乳腺癌MCF-7细胞系转移亚克隆的筛选及其生物学特性研究

目的将乳腺癌MCF-7细胞接种SC ID鼠,筛选具有高转移潜能的转移亚克隆,阐明其生物学特性。方法接种培养的乳腺癌MCF-7细胞,取接种的SC ID鼠肺组织做原代细胞培养,将获得的细胞命名为LM-MCF-7。对该细胞进行生物学鉴定,研究其形态学、生长、细胞周期、染色体和乳腺癌特异性标志物等特征,与其亲本MCF-7细胞进行比较,检测二者肿瘤转移相关蛋白表达的差异。将LM-MCF-7细胞回接SC ID鼠,观察其成瘤和转移的能力。结果在接种MCF-7细胞第68天时处死SC ID鼠,经肺组织原代细胞培养,成功获得了MCF-7细胞的转移亚克隆LM-MCF-7。在形态学上LM-MCF-7细胞为典型的上皮样多角形;应用流式细胞仪检测分析显示,G0/G1期细胞为53.40%,S期细胞为17.10%,G2+M期细胞为23.20%;细胞群体平均倍增时间为20 h±14 h;染色体分析显示为人源性异倍体,其数量为16~123条;免疫细胞化学检测显示,乳腺癌特异性标志物CA15-3在LM-MCF-7细胞中呈阳性反应;W estern印迹检测结果显示,与MCF-7细胞相比,LM-MCF-7细胞中肿瘤转移抑制基因nm23和细胞周期相关蛋白p27的表达水平明显下调,而与细胞运动有关的肌球蛋白轻链激酶(MLCK)及抗细胞凋亡蛋白bc l-2和survivin的表达水平明显上调。将该细胞株接种SC ID小鼠,与亲本MCF-7细胞相比,成瘤时间由7.4 d±1.3 d缩短至5.0 d±0.0 d,在肺脏、肾脏、脾脏、骨髓、淋巴结和心脏等脏器有广泛转移。结论LM-MCF-7细胞株是乳腺癌MCF-7细胞的转移亚克隆,具有高转移潜能。     

一株小鼠自发性乳腺癌细胞系MA-891的建立及其免疫生物学特征

从津白Ⅱ号小鼠自发性乳腺癌TA2MA891建立了体外长期传代细胞系MA891。MA891细胞保持了TA2MA891的高转移特性，皮下接种后肿瘤进行生长，并无一例外地发生肿瘤肺转移。MA891细胞的免疫原性极弱，表现为：（1）淋巴细胞-肿瘤细胞混合培养（MLTC）只能诱导出低水平的细胞毒T细胞（CTL）；（2）肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）含量少，体外经IL－2扩增后只表现出微弱的细胞毒活性；（3）在小鼠体内不能诱导特异性肿瘤排斥反应。MA891可作为研究人类肿瘤生物治疗的有用实验模型。     

615系小鼠可移植性乳腺癌Ca763和Ca761的超微结构

本文报告615系小鼠可移植性乳腺癌Ca763和Ca761的透射电镜观察。发现两瘤株细胞均呈片状或散在分布,未形成原始腺腔样结构。细胞大小不一,多形性,由发育不良的紧密连接相连,间质极少,几无淋巴细胞浸润。Ca761、Ca763原代癌属A型腺泡癌,多代移植使瘤组织类型发生了变异,腺泡型去分化为实性型,瘤组织中也未见B型病毒样颗粒,而A型颗粒则存在于Ca761、Ca763各代粗面内质网内。Ca761胞质内可见大量成团排列的胞质细丝,但未见致密小体及胞质微饮小泡。Ca763少部分瘤细胞内亦可见与质膜平行排列的胞质细丝,有时可见半桥粒和不连续的基板,少数细胞可见直接从中心粒长出的纤毛突向细胞间隙。     

