α-黑素细胞刺激素对原代DMNV细胞钙离子通路及凋亡的影响

目的： 以体外培养的大鼠原代迷走神经运动背核（DMNV）细胞为对象,探讨α-黑素细胞刺激素(α-MSH)对原代DMNV细胞钙离子通路及凋亡的影响。方法：采用体外大鼠原代DMNV细胞培养以及［Ca2+］i测量、实时荧光定量PCR、ELISA细胞凋亡实验等方法进行研究。结果：正常大鼠DMNV组织中存在黑素细胞刺激素受体-4（MC4R）mRNA的表达;NDP-MSH激活MC4R可以促进原代DMNV细胞钙离子内流;NDP-MSH可以降低凝血酶（PAR-1,thrombin）和胰蛋白酶（PAR-2,trypsin）对原代DMNV细胞凋亡。结论：α-MSH可以激发原代 DMNV细胞钙离子内流,降低原代DMNV细胞凋亡。     

基于H1R、PAR-2/ TRPV1 痒信号通路探讨马齿苋对急性湿疹的干预作用

目的:探讨马齿苋提取液对急性湿疹大鼠背部皮肤组胺受体1(H1R)、蛋白酶激活受体2(PAR-2)和瞬时感受器电位受体1(TRPV1)表达的影响及其对H1R、PAR-2/ TRPV1 信号通路的调控作用。方法:SD 大鼠30 只,分为正常组、模型组、马齿苋组,各组10 只。采用二硝基氯苯(DNCB)建立急性湿疹模型,正常组除外。造模成功后,各组分别给予相应药物。末次给药后对各组大鼠进行湿疹面积及严重度指数(EASI)评分。免疫组化法检测H1R、PAR-2 和TRPV1 的表达,流式细胞技术测定细胞内钙离子(Ca2+ )浓度。结果:与正常组比,模型组大鼠EASI(P<0.01)、H1R(P<0.05)和PAR-2(P<0.01)的含量、Ca2+浓度(P<0.01)显著增加,TRPV1 增加差异不明显(P>0.05)。与模型组比,马齿苋组大鼠EASI(P<0.01)、H1R(P<0.01)和PAR-2(P<0.01)的含量及Ca2+ 浓度(P<0.05)显著减少,TRPV1 减少差异不明显(P>0.05)。结论:马齿苋可减少H1R、PAR-2 含量及降低Ca2+浓度,发挥治疗急性湿疹的作用,其机制可能是通过降低上游分子H1R、PAR-2 含量,使其下游分子TRPV1 失活,减少Ca2+内流,达到抗瘙痒的作用。     

HSPgp96诱导巨噬细胞呼吸爆发与细胞内外游离钙关系的研究

目的：探讨从小鼠H₂₂肝癌细胞中提纯的热休克蛋白gp96（HSPgp96）对小鼠腹腔巨噬细胞（PEMφ）呼吸爆发的影响及其与细胞内外游离钙的关系。方法：(1)用亲和层析和离子交换层析等方法从小鼠H₂₂肝癌细胞中获得纯化的HSPgp96。(2)用细胞内过氧化物荧光探针H₂DCF-DA监测HSPgp96作用于小鼠PEMφ过程中，单个细胞活性氧（ROS）信号的变化,反映PEMφ内呼吸爆发时的变化过程；用荧光探针Fluo-3/AM监测HSPgp96作用于小鼠PEMφ过程中，单个细胞内钙离子（［Ca2+］_i）信号的变化。(3)使用细胞膜和细胞内钙通道抑制剂及钙离子载体后，再观察HSPgp96作用后ROS信号的变化。结果：(1)加入HSPgp96后PEMφ内Fluo-3荧光强度立即上升，70s时增幅达161.05%±50.99%；当分别阻断细胞外钙内流、抑制细胞内钙库释放功能后110s增幅分别为84.81%±29.52%和46.21%±17.24%。同时阻断胞内外钙作用，HSPgp96这一诱发功能明显被抑制。加入钙离子载体后可见细胞内荧光强度迅速增强，于110 s时达156.98%±45.83%，随后迅速下降。(2)小鼠PEMφ受HSPgp96刺激后表征ROS的荧光强度立即上升，620 s达基础荧光值的636.78%±82.02%，随后始终维持在高水平。当分别阻断细胞外钙内流、抑制细胞内钙库释放功能后，再加入HSPgp96后细胞内ROS荧光值上升幅度较小。同时阻断了胞内外钙作用后，HSPgp96刺激后ROS荧光值上升没有明显高峰出现。结论：HSPgp96作用于小鼠PEMφ后，促进了细胞外钙内流并使细胞内钙库释钙，这是HSPgp96诱发细胞内活性氧增加的基本机制。     

