N-乙酰化壳聚糖膜的制备和性质研究

以乙酸和甲醇为介质，利用壳聚糖和乙酸酐制备出N-乙酰化壳聚糖膜。对膜的亲水性、吸水性、结晶性、透光性、渗透性以及对血清蛋白的吸附性和与兔角膜上皮细胞的生物相容性进行了研究。结果表明N-乙酰化壳聚糖膜有一定的亲水性、吸水性、结晶性，有很好的透光性和渗透性，对血清蛋白有一定的吸附能力，以该膜为载体培养兔角膜上皮细胞实验结果表明膜与兔角膜上皮细胞具有很好的生物相容性。     

壳聚糖相对分子量对壳聚糖膜与角膜基质细胞相容性的影响

以脱乙酰度为95％，相对分子量分别为130KDa、220KDa、300KDa和500KDa的壳聚糖制备不同的壳聚糖膜。以各种壳聚糖膜作为基质，体外培养兔角膜基质细胞，通过观察角膜基质细胞在不同壳聚糖膜上的生长状态、贴附情况、生长曲线以及乳酸脱氢酶的活性，研究壳聚糖相对分子量对壳聚糖膜与角膜基质细胞生物相容性的影响。实验结果表明壳聚糖相对分子量对壳聚糖膜与角膜基质细胞的相容性具有重要的影响，相对分子量过高或过低的情况下，壳聚糖膜与角膜基质细胞相容性较差，对细胞损伤程度较大，细胞在膜上的贴附、生长能力较差；以相对分子量在200KDa～300KDa之间的壳聚糖制备出的膜与角膜细胞具有较好的相容性，细胞可在膜上长成密集单层，适合作为角膜培养的支架材料。     

壳聚糖-透明质酸共混膜对兔角膜基质细胞生长的影响

观察各种壳聚糖-透明质酸共混膜对角膜基质细胞生长的影响作用,研究透明质酸混入比例对共混膜与细胞相容性的影响.以共混膜为载体培养兔角膜基质细胞,通过光学和电子显微镜,观察细胞在膜上的生长情况;通过MTT法,检测细胞在共混膜上的贴附率和生长活性;通过检测培养基中乳酸脱氢酶的活性,预示壳聚糖-透明质酸共混膜与角膜基质细胞的相容性.以低于1:0.1的比例混入透明质酸.可以提高细胞在共混膜上的贴附率、生长速度,细胞在共混膜上的生长状态好于在壳聚糖膜上的生长状态.结果提示,以低于1:0.1的比例混入透明质酸,可以提高壳聚糖膜与角膜基质细胞的相容性,促进细胞生长;而以高于1:0.1的比例混入透明质酸,则不利于细胞在共混膜上的生长,降低了壳聚糖膜与角膜基质细胞的相容性.     

兔角膜内皮细胞载体的体外培养及移植的研究

以特定曲率的壳聚糖-硫酸软骨素共混膜为载体，构建兔角膜内皮。研究了共混膜的透光性、体外酶降解性以及兔角膜内皮细胞在载体上的细胞贴附性、细胞形态及膜强度等性质。结果表明，共混膜的透光率达90％以上，生物降解性良好。该共混膜有良好的细胞贴附性及机械强度；兔角膜内皮细胞可在共混膜上长成良好的单层，细胞形态较好，并贴附牢固，振荡后细胞无脱落，膜片保持完整。将培养好的载体植入到去除内皮层的兔角膜中，术眼在56天内基本保持透明，说明体外构建的内皮可执行角膜内皮层的部分功能。     

不同脱乙酰度对壳聚糖膜与角膜基质细胞相容性的影响

以分子量为30万．脱乙酰度分别为63．3％、73．7％、83％和97％的壳聚糖制备不同的壳聚糖膜，在不同脱乙酰度的壳聚糖膜上培养兔角膜基质细胞．通过观察角膜基质细胞在不同壳聚糖膜上的生长状态、贴附情况、生长曲线以及乳酸脱氢酶的活性，研究壳聚糖分子脱乙酰度对壳聚糖膜与角膜基质细胞生物相容性的影响。实验结果表明壳聚糖脱乙酰度越高。壳聚糖膜对细胞的损伤越小。越有利于细胞在膜上的生长和贴附，反之．低脱乙酰度的壳聚糖膜与角膜细胞的相容性较差。     

体外培养角膜内皮细胞的鉴定方法

角膜内皮细胞(CEC)对维持角膜透明和相对脱水状态有极为重要的作用,体外培养CEC对研究角膜内皮的结构和功能具有重要的意义.采用组织块培养法培养的CEC容易混入上皮细胞、成纤维细胞和基质细胞,引起细胞性污染;采用消化法、贴壁法培养的CEC形态易发生改变,多次传代后活性有待研究.因此,CEC的鉴定显得至关重要.目前的研究尚未发现CEC特异性的标记物,鉴定CEC成为目前的一个难点.本文就体外培养的CEC鉴定的研究进行如下综述,旨在提供角膜内皮研究的新进展.     

