水飞蓟宾-卵磷脂复合物对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　了解水飞蓟宾 -卵磷脂复合物 (SLC)对大鼠脑缺血 -再灌注损伤的保护作用。方法　 5 0只SD大鼠随机分为 5组 ,分别设为伪手术组、单纯模型组、低剂量SLC组(SLC - 1)、高剂量SLC组 (SLC - 2 )和Silybin组。以伪手术组做对照 ,观察水飞蓟宾和 2种剂量的SLC对大鼠脑缺血 -再灌注损伤模型脑组织含水量、病理学改变、血浆丙二醛 (MDA)含量的影响。结果　 (1)除伪手术组外 ,各组大鼠均出现脑水肿改变。 (2 )伪手术组脑组织含水量低于其它各组 ,单纯模型组脑组织含水量明显高于SLC - 1组、SLC - 2组和Silybin组 ,SLC- 1组脑组织含水量类似于Silybin组 ,而明显高于SLC - 2组。 (3)血浆MDA含量伪手术组低于其它各组 ,单纯模型组明显高于SLC - 1组、SLC - 2组和Silybin组 ,SLC - 1组类似于Silybin组 ,而明显高于SLC - 2组。 结论　水飞蓟宾和SLC对大鼠脑缺血 -再灌注损伤均有保护作用 ;SLC作用优于水飞蓟宾 ,并在一定范围内显示出量 -效关系     

水飞蓟宾类黄酮木质素衍生物的研究进展

水飞蓟是多国药典收载的天然药物,具有抗氧化、抗纤维化、抗炎、免疫调节以及肝细胞再生作用,临床用于治疗肝炎、脂肪肝、肝硬化、缺血性损伤、辐射损伤等。近期随着水飞蓟宾以抗肿瘤新药进入Ⅱ期临床试验,对其衍生物、构效关系以及抗氧化机制等的研究进入加速阶段。本文综述了近年来水飞蓟宾和脱氢水飞蓟宾的近百种衍生物及其活性研究结果,并对该类黄酮木质素类化合物今后的发展和设计研究状况做一概述。     

水飞蓟宾磷脂复合物对小鼠肝损伤的保护作用

目的 研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(SPC)对D-半乳糖胺(D-galN)和脂多糖(LPS)与卡介苗(BCG)诱导的小鼠肝损伤实验的影响.方法 将100只小鼠随机分成10组,分别用于SPC对D-galN和LPS+ BCG诱导的小鼠肝损伤影响实验.分别用D-galN和LPS+ BCG复制肝损伤动物模型,测定血清中ALT、AST和肝组织中TG水平并进行肝脏病理组织学检查.用200mg.Kg-1SPC剂量对2种肝损伤小鼠进行处理,观察SPC对血清酶学及组织学改变的影响.结果 SPC不同程度的使D-galN和LPS+ BCG诱导升高的ALT、AST和TG明显降低(P<0.05),并能减轻两种肝损伤动物模型肝脏组织学结构的改变.结论 SPC对D-galN和LPS+ BCG诱导的肝损伤具有明显的保护作用.     

水飞蓟宾(Silybin)吸收系数的测定

水飞蓟宾及其水溶性衍生物和制剂的含量测定系采用紫外分光光度法。为了简化分析手续和克服制备标准品的困难,有必要测定水飞蓟宾的百分吸收系数。据报道Bandarenko等的测定值为383±4.4,我们初次测定值为428.6。本文用进一步精制的水飞蓟宾纯品进行精密测定,其E_(1cm)~(1％)288nm值为456.1±1.8。一、条件选择 1.溶剂选择:分别以无水乙醇和95％乙醇作溶剂,对照试验表明:两者最大吸收波长288±1nm无改变,但所测得的吸收度明显下降,且溶解度不大理想,故仍采用无水乙醇作溶剂。     

水飞蓟宾葡甲胺片治疗病毒性肝炎临床疗效观察

目的观察水飞蓟宾葡甲胺片治疗病毒性肝炎的疗效。方法对照组30例,以肌苷、门冬氨酸钾镁、维生素C加至10%葡萄糖溶液静脉滴注治疗。治疗组32例,在对照组基础上加用水飞蓟宾葡甲胺片150mg口服,3次/d共4周。结果治疗组在ALT、TB恢复正常率及主要症状的改善上与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。并无任何不良反应。结论水飞蓟宾葡甲胺片对病毒性肝炎有明显治疗作用。     

