超短波对大鼠视神经挫伤后视网膜神经节细胞和BCL-2/Bax表达的影响

目的 研究大鼠视神经夹伤后,经定期超短波治疗视网膜神经节细胞(RGCs)数量的改变和Bcl-2/Bax蛋白表达的变化.方法 建立大鼠神经夹挫伤动物模型,随机选取5只大鼠作为正常组;选取30只作为实验组,伤后即开始超短波治疗;另外选取30只作为对照组,不接受超短波治疗,二者分别于伤后3d、5d、7d、10d、14d、28d处死.HE染色观察RGCs的动态变化,免疫组化方法检测RGCs表达Bcl-2及Bax的水平.结果 对照组视神经损伤后3d RGCs数目严重下降,2周内RGCs快速减少,2周以后继续减少;实验组神经损伤后3d RGC数目急剧下降,但之后各组RGCs数量没有明显降低;伤后在实验组和对照组中Bcl-2和Bax表达随访后时间延长都有不同程度的减少,Bcl-2/Bax的比值在实验组逐渐升高,对照组无明显升高.结论 神经损伤后RGCs数目减少是其视功能下降的病理基础之一,超短波治疗可提高RGCs的存活率,Bcl-2/Bax在RGCs死亡机制中起重要作用,Bcl-2/Bax比率与RGCs的数目变化有一定程度的相关性.     

PEDF对大鼠视神经急性损伤后神经节细胞的保护作用

目的:观察色素上皮衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)对大鼠视神经急性损伤后视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的保护作用.方法:选取健康雌性SD大鼠60只随机分为:空白组、模型组和实验组,每组各20只.采用视神经夹伤方法,建立大鼠视神经急性损伤模型.模型组制作视神经损伤模型成功后即刻向玻璃体腔注射平衡盐溶液5μL,之后的1、2wk分别向玻璃体腔注射平衡盐溶液5μL;而实验组在视神经损伤模型制作成功后即刻向玻璃体腔注射PEDF 5μL,同样在1、2wk时分别向玻璃体腔注射PEDF 5μL.通过HE 染色,光镜下观察视网膜形态学变化并且对视网膜神经节细胞进行计数.通过免疫组织化学半定量的方法对Bcl-2和Bax的表达进行检测,观察PEDF对受损视神经的影响.结果:HE染色观察,实验组神经节细胞从细胞形态上要好于模型组,且RGCs数量较模型组多.实验组的Bcl-2和Bax的蛋白表达与空白组、模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),实验组较模型组Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达下降.结论:PEDF可通过上调视网膜Bcl-2蛋白的表达、减弱Bax蛋白表达,以减弱或抑制视神经损伤后RGCs的细胞凋亡,减轻视神经损伤.     

脑神经生长素治疗兔急性高眼压视神经损伤

目的 观察脑神经生长素(cranial nerve growthine,CNG)对兔眼急性高眼压视神经损伤的治疗作用。 方法 健康成年新西兰大耳白兔(体重2.5～3.0 kg)30只,随机分为5组,每组6只,一只眼前房内灌注生理盐水使眼压升高到50 mm Hg(1 mm Hg＝0.133 kPa),并维持6 h,另一只眼为自身对照眼。每组3只兔制成高眼压模型眼后肌肉注射CNG0.2 ml/d作为治疗组,其余3只兔为实验组。5组兔分别于制造模型眼后1、3、7、15、30 d处死。用辣根过氧化物酶(horserdish peroxidase,HRP)组织化学染色法和透射电镜技术观察CNG对急性高眼压视神经顺行轴浆运输和超微结构的影响,定量分析CNG的药物疗效。 结果 7 d后,治疗组HRP反应物积分光密度(39.79±2.29)较实验组(25.17±1.03)明显增多,差异有显著性意义(P＜0.01);治疗组视神经轴突变性较实验组轻,15 d后,部分轴突结构恢复正常,线粒体增多,30 d后,轴突结构基本正常。 结论 CNG可改善急性高压眼视神经轴浆运输状况,促进视神经结构的恢复。 (中华眼底病杂志,2000,16:88-90)     