肠血管活性多肽对多器官功能障碍综合征大鼠肠淋巴细胞归巢的影响

为观察肠血管活性多肽 (VIP )对大鼠肠缺血再灌注致多器官功能障碍综合征 (MODS )时 ,肠淋巴细胞归巢至肠相关淋巴细胞 (GALT )的调节以及对MODS转归的影响。本研究用微型无创动脉夹夹住大鼠肠系膜动脉根部 4 5min ,松夹后再灌注6h ,制备MODS模型。将VIP分别从股静脉输入和从腹腔注入大鼠体内。收集肠淋巴液 ,计数淋巴细胞总数及T、B淋巴细胞比例 ,了解淋巴细胞进入血循环状况。体外用51Cr标记肠淋巴细胞 ,回输入大鼠体内 ,用γ计数器检测各器官组织内的51Cr 肠淋巴细胞 ,了解肠淋巴细胞归巢。检测血及肠淋巴TNF α、内毒素 ;测定血D 乳酸、谷丙转氨酶 (ALT )、肌肝 (Cr)、血氧分压 ;观察重要器官组织学改变 ,评价VIP对MODS时各脏器形态及功能改变。结果显示 ,VIP使MODS大鼠肠粘膜迁移至血循环肠淋巴细胞总数 [(0 4 2± 0 18)× 10 7/h]较未予处理的MODS组 [(0 2 8± 0 15 )× 10 7/h]显著增加 (P <0 0 5 ) ,以T细胞数上升明显。VIP减少了MODS大鼠归巢至肠粘膜的肠淋巴细胞 ,Peyer淋巴结及小肠分布的51Cr 细胞量分别占总51Cr量的 2 14 %± 1 4 9%、 1 5 8%± 0 4 2 % ,显著低于未予处理的MODS组 (5 0 4 %± 1 2 3%和 3 2 3%± 1 6 9% ,P <0 0 1及P <0 0 5 )。外源性给予MODS大鼠VIP后 ,肠淋巴     

蛋白酶激活受体-2与呼吸系统疾病

蛋白酶激活受体（protease-activated receptors,PARs）属于G蛋白偶联的受体家族,目前发现四个亚型,分别命名为：PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4。凝血酶可激活PAR-1、PAR-3及PAR-4;胰蛋白酶、纤维蛋白溶酶及TF/VIIa（组织因子/活化的凝血因子Ⅶ）复合物、活化的凝血因子X（Xa）等可以激活PAR-2。PAR-3和PAR-4主要表达于血小板膜表面,介导凝血酶反应,引起血小板激活、血液凝固等反应;     

