应用多重套式RT-PCR检测儿童急性淋巴细胞白血病的融合基因

目的　研究染色体结构易位所致的融合基因在儿童急性淋巴细胞白血病 (ALL)的表达。方法　采用多重套式RT PCR结合染色体R带或G带核型分析、流式细胞仪细胞免疫表型检测对 64例儿童ALL进行分析。结果　64例ALL患儿中 23例(36. 0% )具有 13种染色体畸变产生的融合基因,包括E2A/PBX1,E2A/HLF,TEL/AML1,TLS/ERG,MLL/AF4,MLL/AF9,MLL/AF10,MLL/AFX,MLL/AF6,MLL/ELL,dupMLL,TAL1D,HOX11。ALL患儿融合基因和染色体总畸变率为 67. 2%(43 /64)。结论　多重套式RT PCR结合染色体核型、免疫表型是儿童ALL临床诊断、治疗和预后判断的重要依据。     

儿童急性白血病MLL基因的检测及临床意义

目的对儿童急性白血病(acute leukem ia,AL)MLL基因重排进行临床和实验研究。方法采用荧光原位杂交(FISH)和多重RT-PCR技术,联合染色体R带核型分析及流式细胞仪免疫表型检测,对27例儿童AL进行分析。结果25例儿童AL中的9例(36.0%)有MLL重排,ALL中的发生率为4.0%,AML中的发生率为3.7%。多重RT-PCR检测到MLL易位产生的融合基因4例,分别为MLL/AF4 2例、MLL/AF9和MLL/AF10各1例;27例白血病患儿进行了染色体核型分析,22例(81.5%)有克隆性染色体异常。在MLL重排中ALL均为B系ALL,AML均为M5b。结论MLL基因重排可能与儿童急性单核细胞白血病和B细胞系ALL有关。     

MLL基因重排急性白血病患儿的临床和生物学特点研究

目的对儿童急性白血病进行混合谱系白血病(mixed lineage leukemia，MLL)基因重排的临床和实验研究：方法应用MLL双色荧光原位杂交(FISH)基因探针进行双色FISH，以13对引物行多重RT—PCR检测融合基冈，并联合染色体R带核型分析及流式细胞仪免疫表型检测，对298例儿童急性白血病中16例含有MLL基因重排患儿进行分析：结果MLL基因重排的白血病在儿童急性白血病中占5.4％，而在婴幼儿白血病中占56．3％；对106例患进行多重RT—PCR，检测到涉及MLL基因重排11例，其中MLL／AF42例，MLL／AF61例，MLL／AF6、MLI／ELL合并MLL／AFX或HOX11各1例，MLL／AF92例，MLL／AF101例，MLI／ELL2例。串联重复dup11q231例，HOX活化1例；27例进行了FISH检测，发现9例有MLL重排，其阳性率为36．0％；16例MLL基因重排患儿中14例(87．5％)有克隆性染色体异常，其中11例累及11号染色体[t(4；11)2例，t(6；11)、t(8；11)、t(7；8；11)、t(9；11)各1例， 112例，11q-3例]；16例MLL基因重排患儿中11例为B系ALL，以B祖细胞或前B细胞白血病为主，5例为急性单核细胞白血病，其中3例有CD7和CD2淋系抗原表达；16例MLL基因重排患儿中8例接受治疗，7例获得完全缓解。结论多重RT—PCR和FISH联合是检测MLL重排最精确和灵敏的方法，MLL基冈重排中包括易位、缺失和重复。MLL基因重排的检测对儿童急性白血病预后判断和治疗方案的选择具有重要意义，并且对WHO分型将其单独列为11q23／MLL白血病提供了有力的依据。     

儿童急性淋巴细胞白血病细胞遗传学特征分析

目的 分析儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞遗传学变化的特点.方法 以2009年1月至2011年11月确诊的90例初发ALL患儿为研究对象,采用染色体核型分析及荧光原位杂交(FISH)技术检测患者骨髓白血病细胞的细胞遗传学和分子生物学变化.结果 ①染色体核型分析:有分裂象者66例,其中异常者35例(53.0%);无分裂象者24例.②FISH检测:对31例染色体核型正常和24例无分裂象的患者进行FISH检测,异常者分别为7例(占22.6%)和14例(58.3%),其中无分裂象患者异常检出率与有分裂象者核型分析异常检出率差异无统计学意义(P=0.655);55例患儿中TEL-AML1融合基因阳性16例(29.1%),MLL重排3例(5.5%),bcr-abl融合基因阳性2例(3.6%).③90例患儿通过两种检则方法 共检出细胞遗传学异常56例(占62.2%).结论 儿童ALL易出现细胞遗传学改变;对于有足够分裂象的患者,常规染色体核型分析仍是可靠的方法,对分裂象质量低或无分裂象的儿童ALL患者,FISH检测异常克隆能提高细胞遗传学异常检出率.     