蛇毒神经生长因子对高眼压下兔视网膜髓鞘碱性蛋白的影响

目的 通过对兔视网膜损伤后髓鞘碱性蛋白(MBP)的研究,观察蛇毒神经生长因子(vNGF)对慢性高眼压下兔视网膜神经节细胞(RGCs)的保护作用.方法 24只大白兔右眼前房注入0.3%复方卡波姆溶液0.1mL,制成兔慢性高眼压模型后,随机分为vNGF治疗组和平衡盐液对照组,分别于眼压缓慢升高2周后右眼玻璃体腔内注入vNGF和平衡盐液;3d后重复注药1次.分别于最后1次给药后第5d、10d取材;采用病理图像分析仪计数RGCs数目;进行MBP免疫组织化学染色分析.结果 前房注入复方卡波姆溶液后,眼压在1周内缓慢升高并维持到实验结束,平均眼压(32.93±6.33)mmHg.5d时实验组和对照组的RGCs分别为19.25±2.60和12.88±1.46;10d时实验组和对照组的RGCs分别为16.84±1.52和7.63±1. 72,差异均有统计学意义(P＜0.05).对照组MBP表达高于实验组.结论 vNGF能降低高眼压后视网膜MBP的含量,提高RGCs的存活数量,对RGCs损伤后的修复有明显的促进作用.     

优视胶囊对急性高眼压家兔眼压及神经节细胞的影响

目的：观察优视胶囊对急性高眼压兔眼压的影响及对视网膜视神经的保护作用。方法：采用自行设计的上巩膜静脉扎法建立18只兔眼急性高眼压动物模型,于造模前1周至造模后3天共10天内给予具活化血瘀、开窍明目功效的优视胶囊灌胃,18只造模眼随机分为模型组、低剂量组和高剂量组,每组6眼,与18只正常眼进行对照。实验过程中测量眼压并行视网膜神经节细胞计数。结果：造模后即可获得平均眼压高于6．83kPa并能持续3天以上的高眼压动物模型,优视胶囊高、低剂量组表现出轻微的降眼压作用。①持续性的高眼压可造成视网膜神经节细胞减少,但高、低剂量组表现出轻微的降眼压作用。②持续性的高眼压可造成视网膜神经节细胞减少,但高、低剂量组经优视胶囊治疗后高眼压模型眼神经节细胞数高于模型组,提示优视胶囊具有保护或改善急性高眼压后兔眼视网膜神经节细胞的作用。结论：优视胶囊对急性高眼压兔视网膜神经具有保护的作用。     

兔实验性高眼压视网膜神经节细胞的凋亡

目的 探讨实验性高眼压免眼中是否存在视网膜神经节细胞的凋亡。方法 血细胞注射法诱导青光眼建立大白兔血细胞诱导的高眼压实验动物模型。通过制作视网膜组织超薄切片，透射电镜鉴定视网膜神经节细胞(RGCS)凋亡的存在。制备视网膜细胞悬液，利用流式细胞仪检测高眼压兔眼视网膜神经节细胞凋亡的数量。结果 实验组血细胞注射后眼压有不同程度的升高，透射电镜下可见典型的RGCs凋亡阳性细胞存在，经流式细胞仪检测凋亡率为O.76％，～O．93％。结论血细胞诱导青光眼可得到良好的慢性高眼压实验动物模型，实验性高眼压兔眼中有视网膜神经节细胞的凋亡缔朐稠亡旱免高眼RGCs损伤；流式细胞术     

