肺癌组织中黑色素瘤抗原-A3基因mRNA的表达及其序列点突变分析(英文)

目的检测肺癌组织中黑色素瘤抗原-3基因(MAGE-A3)mRNA 的表达。方法用逆转录-套式聚合酶链反应(RT-PCR)对31例肺癌患者癌组织和相应癌旁组织 MAGE-A3 mRNA 表达情况进行测定;PE-377DNA 测序仪对5例10个 RT-PCR 扩增产物中的目的基因片段进行 DNA 序列测定。结果 31例肺癌患者癌组织中26例表达 MAGE-A3 mRNA,阳性率为83.9%;相应的癌旁组织均未表达。DNA 序列测定证明 PCR扩增产物中目的基因片段均为 MAGE-A3 cDNA 序列,所测5例样本中4例样本有两个相同位置的碱基发生了点突变(C2773→32773;G2807→A2807),导致一个氨基酸残基改变(E143→K)。结论 MAGE-A3mRNA 在肺癌中呈高比例表达,提示此抗原有可能作为肺癌患者免疫治疗的靶抗原。我国肺癌患者中存在 MAGE-A3基因个别位点的变异。     

MAGE-A3基因及其产物在肾透明细胞癌组织中的表达

目的:探讨肿瘤特异性黑色素瘤抗原(MAGE-A3)基因mRNA及MAGE-A3蛋白在肾透明细胞癌组织中的表达及其临床意义.方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测45例肾透明细胞癌患者癌组织(新鲜标本,T1期14例,T2期12例,T3期11例,T4期8例;G1 18例,G2 15例,G3 12例)及其中10例患者癌旁组织MAGE-A3基因mRNA表达;Western-blot技术检测上述组织中MAGE-A3蛋白的表达.结果:45例肾透明细胞癌组织中,24例(53%)MAGE-A3 mRNA表达阳性,10例癌旁组织表达均阴性;21例(47%)MAGE-A3蛋白表达阳性,10例癌旁组织表达均阴性.肿瘤不同分期、不同分级之间MAGE-A3基因mRNA及MAGE-A3蛋白表达的差异均无统计学意义(Pearson χ2 检验法,P> 0.05).结论:MAGE-A3基因在肾透明细胞癌中有较高表达,可望成为肾透明细胞癌特异性免疫治疗的靶基因.     

肿瘤-睾丸抗原SSX1和SSX4的mRNA在肝细胞肝癌中的表达

目的检测肿瘤-睾丸抗原(Cancer-Testis antigens,CT)SSX1和 SSX4基因 mRNA 在肝细胞肝癌(HCC)中的表达,探讨 CT 抗原 SSX1和 SSX4 mRNA 在 HCC 中表达有无特异性。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对35例 HCC 患者癌组织和相应的癌旁组织 SSX1和 SSX4基因表达进行检测,对其中6例 RT-PCR 扩增产物的目的片段进行 DNA 序列测定。结果 35例 HCC 患者中,SSX1和 SSX4的表达率分别为81%(27/35)和73%(23/35);癌旁组织、12例肝硬化和15例正常组织未检测到 SSX1和 SSX4的表达。6例 DNA 序列测定结果显示 RT-PCR 产物为 SSX1和 SSX4基因的 cDNA。SSX1和 SSX4的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清甲胎蛋白(AFP)水平、乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染无显著相关性(P>0.05)。结论 SSX1和 SSX4在 HCC 中呈高特异性表达,是制备 HCC 疫苗理想的靶向分子,多种 CT 抗原联合表达为多效价疫苗治疗 HCC提供了理论基础。     