角膜体外重构异种生物载体材料植入性实验研究

目的：分析测定异种（猪）角膜基质组织免疫原性，观察其角膜层间植入后与受体角膜愈合情况，以评价该材料生物相容性，并在此载体上体外重构角膜内皮组织，探讨其作为角膜重建载体材料可行性。 方法： (1)将新鲜、脱水两种猪角膜基质植片分别植入F344大鼠角膜基质层间，术后12、90 d对外周血进行CD25和CD4/CD8双色免疫荧光标记，流式细胞仪测定分析。(2)猪角膜基质植入新西兰白兔角膜层间，定期临床观察植片愈合情况，并取受体兔角膜进行组织学观察。(3)将猫角膜内皮细胞接种于保留后弹力层的脱水猪角膜基质上，加入培养液培养7 d，组织学观察体外重构的角膜内皮组织形态结构。 结果： (1)测得新鲜组、脱水组大鼠外周血T淋巴细胞CD4＋CD25＋、CD8＋CD25＋双阳性表达率及CD4＋/CD8＋比值与同基因移植组、阴性对照组比较无显著差异（P>0.05）。(2)兔眼临床观察：全部植片存活，12只术眼未见有角膜水肿混浊、角膜新生血管、排斥反应发生，新鲜植片在2个月左右已透明，脱水植片在6个月后透明。兔角膜组织学观察：新鲜植片4个月时与兔角膜基质相融愈合，脱水植片经角膜细胞再分布、胶原纤维改建重塑于8个月后与兔角膜基质相融愈合，两组植片愈合过程中未见有淋巴细胞浸润及新生血管生成。(3)体外重构的内皮组织形态结构与正常内皮层相似。 结论： 异种（猪）角膜基质免疫原性低，具有良好的生物相容性，是目前较为理想的角膜体外重构载体材料。     

壳聚糖膜的降解与生物相容性研究

用小鼠作实验动物，研究了壳聚膜的生物降解与生物相容性，结果表明，壳聚糖膜易于生物降解，在植入初期有轻度炎症反应，至１６周后炎症反应基本消失。作为一种新型天然可吸收性生物材料，壳聚糖具有很好的发展应用前景。     

细胞生长因子促进角膜内皮细胞增殖的实验研究进展

近年来,细胞因子对角膜内皮细胞的增殖作用引起人们广泛关注。本文对能促进角膜内皮细胞增殖的细胞生长因子的研究进展进行阐述,说明细胞生长因子对角膜内皮损伤的修复有广阔的应用前景。     

以猪角膜脱细胞基质为载体培养人脐静脉内皮细胞构建实验性角膜后板层

 目的： 探讨以异种后弹力膜/基质为载体诱导人脐静脉内皮细胞向角膜内皮细胞分化的可行性及移植术后在活体的生理功能。方法：体外分离培养脐静脉内皮细胞作为诱导移植的种子细胞;取当地质检合格的猪眼球以直径6.2 mm、厚100 μm、冷冻脱水进行角膜深板层载体的制备;接种经CM-DiI荧光标记的第2~3代人脐静脉内皮细胞于载体的后弹力层面,体外培养7~10 d行细胞形态、密度、组织学和扫描电镜观察,待细胞与后弹力层面融合形成单层后,用于兔角膜移植。受眼：正常健康新西兰大白兔24只（24眼）,实验组（人脐静脉内皮细胞移植组）12眼,对照组（单纯猪角膜深板层移植组）12眼,全角膜范围去除术眼内皮细胞,实施移植手术。结果：人脐静脉内皮细胞在猪后弹力膜/基质载体上贴附生长,形成紧密连接的单层,形态近似六角形,呈铺路石状分布,具有正常兔角膜内皮细胞的超微结构。术后8周实验组角膜基本透明,周边角膜略有水肿。对照组单纯猪角膜深板层移植后,移植角膜明显水肿、混浊。结论：以异种角膜后弹力膜/基质为载体培养的人脐静脉内皮细胞,行异种异体移植后,能够在活体上成活,并能维持角膜透明,具有正常角膜内皮细胞的生物学功能。深板层角膜内皮移植术是体外培养血管内皮细胞移植的一种有效术式。     