0.3%尼莫地平眼膏对兔慢性高眼压视神经保护作用的定量研究

目的 定量探讨自行研制的0.3%尼莫地平眼膏对兔慢性高眼压下视神经及视网膜神经节细胞(RGCs)的保护作用.方法 0.3%尼莫地平眼膏(A1组)局部应用于兔慢性高眼压模型,4周后观察视神经及视网膜组织结构的变化,并与正常眼及模型对照眼(A2组)(仅涂眼膏基质)对比.结果 A1组光镜下仅内外核层出现少量细胞丢失,局部出现轻度空泡样变,电镜下各层细胞超微结构基本正常,与A2组有明显差别.A1组视网膜内核层厚度(25.31±11.01)μm与A2组(19.64±10.22)μm相比,差异有统计学意义(P<0.05).A1组视神经轴突直径平均为(1.215±0.064)μm,与A2组(1.504±0.094)μm间差异有统计学意义(P<0.01),同时视神经轴突数目68655±9572也较A1组48524±17312明显为多(P<0.01).结论 0.3%尼莫地平眼膏局部应用能有效地减轻慢性高眼压对视神经特别是视网膜内核层的损伤.     

急性眼压升高所致视网膜、视神经及视交叉胶质细胞的早期反应北大核心CSCD

背景中枢神经系统以及视网膜中的胶质细胞与神经元关系十分紧密,胶质细胞在神经元损伤和修复过程中发挥着重要作用。急性眼压升高引起的视网膜、视神经及视交叉各部位胶质细胞的早期反应特点以及其与视神经损伤的关系目前尚不清楚。目的探讨大鼠视网膜、视神经及视交叉的胶质细胞对急性高眼压的早期反应,同时观察神经前体细胞标志物巢蛋白（nestin）在反应性胶质细胞中的表达。方法成年雌性Wistar大鼠9只,分为正常对照组3只和急性高眼压组6只,急性高眼压组大鼠采用右眼前房灌注生理盐水的方法升高大鼠眼压至110mmHg,持续60min。于术后第3天和第7天用过量麻醉法处死各组动物各3只,摘出眼球分离视神经和大脑标本,并制作冰冻切片。利用Nissl染色的方法测量高眼压眼视网膜内层厚度,观察视网膜和视交叉的大体形态。用BIU-tubu｜in免疫荧光染色法标记视神经内的视网膜神经节细胞（RGCs）轴突,用胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和nestin双重标记显示视网膜、视神经及视交叉的胶质细胞反应,并对两组结果进行比较。结果正常大鼠的视网膜、视神经以及视交叉内均可见到一定量的GFAP阳性胶质细胞,但nestin的表达量很低。急性眼压升高后的第3天,视网膜内丛状层厚度明显变薄,RGCs数目较损伤前减少约46％。视网膜内胶质细胞GFAP的表达显著增加,细胞突起由神经纤维层伸展至整个视网膜,增生的胶质细胞内可见nestin的明显表达。视神经内RGCs轴突发生变性样改变,GFAP阳性胶质细胞内nestin的表达较眼压升高前明显增加。同损伤眼相对应的一侧视交叉的横断面积减小,出现大量星状GFAP和nestin共表达的胶质细胞。以上改变在眼压升高后第7天更趋明显。结论急性眼压升高早期即可引起RGCs的丢失及轴突的变性,视觉神经元改变的同时伴随胶质细胞的反应,增生的胶质细胞表达神经前体细胞的标志物。视网膜与视神经和视交叉的改变在时间上具有一定的同步性。     