多重RT-PCR在初发急性淋巴细胞白血病患儿中检测不同融合基因的诊断价值

目的:分析多重逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对初发急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿检测不同融合基因的诊断价值。方法:回顾性分析西安医学院第二附属医院2012年9月至2017年9月收治的80例ALL患儿的临床资料,对患儿进行免疫表型、染色体核型及融合基因分析。结果:免疫表型结果显示,髓系+B系混合表达2例,早期B表达2例,前B表达58例,CD13合并前B表达11例,CD5合并前B表达4例,CD2合并前B表达3例。染色体核型分析结果显示,72例行染色体核型分析的患者,其中无法分析5例,染色体核型正常27例,异常11例,无分裂相29例。80例ALL患儿中,共有30例(37.50%)存在6种融合基因表达,分别为MLL/AF9、CBF/MYH 11、BCR/ABL、TLS/ERG、MLL/ENL及TEL/AML1。3例MLL/AF9融合基因表达[t (9; 11)]患儿中2例早期治疗反应不良而经过加强化疗后获得完全缓解,1例行骨髓移植;1例CBF/MYH 11融合基因表达患儿家属放弃治疗;4例BCR/ABL融合基因表达[t (9; 22)(q34; q11)]患儿均为早期治疗反应不良,经加强化疗后获得完全缓解,缓解期间复查该融合基因均为阳性,其中行骨髓移植2例;1例TLS/ERG融合基因表达[t (16; 21)]患儿为早期治疗反应不良,经加强化疗后获得完全缓解;2例MLL/ENL融合基因表达[t (11; 19)]患儿化疗过程中均复发;19例TEL/AML1融合基因表达[t (12; 21)]患儿中获得完全缓解15例,部分缓解4例。结论:基因分型可弥补白血病常规分型—MICM分型的不足,通过多重RT-PCR方法可迅速测定ALL患儿染色体畸变所引起的融合基因。     

多重RT-PCR方法同时检测29种白血病融合基因

目的 探讨同时检测白血病29种染色体结构畸变形成的融合基因与MIC分型的关系。方法 采用多重巢式RT—PCR方法对191例儿童白血病29种染色体结构畸变形成的融合基因进行分析。结果 191例白血病患骨髓或外周血标本中，86例(45．0％)具有14种染色体结构畸变产生的融合基因，包括SIL/TAL1、MLL/AF1q、E2A／PBX1、MLI/AF6、AML1／ETO、MLL/AF9、TEL/ABL、BCR／ABL、MLL/AF10、dupMLL、MLL/ENL、TEL/AML1、PML/RARα、CBFβ/MYH11。在31例患中检出HOX11原癌基因活化，其中15例(7．8％)伴有其它染色体结构畸变产生的融合基因，16例(8．4％)只检出HOX11原癌基因的活化，未伴有其它融合基因。结论 采用多重巢式RT—PCR方法，可快速分析29种染色体结构畸变产生的融合基因，可同时筛选出29种急性白血病的常见染色体易位，帮助化疗和骨髓移植后微量残留病的检测。     

MLL基因重排阳性的儿童急性淋巴细胞白血病的融合基因及免疫表型特点

为了探讨混合谱系白血病（mixed linage leukemia,MLL）基因重排阳性的儿童急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）融合基因与免疫表型的特征,利用多重巢式聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）方法检测601例ALL患儿中MLL基因重排的发生率,通过对PCR产物的测序,分析融合基因的亚型及特点;比较分析重排阳性的22例患儿与同期未检出任何融合基因的随机抽取的30例ALL患儿及43例pro—B—ALL患儿初诊时免疫表型特点。结果表明：MLL基因重排阳性的ALL患儿检出率为3．66％,占pro—B—ALL的29．9％。20例MLL基因重排阳性的B—ALL患者全部为CD10^-,表达CD13、CD33和CD34的例数较pro—B—ALL对照组低,CD20、CD22、CD2、CD5、CD7的表达则无差异。共检出4种MLL基因的伙伴基因AF4、AF9、AF10和ENL。MLL基因融合位点主要位于第6、7、8外显子,同一患者可同时存在多种MLL基因融合位点;而其伙伴基因的融合位点相对单一。1例患儿MLL—AF10融合转录本存在随机插入序列。结论：MLL基因重排的发生率低,重排形式多样,阳性ALL患儿在免疫表型及融合转录本的表达方面具有独特的生物学特征。     