水飞蓟宾对艾滋病合并肝炎治疗的辅助疗效观察

目的考察水飞蓟宾对艾滋病合并肝炎治疗的辅助疗效。方法收集2010年5月～2011年6月在我院住院治疗的艾滋病合并丙型肝炎病患75例,随机分为两组,治疗组39例,水飞蓟宾组36例。结果两组治疗前病毒载量、CD4+、CD8+、NK、肝功能和血脂在治疗前无显著差异(P>0.05)。与治疗前比,两组病毒载量、CD4+、CD8+和NK均有不同程度的改善(P<0.05),但两组之间无显著差异(P>0.05),对照组肝纤维化程度和血脂无显著差异(P>0.05),水飞蓟宾组的肝功能指标显著改善,肝纤维化程度较低(P<0.05),血脂指标显著改善(P<0.05)。结论水飞蓟宾可改善长效聚乙二醇化干扰素(PEG-IFNa-2a)治疗艾滋病合并肝炎治疗的疗效,尤其可改善肝功能,减少肝纤维化程度和血脂水平。     

水飞蓟宾对H2O2诱导SH⁃SY5Y细胞损伤的保护作用及机制

目的：探究水飞蓟宾对过氧化氢（H2O2）诱导SH?SY5Y细胞损伤的保护作用及可能机制。方法：采用体外培养方法,建立SH?SY5Y细胞的H2O2损伤模型。用水飞蓟宾预处理细胞后MTT法测定细胞的存活率;流式细胞术检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）、细胞凋亡和线粒体膜电位的变化;Western blot法检测Cleaved?Caspase?9、Cleaved?Caspase?3蛋白表达情况。结果：与模型组比较,用50和100 μmol/L水飞蓟宾预处理SH?SY5Y细胞3 h能明显减轻H2O2诱导的SH?SY5Y损伤,显著提高细胞存活率（P < 0.01）和减少凋亡（P < 0.05）,减少细胞内ROS水平,稳定线粒体膜电位（P < 0.05）,使Cleaved?Caspase?9和Cleaved?Caspase?3的表达量下降。结论：水飞蓟宾可以保护SH?SY5Y细胞免受H2O2的损伤,其机制可能与水飞蓟宾的抗氧化性、保护线粒体膜电位和降低Cleaved?Caspase?9和Cleaved?Caspase?3的表达量有关。     

黄芪皂甙对培养乳鼠心肌细胞感染柯萨奇B_3病毒的保护作用

采用1000TCID_(50) COX B_3病毒感染96孔培养板培养的SD乳鼠心肌细胞,分别于感染后1,4,8和24h加黄芪皂甙或黄芪,发现细胞培养液中LDH释放量均显著低于对照组,而DNA合成速率显著高于对照组(P<0.05)。病毒感染后48h培养液病毒滴度(Lg 3.78 TCID_(50)和Lg 4.33 TCID_(50)明显低于对照组(Lg 5.78 TCID_(50))。表明黄芪皂甙和黄芪均有保护心肌细胞免受COX B_3病毒感染的作用。     

病毒性心肌炎细胞感染模型的建立

目的 建立病毒性心肌炎细胞感染模型。方法 以柯萨奇Ｂ３ｍ病毒感染新生ＳＤ大鼠的培养心肌细胞,观察感染后细胞病变、搏动情况及超微结构的变化,检测培养液中心肌酶的改变,测定ＤＮＡ含量。结果 培养的ＳＤ大鼠搏动心肌细胞感染柯萨奇Ｂ３ｍ病毒后,逐步出现细胞病变,细胞停止搏动,电镜下可国胞线粒体肿胀,肌原纤维紊乱,Ｚ线模糊,髓质体增多,细胞周期分析显示细胞受阻于Ｇ１期。结论 该模型可作为体外研究病毒性心肌炎     

大鼠血管平滑肌细胞的培养与鉴定

目的:改进大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的培养方法。方法:采用机械刮除、差异贴壁等手段进行组织贴块法原代培养,胰蛋白酶消化传代,并应用相差显微镜和即用型SABC免疫组化染色试剂盒对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果:镜下培养细胞呈典型的"谷-峰状"生长,免疫组化染色显示胞浆内-αactin阳性表达,锥虫蓝染色检测细胞传代成活率95%。结论:本法可获纯度高、结构和功能良好的VSMCs。     

改良大鼠血管平滑肌细胞的原代培养

目的探讨提高大鼠血管平滑肌细胞原代培养效率的方法。方法采取组织块贴壁法进行原代培养,高糖DMEM培养基中加入血小板源性生长因子-B(platelet-derived growth factor-b,PDGF-B),用细胞形态学及免疫组织化学法对血管平滑肌细胞鉴定。结果原代培养,4～6天可见细胞长出,2周可以传代;传代培养,1周可以传代1次。镜下可见细胞以梭形为主,呈"峰-谷"状生长,免疫组化染色可见细胞浆内有大量染成棕黄色的肌丝。结论在采用组织块贴壁法进行培养时,加入PDGF-B培养,可获得纯度高、活性好的血管平滑肌细胞,并缩短了培养周期。     

