不同步或跨系表达抗原检测儿童急性B淋巴细胞白血病微小残留病

目的探讨多参数流式细胞术(FCM)对儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)微小残留病(MRD)的应用价值。方法基于急性B淋巴细胞白血病初诊免疫表型特点,确定一到两组四色抗体,加用抗原跨系表达抗体组合CD45/CD19/CD10/CD13或抗原不同步表达相结合的抗体组合CD45/CD19/CD22/CD34,对20例完全缓解后的急性B淋巴细胞白血病患儿进行MRD定期检测。同时以非白血病患儿为对照,探讨CD45/SSC设门,CD45/CD19/CD10/CD34抗体组合检测MRD的有效性。结果20例B-ALL患儿中,90%患儿初诊时存在CD45、CD34、CD19、CD10表达量的异常。CD45/CD19/CD10/CD34抗体组合表达以≥0.03%为界与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。其中CD45/CD19/CD10/CD34、CD45/CD19/CD10/CD13、CD45/CD19/CD22/CD34三组抗体组合发生频率最高,分别为40%、35%和30%。结论CD45/SSC设门,CD45/CD10/CD34可作为B-ALL患儿MRD检测的有效抗体组合。根据B-ALL患儿初诊异常免疫表型特点,确定一至两组四色抗体组合,再加用抗原跨系表达抗体组合或抗原不同步表达相结合的抗体组合,用于检测MRD,既能使检测个体化又可避免假阴性。     

70例儿童B系急性淋巴细胞白血病相关免疫表型分析

目的 探讨儿童B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)相关免疫表型特点及临床意义.方法运用三色荧光流式细胞仪,CD45/SSC设门,分析70例儿童B-ALL的免疫表型.结果 70例B-ALL患儿根据白血病相关免疫表型(LAIP)特点分为3类,即系列的不保真性,发育不同步性以及抗原缺失或过表达,70例患儿每例均有1类LAIP特征.结论 儿童B-ALL具有明显的免疫表型特征,B-ALL的免疫表型分析对白血病的确诊、鉴别诊断、正确分型、预后评估以及个体化治疗提供了客观的依据.     

CD45+和CD45-儿童急性B淋巴细胞白血病的临床特征分析

目的探讨CD45抗原表达与儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)的临床相关性。方法利用多参数流式细胞术(FCM)以CD45/SSC设门对61例B-ALL患儿进行免疫分型检测;采用染色体核型分析和多重巢式RT-PCR技术进行染色体、融合基因分析。结果免疫表型分析显示CD45+组CD13、HLA-DR抗原表达明显高于CD45-组(P<0.05);CD45-组的融合基因主要为HOX11和E2A/PBX1,而CD45+组主要为TEL/AML1、MLL/AF9、HOX11;相关临床参数、染色体核型及疗效比较两组间差异均无显著性(P>0.05)。结论 CD45抗原的表达与否和B-ALL患儿的临床特征、染色体畸变、治疗效果无统计学相关性;CD45+组较CD45-组高表达CD13和HLA-DR。     

六色流式细胞术检测儿童急性B淋巴细胞白血病微小残留病变价值研究

目的利用六色流式细胞术(FCM)检测急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)微小残留病变(MRD),探讨传统用于临床危险度分级各因素与六色FCM检测MRD值间关系及化疗不同时间点MRD检测值间关系。方法研究对象为2010-7-15—2011-1-25在广州市妇女儿童医疗中心初诊并接受正规化疗的25例B-ALL患儿。根据患儿初发时免疫分型结果,分别在诱导化疗第15、33天及大剂量MTX化疗前3个时间点进行MRD检测,每例患儿使用一组六色同型对照及根据初诊时免疫分型结果灵活调整的两组六色抗体组合进行检测。一组六色同型对照为IgG1-FITC/IgG1-PE/IgG1-PE-Cy7/IgG1-APC/IgG1-Percp/IgG1-APC-cy7;两组六色抗体组合为CD20-FITC/CD34-PE/CD10-PE-Cy7/CD22-APC/CD45-Percp/CD19-APC-cy7、CD7-FITC/CD5-PE/CD13-PE-Cy7/CD33-APC/CD45-Percp/CD19-APC-cy7或CD38-FITC/CD34-PE/CD10-PE-Cy7/CD22-APC/CD45-Percp/CD19-APC-cy7、CD7-FITC/CD15-PE/CD34-PE-Cy7/CD33-APC/CD45-Percp/CD19-APC-cy7。分析各时间点MRD检测值与传统用于临床危险度分级各因素间关系及3个不同检测时间点MRD检测值间关系。结果化疗第15天使用六色FCM检出骨髓MRD阳性20例,P25为0.19%,P50为0.67%,P75为4.21%;第33天检出骨髓MRD阳性10例,P25为0.07%,P50为0.10%,P75为0.26%;大剂量MTX化疗前检出骨髓MRD阳性14例,P25为0.03%,P50为0.04%,P75为0.09%。结论在诱导化疗阶段、诱导化疗结束时MRD的阳性率与诱导化疗第15天相比有显著下降;大剂量MTX化疗前MRD阳性值与诱导化疗第15天和诱导化疗结束时相比,有随化疗时间延长逐步下降的趋势。按传统危险度分级的相关因素分别分组,各组在诱导化疗第15天、诱导化疗结束时和大剂量MTX化疗前MRD检出率均无明显差异。     