肿瘤-睾丸抗原SSX1和SSX4的mRNA在肝细胞肝癌中的表达

目的 检测肿瘤-睾丸抗原(Cancer-Testis antigens，CT)SSX1和SSX4基因mRNA在肝细胞肝癌(HCC)中的表达，探讨CT抗原SSX1 和SSX4 mRNA在HCC中表达有无特异性。 方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对35例HCC患者癌组织和相应的癌旁组织SSX1和SSX4基因表达进行检测，对 其中6例RT-PCR扩增产物的目的片段进行DNA序列测定。 结果 35例HCC患者中，SSX1和SSX4的表达率分别为81％(27／35)和73％(23／35)；癌旁组织、12例肝硬化和15例正常组织未 检测到SSX1和SSX4的表达。6例DNA序列测定结果显示RT-PCR产物为SSX1和SSX4基因的cDNA。SSX1和SSX4的表达与患 者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清甲胎蛋白(AFP)水平、乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染无显著相关性(P >0．05)。 结论 SSX1和SSX4在HCC中呈高特异性表达，是制备HCC疫苗理想的靶向分子，多种CT抗原联合表达为多效价疫苗治疗HCC 提供了理论基础。     

两种黑色素瘤抗原基因在肝细胞癌中的表达

目的 检测黑色素瘤抗原MAGE-4和MAGE-10mRNA在中国人肝细胞癌（HC）中的表达，为用这两种基因编码蛋白作为疫苗对HCC患者进行免疫治疗提供依据。方法 用RT-PCR方法对48例HCC患者癌组织和相应癌旁肝组织、10例肝硬化组织和10例正常肝组织的MAGE-4和MAGE-10mRNA表达情况进行研究，并对RT-PCR扩增产物中目的基因片段进行cDNA序列测定。结果 48例HCC患者中，有15例（31.3%）表达MAGE-4，14例（29.2%)表达MAGE-10mRNA；而相应癌旁肝组织；腩硬化和正常肝组织均不表达,cDNA测序进一步证明，PCR产物中的目的基因片段为MAGE-4和MAGE-10cDNA序列，两种MAGE基因的表达与肿瘤大小。甲胎蛋白（α-FP）水平等临床指标无相关关系。结论 MAGE-4和MAGE-10在HCC组织中呈特异性的表达，面在癌旁非瘤性肝组织中均不表达，这使得以此抗原用于HCC患者的免疫治疗成为可能。     

膀胱移行细胞癌中MAGE-A3基因的表达及意义

目的：研究膀胱移行细胞癌组织中黑色素瘤抗原家族A成员3（melanoma antigen family A,3,MAGE-A3）的表达及其临床意义.方法：采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测51例膀胱移行细胞癌患者癌组织（新鲜标本,Ta-T1期30例,T2-T4期21例;G1 22例,G2 16例,G3 13例）及其中10例患者癌旁正常组织的MAGE-A3mRNA表达.采用Western blot技术检测上述组织中MAGE-A3蛋白的表达.在上述部分组织中进一步应用免疫组化技术证实MAGE-A3蛋白的表达情况.结果：51例膀胱移行细胞癌组织中,26例（51％） MAGE-A3 mRNA表达阳性,10例癌旁组织表达均阴性.23例（45％） MAGE-A3蛋白表达阳性,10例癌旁组织表达均阴性.MAGE-A3蛋白为胞浆内染色.肿瘤不同分期、不同分级之间MAGE-A3mRNA及MAGE-A3蛋白表达的差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论：MAGE-A3基因在膀胱移行细胞癌中有较高表达,而在癌旁组织无表达,有望成为膀胱移行细胞癌特异性免疫治疗的靶分子.     