人骨肉瘤自发性高肺转移模型的建立及其生物学特性初探

目的 在裸鼠体内建立人骨肉瘤自发性高肺转移模型。为探讨骨肉瘤肺转移机制和抗转移治疗提供尽可能与临床条件相近的实验工具。方法 将裸小鼠腹腔筛选的人骨肉瘤高转移细胞亚群经裸鼠间传代,组织块原位植入胫骨骨髓腔,待裸鼠发生转移时,皮下扩增肺转移灶,再次原位移植,如此循环3个周期,观察各代肿瘤细胞致瘤率、脏器转移及染色体数目变化情况。结果 各代肿瘤细胞致瘤率均为100%,肺转移率稳定友上,转移途径单一;体内增殖能力及染色体数目稳定。结论 建立了人成骨肉瘤自发性高肺转移模型。该骨肉瘤细胞系在裸鼠体内传代过程中生物学特性保持相对的稳定。     

小鼠乳腺癌生长与肺转移关系研究

目的：小鼠转移性乳腺癌的发展与肺转移的关系。方法：应用流式细胞仪（Flow cytometry,FCM)动态检测小鼠移植性乳腺癌细胞DNA 数（DNA index,DI),S期细胞百分率（S-phase fraction,SPF),DNA倍体，并分析上述3种指标与移植天数及肺转移的关系。结果：（1）SPF随移植天数增加而减少，二者间呈负的直线关系（r=-0.611,P=0.014)。（2）肺转移前后DI有显著性差异，肺转移前DI高于肺转移后DI。（3）小鼠移植瘤的DI与移植在数间无直线关系，但存在一个趋势即自移植后第10日起DI于上升趋势直至第36天，而后逐渐下降至实验结束。（4）肺转移前后SPF无显著性差异。（5）DNA倍体在肺转移前多表现为二倍体，在肺转移后表现为异倍体，后期又表现为二倍体。结论：用流式细胞仪分析小鼠移植性乳腺癌生长与肺转移的关系对临床研究有重要的意义。     

615系小鼠可移植性乳腺癌株(Ca761)的实验研究

Ca761是将615系小鼠的一自发A型乳腺癌,经同系移植而建立的一个新的小鼠乳腺癌模型。经11年190多代的移植,生长特性已基本稳定:它是615系小鼠的一个同基因型瘤株,在615系小鼠中移植成功率为100%,无自然消退,宿主平均存活时间为17.6±4.6天;基本不受615系小鼠性别和年龄的影响,无论是用埋块法或悬液法接种,或经液氮冷冻,复苏,其生长特性均保持稳定。 Ca761有明显的转移倾向;并已建成其腹水型及体外细胞系;它对所试12种常用抗癌药中的7种表现出不同程度的敏感性,这与乳癌的临床化疗情况有一定的相似性,故Ca761对肿瘤和乳腺癌的防治研究可能具有较大的实用价值。     

软骨多糖抑制小鼠乳腺癌Ca761生长转移的实验研究

目的 研究软骨多糖对615系小鼠乳腺癌Ca761的抑瘤和抗转移的作用机制.方法 分别检测经软骨多糖和生理盐水处理过的615小鼠乳腺癌肺转移模型的瘤重、肺转移发生率,ELISA试剂盒测定血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量,明胶酶谱法检测瘤组织金属基质蛋白酶(MMPs)含量的变化,进行组间比较.结果 软骨多糖具有明显的抑瘤作用,抑瘤率达到44%;治疗组肺转移率明显低于对照组(P＜0.05);治疗组血清中TNF-α含量明显低于对照组(P＜0.05);治疗组瘤组织中MMPs含量低于对照组(P＜0.05).结论 软骨多糖可抑制小鼠乳腺癌Ca761生长和转移.其机制可能与其抑制小鼠TNF-α和MMPs分泌有关,为开发新的抑癌药物提供了选择.     

