缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑低氧诱导因子1αmRNA的表达及参麦注射液的干预作用

目的 研究缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA的表达及参麦注射液的干预作用.方法 新生7 d龄SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水组、参麦组,又各分为缺血缺氧后2、12、24 h,3、7、14 d 6个哑组,每亚组9只.采用反转录(RT)-PCR法检测鼠脑HIF-1α mRNA;流式细胞仪膜联蛋白V/碘化丙啶双染色法检测细胞凋亡.结果 (1)缺氧缺血后2 h,生理盐水组和参麦组右侧海马神经元凋亡率即均高于假手术组(均P<0.05),于24 h达到峰值后开始下降[(16.80±1.44)%、(11.95±1.13)%],14 d各组差异均无统计学意义(均P>0.05).参麦组海马神经元凋亡率在缺血缺氧后12、24 h,3和7 d均明显低于生理盐水组(均P<0.05).(2)缺血缺氧后2 h生理盐水组、参麦组新生大鼠右侧大脑中HIF-1α mRNA的表达即均高于假手术组(均P<0.05),于24 h达峰值后开始下降[(她32±4.03)%、(35.63±3.73)%],14 d各组表达差异均无统计学意义(均P>0.05);参麦组大脑中HIF-1α mBNA的表达在缺血缺氧后12、24 h,3和7 d均明显高于生理盐水组(均P<0.05).结论 新生大鼠HIBD时HIF-1α mBNA表达增强,参麦注射液可提高新生大鼠HIBD后的HIF-1α mRNA的表达,减少新生大鼠缺氧缺血后神经元凋亡的发生.     

清开灵干预新生大鼠缺氧缺血脑皮质IL-6合成的实验研究

目的:探讨缺氧缺血脑损伤对新生大鼠HIBD脑皮质IL-6放射免疫浓度的影响及清开灵对新生大鼠HIBD的干预治疗作用以及有关分子机制.方法:建立HIBD动物模型后分为清开灵干预组、生理盐水对照组和假手术组.根据检测需要,在缺氧缺血后24 h、3 d、7 d作IL-6脑皮质匀浆放射免疫浓度测定.结果:脑皮质组织匀浆IL-6放射免疫浓度(pg/mL)假手术组、生理盐水组、清开灵干预组24 h依次为(50.1±6.2)、(56.3±7.1)和(51.3±6.8);3 d依次为(50.6±6.4)、(250.3±11.2)和(78.1±8.3);7 d依次为(51.4±6.6)、(345.7±12.3)和(81.2±9.2),生理盐水组与另两组分别比较,24 h P>0.05,无明显变化;3、7 d生理盐水组增加明显(P<0.05),清开灵干预组降低明显(P<0.05).结论:新生大鼠HIBD后24 h、3、7 d脑皮质IL-6含量逐渐增高.清开灵能降低新生大鼠HIBD脑皮质IL-6的合成量.     

缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑细胞凋亡的影响

目的 :研究缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑组织缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)mRNA及脑细胞凋亡的影响。方法 :新生 7日龄SD大鼠随机分为空白对照组 (n =12 )、假手术组 (n =12 )、缺氧缺血组 (HIBD组 ,n =15 )和缺氧预处理后缺氧缺血组 (HPC组 ,n =2 1) ,缺氧预处理组在行HIBD模型前 2 4h吸 8%浓度氧 3h。各组大鼠均于 14日龄处死。观察大鼠脑组织神经病理学变化 ;采用末端脱氧核苷酸介导的X DUTP缺口末端标记法测定神经元凋亡的情况 ;采用定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)法测定大鼠脑组织HIF 1αmRNA的表达。结果 :HPC组脑皮层神经细胞变性坏死较HIBD组减轻 ,HPC组大鼠脑组织HIF 1α基因的表达较HIBD组下降 ,HPC组脑细胞凋亡数目较HIBD组减少。结论 :缺氧预处理可保护新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 ,减弱HIF 1αmRNA的表达 ,减少脑细胞凋亡     

缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑细胞凋亡的影响

目的：研究缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA及脑细胞凋亡的影响。方法：新生7日龄SD大鼠随机分为空白对照组(n=12)、假手术组(n=12)、缺氧缺血组(HIBD组，n=15)和缺氧预处理后缺氧缺血组(HPC组，n=21)，缺氧预处理组在行HIBD模型前24h吸8％浓度氧3h。各组大鼠均于14日龄处死。观察大鼠脑组织神经病理学变化；采用末端脱氧核苷酸介导的X-DUTP缺口末端标记法测定神经元凋亡的情况；采用定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法测定大鼠脑组织HIF-1αmRNA的表达。结果：HPC组脑皮层神经细胞变性坏死较HIBD组减轻，HPC组大鼠脑组织HIF-1α基因的表达较HIBD组下降，HPC组脑细胞凋亡数目较HIBD组减少。结论：缺氧预处理可保护新生大鼠缺氧缺血性脑损伤，减弱HIF-1α mRNA的表达，减少脑细胞凋亡。     

葛根素在新生鼠缺氧缺血性脑损伤中的神经保护作用

目的:建立新生大鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)模型,观察新生鼠缺氧缺血后脑组织一氧化氮(NO)和NO合成酶(NOS)及神经元凋亡的变化及葛根素对HIBD的保护作用及机制.方法:用7日龄SD大鼠制备HIBD模型,治疗组在缺氧缺血(HI)后早期腹腔注射葛根素50 mg/kg两次. 在HI后不同时间测定脑组织匀浆NO和NOS含量以及神经元凋亡数量.结果:HIBD组在HI后24 h脑组织NO,NOS明显高于对照组(P＜0.05) ;HI后6 h海马CA1区凋亡细胞增多,24 h达高峰;葛根素组24 h脑组织NO,NOS较HIBD组相比, 显著下降(P＜0.05),同时海马CA1区的凋亡细胞数在24 h较HIBD组明显减少(P＜0.05).结论:葛根素可通过抑制NOS的表达,减少NO的过量生成,从而减轻HIBD后的神经元凋亡,表明葛根素对新生大鼠HIBD有保护作用.     

丹参和干细胞移植对脑损伤大鼠神经元的影响

目的探讨丹参注射液联合骨髓间充质干细胞移植对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后海马神经元Bax、Bcl-2蛋白表达的影响及其治疗作用。方法建立新生SD大鼠HIBD模型,每组实验随机分为4组：假手术组（S组）、生理盐水对照组（C组）、MSCs治疗组（M组）和丹参＋MSCs治疗组（DM组）。观察缺氧缺血组28d内生存情况;检测缺氧缺血前2h,缺氧缺血后12h、24 h,3、7、14、28d各时间点新生大鼠海马CA1区神经元Bax、Bcl-2蛋白的表达。移植后28d进行大鼠迷宫行为学实验。结果 DM组较C组和M组比较,Bax表达明显下调（〈0.05）,而Bcl-2表达显著上调（〈0.05）,生长发育和生存情况明显好于后两者。迷宫实验显示结论：丹参合并MSCs改善了新生大鼠HIBD后的生长发育,提高了其空间记忆能力。结论丹参合并骨髓间充质干细胞移植能减少Bax的产生,发挥对新生鼠HIBD时的脑保护和治疗作用。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后细胞凋亡与自由基损伤机制研究

目的:探讨新生大鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)后细胞凋亡与自由基损伤机制的研究。方法:7日龄SD大鼠72只,随机分成6组:①正常对照组;②HIBD后0h组;③HIBD后24h组;④HIBD后48h组;⑤HIBD后72h组;⑥HIBD后7d组。制备HIBD模型后0,24,48,72h,7d后处死大鼠,取脑并检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;并作HE和Tunel染色光镜下检测各组脑细胞凋亡数。结果:HIBD后各组脑组织SOD,MDA水平及脑细胞凋亡数与对照组比较均有显著性差异,48h及72h组与其他组比较有显著性差异;48h与72h组之间比较无显著性差异。结论:新生大鼠HIBD后48~72h为脑损伤高峰期,细胞凋亡与自由基损伤均参与了缺氧缺血后神经细胞的损害,阻止细胞凋亡或抗自由基损伤应争取在48h内进行。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠IL-16的表达及意义

