Wip1基因在人脑胶质瘤细胞恶性增殖中的作用及其机制

目的研究Wip1基因在人脑胶质瘤细胞增殖的作用及机制。方法构建人Wip1基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,有效沉默胶质瘤细胞U251及U87-MG细胞的Wip1基因表达,检测细胞增殖能力。流式细胞术PI单染法检测Wip1基因沉默后细胞周期分布。实时定量PCR法及Western blotting分别检测差异性基因m RNA及蛋白表达。结果胶质瘤细胞Wip1基因表达被有效沉默。Wip1基因沉默的胶质瘤细胞增殖变慢,在U87-MG细胞更加明显。细胞周期分析显示:Wip1基因沉默对U251细胞周期无明显影响,而U87-MG细胞则在10 d时出现明显S期增多和G1、G2期细胞减少。Wip1基因沉默后,U251细胞中CDKN2A和p14ARF基因表达下调,而在U87-MG细胞中表达均上调。Western blotting结果显示:在U251与U87-MG胶质瘤细胞中p38MAPK表达均上调。在U87-MG细胞中p53及p-p53(Ser 15)表达均上调,但在U251细胞中无明显变化。结论 Wip1对胶质瘤细胞增殖具有重要作用。在U87-MG细胞增殖作用主要与其调节p53功能有关。     

脑胶质瘤Wip1基因与DNA损伤修复关系的研究

目的研究U251胶质瘤细胞Wip1基因沉默对DNA核苷酸切除修复酶XPA、XPC的影响。方法体外培养人胶质瘤细胞U251,Wip1(-)组采用携带Wip1基因RNA干扰载体的慢病毒沉默Wip1基因,经实时定量PCR验证。对照组(NC组)采用阴性对照病毒感染。使用替莫唑胺(temozolomide,TMZ)进行干预,将细胞分为NC组、NC+TMZ组、Wip1(-)组和Wip1(-)+TMZ组。CCK-8法检测各组细胞的增殖,实时定量PCR检测细胞XPA、XPC m RNA表达,免疫印迹检测细胞XPA、XPC蛋白表达。结果 TMZ干预后48 h、72 h、96 h、120 h、144 h,Wip1(-)+TMZ组细胞增殖率低于其他3组(P0.05)。TMZ干预48 h后,NC+TMZ组细胞XPA和XPC m RNA表达远远高于NC组(P0.05),同时XPA和XPC蛋白表达远远高于NC组(P0.05)。TMZ干预48 h后,Wip1(-)+TMZ组细胞XPC m RNA和XPA蛋白表达水平明显高于Wip1(-)组(P0.05)。结论 Wip1基因与U251脑胶质瘤细胞DNA损伤修复有关,可通过调节下游产物XPA与XPC参与细胞核苷酸切除修复过程。     

ShRNA-AKT2对人脑胶质瘤U87细胞株增殖及凋亡的影响

目的研究通过慢病毒载体靶向抑制丝/苏氨酸蛋白激酶2(AKT2)基因表达对胶质瘤细胞株U87增殖、凋亡的影响。方法利用慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)干扰载体感染U87细胞株,逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印迹技术(Western blot)分别检测转染后细胞株AKT2 mRNA和蛋白表达水平变化,四唑盐(MTT)法检测细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率、细胞周期改变。结果转染AKT2-shRNA可有效降低U87细胞株内的AKT2表达。干扰组细胞从第3 d开始增殖明显降低(P0.05);AKT2-shRNA干扰组细胞的凋亡率为11.80%±1.83%,明显高于阴性对照组的2.01%±0.20%和未转染组的2.13%±0.32%(P0.05);AKT2-shRNA干扰组细胞周期S期细胞百分比显著低于对照组,而G0/G1期细胞比分比显著高于对照组(P0.05)。结论 AKT2-shRNA可抑制胶质瘤细胞株的增殖,并导致肿瘤细胞凋亡增加。     

