640完全培养基中培养.5天后收集细胞,作为未成熟树突状细胞,重新铺板后继续在胰岛素浓度分别为1、10 nmol/L和100 nmol/L的RPMI1640完全培养基中培养48 h后,收集细胞和上清液,此时细胞作为成熟树突状细胞,采用流式细胞术检测成熟树突状细胞表面 CD40、CD80和CD83的表达;用酶联免疫吸附法测定检测上清液中细胞因子白细胞介素12、白细胞介素10和肿瘤坏死因子α的浓度;用倒置显微镜动态观察树突状细胞形态变化.结果 树突状细胞表型CD40、CD80和CD83随着胰岛素浓度升高而升高(P＜0.05),培养上清液中细胞因子白细胞介素12、肿瘤坏死因子α的浓度也随着胰岛素浓度升高而升高(P＜0.05),而细胞因子白细胞介素10的浓度则随着胰岛素浓度升高而降低(P＜0.05).同等胰岛素浓度下,急性冠状动脉综合征患者较正常组的树突状细胞表面CD40、CD80和CD83的阳性表达率升高(P＜0.05),培养上清液中细胞因子白细胞介素12、肿瘤坏死因子α的浓度升高(P＜0.05),而细胞因子白细胞介素10的浓度则降低(P＜0.05).结论 高浓度胰岛素促进了急性冠状动脉综合征患者的树突状细胞表面标志物CD40、CD80和CD83的表达;促进了树突状细胞对细胞因子白细胞介素12和肿瘤坏死因子α的分泌;对白细胞介素10的分泌则起抑制作用.高浓度胰岛素通过促进树突状细胞免疫功能成熟,参与动脉粥样硬化免疫炎症反应的发生和发展,是急性冠状动脉综合征发生的可能机制之一.     

阿托伐他汀对人CD4+T淋巴细胞microRNA-21表达的影响

目的 研究阿托伐他汀在体外对人CD4+T淋巴细胞miRNA-21表达的影响.方法 取12例健康志愿者的新鲜外周血,免疫磁珠分选出CD4+T淋巴细胞,分为空白组、PHA+(0、1、5、10 μmol/L)阿托伐他汀组,体外培养48 h后收集各组细胞及培养基上清液,荧光定量PCR检测miRNA-21及PDCD4mRNA表达水平,Western印迹检测PDCD4蛋白表达,ELISA检测培养基上清液TNF-α及IL-10浓度.结果 ①与空白组比较:PHA刺激后,CD4+T淋巴细胞miRNA-21 、PDCD4 mRNA、PDCD4蛋白表达及上清液TNF-α浓度均升高(均P＜0.05).②与PHA+0μmol/L他汀组比较:加入不同浓度阿托伐他汀后,CD4+T淋巴细胞miRNA-21相对表达量和上清液IL-10浓度增加(P＜0.05),而PDCD4蛋白表达和上清液TNF-α浓度明显降低(P＜0.05).结论 阿托伐他汀能促进PHA刺激的人CD4+T淋巴细胞miRNA-21的表达增加,从而抑制靶蛋白PDCD4,促进抗炎因子IL-10分泌和抑制促炎因子TNF-α.     

利拉鲁肽通过调节Sestrin2改善棕榈酸诱导的L6骨骼肌细胞胰岛素抵抗

目的探讨应激诱导蛋白Sestrin2(Sesn2)在利拉鲁肽改善大鼠L6骨骼肌细胞胰岛素抵抗中的作用。方法采用棕榈酸诱导法建立大鼠L6骨骼肌细胞的胰岛素抵抗, 将实验细胞分为对照组(Con组)、棕榈酸0.6 mmol/L处理组(PA组)、棕榈酸0.6 mmol/L+利拉鲁肽10 nmol/L处理组(PA+Lir10组)、棕榈酸0.6 mmol/L+利拉鲁肽100 nmol/L处理组(PA+Lir100组)和棕榈酸0.6 mmol/L+利拉鲁肽1 000 nmol/L处理组(PA+Lir1000组)。细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测各组细胞活性, Western印迹法检测各组葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)和Sesn2蛋白的表达。小干扰RNA(siRNA)转染L6细胞, 抑制Sesn2的表达后, 用棕榈酸0.6 mmol/L和利拉鲁肽100 nmol/L干预细胞, 采用Western印迹法检测细胞中Sesn2、Akt、p-Akt、GLUT4蛋白表达水平。结果与Con组相比, PA组细胞存活率明显下降(P<0.05), p-Ak...     

5-氮杂胞苷上调miR-27b-5p表达对模拟失重下血管内皮细胞凋亡的影响

目的 探究5-氮杂胞苷（5-azacytidine, 5-AZA）对模拟失重效应下血管内皮细胞miR-27b-5p表达及细胞凋亡的影响。 方法 体外培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）,利用MTT试剂盒检测不同浓度5-AZA（0.1 μmol/L、1 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L、50 μmol/L和100 μmol/L）对HUVECs的毒性作用。采用qRT-PCR技术观察模拟失重环境下miR-27b-5p表达的时程变化及5-AZA药物处理对miR-27b-5p表达的影响;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Cleaved Caspase-3的表达,观察5-AZA在回转模拟失重效应下对HUVECs凋亡的影响。 结果 5-AZA对HUVECs的细胞毒性呈浓度依赖性。与对照组相比,0.1 μmol/L、1 μmol/L、5 μmol/L和10 μmol/L组的细胞存活率无统计学差异,50 μmol/L 5-AZA组和100 μmol/L5-AZA组的细胞存活率显著降低（P<0.05）。因此,我们采用10 μmol/L作为后续实验5-AZA的加药浓度。在回转模拟失重效应下,HUVECs的miR-27b-5p表达显著下降（P<0.05）,且随回转时间的延长而下降程度增大（P<0.05）。qRT-PCR检测结果提示,5-AZA可显著上调模拟失重效应下HUVECs中miR-27b-5p表达（P<0.05）。Western blot检测结果提示,5-AZA可显著下调模拟失重效应下HUVECs中Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达（P<0.05）,上调Bcl-2蛋白表达（P<0.05）。 结论 5-AZA通过上调miR-27b-5p表达,抑制模拟失重效应下HUVECs凋亡的发生。     

