区分HIV-1p24抗原和HIV抗体检测方法的临床应用

目的了解艾滋病病毒(HIV)-1p24抗原和抗体联合检测在临床应用的价值。方法总结从2012-2016年HIV-1p24抗原和抗体联合检测并且能区分是抗原还是抗体阳性的临床结果,并和不能区分抗原抗体的四代酶联试剂结果比较,对其中HIV-1p24抗原阳性的样本进行CD4+T淋巴细胞及HIV核糖核酸(RNA)的检测。结果 2012-2016年共检测HIV-1p24抗原和抗体联合检测样本10 476例,其中HIV抗体阳性777例,HIV-1p24抗原阳性36例,其中抗原抗体同时阳性8例,单独HIV-1p24抗原阳性28例。结论 HIV-1p24抗原和抗体联合检测敏感性高、特异性强,尤其是能将抗原和抗体阳性区分开来,大大缩短了窗口期,提高了HIV急性期感染的检出率。     

结核分枝杆菌早期分泌抗原靶-6（ESAT-6）对人THP-1单核细胞IL-12产生的影响

目的研究结核分枝杆菌早期分泌抗原靶-6（ESAT-6）对人THP-1单核细胞IL-12产生的影响及其作用的细胞信号传导机制。方法应用亲和层析方法纯化大肠埃希菌表达重组的结核分枝杆菌ESAT-6抗原,采用ELISA法检测不同浓度ESAT-6刺激人THP-1单核细胞IL-12产生的影响,以及对LPS刺激的反应,应用各种细胞信号传导通路抑制剂来探讨ESAT-6诱导单核细胞IL-12产生相关可能的信号通路。结果结核分枝杆菌ESAT-6分泌抗原在2.5～10g/ml浓度范围能依赖性地刺激人THP-1单核细胞产生IL-12（p70 及其亚单位p40）。细胞信号传导通路JNKMAPK的选择性抑制剂SP600125能促进ESAT-6刺激单核细胞IL-12p40产生,而信号通路PKR抑制剂2-AP有显著性抑制其作用。结论ESAT-6抗原诱导人THP-1单核细胞IL-12产生,JNK MAPK及PKR信号通路可能参与了此过程的调控。     

卡介苗诱导小鼠产生保护性免疫的机制研究

目的 为了探索结核感染保护性免疫的产生机制及主要抗原成分.方法 我们调查了小鼠PEC细胞分别经活卡介苗和热杀死卡介苗刺激后,所产生的IL-12p40,IL-18和γ-干扰素的水平.调查卡介苗菌体裂解液和培养过滤液诱导细胞因子能力.结果 活的卡介苗可以激活巨噬细胞,诱导出IL-12p40和IL-18,而死的卡介苗却不能.活的和死的卡介苗菌体裂解物都可以诱导细胞产生IL-12p40.活的卡介苗的培养过滤液可以诱导出IL-12p40.而热杀死卡介苗过滤液却不能产生IL-12p40.结论 活的卡介苗分泌到培养上清液中的热稳定物质可以诱导细胞因子的大量产生.     

弓形虫感染者血清IgM和IgG抗体免疫印迹谱分析

目的探索近期和慢性弓形虫感染的免疫诊断标志物。方法采用无毒灵敏的TMB为底物的酶联免疫印迹技术,分析弓形虫感染者IgM或IgG抗体阳性血清与弓形虫速殖子可溶性抗原的免疫反应谱。结果IgM抗体对p35、p38和p22的识别比例达80%以上,且反应带出现率较其它抗原组分高,而p32、p30与IgG抗体的反应带出现率和识别比例也分别高达40%和80%以上。其中,反应最强烈最具代表性的分别属p35(出现率81.5%,P<0.0001)和p32(出现率57.1%,P<0.0001)。结论p35、p38、p22可能为近期弓形虫感染的诊断标志物,p32和p30则可能是慢性弓形虫感染的诊断标志物。     