靶向沉默Wip1基因表达对胶质瘤细胞增殖及放疗敏感性的作用

目的 探讨靶向沉默Wip1基因表达对脑胶质瘤细胞增殖及放疗敏感性的影响。方法 体外培养人胶质瘤细胞株U251,用携带Wip1基因RNA干扰载体的慢病毒感染U251细胞沉默Wip1基因表达,然后对U251胶质瘤细胞进行放疗干预。根据对U251细胞处理方法分为4组:Wip1基因沉默后放疗组（IR+Wip1组）、单纯Wip1基因沉默组（Wip1组）、单纯放疗组（IR组）和NC组（空载体病毒感染U251细胞）。CCK-8法检测细胞的增殖,实时定量PCR检测细胞Chk1、Chk2 mRNA表达,免疫印迹检测细胞Chk1、Chk2蛋白表达。结果 U251细胞慢病毒感染后3~4 d,采用荧光显微镜观察,根据绿色荧光蛋白阳性表达判定感染效率,结果显示感染效率均90％以上。放疗后24、48、72、96、120 h,IR组和Wip1组增殖率均显著低于NC组（P<0.05）,而IR+Wip1组细胞增殖率明显低于IR组和Wip1组（P<0.05）。放疗后24 h,IR+Wip1组Chk1 mRNA表达明显低于Wip1组（P<0.05）,明显高于IR组和NC组（P<0.05）;IR+Wip1组Chk2 mRNA表达明显低于其他3组（P<0.05）。IR+Wip1组Chk1蛋白表达明显低于IR组和NC组（P<0.05）,Chk2蛋白表达低于其他3组（P<0.05）。结论 靶向沉默 Wip1 基因表达可抑制胶质瘤细胞的增殖,并可能通过抑制 Chk1 、 Chk2 的蛋白表达增加胶质瘤细胞对放疗的敏感性。     

LRIG3基因对脑胶质瘤细胞系U87和U251的细胞周期、侵袭性和凋亡的影响

目的探讨过表达的富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白3(LRIG3)基因对脑胶质瘤细胞系U251和U87的细胞周期、侵袭能力和凋亡的影响。方法将过表达的LRIG3质粒(实验组)和空白质粒(对照组)经慢病毒法感染胶质瘤细胞系U251和U87,筛选稳定细胞株,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot检测LRIG3表达的变化,碘化丙啶染色后用流式细胞仪测定细胞周期的变化,TransWell小室法检测细胞的侵袭能力,用免疫组化原位末端标记法(TUNEL)检测各组凋亡细胞。结果与对照组相比,实验组U251与U87细胞中LRIG3mRNA水平分别上升67.6%和79.9%,蛋白表达水平分别升高62.3%和91.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组U251细胞中S期与G2/M期细胞数之和低于对照组,有统计学意义(P<0.05);但U87细胞与对照组比无明显差异。实验组U251细胞中穿出细胞数量均明显少于对照组(P<0.05),TUNEL染色结果显示对照组U251细胞凋亡率为23.4%,实验组为35.7%;对照组U87细胞凋亡率为20.2%,实验组为39.5%;对照组与实验组间凋亡率均有明显差异(P<0.05)。结论 LRIG3基因过表达能阻断细胞周期于S期和G2/M期,降低胶质瘤细胞的侵袭能力,加速细胞凋亡。     

胶质瘤干细胞的结肠癌转移相关基因1表达与替莫唑胺耐药的相关性

目的探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)表达与胶质瘤干细胞对替莫唑胺(TMZ)耐药的相关性。方法采用实时定量荧光PCR和Western blot方法测定U87胶质瘤细胞来源的干细胞(GSCsU87)、U251胶质瘤细胞来源的干细胞(GSCs-U251)及U87和U251细胞的MACC1 mRNA、蛋白表达水平。通过实时定量荧光PCR和Western blot检测RNA干扰对MACC1的沉默效应。用流式细胞术和CCK-8方法测定MACC1沉默对TMZ诱导的细胞毒性和细胞凋亡的影响。结果胶质瘤干细胞GSCs-U87和GSCsU251中MACC1 mRNA和蛋白表达水平显著增高(均P 0.05)。shRNA-MACC1可以显着抑制MACC1表达(均P 0.05)。用不同浓度的TMZ处理后,与对照组GSCs-U87和GSCs-U251相比,TMZ对MACC1沉默的GSCs-U87和GSCs-U251细胞毒性显著增加,且MACC1沉默的胶质瘤干细胞的凋亡数增高。结论 MACC1基因的沉默可增强TMZ对胶质瘤细胞的凋亡和生长抑制作用,从而增加其对TMZ化疗的敏感性。     