急性B淋巴细胞白血病患儿微小残留病流式细胞术检测的临床意义

目的研究使用流式细胞术检测小儿急性B淋巴细胞白血病(acutelymphoblasticleukemia,ALL)微小残留病(minimalresidualdisease,MRD)的临床预后价值。方法能将残留白血病细胞与正常骨髓细胞区分开来的抗体组合称为有效抗体组合。我们使用流式细胞术对36例具有有效抗体组合的BALL患儿缓解后的骨髓标本进行MRD的定期检测。对6例无有效抗体组合的患儿,我们使用CD45/CD19/CD34/CD10与CD45/CD19/CD20/CD22两个抗体组合定期检测骨髓标本。结果(1)在42例患儿中有36例(86%)具有有效抗体组合;(2)在治疗6个月时间点时,MRD水平≥10-4的患儿(13例)无病生存率(diseasefreesurvival,DFS)与MRD水平<10-4的患儿(12例)相比无统计学意义(P=0.62);在治疗9个月时,MRD水平≥10-4的患儿(10例)要比MRD水平<10-4的患儿(13例)生存率低(P=0.025);在治疗12个月时,MRD水平≥10-4的患儿(8例)要比MRD水平<10-4的患儿(9例)生存率低(P=0.042);(3)共有7例患儿复发,其中6例复发患儿在复发前的4～10个月均检测到≥10-3水平的MRD。在随访过程中至少有1次MRD水平≥10-3患儿的无病生存率较MRD水平在10-3以下的患儿为低(P=0.003);(4)5例复发患儿的免疫表型基本未发生变化,只有1例丢失了CD13抗原;(5)在6例无有效抗体组合患儿中未发现有意义的MRD。结论(1)MRD水平在10-3或以上的患儿预后较差;(2)治疗9个月与12个月时间点的MRD水平有预后价值;(3)对于无有效抗体组合的患儿,CD45/CD19/CD34/CD10与CD45/CD19/CD20/CD22抗体组合的效果应进一步评估。     

急性髓系白血病98例免疫表型特征及其临床意义

目的 探讨急性髓系白血病(AML)患儿免疫表型特征及其临床意义.方法 采用流式细胞术四色免疫荧光直接标记技术与CD45/侧向角光散射(SSC)设门分析技术,检测98例AML患儿,根据抗体积分系统进行分型.结果 (1)AML 98例免疫表型分析显示,相关抗原的阳性强度表达依次为CD13、CD33、髓过氧化物酶,干/祖细胞分化抗原阳性强度表达依次为CD117、CD34.其中伴淋系抗原表达的阳性强度表达率依次为CD19、CD7、CD2、CD10.(2)98例分为伴淋巴系相关抗原的AML(Ly+AML)(n=38,38.78%)和不伴淋巴系相关抗原的AML(Ly-AML)(n=60,61.22%).Ly-AML组首次化疗完全缓解(CR) 11例(30.0%),Ly+AML组CR 18例(28.95%),2组CR率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 AML患儿38.78%伴有淋巴系抗原表达,并以CD19的高表达为主,其次为CD7,其伴系抗原表达率的多少与AML患儿的CR率无关.     