急性眼压升高所致视网膜、视神经及视交叉胶质细胞的早期反应

背景 中枢神经系统以及视网膜中的胶质细胞与神经元关系十分紧密,胶质细胞在神经元损伤和修复过程中发挥着重要作用.急性眼压升高引起的视网膜、视神经及视交叉各部位胶质细胞的早期反应特点以及其与视神经损伤的关系目前尚不清楚. 目的 探讨大鼠视网膜、视神经及视交叉的胶质细胞对急性高眼压的早期反应,同时观察神经前体细胞标志物巢蛋白( nestin)在反应性胶质细胞中的表达. 方法 成年雌性Wistar大鼠9只,分为正常对照组3只和急性高眼压组6只,急性高眼压组大鼠采用右眼前房灌注生理盐水的方法升高大鼠眼压至110 mmHg,持续60 min.于术后第3天和第7天用过量麻醉法处死各组动物各3只,摘出眼球分离视神经和大脑标本,并制作冰冻切片.利用Nissl染色的方法测量高眼压眼视网膜内层厚度,观察视网膜和视交叉的大体形态.用βⅢ-tubulin免疫荧光染色法标记视神经内的视网膜神经节细胞(RGCs)轴突,用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和nestin双重标记显示视网膜、视神经及视交叉的胶质细胞反应,并对两组结果进行比较.结果 正常大鼠的视网膜、视神经以及视交叉内均可见到一定量的GFAP阳性胶质细胞,但nestin的表达量很低.急性眼压升高后的第3天,视网膜内丛状层厚度明显变薄,RGCs数目较损伤前减少约46％.视网膜内胶质细胞GFAP的表达显著增加,细胞突起由神经纤维层伸展至整个视网膜,增生的胶质细胞内可见nestin的明显表达.视神经内RGCs轴突发生变性样改变,GFAP阳性胶质细胞内nestin的表达较眼压升高前明显增加.同损伤眼相对应的一侧视交叉的横断面积减小,出现大量星状GFAP和nestin共表达的胶质细胞.以上改变在眼压升高后第7天更趋明显.结论 急性眼压升高早期即可引起RGCs的丢失及轴突的变性,视觉神经元改变的同时伴随胶质细胞的反应,增生的胶质细胞表达神经前体细胞的标志物.视网膜与视神经和视交叉的改变在时间上具有一定的同步性.     

青光安颗粒对兔急性高眼压视神经轴突的保护作用

目的:观察青光安颗粒对兔急性高眼压状态后视神经轴突及视网膜神经节细胞的保护作用。方法:家兔48只随机分成青光安治疗组、模型对照组,每组24只。用生理盐水灌注法1眼造成急性高眼压模型,另1眼则穿刺灌注不加压作为自身空白对照组,连续灌胃14d。分别于造模后7,14d处死,检测视网膜中NO及谷氨酸的含量,并观察视网膜的病理组织学改变。结果:7d后各组视网膜组织中NO、谷氨酸含量比较差异有显著性(P<0.01),治疗组和模型组中NO及谷氨酸含量均高于空白组,差异具有显著性(P<0.01,P<0.05),但治疗组明显低于模型组,差异亦具有显著性(P<0.01)。14d后治疗组中NO及谷氨酸含量均接近空白组,差异无显著性;但模型组仍明显高于空白组,差异具有显著性(P<0.05,P<0.01)。治疗组与模型组两组2wk之间比较差异均有显著性(P<0.05)。电镜结果表明,与模型组对比治疗组轴突肿胀较轻,轴浆内线粒体清晰数目较多,视网膜神经节细胞损伤较轻。结论:青光安能加速急性高眼压状态后视网膜组织中NO及谷氨酸的清除,对视神经轴突有保护性作用。     

