胎鼠脊髓内源性NT—3及BDNF对脊髓神经元的营养作用

目的：研究发育中的胎鼠脊髓中神经营养因子－3（NT－3）和脑源性的神经营养因子（BDNF）的营养作用．方法：用抗NT－3及BDNF的抗体封闭小鼠胚胎脊髓内源性NT－3及BDNF，观察封闭后体外培养的脊髓神经元活性和突起生长的变化．结果：NT－3在小鼠脊髓神经元中广泛表达，其作用主要为促进脊髓神经元突起生长，不加抗体封闭式，突起平均长度为（362．062±166．381）μm，当封闭抗体浓度为5mm／L时，突起长度为（262．011±109．168）μm．BDNF免疫反应阳性细胞主要为大细胞和DRG神经元，其作用主要是促进神经元的存活，在封闭抗体浓度为6．25mg／L，4．34mg／L时吸光度（A）值显著低于对照组．结论：发育中胚胎小鼠脊髓中NT－3促进神经元突起生长，BDNF则促进神经元存活．     

人神经干细胞源施万样细胞微囊泡促进大鼠神经元轴突生长

目的: 探究人神经干细胞源施万样细胞微囊泡对大鼠神经元轴突生长的影响。方法: 选取出生4~5 d的SD大鼠乳鼠,摘取背根神经节(dorsal root ganglion, DRG),获得DRG神经元;用施万样细胞微囊泡刺激DRG神经元,行βⅢ 微管蛋白免疫荧光染色,观察轴突生长情况;分别用0、5、20、40 mg/L施万细胞微囊泡刺激神经元样N2a细胞19 h,用荧光定量PCR检测N2a细胞生长相关蛋白43(growth associated protein 43, GAP43) mRNA表达;分别用0、20、40 mg/L施万细胞微囊泡刺激N2a细胞48 h,行过碘酸雪夫染色,检测细胞内糖原生成情况。结果： 施万样细胞微囊泡组的DRG神经元轴突长度明显长于PBS组(P<0.05)。施万样细胞微囊泡可被N2a细胞吞噬。与0 mg/L组相比,5 mg/L组GAP43 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);20、40 mg/L组GAP43 mRNA表达量、突起增长率及碘酸雪夫染色细胞阳性率均明显高于0 mg/L组(P均<0.05)。结论： 施万细胞微囊泡在体外能够促进大鼠神经元轴突生长。     

人参皂苷Rb1和Rg1对海马神经元的影响

目的探讨人参皂苷（ginsenoside）Rb1和Rg1（GRb1,GRg1）对海马神经元突起生长及神经保护作用及其机制。方法培养SD新生大鼠海马神经元,分为：正常组、Rb1组、Rg1组、Rb1＋API-2（Akt抑制剂）、Rg1＋API-2、Rb1＋PD98059（MEK抑制剂）和Rg1＋PD98059组,培养1d,用免疫染色观察神经突起的生长。加入Aβ25—35制备海马神经元损伤模型,分为正常组、损伤组（AB组）、Rb1组、Rg1组、Rb1＋API-2、Rg1-I-API-2、Rb1＋PD98059和Rg1＋PD98059,培养48h,用Hoechst33258染色观察活细胞与凋亡细胞。用Elisa观察培养上清液里神经营养因子的浓度（nerve growth factor,NGF;brain—derived neurotrophic factor,BDNF;neurotrophin-3,NT-3）。结果Rb1和Rg1组神经突起生长高于对照组（P〈0．05）;API-2和PD98059显著抑制了Rb1和Rg1诱导的神经突起生长（P〈0．01）,API-2的抑制效果强于PD98059;Rg1＋API-2组BDNF高于对照组和Rg1组（P〈0．05）,其余各组间差异无统计学意义（P〉0．05）;Rg1组NT-3的浓度高于对照组（P〈0．05）;Rb1＋PD98059组的NGF高于Rb1组。Rb1和Rg1组海马神经元的凋亡率显著低于损伤组（P〈0．01）;PD98059和API-2阻断了Rb1和Rg1对神经元的保护作用（P〈0．01）;神经营养因子水平各组间差异无统计学意义。结论Rb1和Rg1促进海马神经元突起生长及抵抗A1325—35损伤,促进神经元的存活。其机制与Akt和ERK1／2的信号通路激活有关,与增加神经营养因子的分泌无关。     