目的观察缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠白细胞介素-16（IL-16）表达的变化。方法建立新生大鼠缺氧缺血（HI）模型,实验分为假手术组、HIBD组。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测假手术组手术后和HIBD组缺氧缺血后3h、12h、24h、3d、7d、14d、28d脑组织匀浆中IL-16的水平。结果IL-16在HIBD组3h开始上升,24h达高峰,3d开始下降,28d基本恢复正常。与假手术组相比,HIBD组的IL-16水平在缺氧缺血后3h、12h、24h、3d、7d、14d均明显升高（P〈0．01）,而28d无明显差异（P〉0．05）。结论HIBD新生大鼠IL-16蛋白表达的增加出现早、持续时间长,表明IL-16参与HIBD的发病过程。     

心脉隆对缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 研究心脉隆(Xinmailong,XML)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型新生大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法 96只新生7日龄SD大鼠采用随机数字表法分为3组,每组32只:假手术对照组(Sham组)、HIBD模型对照组(HIBD组)、HIBD+XML组(XML组).结扎实验鼠左颈总动脉后吸入8%O2 2.5 h制成HIBD模型,XML组在模型建立后,空气复苏5 min并立即给予XML注射液5 mg·kg-1腹腔注射,其余2组接受同剂量的生理盐水.各组于缺氧缺血(HI)后24 h、48 h、72 h、7 d 4个时间点(每个时间点各8只)分批取心肌组织,HE染色后光镜下观察心肌组织病理形态学改变;Hoechst33258荧光染色及原位末端标记法(TUNEL)定性和定量检测心肌细胞凋亡.结果 Sham组死亡0只;HIBD组死亡4只;XML组死亡2只,各组间存活率差异无统计学意义(P＞0.05).Sham组各时间点心肌组织均仅见散在的凋亡细胞,而HIBD组及XML组心肌细胞凋亡指数均于HI后24 h即开始升高,72 h达到高峰,之后逐渐下降,持续至7 d仍显著高于Sham组(P＜0.05);XML组与HIBD组相比上述指标显著降低(P＜0.05).结论 新生大鼠HIBD后早期心肌细胞即可出现明显凋亡,以HI后72 h更明显;XML能够明显抑制HIBD模型新生大鼠心肌细胞凋亡的发生,发挥对缺氧损伤心肌细胞的保护作用.     

促红细胞生成素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的脑保护研究

目的:探讨促红细胞生成素(EPO)对新生缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠的神经保护作用。方法:40只7 d龄新生大鼠随机分为HIBD模型组、EPO干预组、生理盐水对照组、假手术组,每组各10例。在建立HIBD模型后,EPO干预组立即一次性腹腔注射5 000 U/kg剂量的人基因重组促红细胞生成素(rhEPO),生理盐水对照组注射等量生理盐水;于处置24 h后用原位缺口末端标记(TUNEL)法和流式细胞计(FCM)检测受损局部神经元细胞的凋亡情况,用RT-PCR检测神经元细胞凋亡相关信号分子的改变。结果:与假手术组比较,HIBD模型组在术后24 h神经元出现Bcl-2/Bax比值倒置,神经元凋亡增加;与HIBD模型组比较,EPO干预组神经元Bcl-2表达相对增加,而Bax表达相对受抑制,Bcl-2/Bax比值升高,神经元凋亡明显减少并且增殖增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:EPO可以通过提高Bcl-2/Bax比值,抑制细胞凋亡而起到神经保护作用。     

参附注射液预处理对新生大鼠缺氧缺血后脑保护作用

目的:研究参附注射液(Shenfu injection,SF)预处理对新生大鼠脑保护作用.方法:建立新生大鼠缺氧缺血性脑病(Hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)模型,并随机分为3组:假手术组(S),生理盐水对照组(C),参附预处理组(SF).把实验分成2部分:①检测新生大鼠缺氧缺血后...     