垂体瘤转化基因RNA干扰对胶质瘤细胞化疗敏感性的影响

目的 观察垂体瘤转化基因(PTTG)RNA干扰对胶质瘤细胞对化疗药物敏感性的影响.方法 实验分4组:对照组:对胶质瘤U251细胞不进行任何处理;替莫唑胺(TMZ)组:胶质瘤U251细胞培养基中加入TMZ;PTTG shRNA转染组:PTTG shRNA片段转染胶质瘤U251细胞;PTTG shRNA联合TMZ组:TMZ作用于转染PTTG shRNA片段的胶质瘤U251细胞.MTT法检测细胞生长状况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 MTT结果显示吸光度值在对照组、TMZ组、PTTG shRNA转染组、PTTG shRNA联合TMZ组分别为0.85±0.07、0.58±0.06、0.55±0.07、0.41±0.05,TMZ组、PTTG shRNA转染组、PTTG shRNA联合TMZ组细胞增殖抑制率分别为(31.56±5.51)%、(35.53±4.60)%、(51.49±6.74)%;PTTG shRNA组及TMZ组与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05),而PTTG shRNA联合TMZ组抑制细胞增殖更明显,与PTTG shRNA组及TMZ组比较差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,48 h时对照组凋亡率为(6.29±0.78)%,TMZ组为(33.61±4.88)%,PTTG shRNA组为(39.61±4.95)%,PTTG shRNA联合TMZ组为(66.23±7.60)%,PTTG shRNA组及TMZ组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),而PTTG shRNA联合TMZ组的凋亡率较PTTG shRNA组及TMZ组明显增高,比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PTTGRNA干扰可以增强胶质瘤细胞对化疗药物的敏感性,提高化疗效果.     

Rac1表达调控对髓母细胞瘤Daoy细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨Rac1基因沉默对髓母细胞瘤Daoy细胞株细胞周期、凋亡的影响.方法 将Daoy细胞分为2组:Rac1-shRNA组和对照组,Rac1-shRNA组将Rac1-shRNA质粒转染Daoy细胞,对照组则转染空白质粒.分别用RT-PCR、Western blot及流式细胞仪检测2组Daoy细胞Rac1 mRNA、Rac1蛋白、细胞周期、细胞凋亡率的变化,并进行统计学比较.结果 Rac1 mRNA和Racl蛋白在髓母细胞瘤Daoy细胞株中均有高表达;Rac1基因沉默后Daoy细胞细胞周期受阻于G0～G1期,G0～G1期细胞所占比例明显增加(80.9%±4.9%),而S期所占细胞比例减少(11.8%±2.3%);Rac1-shRNA组Daoy细胞凋亡率为36.7%±3.9%,而对照组为8.5%±0.9%.2组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 RNA干扰沉默Rac1基因可以抑制Daoy细胞增殖,促进细胞凋亡,Rac1可成为抑制髓母细胞瘤增殖并促进细胞凋亡新的靶点.     

慢病毒干扰Chk1、Chk2表达对脑胶质瘤系U87细胞的放射治疗敏感性的影响

目的 探讨慢病毒干扰细胞周期检测点激酶1、2(Chk1、Chk2)基因表达对脑胶质瘤细胞放射治疗敏感性的影响.方法 根据基因库数据提供的Chk1及Chk2基因核苷酸序列,各选择设计一条适合转录短发夹RNA(shRNA)的DNA序列,构建慢病毒并转染胶质瘤细胞系U87细胞进行传代扩增.用实时PCR和免疫印迹法分别在mRNA和蛋白水平上测定Chk1及Chk2的表达.转染后U87胶质瘤细胞经X线照射48 h后,进行细胞周期和凋亡的检测.结果 成功包装慢病毒后转染U87细胞,实时PCR检测Chk1和Chk2的干扰效应,其抑制率分别为73.74%和85.12%.细胞周期检测显示照射组和照射干扰Chk2组的细胞大部分阻滞在G2/M期;照射干扰Chk1组细胞放射治疗后的凋亡率较对照组和干扰Chk2组细胞明显增高(P<0.05).结论 慢病毒转染细胞可以有效的将干扰Chk1和干扰Chk2基因带到U87细胞并发挥作用,干扰Chk1和Chk2可以增加U87细胞对放射治疗的敏感性,为胶质瘤的治疗提供了新的治疗途径.     