小儿急性B淋巴细胞白血病微小残留病免疫表型的改变及临床预后分析

目的 探讨使用流式细胞术检测出的微小残留病(MRD)在急性淋巴细胞白血病(ALL)化疗阶段发生表面抗原的改变以及MRD水平、出现时期与顸后关系.方法 2001年10月至2006年3月北京大学人民医院儿科收治63例出现过MRD阳性的急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿.同时使用流式细胞术及PCR检测MRD.结果 (1)在63例流式细胞术检测MRD阳性患儿中,有23例骨髓复发,1例脑膜白血病,6例失访,1例因严重感染死亡,33例随访至今无病生存.(2)共有147次流式细胞术检测结果呈阳性.有78次(53.06%)MRD检测结果至少有1个抗体荧光强度的变化,其中出现一个抗体强度变化的为33次(22.44%),2个抗体荧光强度变化为22次(14.96%),3个及3个以上荧光强度变化为23次(15.64%).CD10、CD45、CD34抗体荧光强度变化频率最高.(3)共有10例患儿在复发时行免疫分型检查,8例(8/10,80%)与初治时有抗体荧光强度变化.(4)MRD为10-3水平组存活率明显低于10-4水平组(P=0.0007).(5)维持化疗和(或)停药期间出现MRD阳性组存活率明显低于巩固化疗期间出现MRD)阳性组(P=0.024).结论 在小儿B-ALL治疗过程中,MRD的免疫表型可能会发生变化,在检测过程中应加以注意.如果出现10-3水平MRD或者是在维持化疗和(或)停药期间出现MRD,应及时干预.     

急性白血病患儿治疗期机体免疫功能变化

目的了解急性白血病 (AL)患儿不同病程时细胞和体液免疫的变化。方法采用流式细胞仪检测32例AL患儿及28例正常对照儿童外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD3-/CD(16 +56) +、CD19+的含量 ,采用特定蛋白分析仪检测同期患儿IgA、IgG、IgM的含量。结果AL完全缓解患儿在治疗后6、12、18个月CD4 +、CD4+/CD8+、CD3-/CD(16 +56) +、CD19+细胞数明显低于正常对照组 (P均<0.01) ;CD8+明显高于正常对照组 ;同期血清IgG、IgA、IgM水平与正常对照组比较 ,差异均无显著性 (P均>0.05)。结论AL患儿治疗期存在着细胞免疫功能障碍 ,免疫功能检测可为免疫调节治疗提供客观依据。     

CD58在儿童急性B淋巴细胞白血病中的表达及其用于微小残留病检测的可行性研究

目的 检测淋巴细胞功能相关抗原-3(CD58)在儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)中的表达情况,并探讨其用于儿童B-ALL微小残留病(MRD)检测的可行性。方法 选取2014年1~9月确诊为B-ALL的87例患儿为研究对象,同期选取20例非肿瘤、非血液病且骨髓涂片细胞形态正常的住院患儿作为对照组。应用四色流式细胞术(FCM)检测对照组及B-ALL患儿初诊时、诱导化疗15 d时骨髓标本的CD58表达水平。在诱导化疗33 d时,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和FCM对B-ALL患儿进行MRD检测。结果 87例B-ALL患儿骨髓CD58平均荧光强度(MFI)(91±33)高于对照组(14±6)(P< 0.01);其中44例B-ALL患儿CD58强表达。在诱导化疗过程中,诱导化疗15 d时B-ALL患儿骨髓CD58的表达量(105±22)与初诊时(107±26)比较差异无统计学意义(P> 0.05)。对44例CD58强表达B-ALL患儿进行MRD检测,FCM检测MRD阳性患儿9例,阴性患儿35例;RT-PCR检测MRD阳性患儿11例,阴性患儿33例,42例(95%)检测结果一致,两种检测方法检测MRD差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 CD58在B-ALL患儿中高表达且表达稳定,可以作为B-ALL患儿MRD检测的指标。     