粒细胞集落刺激因子对大鼠急性肝衰竭肝细胞凋亡的影响

目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)抑制大鼠急性肝衰竭(ALF)肝细胞凋亡的作用及机制.方法 D-氨基半乳糖(D-GalN)制备SD大鼠急性肝衰竭模型.治疗组皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)50 μg/kg共3 d,安慰剂组皮下注射生理盐水共3 d.建模后观察动物生存率,分别于6 h、12 h、1 d、3 d取肝脏,流式细胞仪检测肝细胞凋亡率,免疫组化法检测肝脏Bcl-2、半胱氨酸蛋白水解酶(caspase)-3表达,图像分析系统半定量分析.结果 治疗组生存率高于安慰剂组(53.3% vs 33.3%,P=0.027).两组肝细胞凋亡率、肝组织Bcl-2、caspase-3表达量均随时间而升高.1 d时治疗组肝细胞凋亡率(29%±7%)低于安慰剂组(44%±12%),差异有统计学意义(P=0.026).治疗组12 h、1 d时肝组织Bcl-2灰度值均低于安慰剂组,差异有统计学意义(分别为152±37 vs 161±7,P=0.012;150±12 vs 159±9,P=0.018),表示Bcl-2表达量高于安慰剂组;治疗组1 d、3 d时肝组织caspase-3灰度值均高于安慰剂组,差异有统计学意义(分别为189.6±4.6 vs 169.6±15.7,P=0.000;184.7±4.8 vs 160.0±5.0,P=0.000),治疗组caspase-3表达量低于安慰剂组.结论 肝细胞凋亡在ALF发病过程中发挥了重要作用.G-CSF通过促进肝细胞Bcl-2表达和减少caspase-3表达,延缓并减少肝细胞凋亡的发生,提高ALF大鼠生存率.     

大鼠脊髓进行性压迫性损伤半胱氨酸蛋白水解酶-12表达与细胞凋亡

目的探讨大鼠脊髓进行性压迫损伤细胞凋亡、半胱氨酸蛋白水解酶（caspase-12）表达变化规律及其关系。方法随机选用健康成年Wistar大鼠120只,分为两组：手术组和对照组各60只,每个时间点各10只,按白行设计的方法作脊髓压迫模型;对照组,仅做脊髓显露。分别于术后1、3、7、14、21、28d观察脊髓受压后细胞凋亡及caspase-12的表达变化系。结果在各压迫组神经细胞出现凋亡,凋亡的发生率在1、3、7、14、21、28d分别为12．5％±2．3％、13．0％±3．6％、17．2％±4．3％、29．4％±4．4％、36．1％±6．5％、2．3％±7．9％,并伴随caspase-12的表达增强而增加,14、21、28d组间比较差异有统计学意义（均P〈0．05）。结论caspase-12可能参与了脊髓进行性压迫缺血所致的细胞凋亡。     

缺氧缺血型脑病与细胞凋亡

目的：观察7d龄大鼠缺氧缺血性脑病（HIE）模型中脑细胞凋亡的规律。为寻求最佳治疗时间提供一定的动物实验依据。方法：利用7d龄SD大鼠建立HIE动物模型,用流式细胞仪测定缺氧缺血（HI）后2h-7d内不同时间脑细胞凋亡率,结果：7d龄正常新生大鼠HI后48h细胞凋亡达高峰,结论：早期用药（24h-48h内）将是抑制细胞凋亡,提高疗效的关键。     