糖基化终产物通过EMMPRIN/MMPs途径对Ⅰ型胶原代谢的影响

目的探讨糖基化终产物是否通过EMMPRIN/MMPs途径影响Ⅰ型胶原的代谢。方法利用小鼠成骨样细胞(MC3T3E1)和小鼠巨噬细胞(RAW264.7)构建共培养体系。应用AGE-BSA(50mg/L)、EMMPRIN抗体(5mg/L)、AGE-BSA+EMMPRIN抗体分别干预共培养体系24h,用ELISA法检测上清液中Ⅰ型胶原含量。不同浓度AGE-BSA(0、50、100、200、400mg/L)干预共培养细胞24h,收集细胞及上清液,用半定量RT-PCR法检测成骨细胞Ⅰ型胶原mRNA表达,用明胶酶谱法测定上清液中MMP-2和MMP-9的分泌量。结果加入AGE-BSA(50mg/L)干预后上清液中Ⅰ型胶原含量显著降低(P<0.05),EMMPRIN抗体使Ⅰ型胶原含量增加(P<0.05),EMMPRIN抗体+AGE-BSA组使Ⅰ型胶原水平显著增加(P<0.05)。不同浓度AGE-BSA干预共培养体系后,Ⅰ型胶原mRNA表达与对照组相比显著增加(P<0.05),且随AGE-BSA干预浓度增加而增加(P<0.05)。MMP-2、MMP-9分泌水平均较对照组显著增加(P<0.05),并随AGE-BSA干预浓度增加而增加(P<0.05)。结论在体外AGEs可增加成骨细胞Ⅰ型胶原的合成,同时促进Ⅰ型胶原的降解,提示AGEs可能通过打破Ⅰ型胶原合成与降解之间的平衡使降解多于合成,进而降低骨强度。     

小干扰质粒干扰肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A对小鼠胰岛β细胞增殖及胰岛素基因表达的影响

目的探讨肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A(MafA)对胰岛β细胞增殖及胰岛素基因表达的影响。方法采用RT-PCR和Western blot分别测Ma。fA mRNA和蛋白的表达,筛选最佳小干扰质粒(siRNA),分为转染对照组(Cy3组)、阴性对照组(Scramble组)、阳性对照组(siβ-actin组)及实验组(即siMafA-1、siMafA-2和siMafA-3组)。按不同葡萄糖浓度分为5.6 mmol/L、10 mmol/L、25 mmol/L。根据不同葡萄糖浓度是否加入siRNA分为未加siRNA的对照组:A_0组5.6 mmol/L、B_0组10 mmol/L、C_0组25 mmol/L;加入siRNA的实验组:A_1组5.6 mmol/L、B_1组10 mmol/L、C_1组25 mmol/L。测MafA基因沉默后MIN6细胞增殖、胰岛素(Insulin)-1和Insulin-2 mRNA表达、MafA蛋白表达及上清液胰岛素浓度的变化。结果siMafA-2组干扰效果最好。C_1组MafA蛋白表达较C_0组下降(P0.05);MIN6细胞增殖、Insulin-2 mRNA表达和上清液胰岛素浓度均降低(P0.05)。A_1组与A_0组比较,MafA蛋白表达比较,差异无统计学意义(P0.05);MIN6细胞增殖、Insulin-2 mRNA表达和上清液胰岛素浓度比较,差异无统计学意义(P0.05)。不同糖浓度各亚组与对照组Insulin-1 mRNA表达比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论siRNA-2组是理想的siRNA。MafA下调可抑制小鼠胰岛β细胞增殖。MafA下调可抑制小鼠Insulin2 mRNA表达和胰岛素分泌。     

尼古丁对脐静脉内皮细胞释放IL-6及PAI-1的影响

目的:探讨尼古丁干预人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后,白介素-6(IL-6)和纤溶酶原激活物抑制物-I(PAI-1)抗原的表达变化,并分析其相关性.方法:将4-6代HUVECs接种于24孔培养板.随机分为对照组与不同浓度尼古丁组.尼古丁浓度分别为0.1μmol/L、1.0μmol/L、10μmol/L与100μmol/L.12h后收集各组细胞上清液.采用酶联免疫吸附双抗体夹心分析法(ELISA)定各组细胞上清液中IL-6、PAI-1抗原浓度.结果:各浓度尼古丁组HUVECs释放IL-6抗原呈浓度依赖性增高,各尼古丁组IL-6含量与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).100μmol/L尼古丁组PAI-1含量与对照组比较升高(P<0.05).HUVECs释放PAI-1与IL-6呈正相关(P<0.05).结论在体外,尼古丁可诱导HUVECs释放IL-6、PAI-1增多,参与内皮损伤、炎症与纤溶活性紊乱.     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.