原发性骨髓增生异常综合征患者染色体核型与IPSS 危度分组:FAB与WHO分型比较

目的　比较原发性骨髓增生异常综合征 (pMDS)患者WHO(2 0 0 1)分型和FAB分型的亚型与细胞遗传学异常及预后的相关性。方法　按FAB标准确诊并进行了染色体核型分析的 2 37例pMDS患者 ,重新进行血片和骨髓片分类计数并按WHO标准进行分型 ,对两种分型结果的染色体核型异常和国际预后积分系统 (IPSS)危度分组与各亚型的关系进行比较。结果　按FAB标准分型各亚型的染色体异常检出率及染色体异常危度分组无显著性差异 ,按WHO标准分型的难治性血细胞减少伴多系发育异常 (RCMD)患者与RA患者染色体核型异常检出率有显著性差异 (分别为 74 .4 %和 4 2 .5 % ,P <0 .0 0 1) ,IPSS预后好的染色体核型比例RA组 (6 5 .0 % )明显高于RCMD组 (2 4 .4 % )(P <0 .0 0 1) ,中等及差的染色体核型比例RCMD组 (分别为 4 8.9% ,2 6 .7% )明显高于RA组 (分别为 2 7.5 % ,7.5 % ) (P <0 .0 5 )。WHO分型与FAB分型一样 ,各亚型与IPSS危度分组有较好的相关性 ,WHO分型的RCMD低危组比例 (1.1% )较RA(10 .0 % )明显减低 (P <0 .0 5 ) ,RAEB Ⅱ高危组比例 (30 .5 % )较RAEB Ⅰ (0 )明显增高 (P <0 .0 0 1)。结论　pMDS的WHO分型较FAB分型与遗传学异常及预后的相关性更好     

397例急性白血病细胞遗传学与FAB分型相关性研究

本研究探讨急性白血病的细胞遗传学改变,了解染色体核型异常与急性白血病FAB分型的关系及其对预后因素的影响。397例急性白血病患者于治疗前抽取骨髓标本,采用短期细胞培养法制备染色体标本,应用G显带技术进行染色体核型分析。结果显示,397例急性白血病中78例无分裂相,319例可供染色体核型分析的患者中染色体核型异常175例(占54.9%)。在急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓系白血病(AML)和急性混合细胞白血病(AMLL)3种类型的白血病患者中,染色体核型异常分别为33/120例(占27.5%)、129/252例(占51.2%)和13/25例(占52.0%)。超二倍体41例(占23.4%),亚二倍体22例(占12.5%),正常二倍体112例(占64.0%)。AML染色体核型异常中与FAB分型相关的特异性染色体重排74/129例(占57.4%)。结论:大约55%左右的急性白血病存在克隆性染色体异常,一些特异性染色体异常改变是急性白血病的细胞遗传学特征,与急性白血病的FAB分型有明显相关性,染色体检查和分子遗传学方法相结合,对于白血病的诊断、分型、治疗和预后都具有重要意义。     

安徽省儿童白血病的融合基因及染色体核型分析

目的:探讨儿童白血病融合基因和染色体核型的分析对白血病临床分型及治疗的意义。方法:回顾性分析2018年4月至2019年4月87例在安徽省儿童医院确诊为白血病患儿的融合基因以及染色体核型。结果:87例白血病患儿年龄1~10岁占比86.2%。所有患儿中,淋系白血病(ALL)60例(69.0%),髓系白血病(acute myeloblastic leukemia,AML)27例(31.0%)。融合基因阳性白血病38例(43.7%),常见融合基因型有TEL-AML1、AML1-ETO、E2A-PBX1和BCR-ABL。染色体核型异常55例(63.2%),未检出异常29例(33.3%),3例未做此项检测。与融合基因匹配的特异性典型核型18例(32.7%),复杂核型37例(67.3%)。结论:安徽省儿童白血病以淋系白血病为主,年龄集中在1~10岁。融合基因类型与染色体核型异常基本一致,但是其中TEL-AML1融合基因与核型检测结果完全不匹配,因此融合基因检测和骨髓细胞核型分析对于儿童白血病的具体分型兼具重要作用。     

成人急性淋巴细胞白血病的分型探讨

目的 研究成人急性淋巴细胞白血病(ALL)生物学特征,分析WHO 2008年ALL分类的变化.方法 应用流式细胞术、R显带常规核型分析法、RT-PCR技术对初诊成人ALL患者进行免疫学、细胞遗传学、分子生物学检测.结果 ①共412例初诊成人ALL患者,男性239例,女性173例.免疫表型可分析病例410例,B系357例...     