壳聚糖与硫酸软骨素共混膜性质的研究

以壳聚糖和硫酸软骨素按一定比例制备出共混膜，研究了膜片的透光性、含水量、渗透性、力学性质、表面结构、生物降解性、生物相容性等性质。结果表明该共混膜具有较好的透光性、通透性、生物降解性和生物相容性，膜表面较粗糙。以此共混膜为载体培养兔角膜基质细胞，发现细胞在此共混膜上生长良好。制备膜片随着加入CaSO4量的增加，膜的通透性也随之增加。     

Effects of Hydrophobic Modifications and Phase Transitions of Polyvinylamine Hydrogel Films on Reversible CO2 Capture Behavior: Comparison between Copolymer Films and Blend Films for Temperature‐Responsive CO2 Absorption

The separation of CO₂ from large emission sources is essential to both mitigate the greenhouse effect, as well as generate carbon‐based energy. However, energy consumption of conventional CO₂ separation processes, which using aqueous amine solution as absorbent, is too large. It is has been previously reported that hydrogel films that are consisting of temperature‐responsive amine‐containing polymers can be energy efficient CO₂ absorbent—the films can reversibly capture and release large amount of CO₂ via temperature‐induced phase transition of hydrogels. However, the study is limited to the films consisting of gel particles of polyacrylamides. In this study, a series of hydrogel films consisting of a mass‐produced amine‐containing linear polymer, polyvinyl amine (PVAm), are prepared, and the efficiencies of their reversible CO₂ capture are tested. The effects of hydrophobic modifications and the temperature dependent phase transition behaviors of the films on the reversible CO₂ capture efficiency are studied in detail. The function of hydrogel films containing modified PVAm (copolymers), as well as blend films of nonmodified PVAm and 100% modified PVAm, are compared for the first time. The results reveal that the reversible CO₂ capture efficiency of polyamine films can be improved just by blending with temperature‐responsive polymers.

     

川芎嗪和剪切率对大鼠悬浮微血管内皮细胞凋亡和功能的影响

以川芎嗪和锥-板旋转剪切方式共同作用于悬浮状态的大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC),采用AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡率和测定剪切液中t-PA、PAI、6-K-PGF1α、TXb2、vWF以探讨川芎嗪和剪切率对悬浮血管内皮细胞凋亡和功能的影响.结果表明:川芎嗪(31.5、63.0、126.0μg/ml)和剪切率(2000、4000、6000、8000 s-1)对悬浮rCMEC的凋亡和功能有显著影响,在对各指标的影响上,二者均无交互作用;随着剪切率的逐渐增加,rCMEC的生存状态和生理功能渐趋紊乱,表现为凋亡率增加,t-PA和PGI2分泌量减少,PAI、TXB2和vWF分泌量增加;给予川芎嗪后可抑制高剪切率诱导的rCMEC凋亡,促进rCMEC分泌t-PA和PGI2,抑制PAI、TXB2和vWF的分泌.结果提示:高剪切率可诱导rCMEC凋亡,导致悬浮rCMEC功能紊乱.川芎嗪可明显抑制其凋亡和功能紊乱.     

流体剪切力调节血管内皮细胞自噬的研究进展

细胞自噬作为细胞的一种防御和应激调控机制,参与维持细胞的代谢平衡。在血管内皮细胞中,自噬是影响内皮细胞功能的一个重要因素。流体剪切力也是影响血管内皮细胞形态和功能的重要因素之一。而血管内皮细胞生理功能的维持在整个心血管系统的正常运转中起着重要的作用。我们主要对血管内皮细胞的功能,细胞自噬和流体剪切力对血管内皮细胞功能的调节作用,以及流体剪切力对血管内皮细胞自噬的调节作用等方面进行综述。     

大鼠脑微血管内皮细胞的原代培养及缓激肽的作用靶细胞探讨

目的建立稳定的原代大鼠脑微血管内皮细胞培养方法,并在体外探讨不同剂量缓激肽的作用靶细胞,进一步阐释缓激肽开放血脑和血肿瘤屏障的机理。方法运用免疫荧光测定原代培养的脑血管内皮细胞、星形胶质细胞及C6胶质瘤细胞在不同剂量缓激肽作用前后的细胞内钙离子变化,根据给药前后的荧光改变来确定不同剂量缓激肽的作用靶点细胞。结果小剂量缓激肽(终浓度:1μmol/L)可以引起C6胶质瘤细胞内的钙离子水平升高,而只有大剂量(终浓度:10μmol/L~1mmol/L)缓激肽才能触发星形胶质细胞内的钙离子水平升高,脑微血管内皮细胞对大、小剂量缓激肽均无任何反应。结论缓激肽的直接作用靶点是胶质细胞及C6胶质瘤细胞,缓激肽调节脑血管内皮细胞通透性的作用可能需要某些细胞间信使的参与。     