复方中药心复康抗柯萨奇B组3型病毒的实验研究

本文采用组织培养法和染料摄入法，观察研究了复方中药制剂心复康对ＨｅＬａ细胞生长以及对柯萨奇Ｂ组３型病毒（ＣＢＶ３）增殖的影响。结果表明，高浓度心复康（稀释度＜１：４）对ＨｅＬａ细胞生长有毒性作用，中低浓度（稀释度＞１：８）对细胞生长无毒性作用，１：６４稀释时似具有促进细胞生长作用。中浓度心复康对ＣＢＶ３增殖有明显抑制作用。比较心复康作用细胞和病毒的不同环节，提示心复康除具有保护细胞减轻病毒感染功能     

柯萨奇B3病毒mAb对心肌细胞形态及多种酶代谢的影响

目的 通过心肌细胞形态学及培养液中多种酶的变化，探讨柯萨奇B3病毒mAb对体外培养心肌细胞的作用。方法 应用间接免疫荧光法将培养小池中用冷丙酮固定的心肌细胞与自备的26种柯萨奇B3病毒mAb(CVB3-mAb)进行反应；并筛选出2种与大鼠心肌细胞结合的阳性mAb(2A3,2G12)，进一步与体外培养搏动的大鼠心肌细胞作用，观察mAb-大鼠心肌细胞培养液中心肌酶的改变，搏动百分比及细胞病变。结果 荧光显微镜下观察，有12本可与大鼠心肌细胞纤维结合，而另外14种无此结合反应。筛选出的2种CVB3－mAb加入搏动的大鼠心肌细胞中，取其不同时间细胞培养液检测。与对照组比较，心肌细胞培养液中心肌酶（CK，CK－MB，LDH，LDH－1，HBDH）及肌钙蛋白I（cTnI)等均增高（P＜0．05），并可引起心肌细胞形态改变。结论 部分病毒抗体可引起心肌细胞形态学及培养液中多种酶的改变，是引起心肌细胞进行性损伤的重要原因。     

自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的培养及鉴定

目的：培养、鉴定自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞,了解生长特性,为血管增生性疾病的治疗研究提供试验材料。方法;采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,用倒置相差显微镜观察其生长情况,用免疫组化染色做鉴定,台盼蓝染色进行活力检测,绘制生长曲线、MTT法测定VSMC细胞的成活率、生长、增殖特征。结果：细胞生长曲线近似“S”形,VSMC传代周期为7-10d,呈典型“峰一谷”状生长,MTT法显示细胞生长第7～9天光密度值变化较明显,免疫组化染色显示胞浆内平滑肌肌动蛋白阳性表达,第2代阳性结果强于4代。结论：正确的利用组织块可以简单、经济、高效地培养出VSCM,为VscM的治疗提供了理想的细胞模型。随传代过程细胞生物学特性发生改变。     

CVB3cDNA重组质粒pGP51B转化作用的实验研究

以大肠杆菌ＨＢ１０１菌株为受体菌，研究了ＣａＣｌ２浓度，转化时间及转化 温育时间对柯萨奇Ｂ组病毒３型ｃＤＮＡ重组质粒ｐＧＰ５１Ｂ转化作用的影响。实验结果表明，ＣａＣｌ２浓度和转化时间对转化率的影响极为显著，而转化后的能时间对转化率的影响不明显。     

灭活CVB1在离体骨骼肌细胞中基因转移的研究

【目的】研究灭活后的柯萨奇病毒B1在原代培养骨骼肌细胞中对报道基因 pCDNA3 LacZ转移效率的影响。【方法】①用聚乙二醇沉淀和蔗糖低温超速离心法提纯并用 β 丙内酯灭活病毒 ;②分别用不同浓度的转铁蛋白聚赖氨酸 (TfpL) LacZ、灭活CVB1 LacZ以及灭活CVB1 TfpL LacZ在肌肉细胞进行基因转移 ,以报告基因产物 β 半乳糖苷酶染色阳性的细胞数作为基因转移效率指标。【结果】灭活CVB1 TfpL LacZ在肌肉细胞中使基因转移效率由TfpL LacZ组的不到1%提高到 15 %～ 2 0 %。【结论】灭活CVB1也能象腺病毒一样促进基因转移 ,CVB1的嗜肌肉特性为在肌肉组织中研究靶向明确的新载体提供了实验依据。