以黑色素瘤抗原基因mRNA为标记检测乳腺癌患者循环肿瘤细胞

目的 以黑色素瘤抗原-A1和A3(MAGE-A1和MAGE-A3) 基因mRNA为标记,检测乳腺癌患者循环肿瘤细胞,并探讨其临床意义.方法 采集60例乳腺癌患者癌组织、癌旁组织标本及术前、化疗后外周血和60例非肿瘤患者外周血,用巢式RT-PCR检测癌组织、癌旁组织标本及外周血单核细胞(PBMC)中MAGE-A1和MAGE-A3基因mRNA.结果 28.3%(17/60)和23.3%(14/60)的乳腺癌患者PBMC中分别检测到MAGE-A1和MAGE-A3 基因的mRNA,35.0%(21/60)的乳腺癌患者PBMC中至少可以检测到1种MAGE基因mRNA.乳腺癌患者PBMC中MAGE-A1和MAGE-A3基因mRNA的检出率与肿瘤组织中MAGE的检出率相关(P＜0.0005),肿瘤组织及外周血中MAGE的表达与肿瘤的分期、肿瘤的病理类型、年龄、受体状况、CerbB-2、 Ki-67无相关性(P＞0.05).结论 MAGE-A1和MAGE-A3基因mRNA可以作为特异性肿瘤标记物用于检测乳腺癌患者PBMC中的乳腺癌细胞,其检测结果可能有助于判断乳腺癌患者的预后.     

肿瘤睾丸抗原(CTA)在肺癌中的表达

目的：检测多种肿瘤睾丸抗原（CTA）基因在肺癌中的表达。方法：用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）法对35例肺癌患者癌组织和癌旁正常肺组织进行MAGE－1、－3，SSX－1、－2、－4、－5和NY－ESO－mRNA表达检测。随机抽取每种CTA基因的3例RT－PCR扩增产物的目的片段进行DNA序列测定。结果：35例肺癌标本中MAGE－1、－3，SSX－1、－2、－4、－5和XY－ESO－1的表达率分别为34．3％（12／35）、57．1％（20／35）、17．1％（6／35）、20．0％（7／35）、26．7％（9／35）和37．1％（13／35）。正常肺组织中7种CTA基因均无表达。肿瘤组织中7种基因至少有1种表达的几率是26／35（74．3％），两种或两种以上同时表达几率是23／35（65．7％）。测序结果表明RT－PCR产物确为CTA基因。结论：CTA在肺癌主动免疫治疗中是一种合适的、有前景的攻击靶点。同时，多种CTA的联合表达为多效价CTA疫苗在肺癌免疫治疗中的应用提供了理论基础。     

肝细胞癌中NY-SAR-35 NY-TLU-57和NY-ESO-1基因的表达及意义

目的:检测三种癌-睾丸抗原NY-SAR-35、NY-TLU-57和NY-ESO-1基因mRNA在广西地区肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)中的表达,探讨其作为HCC特异性免疫治疗靶抗原的可能性。方法:利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测NY-SAR-35、NY-TLU-57和NY-ESO-1基因在63例HCC组织、56例HCC癌旁组织和4例正常肝组织中的表达,随机选择4例RT-PCR阳性产物直接进行DNA序列测定,并将其表达结果与临床病理指标进行统计学分析。结果:所检测的三种基因在4例正常肝组织中无表达;在63例HCC组织中,NY-SAR-35表达率为38.1%(24/63),NY-TLU-57为4.8%(3/63),NY-ESO-1为23.8%(15/63);在56例HCC癌旁组织中,NY-TLU-57和NY-ESO-1无表达,NY-SAR-35的表达率为26.8%(15/56)。基因表达与临床病理指标关系的分析显示,这三种癌-睾丸抗原的表达均与所分析的临床病理指标无关(P>0.05)。结论:癌-睾丸抗原NY-SAR-35、NY-TLU-57和NY-ESO-1基因可特异性的表达于HCC中,其中NY-SAR-35、NY-ESO-1具有一定的表达频率,提示它们有可能作为HCC特异性免疫治疗的靶抗原。     