垂体腺苷酸环化酶激活多肽可加剧实验性急性胰腺炎

脑肠肽垂体腺苷酸环化酶激活多肽 (Pituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide ,PACAP)在急性胰腺炎 (Acutepancreatitis,AP)发病机理和治疗中的作用尚不清楚 ,为此 ,本实验观察外源性PACAP对正常大鼠胰腺、实验性AP病程的影响。结果发现 :5～ 30 μg/kg的PACAP可促使血清淀粉酶轻微增高、胰腺水肿形成 (实验组2 3 88%± 2 .5 32 %～ 2 5 .86 %± 1.974 %vs正常组 2 9.2 1%± 5 .6 5 7% )、炎性细胞浸润、腺泡细胞空泡化、部分病例可见脂肪坏死和实质坏死灶。 15 μg/kg和 30 μg/kgPACAP可加重蛙皮缩胆囊肽诱发的AP ,胰腺组织水肿更明显(实验组 13.4 5 %± 2 .0 4 5 %～ 17.6 6 %± 4 .6 5 2 %vs蛙皮缩胆囊肽组 2 1.83%± 3.0 13% ,P <0 .0 5 ) ,血清淀粉酶增高 ,出现腹水、胰腺出血、脂肪坏死和实质坏死 ,腺泡细胞明显空泡化。 5 μg/kg和 10 μg/kgPACAP对牛磺胆酸钠诱发的急性出血坏死性胰腺炎病程的影响有所不同 ,可稍减轻胰腺水肿 (实验组 19.18%± 2 .10 2 %～ 2 0 .87%±5 5 97%vs牛磺胆酸钠组 17.5 2 %± 1.5 0 5 % ;下同 )、降低血清淀粉酶 (1986 .91%± 710 .97%～ 2 94 4 .33± 1182 .4 7IU/Lvs 36 90 .87± 2 2 77.99IU/L ,P <0 .0 5 ) ,而胰腺出血和坏死加剧。除蛙皮缩胆囊肽诱发     

树突状细胞激活的肿瘤浸润淋巴细胞对荷瘤小鼠免疫功能影响的研究

目的:探讨H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL体外抗小鼠肝癌活性;并将H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL(H22-DC-TIL)过继免疫荷瘤小鼠,研究其对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:从小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤全细胞性抗原致敏DC,然后用DC激活TIL,观察TIL在体外对H22细胞、Hepal-6细胞和B16细胞的杀伤活性;检测应用H22-DC-TIL后荷瘤小鼠的脾淋巴细胞的NK、LAK、CTL活性及血清TNF活性,并与对照组相比较。结果:(1)H22-DC-TIL具有很强的对H22细胞杀伤活性(杀伤率为71.31%±3.11%),明显高于其对Hepal-6和B16细胞的杀伤活性(杀伤率分别为50.11%±3.03%和30.31%±2.89%);也明显高于未经DC激活的TIL、H22-DC-小鼠脾淋巴细胞和未经DC激活的小鼠脾淋巴细胞对H22细胞杀伤活性(杀伤率分别为49.80%±3.21%、48.76%±3.60%和19.23%±2.71%)和对Hepal-6细胞杀伤活性(杀伤率分别为39.40%±3.21%、38.62%±2.87%和18.73%±2.40%)以及对B16细胞杀伤活性(杀伤率分别为26.38%±2.51%、25.82%±2.70%和18.34%±3.01%),同时B16-DC-TIL(TIL来源于H22瘤体)也可诱导相对较低的对B16细胞的特异性细胞杀伤活性。(2)H22-DC-TIL可明显诱导提高荷瘤小鼠脾淋巴细胞NK、LAK和CTL活性(活性分别为30.43%±1.35%、31.40%±1.80%和35.30%±1.20%),并可检测到血清TNF水平明显上升[血清TNF为(40.41±1.85)U/m l],它们均达正常对照组水平,与未经DC激活的TIL组、H22-DC-小鼠脾淋巴细胞组、未经DC激活的小鼠脾淋巴细胞组、生理盐水组分别对应比较,差异均有显著性(P<0.01)。结论:(1)H22-DC-TIL可产生很强的体外针对H22细胞的特异性杀伤活性。(2)H22-DC-TIL可明显诱导提高荷瘤小鼠特异性抗肿瘤免疫反应。     

2型登革病毒诱导ED25细胞凋亡及死亡受体的表达变化

目的： 观察2型登革病毒（dengue virus type 2，DV2）感染ED25（人肝静脉内皮细胞）诱导细胞凋亡及胞膜死亡受体TRAILR、TNFR、Fas表达水平的改变，并探讨其意义。方法: 用 DV2感染ED25细胞，流式细胞技术检测ED25细胞感染前、后凋亡变化及胞膜死亡受体TRAILR1-4、TNFR1-2、Fas的表达。结果: 病毒感染后ED25细胞凋亡增加，感染前细胞凋亡数约5.7%±1.2%，而感染后细胞凋亡数约27.3%±1.6%，P<0.05；病毒感染后细胞Fas表达百分比增加，感染前为44.3%±2.2%,而感染后为63.0%±2.3%，P<0.05;而TRAILR1-4、TNFR1-2表达水平甚低，感染前后无明显改变。结论: 2型登革病毒感染可以诱导肝静脉内皮细胞ED25细胞凋亡，其中死亡受体Fas表达增高，提示DV2可能通过调节Fas/FasL的表达诱导细胞凋亡，有利于进一步研究登革病毒感染引起肝脏器官损伤。     