一株小鼠自发性乳腺癌细胞系MA—891的建立及其免疫生物学…

从津白Ⅱ号小鼠自发性乳腺癌ＴＡ２ＭＡ８９１建立了体外长期传代细胞系ＭＡ８９１。ＭＡ８９１细胞保持了ＴＡ２ＭＡ８９１的高转移特性，皮下接种后肿瘤进行生长，并无一例外地发生肿瘤肺转移。ＭＡ８９１细胞的免疫原性极弱，表现为：（１）淋巴细胞－肿瘤细胞混合培养（ＭＬＴＣ）只能诱导出低水平的细胞毒Ｔ细胞（ＣＴＬ）；（２）肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）含量少，体外经ＩＬ－２扩增后只表现出微弱的细胞毒活性；（３）在上     

不同转移潜能乳腺癌细胞亚系的建立与生物学特性的分析

目的探讨利用细胞穿透人工基质膜能力的差异筛选不同转移潜能乳腺癌细胞的可行性,并分析二者生物学特性差异。方法人乳腺癌细胞系MDA-MB-435s经过连续人工基质膜侵袭试验后获得高、低转移潜能细胞株,并应用细胞生长曲线测定、侵袭力、黏附率实验,促血管形成实验分析所筛选出的不同转移潜能乳腺癌细胞的生物学性质的差异。结果获得2株转移潜能不同的乳腺癌细胞株,它们具有差异明显的体外生长速度、侵袭力、黏附力和促血管形成能力。结论利用细胞穿透人工基底膜能力的差异能够筛选出高、低转移潜能的乳腺癌细胞。     

小鼠腹水型肝癌肺转移亚株与淋巴结转移亚株若干生物学特性的比较

本实验用小鼠腹水型肝癌(Hca) 分别经腹水→足垫→淋巴结→腹水……,与腹水→尾静脉→肺→腹水……循环传代10次,得到淋巴结筛选型(HcaSL_(10))和肺筛选型(HcaSP_(10))。将两者均分别向足垫和尾静脉注射,观察各自的淋巴结转移率和肺转移率。发现HcaSL_(10)淋巴结转移率明显高于HcaSP_(10);HcaSP_(10)肺转移率明显高于HcaSP_(10)并对两者进行了细胞形态学,细胞电泳率,促血小板聚集能力等方面的比较。其结果提示HcaSL_(10)与HcaSP_(10)细胞性质存在着差异。     

人肝癌细胞系HCC-9724的建立及其生物学特性

目的 建立一株肝癌细胞系ＨＣＣ－９７２４,为肝癌研究提供实验模型。方法 无菌切除肝癌手术标本,６只裸鼠右后肢皮下包埋,体内连续传３代后,取移植瘤体外培养,绘制细胞生长曲线,光镜、电镜观察细胞形态,并进行细胞周期和染铎体核形分析,用免疫荧光法测定荷瘤鼠中ＡＦＰ的表达,结果 移植模型原代获得率为３３．３％,潜伏期为５２ｄ,自第３代后肿瘤获得率为１００．０％,潜伏期为１６ｄ,该模型移植瘤具有生长,稳定,     

不同转移潜能喉癌细胞株的分离及生物学特性比较

目的：获得高侵袭性喉癌细胞株,为建立高转移喉癌动物模型奠定基础.方法：改良侵袭实验筛选出高低两种侵袭潜能细胞亚群,通过生长曲线、倍增时间和流式细胞术检测两种细胞的生长和周期差异;采用侵袭实验、迁移实验检测侵袭和迁移能力的差异;各取5只裸鼠进行动物实验检测体内肿瘤生长和转移能力的差异.结果：经过改良侵袭实验筛选出了高低两种侵袭潜能细胞亚群,倍增时间分别为（31.6±1.1）,（60.2±11.1）h（P〈0.05）;增殖指数分别为（27.6±0.5）%,（16.3±0.8）%（P〈0.01）;高低亚群侵袭细胞数分别为210.2±12.9和11.6±5.0（P〈0.01）,迁移细胞数分别为229.8±12.1和6.0±4.5（P〈0.01）.动物实验中,高低侵袭组在裸鼠体内的成瘤时间分别为2,4wk,病理活检高侵袭组3只同侧腘窝淋巴结转移、4只同侧腹股沟淋巴结转移、1只对侧腹股沟淋巴结转移;低侵袭组1只同侧腹股沟淋巴结反应性增生,2只同侧腹股沟淋巴结转移;瘤重分别为（17.0±3.0）,（9.7±3.8）mg（P〈0.05）;瘤内血管数分别为21.2±4.0,1.4±0.9（P〈0.01）.结论：成功从喉癌同一亲本细胞系中分离得到了高低两种侵袭潜能细胞亚群,高侵袭性亚群的恶性程度高于低侵袭性亚群.     