膀胱移行细胞癌中肿瘤-睾丸抗原基因的表达情况

目的: 研究4种肿瘤-睾丸抗原(CT)基因在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义.方法: 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测49例膀胱移行细胞痈患者癌组织(新鲜标本,Ta-T1期28例,T2-T4期21例;G1 20例,G2 16例,G3 13例)及其中15例患者癌旁组织的cTAGE-1、cTAGE-2、MAGE-A1及NY-ESO-1等4种CT基因mRNA的表达.结果: 49例膀胱移行细胞癌组织中MAGE-A1表达最高,其次为cTAGE-1,cTAGE-2及NY-ESO-1,分别为59%(29/49),55%(27/49),51%(25/49)及47%(23/49).15例癌旁组织表达均阴性.膀胱移行细胞癌组织中肿瘤不同分期、不同分级之间4种CT基因表达的差异均无统计学意义(Pearson x2检验法,P>0.05).结论: CT基因在膀胱移行细胞癌组织中有较高表达,而在癌旁组织无表达,可以进一步研究作为膀胱移行细胞癌特异性免疫治疗靶基因的可行性.     

MAGE-A1 和MAGE-A3在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义

[摘要] 目的：探讨黑色素瘤抗原基因-A1（MAGE-A1）和MAGE-A3 在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法：选取2006 年1 月至2010 年1 月河北医科大学第四医院神经外科手术切除的78 例脑胶质瘤组织标本和15 例车祸死亡捐献者的正常脑组织标本。用RT-PCR法检测胶质瘤组织中MAGE-A1 和MAGE-A3 的表达,分析其表达水平与患者预后的关系;用MSP-PCR术检测MAGE-A1 和MAGE-A3 基因启动子区的甲基化状态,分析两者表达与甲基化之间的关系;用RT-PCR法检测胶质瘤U251 和U87 细胞中MAGE-A1 和MAGE-A3 表达以及经DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2''-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA）联合作用后两者的表达水平。结果：78 例胶质瘤组织中MAGE-A1 和MAGE-A3 mRNA阳性表达率分别为65.34%和38.46%,而在15 例正常脑组织中未发现2 种mRNA表达。MAGE-A1 阳性组患者5 年生存率较阴性组低（P<0.05）。MAGE-A1 和MAGE-A3 基因启动子区去甲基化水平与其在mRNA水平上的表达均有显著的相关性（均P<0.01）。未经5-Aza-CdR 和TSA处理的U87 细胞未见MAGE-A1 和MAGE-A3 mRNA的表达,U251 细胞则有少量表达。单独给予TSA不能引起MAGE-A1 和MAGE-A3 基因的表达激活,单独给予5-Aza-CdR 或与TSA合用可以引起该2 个基因的表达激活,且两者合用的作用优于单独给药。结论：脑胶质瘤组织中有不同程度的MAGE-A1 和MAGE-A3 基因表达,MAGE-A1 基因表达与患者的预后不良相关。DNA启动子区甲基化和组蛋白乙酰化是MAGE-A1和MAGE-A3基因表达激活的重要机制。     

CAGE? MAGE-A1和MAGE-A3去甲基化在胃癌发生发展中的作用

探讨肿瘤相关抗原基因（CAGE）、黑色素瘤抗原基因-A1（MAGE-A1）和黑色素瘤抗原基因-A3（MAGE-A3）启动子区去甲基化状态改变在胃癌早期发生、发展中的作用及意义。方法:87例内镜活检标本分为胃癌组、癌前病变组和正常对照组,应用甲基化特异性PCR方法分别检测各组中3种基因启动子区的去甲基化状态。结果:胃癌组、癌前病变组和正常对照组中,各基因启动子区的去甲基化阳性率分别为:CAGE:80.0%（24/30）、37.5%（12/32）和4.0%（1/25）;MAGE-A1:60.0%（18/30）、21.9%（7/32）和0（0/25）;MAGE-A3:46.7%（14/30）、12.5%（4/32）和8.0%（2/25）,呈下降趋势。3种基因启动子区去甲基化阳性率在3组间比较,差异有统计学意义（P<0.05）。30例胃癌至少发生1种基因启动子区去甲基化的有27例;至少发生2种基因启动子区去甲基化23例;7例同时发生了3种基因启动子区的去甲基化。结论:这3种基因启动子区去甲基化改变可能发生于胃癌发病早期,且贯穿于胃癌发生、发展的全过程并起到一定的作用,联合检测可能有助于提高胃癌去甲基化诊断的阳性率。      