神经生长因子对成年兔视神经夹伤后 修复的影响

目的研究神经生长因子(NGF)对成年兔视神经夹伤后修复的影响。方法16只成年兔随机分成NGF组和对照组,每组8只兔。建立兔右眼视神经夹伤模型后分别将载有0.06 ml NGF（浓度:5×10-4g/L,NGF组）或等量磷酸盐缓冲液（PBS）（对照组）的组织工程化神经移植于视神经损伤处；并向右眼玻璃体腔内注入0.02 ml NGF（浓度:5×10-4 g/L ,NGF组）或等量PBS（对照组）。所有兔左眼为正常空白对照组。分别于夹伤后1 d、2周、8周进行闪光视觉诱发电位(FVEP)检查。夹伤后8周时作光学显微镜和电子显微镜检查观察视网膜神经节细胞(RGC)和视神经的改变，同时用计算机图像处理系统作视神经纤维计数。结果夹伤后2周时FVEP检查结果显示，NGF组伤眼与健眼FVEP幅值比为0.765±0.150，对照组为0.494±0.108， NGF组与对照组相比差异有统计学意义（P<0.01）。夹伤后8周时NGF组伤眼与健眼FVEP幅值比为0.581±0.138，对照组为0.409±0.119， NGF组与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。夹伤后8周时的光学显微镜和电子显微镜检查结果显示：NGF组RGC、视神经纤维的退变较对照组轻。夹伤后8周时NGF组和对照组视神经纤维计数分别为（10 955±608.7）、（7 898±608.8）根/ mm²，两组间差异有统计学意义（P<0.001）。结论NGF能够在一定程度上增加RGC的存活，促进轴突的再生，因而对视神经夹伤后的修复、视功能的恢复具有一定的促进作用。(中华眼底病杂志,2005,21:253-257)     

视神经挫伤后视网膜形态学和Bcl-2/Bax表达

目的 研究大鼠视神经夹挫伤后视网膜神经节细胞（RGC）形态学改变及Bcl-2／Bax蛋白表达的变化，为了解视神经损伤的病理机制提供一定的依据。方法 建立大鼠视神经夹挫伤动物模型，伤后1d、3d、5d、7d、9d、2周、4周处死，HE染色观察RGC的动态变化，免疫组化方法检测RGC表达Bcl-2及Bax的水平。结果 视神经伤后RGC数目严重下降，2周内RGC快速减少，2周以后缓慢减少；伤后Bcl-2及Bax表达随时间而有不同程度的增加，Bax对损伤的反应较Bcl-2稍晚，两者表达均呈现先升后降的趋势，并维持一定的时间。Bcl-2和Bax蛋白表达比与RGC存活数目有一定的相关性。结论 视神经损伤后RGC数目减少是其视功能下降的病理基础之一，Bcl-2和Bax在RGC死亡机制中起重要作用，Bcl-2／Bax比率与RGC的减少呈一定的相关性。     

杞贞胶囊对视网膜神经节细胞保护作用及其作用机制的实验研究

目的 探索杞贞胶囊对大鼠视神经夹伤模型视网膜神经节细胞的保护作用及其作用机制。设计 实验研究。研究对象 SPF级SD大鼠72只。方法 72只SD大鼠随机分为2组：用药组36只;对照组36只。两组大鼠右眼行视神经夹伤,于球后2 mm处用40 g微型视神经夹夹伤视神经60 s。左眼作为正常对照。夹伤后2小时及此后每日予以灌胃给药一次。用药组给予20%杞贞溶液2.5 ml/kg,对照组给予生理盐水2.5 ml/kg。给药第28天取眼球标本,用药组和对照组各取24只行HE染色﹑Tunel试剂盒染色﹑Caspase-3免疫组化染色;剩余每组12只分离视网膜提取mRNA,测定Bax和Bcl-2基因的表达量。主要指标 视网膜厚度﹑Bax和Bcl-2基因表达量。结果 用药组视网膜厚度平均为（109.0±4.4）μm;对照组视网膜厚度为（101.8±7.6）μm（F=29.497,P=0.028）。两组间Bax基因表达差异具有统计学意义（t=1.089,P=0.028）;Bcl-2基因表达差异未见统计学意义（t=0.553,P=0.692）。结论 杞贞胶囊对大鼠视神经夹伤后的视网膜神经节细胞具有保护作用,可能通过下调Bax基因表达和抑制Caspase蛋白活性从而减少视网膜神经节细胞凋亡。     