参附注射液抑制大鼠缺血再灌注损伤期间心肌细胞凋亡的作用机制

目的探讨参附注射液抑制大鼠缺血再灌注损伤期间心肌细胞凋亡的作用机制。方法 28只SpragueDawley大鼠分为3组:假手术组(8只)、对照组(10只)和给药组(10只)。建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。分别采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法检测凋亡心肌细胞;免疫组织化学方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达;利用Affymetrix Rat 230A芯片进行差异基因表达分析,用Microarray Suite 5.0软件读取并进行数据处理。结果免疫组织化学:与假手术组比较,对照组凋亡细胞表达阳性率显著增加(P<0.001),给药组无显著变化(P>0.05);凋亡因子Bcl-2表达阳性率,对照组略有下降,但差异无统计学意义(P>0.05),给药组显著增加(P<0.01);凋亡因子Bax表达阳性率,对照组显著增加(P<0.001),给药组显著下降(P<0.05)。差异基因表达:给药组与对照组比较,上调表达细胞凋亡相关基因主要为金属硫蛋白基因,下调表达基因主要为蛋白激酶结合蛋白基因、肿瘤坏死因子亚家族基因和p75类凋亡基因。结论参附注射液在大鼠心肌缺血再灌注损伤期间,对心肌细胞的保护作用机制主要是通过抑制心肌细胞凋亡,调节与细胞凋亡相关基因的表达,减轻心肌细胞凋亡的发生,提高心肌细胞的防御能力等而起到保护心肌的作用。     

腺病毒载体介导血管内皮生长因子165基因治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的 研究腺病毒介导血管内皮生长因子(VEGF)165基因转移对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的治疗作用.方法 采用细菌内同源重组技术构建腺病毒重组载体Ad-VEGF.7日龄SD大鼠随机分成3组:假手术组(20只)、HIBD(20只)、Ad-VEGF移植组(Ad-VEGF组,20只),Ad-VEGF移植组在HIBD后3 d于大鼠左侧感觉运动皮层区(坐标AP:+0.3mm,ML:-2 mm,DV:-1.5 mm)立体定位注射2μl重组体腺病毒悬液.移植后7 d采用免疫组织化学法检测鼠脑VEGF蛋白;采用原位缺口末端标记法(TUNEL法)检测鼠脑神经元凋亡情况;大鼠3～4周龄时采用T迷宫觅食实验及足错误、姿势反射、肢体放置实验对其学习记忆、空间能力和感觉运动功能等行为学进行评估;采用尼氏染色法检测鼠脑海马CAl区和皮层单位面积内神经元数目.结果 免疫组织化学法结果 显示皮层与海马Ad-VEGF组VEGF阳性细胞数均明显多于HIBD组(68.09±3.37比24.65±3.37,68.37±3.17比25.14±1.86,均P<0.05).TUNEL结果 显示Ad-VEGF组鼠脑神经元凋亡数目明显低于HIBD组(151.4±21.7比264.4±16.3,P<0.05);行为学检测结果 显示Ad-VEGF组的各项行为学测试成绩均较HIBD组有明显改善(均P<0.05),尼氏染色结果 显示Ad-VEGF组鼠脑海马CAl区和皮层单位面积内神经元数日明显多于HIBD组(70.6±2.3比55.3±2.1,95.1±2.8比70.1±2.7,均P<0.05).结论 腺病毒载体介导的VEGF165基因治疗可增加VEGF蛋白的表达,减少脑细胞凋亡、改善脑损伤后的远期行为学功能,减轻缺氧缺血后的脑损伤,具有神经保护作用.     