儿童急性淋巴细胞白血病免疫分型特征及其临床意义

目的：探讨急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿的免疫分型及其与临床特征的关系。方法：139例ALL患儿为研究对象,取肝素抗凝的骨髓或静脉血2~3 mL,利用流式细胞仪进行免疫分型分析。结果：139例ALL患儿中,B-ALL 103例（74.1 %）,T-ALL 24例（17.3 %）,T/B双表型ALL 12例（8.6 %）。B-ALL主要表达的抗原有CD19（90.3%）、CD10（83.5%）、CD20（27.2%)。T-ALL主要表达的抗原有CD3（79.2%）、CD7（66.7%）、CD5（33.3%）。B/T-ALL主要表达的T系抗原有CD7（50.0%）、CD5（41.7%）;B系抗原有CD19（50.0%）、CD10（33.3%）。139例ALL患儿中,32例伴髓系抗原表达（My+）,主要表达的抗原有CD13、CD33、CD14、MPO等。139例ALL患儿中,31例表达CD34;而My+ ALL中CD34阳性表达（15.6%）明显低于My- ALL（24.3%）。139例ALL患儿中,82例表达HLA-DR。CD10、CD34、HLA-DR在标危、中危、高危型ALL中的表达差异有统计学意义。My+ ALL组性别、出血发生率与My- ALL组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：免疫分型可正确区分儿童ALL的来源。CD10、CD34、HLA-DR抗原表达与ALL的临床分型有关。     

23例儿童T系急性淋巴细胞白血病的生物学特征分析

目的：探讨儿童T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)的生物学性状及临床意义。方法：对初诊的23例儿童T-ALL患儿进行免疫分型、染色体、融合基因检测。结果：免疫分型中T系抗原以CD3阳性率最高,其次为CD7、CD5;B系抗原以CD19阳性率最高。23例中4例伴髓系抗原表达,阳性率达17%。CD34、HLA-DR表达阳性率分别为17%、22%。cCD3和cCD79的阳性表达率为100%和96%。8例行染色体检查,其中1例为超二倍体;1例为Ph+染色体。融合基因检测：5例中2例MLL基因重排异常,1例为SIL/TAL1阳性。CD3的表达与T-ALL首次化疗完全缓解率有关。结论：免疫分型分析是诊断T-ALL的重要手段, 但T-ALL免疫表型存在一定的异质性。对于儿童T-ALL的治疗预后评估,应结合细胞遗传学及分子遗传学进行综合判断。［中国当代儿科杂志,2010,12（8）：605-608］     

儿童急性B系淋巴细胞性白血病有效抗原组合及其临床应用探讨

目的 探讨使用流式细胞术(FCM)检测儿童急性B系淋巴细胞性白血病(B-lineageacute lymphoblastic leukemia,B-ALL)各有效抗原组合的发生频率及其与临床预后顺素相关性.方法 对289例初发B-ALL患儿的骨髓标本进行每组4个抗原,共9个抗原组合检测,统计各有效抗原组合的发生频率并与国外报告进行比较,分析各抗原组合在临床预后因素分组中的分布差异.结果 (1)327例初发B-ALL患儿中,289例存在至少1组可用于微小残留病(minimal residual disease,MRD)检测的有效抗原组合,其覆盖率为88.4%.(2)不同有效抗原组合的发生频率不同,以TdT组频率最高,为70.59%.(3)部分有效抗原组合与临床表型以及治疗反应相关,CD58组和TdT组与良好预后因素相关,而CD66c组和CD38组与不良预后因素相关.结论 B-ALL不同有效抗原组合的发生频率不同,在中国患儿中的表达与国外报道有差异.TdT组有高表达频率,可作为简化的MRD检测目标组合.发生频率较高的4个抗原组合可以为无初发时MRD记录的患儿的疗效评估和治疗强度调整提供一定的参考依据.部分有效抗原组合对临床预后产生影响,可能为B-ALL的个体化治疗提供参考依据.     