双抗体夹心ELISA法检测HIV-1 p24抗原的初步建立

目的 建立敏感、特异的艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1) p24抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,为试剂盒的研制奠定基础.方法 用纯化的基因工程p24表达抗原免疫小鼠及兔子,获得单克隆抗体(单抗)及多克隆抗体(多抗),用单抗包被酶标板,辣根过氧化物酶标记多抗,初步建立HIV-1 p24抗原的ELISA检测方法.进一步与美国杜邦公司的HIV-1 p24抗原检测试剂同时检测88份HIV感染者血清和50份健康献血员血清中的p24抗原,确定其特异性;采用倍比稀释法的p24抗原标准品,测定试剂的灵敏度.结果 两种方法检测88份HIV感染者血清和50份献血员血清中的p24抗原.结果 均为阴性(符合率为100%);自建ELISA法检测HIV-1 p24抗原的灵敏度为100pg/ml.结论 初步建立了检测HIV-1 p24抗原的ELISA法,与国外同类试剂比较,本法的特异性和灵敏度均接近国外同类试剂,有较好的特异性和灵敏度,为进一步研制HIV-1 p24抗原ELISA检测试剂盒打下了基础.     

卡介苗诱导小鼠产生保护性免疫的机制研究

目的　为了探索结核感染保护性免疫的产生机制及主要抗原成分。方法 我们调查了小鼠PEC细胞分别经活卡介苗和热杀死卡介苗刺激后,所产生的IL-12p40,IL-18和γ-干扰素的水平。调查卡介苗菌体裂解液和培养过滤液诱导细胞因子能力。结果 活的卡介苗可以激活巨噬细胞,诱导出IL-12p40和IL-18,而死的卡介苗却不能。活的和死的卡介苗菌体裂解物都可以诱导细胞产生IL-12p40。活的卡介苗的培养过滤液可以诱导出IL-12p40。而热杀死卡介苗过滤液却不能产生IL-12p40。结论 活的卡介苗分泌到培养上清液中的热稳定物质可以诱导细胞因子的大量产生。     

胃癌及癌前病变p53蛋白及Ki-67抗原检测的临床意义

应用免疫组织化学法检测胃癌和癌前病变p53蛋白、Ki-67抗原的表达.结果 正常胃黏膜无p53蛋白和Ki-67抗原表达.从萎缩性胃炎、肠上皮化生、胃黏膜异型增生至胃癌,p53蛋白和Ki-67抗原阳性表达率逐渐升高.胃癌及胃黏膜异型增生p53蛋白和Ki-67抗原阳性表达率显著高于萎缩性胃炎和肠上皮化生,差异有统计学意义（P＜0.05）;胃癌与胃黏膜异型增生、萎缩性胃炎与肠上皮化生比较p53蛋白和Ki-67抗原表达差异无统计学意义（P＞0.05）.认为p53蛋白和Ki-67抗原的检测有助于胃黏膜癌变的早期诊断.     

肝癌抗原肽冲击转染p53的树突状细胞对荷瘤小鼠免疫功能的影响

树突状细胞（DC）是体内功能最强大的专职性抗原呈递细胞，它们能高效摄取、处理抗原，并将多肽呈递给静息型T细胞，引起针对此抗原的特异性免疫反应。我们将全长野生型p53基因（wt—p53）转染小鼠骨髓来源的DC，然后用肝癌抗原肽修饰已转染野生型p53的DC（wt—p53DC），利用这种DC诱导小鼠脾脏淋巴细胞特异的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）。     

卡氏肺孢子虫P55抗原表位与蛋白特性的分析

目的预测p55抗原表位及蛋白性质。方法运用生物信息学方法推测p55抗原表位及蛋白性质，分析预测结果。结果p55蛋白存在多个潜在的抗原表位，T细胞表位按预测积分高低排列位于141-158，54-68，123-137，349-364，397-414位氨基酸残基；B细胞表位在37-41，74-79，111-119，148-161，199-210，240-250，256-266，295-314，322-360位氨基酸残基等部位。P55重组融合蛋白为可溶性蛋白的概率是92％。结论p55抗原表位可能主要存在于148-161、295-320、337-356氨基酸序列区域内或其附近。该预测p55抗原表位可以有目的地克隆重组基因片段，为研究高效的表位疫苗奠定基础。     

纳米粒子-DNA疫苗治疗屋尘螨抗原过敏的研究进展

在屋尘螨多种变应原中,Der p1和Der p2是研制屋尘螨变应原疫苗主要的特异性抗原,而Der p2由于较Der p1更稳定和耐降解正逐渐取代后者.传统的过敏原特异性治疗的周期长、易产生不良反应、患者依从性差,口服DNA疫苗可以消除上述困难,但义难以克服消化道中的各种屏障,利用纳米粒子包被DNA疫苗可以有效保护DNA疫苗不被降解,因此得到了广泛认可.本文就纳米粒子-DNA 疫苗治疗屋尘螨抗原过敏的研究进展作一综述.     