纳洛酮对缺氧诱导大鼠神经元损伤的抑制作用及其机制

目的探讨纳洛酮对缺氧诱导大鼠神经元损伤的作用及其可能的机制。方法体外培养大鼠神经元，将其分为正常对照组、缺氧诱导组、缺氧诱导＋纳洛酮干预组。应用流式细胞术测定大鼠神经元损伤；应用荧光探针2，7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸（DCFDA）检测细胞内活性氧的变化；应用比色法检测超氧化物歧化酶（SOD）的活性；应用Westernblot检测NF—KB的活化。结果（1）纳洛酮抑制缺氧诱导的大鼠神经元凋亡，缺氧组大鼠神经元细胞凋亡明显增加，为对照组的3．54倍，纳洛酮干预组为对照组的1．35倍（均P〈0．05）。（2）纳洛酮抑制缺氧诱导的活性氧生成，缺氧诱导大鼠神经元活性氧生成，为对照组的2．66倍，纳洛酮干预组为对照组的1．24倍（均P〈0．05）。（3）纳洛酮抑制缺氧诱导的NF—KB活化（P〈0．05）。（4）抗氧化剂NAC抑制缺氧诱导的NF—KB活化，抑制率达49％（P〈0．05）。结论纳洛酮抑制缺氧诱导的活性氧生成，进而抑制NF—KB活化，从而抑制缺氧诱导的大鼠神经元凋亡。     

发育期大鼠反复痫性发作后远期学习记忆障碍及海马神经元可塑性的研究

目的探讨发育期大鼠反复痫性发作对大鼠成年后学习记忆及海马神经元可塑性的影响。方法生后10dsD大鼠32只,随机分为实验组16只和对照组16只。实验组用戊四氮（PTZ）反复腹腔注射5d,制成反复痫性发作模型,对照组腹腔注射等量生理盐水。在生后第60天用Morris水迷宫评价大鼠的学习记忆功能,用RT—PCR方法检测大鼠海马神经元可塑性标志物神经生长相关蛋白-43（GAP一43）mRNA的表达变化。结果与对照组比较,实验组在Morris水迷宫测试中平均逃避潜伏期明显延长（P〈0．05）,原平台所在象限的游泳时问明显缩短（P〈0．05）;海马组织GAP一43mRNA的表达显著增多（P〈0．05）。结论发育期大鼠反复痫性发作可引起远期学习记忆损害及海马神经元激活和突触重建等神经元可塑性改变,而GAP一43表达增多可能是学习记忆功能和可塑性变化的分子机制。     