儿童急性淋巴细胞性白血病微小残留病监测的预后意义

目的 研究儿童急性淋巴细胞性白血病(ALL)化疗过程中,不同时间点监测的不同微小残留病(MRD)水平的预后意义.方法 对102例ALL患儿进行MRD监测研究,分别在患儿诱导化疗开始后第15天、第29天、第3个月、第6个月、第12个月进行MRD监测.根据患儿初诊时免疫表型特征,采用流式细胞术检测不同的四色单克隆抗体组合.常用的抗体组合包括CD45CD19CD34CD10和CD45CD19CD34CD20等.结果 102例ALL患儿的5年总体生存(OS)率和无事件生存(EFS)率分别为(86.9±3.4)%和(79.9±4.0)%,共12例患儿复发.在第15天、29天、3个月、6个月和12个月,分别有14.3%、43.9%、39.1%、39.7%和45.6%的患儿处于MRD阴性(MRD<10~(-4)).其中MRD水平能在1年内达到阴性的患儿的长期存活率明显高于MRD持续阳性的患儿[5年EFS:(92.5±3.2)% vs. (58.3±8.6)%,P<0.001].各时间点上,化疗后第15天时MRD≥10~(-2)[(79.8±10.3)% vs.(28.6±17.1)%,P<0.001]、第29天时MRD≥10~(-3)[(88.3±4.9)% vs.(51.3±14.4)%,P<0.003]、第3个月[(92.4±5.1)% vs.(65.5±7.5)%,P<0.015]、6个月[5-year EFS rates(96.3±3.6)% vs.(65.4±7.5)%,P<0.003]及第12个月[(100.0±0.0)% vs.(67.7±8.4)%,P<0.002]时MRD≥10~(-4)的患儿的5年EFS率明显较差.而第15天时MRD≥10~(-2)是独立的不良预后因素.结论 采用流式细胞术动态监测MRD水平能有效地评估ALL患儿的预后,而不同时间点上具有预后意义的MRD水平并不相同.     

Flow cytometry and fluorescence in situ hybridization to detect residual neuroblastoma cells in bone marrow

BACKGROUND: In patients with neuroblastoma morphological assessment of BM for residual NB cells is not precise, particularly when the number of tumor cells is small. PROCEDURE: To develop a sensitive and rapid method of detecting NB cells in BM, we assessed the efficiency of flow cytometry (FCM) using markers CD9, CD56, and CD45. The percent of CD9+/CD56+/CD45- (NB phenotype) cells was determined by FCM in 41 samples (16 patients) at various time points. For confirmation fluorescence in situ hybridization (FISH) for 17q gain was performed. RESULTS: Nineteen of the 22 (86%) samples that were negative by morphology were positive by FCM (>0.006% CD9+/CD56+/CD45- cells). The longest time to complete the FCM study was 3 hr. In six FISH experiments the sorted CD9+/CD56+/CD45- population had a higher percentage of cells with 17q gain (11.5-95%) compared to a CD56-/CD45+ internal control population (2-8%). CONCLUSIONS: Our preliminary results suggest that FCM determination of the percent of CD9+/CD56+/CD45- cells is an effective method of rapidly detecting NB cells in BM.     

儿童B系急性淋巴细胞性白血病微小残留病的相关因素及预后分析

目的：了解检测儿童B系急性淋巴细胞性白血病(ALL)微小残留病(MRD)在临床上的意义,探讨其相关因素及预后的关系。方法：用一种胞浆与胞膜、特异与敏感的标志相结合,CD45/SSC双参数图设门的三色流式细胞术(FCM)对67例儿童B系ALL在诱导治疗结束时(诱导第28～37d)进行MRD监测。结果：67例随访病人低危组为18例,中危组为35例,高危组为14例,MRD在3组之间差异有显著性(P<0.005),高危组的MRD(+)率明显较低、中危组高(P<0.005)。MRD与起病时的性别、年龄、白细胞数之间无相关性(P>0.05)。MRD在早期治疗反应上也无明显的统计学差异(P>0.05)。而MRD与复发及中位无事生存期密切相关,MRD(+)组复发率明显较MRD()组高(P<0.05),MRD(+)组中位无事生存期也短于MRD()组(P<0.005)。结论：检测MRD有助于了解疗效以及初步判断其预后以便调整治疗策略,是目前随访儿童ALL的有效方法。     

CD10 AND CD34 EXPRESSION IN CHILDHOOD ACUTE LYMPHOBLASTIC LEUKEMIA IN MOROCCO: Clinical Relevance and Outcome

CD10 and CD34 expression in 86 Moroccan children with acute lymphoblastic leukemias (ALL) and the relevance to prognosis, diagnosis, and outcome during a 5-year follow-up were examined. At diagnosis, 57% of patients had CD10⁺ blasts, while 35% had CD34⁺ blasts. The CD10⁺ blast frequency was much higher (80%) in B-ALL than in T-ALL (20%). The frequency of CD34⁺ blasts was higher in B-ALL (48%) compared to T-ALL (16%). The 5-year survival curves showed that children with CD10⁺ B-ALL had a significantly longer survival rate than those with CD10^?, as observed for T-ALL. The survival rate of B-ALL expressing CD34 was higher than that of CD34^?. Thus, CD34 and CD10 expression may have prognostic value and is associated with a better clinical outcome.