区分抗原抗体HIV检测策略的临床应用

<正>人体感染HIV后,各种HIV检测试剂的检出能力通常以检测窗口期来评价,HIV RNA是目前检测HIV感染最敏感的指标^[1]。p24抗原在感染10天左右即可在血浆中检测到,并常在50天左右被清除^[2-3],这也是HIV p24抗原检测作为早期感染指标的重要原因。     

红细胞血型RAPH抗原研究进展

正RAPH抗原是原来"系列抗原"中的高频抗原MER2抗原(901011)。1987年发现和确认了这个抗原的基因位点和遗传性。2004年ISBT确认了这个抗原属于独立的系统抗原,并给予抗原的命名是RAPH,编号是025,到目前该系统只确认了一个抗原;即RAPH1,025001或称MER2。本文就RAPH抗原近年来的研究进展做一简略介绍。1 基因RAPH抗原的基因位点在11号染色体短臂;11p15,5,基因名:MER2或CD151,基     

一种检测非小细胞肺癌患者血清中p53自身抗体的新方法

背景与目的多肽阵列是近年来发展起来的一种研究分子之间相互作用的方法。本研究拟建立多肽阵列检测非小细胞肺癌患者血清中p53自身抗体的方法，筛选p53自身抗体识别的抗原决定簇序列。方法利用点合成技术（SPOT synthesis technique）合成覆盖p53多肽链全部序列的多肽阵列；分别用ELISA和多肽阵列检测血清中的p53自身抗体，确定p53自身抗体识别的抗原决定簇序列。结果将包含p53多肽链全部序列的重叠肽段合成到硝酸纤维素膜上。多肽阵列检测30例非小细胞肺癌患者血清中的p53自身抗体，有7例为阳性，30例健康对照者均为阴性，与ELISA检测结果相同。P53自身抗体识别p53多肽链上某些共同的抗原表位。结论多肽阵列不仅可以用来检测肺癌患者血清中的自身抗体，还可以筛选这些自身抗体识别的抗原表位，为下一步研究自身抗体与非小细胞肺癌的早期诊断和预后的关系奠定基础。     

胃黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤中p16蛋白和Ki-67抗原的表达及意义

目的 探讨p16蛋白和Ki-67抗原在胃黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤(MALTL)发生、发展中的作用.方法 选择我院病理科1993年3月至2005年6月期间经病理诊断的胃MALTL手术标本,均经2位以上病理科医师会诊筛选,从中确定胃MALTL患者47例.应用免疫组织化学法检测p16蛋白和Ki-67抗原在20例正常胃黏膜组织和47例胃M?cLTL组织中的表达.结果 胃MALTL组织中p16蛋白表达阳性率21.3%(10/47)明显低于胃正常组织(90.0%).伴淋巴结转移的胃MALTL组织中p16蛋白阳性率低于无淋巴结转移组(P<0.05),Ki-67抗原表达的阳性率为87.2%(41/47),明显高于胃正常组织(P<0.05).p16蛋白表达与Ki-67分级呈明显负相关(P<0.05).结论 联合检测p16蛋白和Ki-67抗原有助于评估胃MALTL患者的预后及指导临床治疗.     