人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株的建立及其生物学特性观察

目的:建立人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株。方法:采用体外低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击的诱导方法建立5-FU获得性BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株。MTT法检测耐药细胞株对多种化疗药物的交叉耐药性。观察其细胞形态学、生长曲线、倍增时间、平板克隆形成率、贴壁率、细胞周期分布、染色体核型以及裸鼠致瘤性。流式细胞术检测阿霉素在亲本及耐药细胞株内的积聚量。免疫细胞化学法检测胸苷酸合酶在耐药细胞内的表达。结果:成功建立人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株模型。该耐药细胞对阿霉素、长春新碱、奥沙利铂及甲氨蝶呤均有不同程度的交叉耐药性,但对羟基喜树碱仍较敏感。体外培养见细胞趋向群集性生长。耐药细胞株倍增时间较亲本细胞株长,克隆形成率则较亲本细胞株低,差异有统计学意义。耐药细胞贴壁率在23、h明显低于亲本细胞株,其G0/G1期细胞分布比率较低而S期比率明显增加。阿霉素在耐药细胞株内的积聚量低于亲本细胞株,耐药细胞株胸苷酸合酶的蛋白表达量较亲本细胞株明显增强。结论:人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株可以成为研究5-FU获得性耐药机制及开展多药耐药逆转剂筛选较好的体外模型。     

人肝癌细胞系HCC－9204的建立及其特性研究

目的和方法：作者用组织块培养法，对１２例肝细胞肝癌手术标本进行培养，并对能存活的细胞进行形态学观察，ＬＤＨ同工酶谱和ＡＦＰ检查，核型分析，对数求解和放射自显影测定细胞增殖周期，异种移植及生物学特性研究，结果：１例获得长期体外生长的能力，将其命名为ＨＣＣ－９２０４，无论形态学观察，还是ＬＤＨ同工酶谱的变化，均符合肝癌细胞的一般特征，并具有体外分泌ＡＦＰ的能力，染色体众数为７８～８０条各群染色体均增加，而以Ｃ，Ｅ群增加最为明显，并恒定出现Ｍ＿２ｄｅｒ（４）ｔ（４；１９）和Ｍ＿８ｄｅｌ（１３）两种标记染色体，增殖周期约为２０ｈ，异种移植成瘤率１００％．结论：ＨＣＣ－９２０４是一株人体肝癌细胞系，可用于肝癌防治研究．     

Establishment of the human hepatocellular carcinoma cell line HCC－9204 and its characteristics

ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅＨＣＣ－９２０４ａｎｄｉｔｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓＨｕＣｈｕａｎｍｉｎ；（胡川闽）；ＬｉｕＹａｎｆａｎｇ；（刘彦仿）；ＳｕｉＹａｎｆａ...     

人结直肠癌耐药细胞株HT-29/CPT-11的构建及其生物学特性探讨

目的:建立耐伊立替康(CPT-11)的人结直肠癌细胞株(HT-29/CPT-11),并研究其生物学特性.方法:采用药物浓度梯度递增间歇诱导法建立人结直肠癌耐药株HT-29/CPT-11;CCK-8法检测CPT-11对亲本细胞HT-29和耐药细胞株HT-29/CPT-11细胞的半数抑制率(IC50);绘制细胞生长曲线,并计算细胞倍增时间;流式细胞术分析细胞周期分布;RT-PCR检测HT-29/CPT-11和HT-29细胞MDR-1 mRNA的表达.结果:(1) 成功建立人结直肠癌耐药细胞株HT-29/CPT-11,耐药指数为6.51.(2) HT-29/CPT-11耐药细胞株倍增时间较原代细胞HT-29延长[分别为(41.29±1.69)h和(27.12±2.73)h,P<0.05].(3) 流式细胞术检测细胞周期结果显示,耐药细胞株HT-29/CPT-11 G1期细胞数目增加,S期细胞数目减少(P<0.05).(4) 耐药细胞HT-29/CPT-11的MDR-1 mRNA表达水平明显高于亲本细胞株HT-29,分别为1.086±0.054和0.416±0.02(P<0.05).结论:成功构建了人结直肠癌耐药细胞株HT-29/CPT-11,为下一步研究耐药机制奠定实验基础.     