靶向PTTG1基因的微小RNA转染后诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的研究

目的 构建表达靶向抑制垂体瘤转化基因1 (PTTG1)基因表达的RNA干扰载体microRNA,导入人脑胶质瘤细胞株U251中,研究靶向抑制PTTG1基因对U251细胞的凋亡诱导作用.方法 以PTG1为靶基因,根据pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体要求,设计针对PTIG1的microRNA序列,脂质体转染法将重组质粒转入U251细胞,采用荧光定量多聚酶链反应(PCR)以及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测干扰效果;膜联蛋白Ⅴ与碘化丙啶(annexinⅤ/PI)双色标记的流式细胞仪法检测microRNA诱导的细胞凋亡,碘化丙锭(PI)染色检测细胞周期阻滞.结果 实时荧光定量PCR以及Western blot检测显示,PTTG1基因的mRNA转录水平以及蛋白水平的表达均得到显著抑制;转染后,流式细胞仪检测分析显示,PTTG1基因表达被抑制后,U251细胞凋亡率明显增高,细胞周期出现明显的G2/M阻滞.结论 靶向PTTG1基因的重组microRNA干扰载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-PTTG1介导的RNAi显著靶向抑制了PTTG1基因在人脑胶质瘤细胞中的表达,并明显地诱导了脑胶质瘤细胞发生凋亡和G2/M期细胞周期阻滞.     

不同病房模式对精神分裂症病情影响的研究

目的探讨不同病房模式对首发精神分裂症患者病情的影响及康复情况。方法开放式病房的患者为研究组68例,同时选择住封闭式病房患者为对照组130例,对两组患者的临床资料进行比较分析。结果对照组患者入院时焦虑抑郁及敌对猜疑出现明显变化（P＜0.05）;研究组患者在第1周时焦虑抑郁已经开始改善,第2周时病情、阳性症状、一般精神病理、敌对猜疑、激活性也出现明显变化（P＜0.05）;第4周时研究组病情及各因子、认知功能及自知力显著改善,与对照组比较存在统计学差异（P＜0.05）。结论开放式病房模式可以减少患者的负性影响,更快改善患者的认知功能,有利于患者自知力的恢复,使患者的病情达到更全面的康复。     

Certain predictions on the effectiveness of l-DOPA on parkinsonism

Summary Sixty nine patients with Parkinson's disease were treated with L-DOPA for more than a year. L-DOPA produced remarkable improvement in akinetic patients, moderate improvement in rigidity and slight improvement in tremor. The degree of improvement in akinesia, rigidity and tremor tended to be reversely related to the severity of the disease. Rigidity and akinesia improved better in young patients, but there was no correlation between age and the response of tremor to the treatment. Except for rigidity there was no correlation between the improvement and the duration of the disease.

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Zusammenfassung 69 Parkinsonpatienten wurden während mehr als 1 Jahr mit L-DOPA behandelt. Es wurde dadurch bei akinetischen Patienten eine beachtliche, bei Patienten mit Rigor eine mäßige und bei Patienten mit Tremor eine geringfügige Besserung erreicht. Das Ausmaß der Besserung war in allen drei Formen um so geringer, je ausgeprägter die Symptome bei Behandlungsbeginn waren. Rigor und Akinesie sprachen bei jungen Patienten besser auf die Therapie an, aber es bestand keine Korrelation zwischen dem Alter der Patienten und der Beeinflußbarkeit des Tremors durch die L-DOPA-Therapie. Außer für den Rigor bestand keine Korrelation zwischen dem Ausmaß der Besserung und der Dauer der Erkrankung vor Behandlungsbeginn.

     

Efficacy of milnacipran on poststroke depression on inpatient rehabilitation

Post-stroke depression (PSD) has a negative impact on rehabilitation following stroke. No satisfactory antidepressant treatment for PSD has yet been developed. The present study examined the effect of milnacipran, a serotonin and norepinephrine reuptake inhibitor, on PSD patients. Eleven PSD patients taking milnacipran in a rehabilitation hospital were compared to age-matched, sex-matched, and severity of depression at admission-matched PSD patients hospitalized during 2001 who did not take any antidepressant as historical control. Severity of depression was measured using self-rating depression scale for depression (SDS) assessed at admission and discharge after 3 months inpatient rehabilitation. Activities of daily living (ADL) and quality of life (QOL) were measured, respectively, by the functional independence measure (FIM) and a self-completed questionnaire for QOL (QUIK) as outcomes of rehabilitation. For the SDS score, the group taking milnacipran showed significant improvement compared to the control group in our study. FIM was improved in both groups. In the end QUIK did not change significantly in either group. We found no major side-effects of milnacipran among the patients. These results suggest that milnacipran is a safe and effective treatment for PSD for inpatients undergoing rehabilitation.     