粪便p53基因突变检测在结直肠癌诊断中的应用

目的 探讨粪便p53基因突变检测对结直肠癌的诊断价值,旨在建立一种非侵入性的结直肠癌筛检的方法。方法 应用PCR-单链构象多态性分析-溴乙锭染色方法,检测40例结直肠癌、20例结直肠腺瘤及15例胃癌患者肿瘤组织和粪便标本p53基因突变。结果 40例结直肠癌患者粪便p53相应外显子DNA片段扩增率为90％,20例结直肠腺瘤为85％,15例胃癌为93％。所有标本总的扩增率为89％。40例结直肠癌患者组织标本中29例存在p53突变(72．5％),其中23例粪便测及p53突变,检测敏感性为57．5％,明显高于粪便隐血及血癌胚抗原检测的阳性率(P＜0．05);20例结直肠腺瘤患者组织标本中3例存在p53突变(15．0％),且均测及粪便p53基因突变。15例胃癌患者组织标本中10例存在p53突变(67．7％),粪便均未测及p53突变。结论 粪便p53基因突变检测诊断结直肠癌的敏感性较高,有望成为早期诊断大肠癌的一个相对敏感、特异、有效的指标,尤其在大范围人群筛检时。     

适于HIV-1 p24抗原检测试剂的单抗制备与筛选

目的制备抗HIV-1p24单克隆抗体(单抗,McAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立HIV-1p24抗原检测试剂。方法以基因工程原核重组抗原HIV-1p24蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备单克隆抗体,单抗经纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测p24蛋白的最佳配伍单抗以期建立HIV-1p24抗原检测试剂。结果成功筛选到16株稳定分泌抗HIV-1p24单抗的杂交瘤细胞株,并从中筛选出最佳单抗配伍组合“16G12+2F2b-HRP”,该组合对p24蛋白的检测灵敏度为20pg/mL,对感染性克隆pNL4-3表达的HIV病毒培养上清检测呈阳性,对100份HIV阴性人血清无非特异性反应,显示出良好的检测灵敏度和特异性。结论本研究初步成功地建立了HIV-1p24抗原的检测试剂,并为最终建立HIV第四代诊断试剂(HIV Ag/Ab Assay)奠定了坚实的基础。     

p53诱导细胞衰老基因机制研究最新进展

p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因.在短短的二十多年里,人们对 p53基因的认识经历了癌蛋白抗原,癌基因到抑癌基因的三个认识转变,现已认识到,引起肿瘤形成或细胞转化的p53蛋白是p53基因突变的产物,是一种肿瘤促进因子,它可以消除正常p53的功能,而野生型p53基因是一种抑癌基因,它的失活对肿瘤形成起重要作用.     

鼠疫耶尔森菌F1抗原蛋白大肠杆菌分泌表达载体的构建

目的构建鼠疫耶尔森菌F1抗原蛋白的大肠杆菌分泌表达载体。方法 PCR法扩增鼠疫耶尔森菌的F1抗原基因,并插入大肠杆菌分泌表达载体p BAD/gⅢC中构建分泌表达载体。结果扩增出了长约500 bp的鼠疫耶尔森菌F1抗原基因并构建了该抗原的大肠杆菌分泌表达载体。结论本研究中我们用载体p BAD/gⅢC构建鼠疫耶尔森菌F1抗原的大肠杆菌分泌表达质粒,为后期制备针对鼠疫F1抗原的单克隆抗体或多克隆抗体,进一步建立便捷高效的鼠疫诊断方法奠定基础。     

纳米粒子-DNA疫苗治疗屋尘螨抗原过敏的研究进展

在屋尘螨多种变应原中,Der p1和Der p2是研制屋尘螨变应原疫苗主要的特异性抗原,而Der p2由于较Der p1更稳定和耐降解正逐渐取代后者.传统的过敏原特异性治疗的周期长、易产生不良反应、患者依从性差,口服DNA疫苗可以消除上述困难,但又难以克服消化道中的各种屏障,利用纳米粒子包被DNA疫苗可以有效保护DNA...     

HIV—1感染者确认实验带型分析

对169份初筛为HIV阳性的血清进行确认实验,发现166份为HIV—1阳性,2份可疑,1份阴性.阳性反应中,外膜蛋白抗原gp160出现频率最高,为100%;多聚酶抗原p66为97%,核心抗原p24为95.2%,提示这三种抗原为HIV-1感染的重要的标志性抗原.其中有20份样本出现HIV—2型反应条带,感染类型需进一步证实.