脐血树突状细胞介导的食管癌疫苗生物学特征

目的　利用杂交瘤技术制备脐血树突状细胞和食管癌细胞融合疫苗 ,研究融合疫苗的生物学特征。方法　免疫磁珠法分离脐血CD34 干细胞 ,细胞因子诱导扩增为成熟树突状细胞 (DC) ;用聚乙二醇法 (PEG)将DC与食管癌细胞EC10 9融合 ,免疫磁珠法筛选阳性克隆EC10 9-DC ;利用流式细胞术鉴定融合疫苗表型 ;绘制融合疫苗生长曲线。结果　融合疫苗EC10 9-DC可在体外培养生长 ,高表达CD80 ,CD83和CD86 ,增殖活性低于EC10 9。结论　融合疫苗EC10 9-DC细胞具备了刺激免疫细胞活化的分子表型 ,为食管癌的特异性免疫治疗提供新的理论依据。     

小鼠乳腺癌实体瘤（Ca761／S）细胞G,C带核型分析

为探讨小鼠乳腺癌实体瘤的细胞遗传学特性，我们进行了染色体Ｇ，Ｃ带核型分析。含４６条的占５６％，含４０条的占４４％，共发现６条标记染色体，出现频率为１０／１０。这种稳定出现的超二倍体和假二倍体核型及恒定出现的标记染色体，提示肿瘤细胞恶性变过程中占有生长优势的细胞经体外接种，悬浮培养，分离，再培养有可能克隆化。     

人肝癌淋巴结高转移特性细胞株的建立

目的　从肝癌细系 HCC- 972 4(简称 H )中分离出淋巴结转移性克隆 HCC- 972 4- P(简称 P) ,比较两者异同 ,以揭示肿瘤转移的机制 .方法　采用裸鼠肝脏移植法 ,将 H原位接种于裸鼠肝脏 ,5 0 d时 ,肝内长出约 1.7cm× 0 .6 cm大小的肿瘤呈分叶状 ,质地较软 ,周围血供丰富 ,瘤组织与邻近脏器粘连 ,有明显的浸润和转移 ,取其淋巴结转移灶反复接种连续 3代 ,经体外培养后 ,克隆筛选得到淋巴结转移细胞株 P.结果　 P与 H相比 ,前者细胞周期短 ,在软琼脂内克隆形成率高 (P<0 .0 1) ,原位肝移植时 ,潜伏期短 ,瘤体大 ,形成广泛的肠系膜淋巴结转移 (P<0 .0 5 ) .结论　采用裸鼠肝原位移植法 ,经体外培养 ,克隆筛选 ,获得的 P克隆是淋巴结高转移性细胞株 .     

人尿道高分化鳞癌系HUS-98的建立及生物学特性

目的 以尿道高分化鳞状上皮转移癌患者腹水为材料，建立体外培养的人尿道鳞癌细胞系HUS-98。方法 按照细胞系建立标准检测细胞的一系列生物学特性，包括光镜、电镜观察，生长曲线、染色体数目、裸鼠致瘤性、致瘤性病毒基因等。结果 细胞维持培养15个月，传120代，生长稳定。细胞群体倍增时间52.3h。细胞呈贴壁生长，趋向复层，无接触抑制。光镜和电镜检查均显示高分化鳞癌特征性结构。染色体数目分布 34～120之间，主流范围在62～72之间（57%）。PCR检测乳头瘤病毒12，18型、疱疹病毒Ⅱ型、EB病毒和巨细胞病毒均阴性；乙肝病毒基因阳性。三次裸鼠移植试验均未致瘤。结论 该细胞系的建立将有助于尿道肿瘤的生物学特性的研究。