Influence of abciximab on the adhesion of platelets on a shielded plasma gradient prepared on polyethylene

INTRODUCTION: Thrombotic effects of biomaterial implants are mediated merely through activation of the platelet glycoprotein IIb-IIIa (GpIIb-IIIa) receptor. Consequently, platelet GpIIb-IIIa receptor inhibitors are successfully used during stent implantation procedures to prevent thrombosis. However, currently a new generation of stents contains surface coating, which changes the surface to more hydrophobic or hydrophilic. This change markedly affects the interaction of platelets and may influence the efficiency of GpIIb-IIIa inhibitors. MATERIALS AND METHODS: To study the influence of the wettability of biomaterials on the effectiveness of abciximab, 5-cm polyethylene gradients with contact angles of 100 degrees to 40 degrees were made by means of glow discharge. Fresh whole blood with or without abciximab was recirculated over this gradient. RESULTS: Inhibition of platelet adhesion by abciximab was maximal, but not complete, on the hydrophobic and moderate hydrophobic part of the gradient, with contact angles of 55 degrees to 90 degrees. Percentage inhibition by abciximab was maximal around 60 degrees. CONCLUSIONS: Intermediate hydrophobicity of currently applied stent materials, such as stainless steel, seems optimal in combination with abciximab. However, on hydrophobic and particularly on hydrophilic materials, abciximab is less effective.     

散发神经鞘瘤22号染色体杂合子丢失发生的研究

目的探讨散发神经鞘瘤病人22号染色体（CHR22）杂合子丢失（LOH）情况及其与肿瘤增殖的关系。方法选取4个与NF2基因密切相关的多态性微卫星标记物,应用PCR方法研究54例神经鞘瘤的LOH情况。采用Ki-67和增殖细胞核抗原（PCNA）评估增殖指数。结果23例（42.6%）CHR22发生LOH,听神经鞘瘤发生率显著性高于脊神经鞘瘤（χ2=5.14,P〈0.05）。发生LOH者增殖指数明显高于无LOH者（Pki-67=0.0079,PPCNA=0.0021）。结论在散发神经鞘瘤中,CHR22LOH是常发事件;听神经瘤与脊神经鞘瘤LOH发生率有显著性差异,CHR22LOH与神经鞘瘤的增殖活动性有关。     

Clinical and experimental studies on the action of ethamsylate on haemostasis and on platelet functions

In a series of tests,the action of ethamsylate on haemostasis and on platelet functions was examined. After oral administration of the drug,a highly significant diminution of the bleeding time and of the blood loss from a standard wound was observed. This effect was demonstrated in healthy individuals and in patients suffering from platelet dysfunctions,and there was a distinct dose relation. There was also an increase of platelet adhesion,of PF 3 availability and of PF 4 release. The action of prostacyclin on the epinephrine induced platelet aggregation could be inhibited by ethamsylate. This offers a possible explanation for some of the effects on hemostasis. In addition,an action of ethamsylate on the platelet membrane was assumed since an in vitro increase of functions of the platelet membrane like PF 3 availability would not be explainable by a possible inhibition of prostacyclin.     

辣椒碱载药纳米微球抗脑胶质瘤作用的实验研究

目的探讨聚己内脂-聚乙二醇二嵌段共聚物(m PEG-PCL)制备的辣椒碱纳米微球的理化性质,通过实验评价其抗胶质瘤效果。方法通过开环聚合法和溶剂分散法制备负载辣椒碱的纳米微球,应用负载荧光素纳米粒子的肿瘤细胞摄取实验以及辣椒碱纳米微球的细胞毒性实验。结果实验显示载药微球具有缓释特性,细胞可通过胞吞作用将纳米微球摄入,负载NIR-797纳米微球可以很好地透过血-脑屏障,辣椒碱纳米微球对U251细胞的生长有明显的抑制作用。结论 m PEG-PCL为载体的辣椒碱纳米微球能够有效抑制胶质瘤细胞增殖,为脑胶质瘤药物治疗提供了一条极有前途的治疗途径。