PARP-1抑制剂通过激活SIRT1-PGC-1α轴减轻慢性阻塞性肺疾病大鼠的炎症和氧化应激反应

目的：通过构建慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠实验模型，探讨聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1(PARP-1)抑制剂是否通过调控沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)减轻COPD大鼠的炎症和氧化应激反应，探究SIRT1-PGC-1α轴作为PARP-1抑制剂作用新靶点的可能性。方法：将48只SD大鼠随机选取12只作为健康组，剩余大鼠构建COPD实验模型，将造模成功的大鼠随机分为模型组、PARP-1抑制剂处理组、PARP-1抑制剂+PGC-1α抑制剂组，HE染色观察肺组织病理形态变化，ELISA检测大鼠肺组织TNF-α、IL-6、IL-1β、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平，荧光定量PCR法检测各组大鼠SIRT1、PGC-1α mRNA表达水平，Western blot检测SIRT1、PGC-1α蛋白表达。结果：健康组大鼠肺组织结构完整，与健康组相比，模型组大鼠肺组织产生结构损伤，有大量炎症细胞浸润，肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著升高，血清中MDA含量显著升高，SOD含量显著降低，SIRT1、PGC-...     

蛋白酶激活受体2/P38MAPK信号通路在缺血后处理对抗老年糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的:研究蛋白酶激活受体2/P38MAPK(PAR-2/P38MAPK)信号通路在缺血后处理(IPost)对抗老年糖尿病大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤中的作用。方法:22-24月龄雄性Wistar大鼠32只,随机选取24只采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射制备老年糖尿病模型。成模大鼠随机分成3组(每组8只):I/R组、IPost组、PAR-2抑制剂组(PAR-2组),PAR-2组大鼠于缺血处理前1h尾静脉注射PAR-2抑制剂FSLLRY-NH2,其余处理同IPost组;未造模的8只大鼠作为对照组(SC组)。采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥比色法分别测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)浓度,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,Western Blotting测定PAR-2及P38MAPK、P-P38MAPK蛋白表达水平。结果:I/R组MDA浓度、心肌细胞凋亡率及P-P38MAPK水平均较SC组显著增加(P0.05或P0.01),SOD活性、PAR-2蛋白表达水平明显降低(P0.01)。IPost组SOD活性及PAR-2水平较I/R组显著增加(P0.05),P-P38MAPK水平、MDA浓度及心肌细胞凋亡率均下降(P0.01)。PAR-2抑制剂则可抑制IPost作用,使P-P38MAPK蛋白表达水平上调、心肌细胞凋亡率增加、MDA浓度升高、SOD活性降低(P0.05或P0.01)。结论:IPost对老年糖尿病大鼠心肌I/R损伤有保护作用,其机制与PAR-2/P38MAPK信号通路的调节有关。     

Chitinase activates protease-activated receptor-2 in human airway epithelial cells

Mammalian chitinase released by airway epithelia is thought to be an important mediator of disease manifestation in an experimental model of asthma. However, the intracellular signaling mechanisms engaged by exogenous chitinase in human airway epithelial cells are unknown. Here, we investigated the direct effects of exogenous chitinase from Streptomyces griseus on Ca(2+) signaling in human airway epithelial cells. Spectrofluorometry was used to measure intracellular Ca(2+) concentration ([Ca(2+)](i)) in fura-2-AM-loaded cells. S. griseus chitinase induced dose-dependent [Ca(2+)](i) increases in normal human bronchial epithelial cells and promoted [Ca(2+)](i) oscillations in H292 cells. Chitinase-induced [Ca(2+)](i) oscillations were independent of extracellular Ca(2+), suggesting that the observed [Ca(2+)](i) increases were due to Ca(2+) release from intracellular stores. Accordingly, after depleting endoplasmic reticulum (ER) Ca(2+) with the ER Ca(2+) ATPase inhibitor, thapsigargin, chitinase-mediated [Ca(2+)](i) increases were abolished. Treatment with the phospholipase C (PLC) inhibitor U73122 or the 1, 4, 5-trisinositolphosphate (IP(3)) receptor inhibitor 2-APB attenuated chitinase-induced [Ca(2+)](i) increases. Desensitization of protease-activated receptor-2 (PAR-2) by repetitive agonist stimulation or siRNA-mediated PAR-2 knock-down revealed that chitinase-mediated [Ca(2+)](i) increases were exclusively mediated by PAR-2 activation. Finally, chitinase was found to cleave a model peptide representing the cleavage site of PAR-2 and enhanced IL-8 production. These results indicate that exogenous chitinase is a potent proteolytic activator of PAR-2 that can directly induce PLC/IP(3)-dependent Ca(2+) signaling in human airway epithelial cells.     