联合间期和中期荧光原位杂交确定成人急性白血病患者11q23/MLL异常

目的 探讨快速、敏感、有效揭示11q23／MLL基因重排的方法，确定11q23／MLL异常存成人急性白血病（AL）中的发生情况及其临床特征，指导AL风险治疗。方法112例成人AL患者骨髓细胞经24h短期培养按常规方法制备染色体标本，R显带行核型分析；LSIMLL双色分离信号DNA探针行间期荧光原位杂交（FISH）筛选异常信号，有异常信号者行中期FISH确定11q23／MLL基因重排。结果 112例AL患者FISH揭示9例11q23／MLL易位（检出率8．0％），其中常规细胞遗传学分析（CCA）只检出4例（检出率3．6％）。3例CCA示del（11）（q23）者FISH揭示2例为11q23／MLL易位，1例为11号染色体长臂末端缺失。在1例正常核型、1例11q＋和1例无11q23明显异常者，FISH揭示为11q23／MLL易位。除9例易何外，FISH揭示8例存在MLL基因扩增，包括多倍体、均匀染色区（hsr）和双微染色体（dmin）。AL伴11q23／MLL异常者多诊断为B系祖细胞急性淋巴细胞白血病（pro-B ALL）、急性单核细胞白血病（AMoL）或急性双表型白血病（BAL）。结论 使用MLL双色分离信号DNA探针行FISH确定11q23／MLL异常是快速敏感的方法，其检出率高于CCA，有效揭示11q23／MLL易位和扩增。临床诊断pro-B ALL、AMoL或BAL，尤其正常核型者应行FISH以确定11q23／MLL异常。     

MLL基因重排在成人急性白血病中的检测和临床特征研究

混合系白血病(MLL)发生基因重排在成人急性白血病中相关研究较少。本研究通过3种技术组合检测MLL基因重排,探究其在成人急性白血病中的发生率、伙伴基因类型、伴MLL基因重排的急性白血病临床特征和预后并评估该组合检测的临床应用价值。对183例成人急性白血病患者采用常规细胞遗传学、分离信号FISH和多重巢式PCR 3种技术组合检测MLL基因重排。结果显示,成人急性白血病中MLL基因重排发生率低(8.2%);重排类型在急性淋巴细胞白血病(ALL)中MLL-AF4最常见,急性髓系白血病(AML)中MLL-AF6和MLL-AF9最常见;MLL基因重排患者髓外浸润占40%,诱导治疗30 d内完全缓解率33.3%,3个月复发率和6个月生存率各为50.0%和50.0%。结论:本研究中常规细胞遗传学技术对MLL基因重排的漏检率高达60%,因此常规细胞遗传学,分离信号FISH和多重巢式PCR结合检测MLL基因重排具有重要的预后意义和指导临床治疗价值。     

儿童B系急性淋巴细胞白血病TEL-AML1融合基因的研究

目的了解ＴＥＬＡＭＬ１融合基因在儿童Ｂ系急性淋巴细胞白血病（急淋）中的发生率及其与临床诊断和预后的关系,并比较巢式逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）和双标记荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）两种方法。方法采用巢式ＲＴＰＣＲ和双标记ＦＩＳＨ技术检测ＴＥＬＡＭＬ１融合基因。结果和结论ＲＴＰＣＲ检测发现儿童Ｂ系急淋中２２．５％（４０例中９例）的患者有ＴＥＬＡＭＬ１融合基因转录本,这类患者预后较好,完全缓解率达１００％。ＲＴＰＣＲ和ＦＩＳＨ技术是检测ＴＥＬＡＭＬ１的有效方法,并为临床诊断和预后估计提供了有一定价值的手段。     

多重PCR检测基因抗原受体重排在儿童急性淋巴细胞白血病诊断中的应用

目的 建立多重PCR方法检测免疫球蛋白（Ig）和T细胞受体（TCR）基因重排,探讨在儿童急性淋巴细胞白血病诊断和鉴别中的作用.方法 参照BIOMED-2协作组制定的Ig和（或）TCR检测方法,对儿童ALL患儿114 例,分别检测患者骨髓单个核细胞的IgH、IgK、TCRG和TCRB基因重排.结果 在105例B系儿童ALL患者中,克隆重排的检出率分别为IgH 73%、IgK34%、TCRG 44%和TCRB 35%,所有B-ALL患者Ig基因重排检出率可达85%;在11例T系ALL患者中,克隆重排的检出率分别为TCRB 82%和TCRG 73%,T-ALL 患者TCR基因重排检出率可达100%.结论 BIOMED-2引物系统可以检测出绝大多数儿童ALL患者的Ig/TCR基因重排,是一种有效的检测工具,值得在临床中推广使用.