云南眼镜蛇毒因子用于预致敏大鼠同种心脏移植的实验研究

目的观察纯化的云南眼镜蛇毒因子(Y-CVF)对预致敏大鼠同种心脏移植急性体液排斥反应的作用。方法BN大鼠到Lewis大鼠连续3次皮肤移植预致敏后行颈部异位心脏移植。将15对大鼠用随机数字法分成2组,实验组(n=8)于心脏移植前24h静脉给予Y-CVF80μg/kg;对照组(n=7)不用Y-CVF。观察移植心的生存时间,移植心停跳后病理学检查排斥类型,免疫组织化学染色观察移植心IgG和补体C3的沉积。结果Lewis大鼠预致敏后抗BN大鼠抗体滴度由0升高至1∶1028~1∶2056。对照组移植心存活时间为12·71h±13·94h,实验组移植心存活时间为99·50h±38·72h,与对照组比较差异有统计学意义(t=5·599,P<0·01)。病理检查结果证实,实验组均未发生急性体液排斥,仅见以大量单核淋巴细胞浸润为特征的急性细胞排斥反应。对照组则见以小血管内血栓形成为特征的急性体液排斥反应。免疫组织化学IgG染色实验组和对照组均为阳性,C3染色对照组为阳性,而实验组为阴性。结论使用Y-CVF可克服预致敏大鼠同种心脏移植急性体液排斥反应的发生。     

Shenfu injection reduces toxicity of bupivacaine in rats

Objective To investigate the effects of injecting Shenfu, an extract of traditional Chinese herbal medicines, on the central nervous system (CNS) and the cardiac toxicity of bupivacaine in rats. Methods Sixteen male Sprague-Dawley rats, weighing form 280 to 320 g, were randomly assigned to two groups (n=8 in each group). Animals in the control group received a saline injection 10 ml/kg while animals in the Shenfu group received an injection of Shenfu 10 ml/kg intraperitoneally 30 minutes before intravenous infusion of bupivacaine. Lead Ⅱ of an electrocardiogram (EEG) was continuously monitored after 3 needles were inserted into the skin of both forelimbs and the left hind-leg of each rat. The femoral artery was cannulated for measurement of arterial blood pressure and blood sampling. The femoral vein was cannulated for the infusion of bupivacaine. After baseline measurement (arterial blood pressure, heart rate and arterial blood gas), 0.5% bupivacaine was infused intravenously at a rate of 2 mg·kg-1·min-1 to all animals until asystole occurred. The time of bupivacaine-induced convulsions, arrhythmia and asystole were determined. The dose of bupivacaine was then calculated at the corresponding time point. Results The doses of bupivacaine that induced convulsions, arrhythmia and cardiac arrest were remarkably larger in Shenfu injection-treated animals than in saline-treated rats ［convulsions, (10.5±1.9) mg/kg vs (7.2±1.5) mg/kg; arrhythmia (10.5±2.0) mg/kg vs (7.2±1.9) mg/kg; asystole, (32.8±8.5) mg/kg vs (25.0±5.0) mg/kg; P=0.006, 0.009 and 0.044, respectively］. Conclusion The Shenfu injection is able to reduce the toxicity of bupiralaine to CNS and cardiac system in rats.     

硫化氢和胱硫醚β合酶在脑室周围白质软化新生大鼠脑组织中的表达

目的探讨缺氧缺血对3日龄大鼠脑白质细胞硫化氢(H2S)及胱硫醚β合酶(CBS)表达的影响,以及其在3日龄大鼠脑白质损伤(WMD)发病过程中的作用。方法将3日龄大鼠按照随机数字表法分为实验组和对照组,建立新生大鼠WMD模型,分别在缺氧缺血后第12、24、48、72 h和7 d处死大鼠,脑组织取材后行苏木精-伊红(HE)染色,并观察其病理变化。采取免疫组织化学法检测脑组织CBS的表达水平;用分光光度计法测大鼠血浆中H2S水平。结果在新生大鼠脑白质中,缺氧缺血后实验组大鼠脑组织CBS的表达和血浆H2S水平在12 h开始增强,24 h达高峰,7 d仍可见表达;实验组大鼠脑组织CBS的表达和血浆H2S水平在缺氧缺血后12、24、48、72 h和7 d均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论新生大鼠脑组织CBS和血浆H2S表达水平于缺氧缺血后显著增强,二者可能与新生大鼠WMD的病理生理过程有关。