卡托普利对缺氧/复氧乳鼠心室肌细胞游离钙的影响及其离子通道机制

目的：观察卡托普利晚期预处理对缺氧/复氧乳鼠心室肌细胞游离钙的影响及其离子通道机制。方法:建立培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型。设正常对照组、缺氧/复氧组、缺氧预适应组和卡托普利组。经Flou-3/AM负载染色后，采用流式细胞分析技术，测定细胞内钙离子浓度(［Ca²⁺］i)；利用膜片钳技术，观察L-型钙通道和钠钙交换电流的变化。结果:（1）缺氧/复氧时，［Ca²⁺］i和Na⁺/Ca²⁺交换电流高于正常对照组（P<0.01），L-型钙电流（I_Ca-L）峰值下降，I-V曲线上移，半数失活电压(V_0.5)减小，ICa-L失活曲线左移。（2）晚期预处理和卡托普利使缺氧/复氧时［Ca²⁺］i低于缺氧/复氧组（P<0.01）；I_Ca-L增加，I-V曲线下移，V_0.5增大及稳态失活曲线右移；Na⁺/Ca²⁺ 交换电流减少；但［Ca²⁺］i和Na⁺/Ca²⁺交换电流高于对照组（P<0.05）。（3）卡托普利组与缺氧预适应组比较上述指标均无显著差异 。结论：心肌细胞缺氧/复氧，通过Na⁺/Ca²⁺交换电流的异常增加可引起［Ca²⁺］i的异常升高及其钙超载；卡托普利通过轻度增加Na⁺/Ca²⁺交换电流及其［Ca²⁺］i而触发晚期预处理，抑制后续缺氧/复氧引起的Na⁺/Ca²⁺交换电流及其［Ca²⁺］i的异常增加。     

小鼠胚胎干细胞钙敏感受体的表达和其对细胞增殖的影响*

 目的： 观察钙敏感受体（calcium-sensing receptor,CaSR）在小鼠胚胎干细胞（mouse embryonic stem cells,mESCs）的功能性表达。方法: （1）采用Western blotting技术及免疫荧光染色分析CaSR蛋白在129小鼠ES-D3细胞系的表达;采用激光共聚焦扫描技术检测不同处理因素(包括G蛋白-PLC-IP3通路)对细胞内钙离子浓度（［Ca2+］i）的影响;应用MTT法和流式细胞术分析CaSR活化对mESCs增殖的影响。结果: CaSR蛋白在mESCs有表达;增加细胞外钙或者给予CaSR激动剂新霉素均可引起［Ca2+］i和CaSR表达增加;CaSR活化可增加mESCs 的存活率和磷酸化ERK2蛋白的表达。NPS2390（CaSR抑制剂）则能减弱这种作用。结论: CaSR在mESCs有表达;CaSR的活化参与了mESCs的增殖。     