Toll样受体系统在肾脏衰老中的表达变化

目的观察Toll样受体（TLRs）系统在肾脏衰老中的表达变化。方法用免疫印迹和实时定量PCR（qRT—PCR）技术分析3月龄组（青年组,n=20）、12月龄组（中年组,n=20）和24月龄组（老年组,n=20）大鼠肾脏中TLRs系统分子、核转录因子（NF—κB）信号通路分子以及炎症因子包括趋化因子配体3（CCL3）、CCL4、CCL5、CD80、肿瘤坏死因子-d（TNF—α）和白细胞介素-12b（IL-12b）的表达变化情况。结果①12月龄组和24月龄组体重[（466．86±32．62）、（617．8±57．34）g]、肾重[（43．25±0．50）、（5．01±1．00）g]、三酰甘油（TG）[（2．32±0．46）、（3．22±0．82）mmol／L]和尿蛋白／肌酐比值[（164．81±38．31）、（256．00±49．39）mg／mmoL]高于3月龄组[（236．3±12．28）g、（1．67±0．68）g、（1．20±0．32）mmol／L、（146．01±22．72）mg／mmoLl,差异有统计学意义（P〈0．05）;24月龄组大鼠血尿素氮（BUN）水平[（6．86±1．10）mmol／L]高于3月龄组[（5．73±0．47）mmol／L1,差异有统计学意义（P〈0．05）;而血肌酐（SCR）、血糖（GLU）和胆固醇（CrtOL）水平三组差异无统计学意义（P〉0．05）。24月龄组肾重I（5．01±1．00）g]和尿蛋白／肌酐比值[（256±49．39）mg／mmoL]高于12月龄组[（3．25±0．50）g、（164．81±38．31）mg／mmoL],差异有统计学意义（P〈0．05）。②12月龄组和24月龄组TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLRll表达水平均高于3月龄组,24月龄组TLRl和TLR3水平高于3月龄组,24月龄组TLR9水平高于3月龄组,差异均有统计学意义（P〈0．05）：三组TLR6、TLR7、TLRl0水平差异无统计学意义（P〉0．05）;TLR8未检测到。24月龄组TLRl：TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLRll水平高于12月龄组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。③12月龄组和24月龄组IK—Ba和活化的磷酸化NF—κBp65（Phospho—NF—κBp65）水平高于3月龄组,差异有统计学意义（P〈0．05）;24月龄组NF—κBp65水平高于3月龄组,差异有统计学意义（P〈0．05）。24月龄组NF—κBp65和Phospho—NF—κBp65水平高于12月龄组,差异有统计学意义（P〈0．05）。④24月龄组CCL3、CCL4、CCL5、CD80、TNF—d和IL-12b水平高于3月龄组,差异有统计学意义（P〈0．05）;12月龄组CD80和IL-12b水平低于3月龄组,差异有统计学意义（P〈0．05）。24月龄组CCL3、CCIA、CCL5、CD80、TNF-仅和IL-12b高于12月龄组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论TLRs系统可能通过激活NF—κB信号通路、促进炎症因子的表达而在肾脏衰老过程中发挥重要作用。     

Nogo-A基因敲除鼠视神经损伤后修复的实验研究

目的评价Nogo—A基因在视神经损伤后修复机制中的作用。方法Nogo-A基因敲除联合视神经损伤鼠为实验组（20只）,C57BL／6小鼠联合视神经损伤作为对照组（20只）。制备视网膜、视神经冰冻切片,采用免疫荧光技术检测视网膜神经节细胞和视神经中生长相关蛋白（GAP）43的表达。进行视网膜神经节细胞体外培养,进行GAP-43染色,采用图像分析系统计算细胞轴突长度。结果视神经中GAP-43表达：夹伤后1、3、7d对照组中表达少量GAP-43,实验组中GAP-43表达明显高于对照组（t=2．12,3．56、2．63,均P〈0．01）。GAP-43抗体染色可见着色在体外培养RGC轴突,实验组3d有较长轴突生长,对照组3d有较短轴突生长。RGC于培养1、3及7d,经自动图像分析系统处理,得出细胞突起长度,实验组突起长度明显高于对照组（F=41．36、31．23,均P〈0．01）。结论Nogo—A基因在抑制视神经损伤后轴突再生机制中起重要作用。     

BMP2在SVZa神经干细胞向TH+神经元分化中的作用

目的 研究BMP2对室管膜前下区（anterior subventricular zone，SVZa）神经干细胞分化为TH^＋（酷氨酸羟化酶）神经元的作用。方法 体外培养SVZa神经干细胞，以0、0．1、1、10、20、100（ng／m1）浓度的BMP2分别诱导SVZa神经干细胞分化，通过免疫组化和流式细胞仪技术检测不同浓度下SVZa神经干细胞分化为TH^＋神经元的比例。结果0．1—100（ng／ml）组的TH^＋细胞比例均明显高于0ng／ml组，10ng／ml组达最高峰，各组间差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论 BMP2可以促进SVZa神经干细胞向TH^＋神经元分化，可以明显提高分化比例。     