MAGE-A protein and MAGE-A10 gene expressions in liver metastasis in patients with stomach cancer

Tumour samples from 71 patients with stomach cancer, 41 patients with liver metastasis (group A) and 15 patients each in stages II-IV (group B) and stage I (group C) without liver metastasis were analysed. MAGE-A protein expression was evaluated by immunohistochemistry using a 6C1 monoclonal antibody and MAGE-A10 mRNA expression was detected by highly sensitive in situ hybridisation using a cRNA probe. Expressions of MAGE-A protein and MAGE-A10 mRNA in group A were detected in 65.9 and 80.5%, respectively. Both protein and gene showed significantly higher expression in group A than those in groups B (6.7, 26.7%) and C (0, 0%) (P=0.0003, P=<0.0001, respectively). MAGE-A10 mRNA expression in liver metastasis was found in eight (88.9%) out of nine patients. The concordant rate between MAGE-A family protein expression and MAGE-A10 mRNA expression in the primary sites was 81.7% (P<0.0001). MAGE-A10 gene expression was associated with reduced survival duration. The results of this study suggest that MAGE-A10 is a possible target in active immunotherapy for advanced stomach cancer.     

肿瘤抗原MAGE-A4在乳腺癌组织和细胞系中的表达及其作用

目的检测正常乳腺组织及乳腺癌组织中MAGE-A4 (melanoma antigen-A4) mRNA的表达,探讨其与乳腺癌临床参数、生物学行为的关系以及对乳腺癌细胞增殖的影响。方法用RT-PCR方法检测77例正常乳腺组织及乳腺癌组织中MAGE-A4 mRNA的表达状况,用χ2检验分析其表达与乳腺癌临床参数及生物学行为的关系;用集落形成实验研究MAGE-A4对乳腺癌细胞增殖的影响。结果77例正常乳腺组织中没有检测到MAGE-A4 mRNA的表达;77例乳腺癌组织有33例MAGE-A4 mRNA阳性表达,阳性率为42.9%。60（含60岁）岁以上乳腺癌患者MAGE-A4 mRNA阳性表达率明显高于60岁以下患者(P<0.05);但MAGE-A4 mRNA表达与乳腺肿瘤的大小、临床分期、病理类型、组织学分级、淋巴结转移、有无瘤栓、ER/PR及HER-2状态之间无明显相关性 (P>0.05)。乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231均不表达MAGE-A4 mRNA,而乳腺癌细胞系MDA-MB-436中MAGE-A4 mRNA呈高表达。转染MAGE-A4基因可以抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞克隆的形成(P<0.05)。结论MAGE-A4在正常乳腺组织不表达,在乳腺癌组织中表达率为42.9%,提示MAGE-A4是一种肿瘤特异性抗原。该基因的表达与乳腺癌患者的年龄有关,与其他临床参数及生物学行为无明显相关性。在MAGE-A4阴性表达的乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中转染MAGE-A4基因可抑制该细胞的克隆形成。     