中药复光颗粒对家兔视神经夹伤后Bcl-2和Bax表达的影响

目的:观察复光颗粒对家兔受损视神经的保护作用。方法:采用视神经夹伤方法,建立家兔外伤性视神经病变(traumatic optic neuropathy,TON)模型,通过测定凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达,观察复光颗粒对受损视神经的影响。结果:视神经夹伤后,凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达及Bcl-2/Bax值在复光颗粒组间(低、高剂量组)比较无显著差异性(P>0.05)。而复光颗粒各组与模型对照组间均有显著差异(P<0.05),复光颗粒各组较模型组Bcl-2表达增加,Bax表达减少。结论:在本实验条件下,复光颗粒具有上调抗凋亡基因Bcl-2和下调促凋亡基因Bax表达的作用,可减轻视神经损伤的作用。     

富血小板血浆在兔外伤性视神经损伤中的修复作用及其机制

目的:研究自体富血小板血浆(PRP)对兔外伤性视神经损伤及视网膜的修复作用及机制。方法:选取清洁级成年新西兰白兔40只,构建兔右眼视神经钳夹损伤模型,将造模成功的36只新西兰白兔按照随机数表法随机分为模型对照组、生理盐水对照组和PRP组,每组12只,均以右眼为实验眼,另取12只健康未造模兔作为正常对照组。抽取兔自体血制...     

血管内皮生长因子B对小鼠视神经保护作用的研究

目的 探讨血管内皮生长因子B(VEGF-B)在视网膜组织的表达及其对视网膜神经节细胞的保护作用.方法 对照实验研究.35只成年雌性健康C57BL/6小鼠,分为正常对照组,视神经损伤后6 h、1 d、1周、2周组.其中10只鼠用于原位杂交,每组2只鼠;25只鼠用于实时定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR),每组5只鼠.采用原位杂交法观察实验鼠视网膜组织VEGF-B的mRNA表达;用real time RT-PCR法观察视网膜组织损伤后不同时间VEGF-B的mRNA定量表达;从双侧上丘行荧光金逆行标记和视网膜神经节细胞计数,评估玻璃体腔内注射重组人VEGF-B(450 mg/L)对视网膜神经节细胞的保护作用.应用SAS统计学软件进行数据分析.对组间real timeRT-PCR检测结果比较采用方差分析,对组间视网膜神经节细胞计数的计量资料比较采用秩和检验.以P<0.05作为差异有统计学意义.结果 小鼠视神经损伤后的视网膜组织VEGF-B表达显著增强,损伤后1周达高峰.玻璃体腔内注射重组人VEGF-B蛋白,可显著增加视网膜神经节细胞的存活数量,分别是单纯视神经损伤组和损伤加玻璃体腔内注射的阴性对照组的1.7倍(t=0.1301,P<0.01)和1.9倍(t=0.001,P<0.01).结论 VEGF-B参与小鼠视神经损伤后的修复,并对视网膜神经节细胞有保护作用.(中华眼科杂志,2009,45:38-42)     

金丝桃素对视神经损伤大鼠视网膜节细胞的保护作用

目的观察金丝桃素对视神经损伤大鼠视网膜节细胞的保护作用。方法24只SD大鼠随机分为正常对照组、单纯夹伤组、生理盐水对照组、金丝桃素治疗组4组,每组6只（12眼）。对所有大鼠行双上丘注射2％荧光金逆行标记节细胞,7d后,对单纯夹伤组、生理盐水对照组、金丝桃素治疗组进行球后视神经钳夹．同时在生理盐水对照组、金丝桃素治疗组玻璃体内分别注入生理盐水和金丝桃素5ul,14d后进行视网膜节细胞的计数。采用SPSS13．0统计软件对所得数据进行t检验。结果视神经夹伤后14d,存活的视网膜节细胞显著减少。单纯夹伤组节细胞存活率为50％,生理盐水对照组节细胞存活率为52％,金丝桃素治疗组节细胞存活率为68％。金丝桃素治疗组相比单纯夹伤组和生理盐水对照组,存活的节细胞明显要多（P〈0．05）。结论玻璃体内注射金丝桃素能减少大鼠视神经损伤后视网膜神经节细胞的死亡率．对视网膜节细胞有保护作用。