TRPV1对慢性压迫背根节神经元自发放电的作用

目的：研究瞬时受体电位V1受体（TRPV1）对受压迫背根节（DRG）神经元自发放电的影响．方法：在麻醉消毒手术条件下,经大鼠L5椎间孔插入长4mm直径0．5～0．8mm不锈钢丝,以形成对大鼠DRG及其神经根的稳定慢性压迫．观察模型动物的行为学特征,引导损伤侧背根A类单纤维自发放电,观察分析TRPV1受体拮抗剂Capsazepin作用下,自发放电频率的变化及特征．结果：模型动物表现出明显的疼痛行为．术后24h其损伤侧后肢每分承重分散时间延长为（10．5±2．1）s／min（P〈0．05）．大部分慢性压迫模型（32／35）表现为自发放电阳性,按其特征分为周期放电（14例）、非周期放电（18例）．在Capsazepin（3μmol／L）浸浴作用下,受损DRG神经元自发放电频率明显下降,周期放电频率由（27．7±2．2）Hz下降至（15．5±2．0）Hz（n=4,P〈0．05）;非周期放电的放电频率由（34．7±7．4）Hz下降至（17．2±5．2）Hz（n=10,P〈0．05）．结论：阻断TRPV1后,由DRG慢性压迫诱发的自发放电被部分抑制．TRPV1可能参与受损DRG神经元自发放电的产生,介导了神经病理痛信号的产生和传导．     

针刺对备用背根节神经元NP-1表达的影响

目的探讨针刺对备用背根节（dorsal root ganglion,DRG）NP-1表达的影响。方法将25只成年雄猫分为5组,即假手术组、单侧备用背根手术7d组、单侧备用背根手术并针刺7d组、单侧备用背根手术14d组和单侧备用背根手术并针刺14d组。通过免疫组化ABC法,观察各组备用DRG中NP-1的免疫反应神经元数目。结果在假手术组,NP-1阳性神经元主要定位于部分中小神经元及少数大神经元胞浆中;部分背根切断7d后NP-1阳性中小神经元数较假手术组明显减少（P〈0．05）,NP-1阳性大神经元数与假手术组者差异无统计学意义（P〉0．05）;而术后14d,NP-1阳性中小神经元数较7d组明显增多（P〈0．05）,且回升至假手术组水平,NP-1阳性大神经元数与手术7d组差异无统计学意义（P〉0．05）;针刺7d组较手术7d组NP-1阳性中小神经元数增多（P〈0．05）,但尚未回升至假手术组水平,NP—1阳性大神经元数减少（P〈0．05）;针刺14d组各类阳性神经元数目与手术14d组及针刺7d组差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论针刺可上调NP-1在备用DRG中小神经元的表达。     

壬基酚对子代大鼠皮质部神经生长相关蛋白的影晌

目的母鼠孕期和哺乳期暴露NP,观察其对子代神经生长相关蛋白（GAP-43）的影响。方法将交配成功的31只孕鼠根据妊娠H期分层后随机分配到4组,即对照组,NP低、中、高剂量组（NP0、25、50、100mg／kg／day）,单笼饲养,空腹灌胃,NP暴露时间为受孕第6天到出生后21d哺乳期结束（GD6-PND21）,免疫组织化学法检测21d、60d皮质部GAP-43的变化,并分析上述变化与NP暴露之间的关系。结果高剂剂量组21d和60d龄的仔鼠皮质部GAP-43免疫反应阳性细胞平均数目、积分光密度低于同期对照组仔鼠（P〈0．05）;GAP-43蛋白表达与NP暴露剂量有负相关关系,差异有统计学意义（r=-0．711、-0．568,P〈0．05）。结论NP孕期暴露影响子代大鼠脑组织GAP-43的表达,且剂量越高,GAP-43表达越低。     

二苯乙烯苷对Aβ25-35致NG108-15损伤的保护作用

目的观察二苯乙烯苷对Aβ25-35诱导损伤的NG108-15细胞生长、分化的影响。方法以Aβ25-35诱导NG108-15细胞建立痴呆细胞模型后加入二苯乙烯苷培养,观察NG108-15细胞的生长状态、存活率、突起率及突起平均长度。结果与细胞模型组相比,二苯乙烯苷组能在一定程度上抑制Aβ25-35对痴呆细胞的损伤作用,细胞生长状态良好,细胞存活率、突起率及突起平均长度与模型组比较均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论二苯乙烯苷对Aβ25-35诱导的NG108-15细胞损伤具有保护作用。     