乳腺癌中MAGE-A9和MAGE-A11基因的表达及表达机制的研究

【】 目的：探讨黑色素瘤抗原MAGE-A9和MAGE-A11在乳腺正常组织、乳腺良性病变、乳腺癌组织中的表达以及甲基化酶抑制剂5-氮杂-２"-脱氧胞苷(5-aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对MAGE-A9和MAGE-A11基因表达的影响。方法：应用RT-PCR检测60例乳腺正常组织、60例乳腺良性病变及60例乳腺癌组织中MAGE-A9和MAGE-A11 mRNA的表达,分析其与乳腺癌患者临床病理学特征的关系。乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231经5-aza-CdR 和 TSA 单独或联合作用后,应用RT-PCR法检测细胞中 MAGE-A9和MAGE-A11 mRNA 表达的变化。结果：乳腺癌组织中MAGE-A9 mRNA阳性表达率为45%(27/60),MAGE-A11 mRNA阳性表达率为66.7%(40/60),而乳腺正常组织及良性病变中均未发现MAGE-A9和MAGE-A11 mRNA的表达。 MAGE-A9和MAGE-A11 mRNA的表达与乳腺癌患者的年龄、病理类型、临床分期、肿瘤大小、淋巴转移、瘤栓及孕激素受体的表达均无明显关系(P ＞0.05),与人表皮生长因子受体2(HER-2)和雌激素受体(ER)的表达有关(P＜0.05)。未经药物处理的MCF-7、MDA-MB-231细胞未见MAGE-A9和MAGE-A11 mRNA表达。单用5-aza-CdR后可见MAGE-A9和MAGE-A11基因重新表达,联合应用5-aza-CdR和TSA使MAGE-A9和MAGE-A11基因表达进一步增加(P＜0.05)。TSA单独作用对基因表达没有影响(P＞0.05)。结论：乳腺癌组织中MAGE-A9和MAGE-A11 mRNA的表达与ER 和HER-2的表达有关,5-aza-CdR单用或联合应用TSA可诱导不表达MAGE-A9和MAGE-A11 mRNA的细胞重新表达,说明DNA的去甲基化和组蛋白乙酰化是调控人类肿瘤细胞MAGE的表达的重要机制。     

肿瘤相关抗原MAGE-A3的研究进展

肿瘤相关抗原MAGE-A3广泛表达于多种恶性肿瘤，而在正常组织中（除睾丸和胎盘外）不表达。该抗原经抗原递呈细胞加工后能被HLAⅠ类或Ⅱ类分子递呈，引起针对MAGE-A3表达阳性的肿瘤细胞的特异性免疫。近年来，MAGE—A3抗原已被广泛应用于肿瘤的诊断和免疫治疗，本文就MAGE—A3抗原在肿瘤中应用做一综述。     

Inhibition of histone lysine methylation enhances cancer-testis antigen expression in lung cancer cells: implications for adoptive immunotherapy of cancer

Cancer-testis antigens (CTA), such as NY-ESO-1, MAGE-A1, and MAGE-A3, are immunogenic proteins encoded by genes, which are normally expressed only in male germ cells but are activated by ill-defined epigenetic mechanisms in human tumors, including lung cancers. Previously, we reported induction of these CTAs in cancer cells, but not normal cells, by DNA-demethylating agents and histone deacetylase inhibitors using clinically achievable exposure conditions. In the present study, we evaluated chromatin alterations associated with repression/activation of cancer-testis genes in lung cancer cells to further develop gene-induction regimens for cancer immunotherapy. Repression of NY-ESO-1, MAGE-A1, and MAGE-A3 coincided with DNA hypermethylation, recruitment, and binding of polycomb-group proteins, and histone heterochromatin modifications within the promoters of these genes. Derepression coincided with DNA demethylation, dissociation of polycomb proteins, and presence of euchromatin marks within the respective promoters. Short hairpin RNAs were used to inhibit several histone methyltransferases (KMT) and histone demethylases (KDM) that mediate histone methylation and repress gene expression. Knockdown of KMT6, KDM1, or KDM5B markedly enhanced deoxyazacytidine (DAC)-mediated activation of these cancer-testis genes in lung cancer cells. DZNep, a pharmacologic inhibitor of KMT6 expression, recapitulated the effects of KMT6 knockdown. Following DAC-DZNep exposure, lung cancer cells were specifically recognized and lysed by allogeneic lymphocytes expressing recombinant T-cell receptors recognizing NY-ESO-1 and MAGE-A3. Combining DNA-demethylating agents with compounds, such as DZNep, that modulate histone lysine methylation may provide a novel epigenetic strategy to augment cancer-testis gene expression as an adjunct to adoptive cancer immunotherapy.