烧伤大鼠粒细胞与内皮细胞粘附力学特性的研究

本文以大鼠作为烧伤的实验动物模型，以微管吸吮技术研究了烧伤情况下粒细胸（ＰＭＮ）与肺毛细血管内皮细胞（ＰＣＥＣ）的粘附力学特性．作者首先测定了ＰＭＮ与ＰＣＥＣ间的粘附力Ｆａ，进而在实验条件下定义了相对粘附应力Ｓ１．实验结果表明：在烧伤后２４小时内，粒细胞与肺毛细血管内皮细胞间的粘附力及相对粘附应力均显著升高，且在烧伤后１小时达到最大值。结合烧伤早期的病理变化，作者对实验结果进行了一定的分析和讨论．     

高脂饮食对大鼠主动脉内皮细胞形态及刚度的影响

目的研究高脂饮食对大鼠主动脉内皮细胞形态与刚度的影响。方法将SD大鼠随机分为高脂饲养组(AS组,n=3)与对照组(CON组,n=3),利用植块法获得大鼠胸主动脉内皮细胞。在倒置显微镜下观察细胞形态,通过荧光染色比较两组细胞F-actin平均荧光强度,利用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)检测细胞刚度。结果细胞在植块后第7 d有少量细胞爬出,第14 d细胞融合成单层,利用Ⅷ因子免疫荧光染色法证实为内皮细胞。高脂饮食引起细胞周长(P0.01)、长轴/短轴比率(P0.01)、面积增大(P0.05);细胞圆度减小(P0.01)。高脂组F-actin平均荧光强度明显高于对照组(P0.01)。AFM显示高脂饲养引发内皮细胞刚度显著增大(P0.01)。结论高脂饮食将引发内皮细胞形态与刚度发生改变,进而影响血管正常功能,使其成为动脉粥样硬化的重要诱因。     

电磁脉冲对血管内皮细胞骨架微丝聚合肽肌动蛋白表达的影响

目的研究不同脉冲次数电磁脉冲（electromagnetic pulse,EMP）作用对人脐血管内皮细胞（ECV-304）骨架聚合态肌动蛋白（F-actin）表达的影响。方法EMP采用0、100、200、400次脉冲数各辐照ECV-304细胞,用异硫氰酸荧光素-鬼笔环肽染色F-actin和PI染色胞核的双标染色法,观察受辐照血管内皮细胞内微丝形态学的变化,记录并测定细胞F-actin的平均荧光强度。结果对照组细胞中的大部分荧光样物质呈弥漫状态,胞膜荧光较弱,胞浆内可见少量肌动蛋白纤维丝,方向不规则。与对照组相比,各暴露组细胞均可见其胞浆中微丝F-actin明显粗大、变长,其间的荧光样物质大多为较长的粗大应力丝,沿细胞纵轴排列较多,细胞内数量和荧光强度明显增加（P〈0.01）,细胞膜结构完整且荧光增强。随着EMP脉冲次数的增加而微丝F-actin表达显著增多,以400次脉冲组最为明显（P〈0.01）。结论EMP可引起血管内皮细胞的骨架F-actin表达增高且存在着一定的量效关系。     

Excessive Endothelial Cell Proliferation Occurring in an Organizing Thyroid Hematoma: Report of a Case and Review of the Literature

The authors report a case of a thyroid hematoma containing an exuberant endothelial cell proliferation. No underlying vascular neoplasm was apparent and the hematoma occurred in a substernal goiter from a 90-yr-old male. Review of the literature revealed four similar previously reported cases of endothelial cell proliferation found in thyroid hematomas for a total of five cases. A fine needle aspiration or biopsy procedure antedated the definitive surgery in four patients and may be responsible for the formation of the hematoma in these cases. Areas of the endothelial proliferation resembled papillary endothelial hyperplasia (Masson’s hemangioma) in four cases and cavernous hemangioma in three. However, these lesions occurred outside of vascular lumina and instead were intimately associated with fibrinous material of the hematoma. In addition, two cases contained foci of endothelial cells with nuclear atypia or intracytoplasmic lumens requiring distinction from angiosarcoma. These vigorous endothelial proliferations most likely represent alterations in the organization of a thyroid hematoma, a process similar to papillary endothelial hyperplasia, which is usually intravascular. Primary vascular neoplasms of the thyroid are exceedingly rare. Nevertheless, awareness of exuberant endothelial cell proliferation as a potential, albeit rare, manifestation of a thyroid hematoma should prompt careful attention to distinguish this reactive process from vascular neoplasms such as hemangioma or angiosarcoma.