针刺对部分背根切断备用背根节生长的影响

目的探讨针刺对部分背根切除备用背根节(DRG)生长的影响。方法健康成年雄猫10只。随机分为正常对照组、备用根模型组及针刺备用根模型7d组(摘除双侧L1~L5,L7~S2DRG,保留L6DRG为备用背根,其中针刺一侧备用根支配区的两组穴位即为针刺组,非针刺侧为备用根模型组),每组5只。两组动物在无菌条件下取出双侧L6DRG进行体外培养。分别于1、3、5、7d250倍光镜下随机测量20个视野的细胞突起长度。用抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体行免疫组织化学ABC法染色对神经元进行鉴定。结果培养的DRG细胞经抗NSE抗体行免疫细胞化学ABC法染色,可见95%以上呈NSE阳性反应,且为典型的体外培养的DRG神经元。在相应时间段正常组DRG神经元的神经突起长度小于备用根组(P<0.05)、备用根组小于针刺组(P<0.05)。结论部分背根切断可致备用DRG神经元突起再生活性增强,针刺备用根所支配的穴位后可进一步促进备用DRG神经元的突起再生。     

二脱氧肌苷对背根神经节神经元突起生长的影响

目的探讨二脱氧肌苷（didanosine, ddI）对分散培养的胎鼠背根神经节（dorsal root ganglion, DRG）神经元胞体和突起生长的影响。方法分散培养的胎鼠DRG神经元用不同浓度的ddI (1μg/mL, 5μg/mL, 10μg/mL, 20μg/mL) 孵育,对分散培养的DRG神经元用微管相关蛋白2（microtubule associated protein 2, MAP2）免疫荧光标记后,用共聚焦激光扫描显微镜（confocal laser scanning microscope, CLSM）观察神经元胞体和突起的改变。结果分散培养的胎鼠DRG神经元用ddI孵育3d后,神经元突起的数目减少和长度变短,而神经元的胞体的大小则没有明显变化。结论ddI可直接影响分散培养的胎鼠DRG神经元突起的生长。     

氧化LDL对人脐静脉内皮细胞Connexin37表达的影响

目的研究氧化低密度脂蛋白（Ox—LDL）对体外培养的人脐静脉内皮细胞缝隙连接蛋白Connexin37基因表达的影响。方法常规人脐静脉内皮细胞体外培养并传代。根据Ox—LDL的不同浓度分为对照组（不加Ox—LDL）及50、100、200mg／L干预组,干预24h后通过RT-PCR方法检测并比较各组内皮细胞Connexin37mRNA的表达。根据Ox—LDL干预的不同时间分为对照组（不加Ox—LDL）以及50mg／LOx—LDL干预6、12、24、48、72h组,检测比较各组Connexin37mRNA的表达情况;并检测比较对照组和100mg／L Ox-LDL干预组间Connexin37蛋白的表达水平。结果50、100、200mg／L的Ox—LDL干预24h后均能引起内皮细胞Connexin37mRNA表达的显著减少（P〈0.01）,以50mg／L的Ox—LDL干预效果最明显（P〈0.01）.50mg／L的Ox-LDL干预12h后Connexin37mRNA的表达开始显著下降（P〈0．01）,24h下降最明显（P〈0．01）,48h仍下降（P〈0．05）,至72h时恢复到刺激前水平。100mg／L的Ox—LDL干预24h后内皮细胞Connexin37蛋白表达水平显著降低（P〈0.01）。结论Ox-LDL可以抑制人脐静脉内皮细胞Connexin37mRNA和Connexin37蛋白的表达。     

参蛇偏瘫胶囊联合尼莫地平预处理对脑缺血后再灌注神经细胞凋亡的影响

目的：探讨参蛇偏瘫胶囊联合尼莫地平预处理对脑缺血后再灌注神经细胞凋亡的影响。方法：采用夹闭小鼠双侧颈总动脉造成脑缺血模型。将50只小鼠随机分成五组,即假手术组、模型组、尼莫地平组、参蛇偏瘫胶囊组、参蛇偏瘫胶囊联合尼莫地平预处理组（联合组）,每组各10只。尼莫地平组、参蛇偏瘫胶囊组、联合组三组缺血前30min分别静脉给予尼莫地平0.2 mg/kg、腹腔注射参蛇偏瘫胶囊10 ml/kg以及二者同时联合处理,缺血5 min后分别再灌注72 h。取脑片观察各组脑细胞凋亡的变化情况,并采用免疫组化染色评定Bcl-2蛋白反应强度。结果：联合组的凋亡细胞百分数明显低于其他各组（P〈0.05）,而Bcl-2蛋白免疫反应强度高于其他各组（P〈0.05）。结论：脑缺血前经参蛇偏瘫胶囊联合尼莫地平预处理后能明显减少细胞凋亡的发生,且优于单独使用二者,此与Bcl-2蛋白表达增强有关。     

糖尿病大鼠背根神经节神经元TTX-R钠离子通道电流变化及意义

目的:通过研究大鼠糖尿病神经病理性疼痛(DNP)中背根神经节(DRG)神经元TTX-R钠离子通道特征的变化,以探讨此疾病引起痛觉过敏可能的发生机制。方法:8只SD大鼠腹腔注射链尿佐菌素诱导制作糖尿病神经病理性疼痛模型(DNP组),取L5⁶DRG,贴壁消化法行神经元培养,电生理全细胞膜片钳记录离子通道电流;8只同月龄大鼠为正常对照。结果:大鼠糖尿病神经病理性疼痛小直径DRG神经元TTX-R INa电流密度较对照组增高。与对照组比较激活曲线向超极化移动3.9 mV(P<0.05),DNP组具有重复放电的神经元的比率增加。结论:大鼠糖尿病神经病理性疼痛小直径DRG神经元TTX-R钠通道电流的变化是痛觉过敏形成的原因之一。     

神经营养因子3在电刺激治疗脊髓损伤中的作用

目的 探讨神经营养因子-3（NT-3）在成年猫脊髓损伤后电刺激治疗中的作用.方法 成年猫25只,雌雄不拘,随机分为左侧脊神经根去传入手术组（手术组,保留L6脊神经节）、手术＋电刺激组（电刺激组）、手术＋电刺激＋NT-3抗体封闭组（抗体封闭组）,2个月后对相应脊髓节段和保留脊神经节进行霍乱毒素B亚单位结合辣根过氧化物酶复合物形态学示踪及免疫组化、酶组化染色观察并进行组间比较.结果 各组脊神经节感觉性神经元中枢投射轴突终末集中分布在脊髓后角Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ板层内侧,但电刺激组终末出芽标记点密度高于手术组,而抗体封闭组终末再生出芽能力相比电刺激组显著降低.结论 电刺激可能通过上调NT-3的表达促进损伤脊髓和感觉神经元的形态和功能修复,来参与脊髓可塑性过程.     

益气活血法对脑缺血再灌注损伤后神经可塑性影响的实验研究

目的探讨益气活血法对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠缺血半暗带神经可塑性的影响及作用机制。方法120只SD大鼠分为假模型组、手术组、益气活血法组、活血法组、益气法组。每组再分为缺血再灌注3、7、14d三个亚组。以线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉,复制局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2h再灌注3、7、14d,用免疫组织化学染色SABC法分别检测缺血半暗带突触素SYP、生长相关蛋白GAP-43的表达。结果缺血再灌注3d,益气组、活血组SYP的表达与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,益气活血组、活血组的GAP-43表达,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;缺血再灌注7、14d,活血组和益气活血组SYP的表达与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,益气活血组GAP-43表达与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论益气活血法能促进SYP、GAP-43表达,有利于脑缺血后神经细胞轴突的再生以及突触的重塑。