急性低氧大鼠肺动脉平滑肌内质网钙信号的变化及意义

目的：观察急性低氧大鼠肺动脉平滑肌内质网钙信号的变化及意义。方法:细胞水平：钙荧光探针(Fura-2/AM)负载大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs），荧光分光光度法，细胞外液无Ca2+及含Ca2+，在常氧（37 ℃、5% CO2、21 %O2、74 %N2 ）和急性低氧(37 ℃、5% CO2、2% O2、93 %N2)时，检测理阿诺碱（RD）和环匹阿尼酸（CPA）等对细胞浆内游离钙离子浓度（［Ca2+］i）的影响；离体血管环水平：相同条件，离体血管灌流方法检测肺动脉环张力变化。结果:(1)急性低氧时［Ca2+］i升高：常氧组［Ca2+］i为（96.99±7.16） nmol/L，低氧组为(257.06±32.48) nmol/L (P<0.01)。(2)与低氧组比较，预先用RD或普鲁卡因(procain)抑制内质网理阿诺碱受体敏感钙库，随后再给予低氧刺激时［Ca2+］i不升高，为（100.91±11.21） nmol/L (P<0.01)；而用CPA或thapsigargin（TG）抑制内质网摄取Ca2+，再给低氧刺激时［Ca2+］i呈升高状态(P>0.05)，而在细胞外液含钙及低氧下CPA及TG引起［Ca2+］i进一步升高(P<0.05)。(3)低氧引起肺动脉环收缩：常氧对基础张力无影响，低氧引起肺动脉环收缩，最大收缩张力达（49.28±8.64） g/g,P<0.01。(4)与低氧组比较，预先用RD或procain抑制内质网理阿诺碱受体敏感钙库，再给予低氧刺激，肺动脉环不收缩，最大收缩张力（3.75±1.14） g/g, P<0.01；而用CPA或TG后，再给予低氧刺激，肺动脉环呈收缩状态(P>0.05)，而在细胞外液含钙及低氧下CPA及TG引起肺动脉环进一步收缩(P<0.05)。结论:急性低氧可以引起内质网释放Ca2+，至少来自理阿诺碱受体敏感钙库的Ca2+释放参与了低氧肺血管收缩的发病机制；这可能是PASMCs自身具有的，既不依赖细胞外Ca2+内流，也不依赖血管内皮。     

细胞内钙信号对锌指转录因子及胚心标志基因的调控

目的：探讨心肌细胞内游离钙离子浓度（［Ca2+］i）变化对锌指转录因子及胚心标志基因的影响。 方法: 以原代培养的乳鼠心肌细胞为模型，血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及雷尼丁(RY)剌激心肌细胞跨膜钙内流及细胞内钙释放; Fura-2/AM比率荧光成像系统分析细胞内钙信号；免疫印迹(Western blotting)检测心肌细胞钙调神经磷酸酶(CaN)、活化T细胞核因子（NFAT3）、锌指转录因子（GATA4）、α-actin蛋白表达，RT-PCR 检测心肌球蛋白重链（β-MHC）mRNA表达。 结果: AngⅡ及RY均可使心肌细胞内［Ca2+］i增加，与对照组相比差异显著（P<0.01）。AngⅡ、RY刺激1、3 d，心肌细胞CaN、NFAT3、GATA4、α-actin蛋白表达及β-MHC mRNA表达明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)。 结论: 细胞内钙信号的变化可能通过影响CaN及ERK信号通路，增加心肌细胞胚心标志基因的表达,在心肌细胞肥大的病理过程中起重要作用。     

钙蛋白酶调节致心肌细胞肥大的信号转导

目的： 探讨钙敏感的calpain对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）介导的致心肌细胞肥大的钙调神经磷酸酶（CaN）信号通路的调节。方法: 原代培养的乳鼠心肌细胞为模型，AngⅡ刺激细胞Ca2+内流和（或）内贮细胞Ca2+释放， ［3H］-Leu掺入法反映心肌细胞蛋白合成速率，Fura-2/AM比率荧光成像分析细胞内钙信号变化，免疫印迹检测心肌细胞μ-calpain、m-calpain、CaN磷酸化及蛋白表达。结果: Ang Ⅱ呈浓度依赖性（10^-8-10^-5 mol·L^-1）促心肌细胞［Ca2+］i增加,各刺激组［Ca2+］i与对照组差异显著(P<0.01或P<0.05)。AngⅡ（10-7 mol·L^-1）剌激心肌细胞15 min后, μ-calpain的磷酸化明显增加，但其蛋白表达量无显著改变（P>0.05）, m-calpain蛋白表达及磷酸化量显著差异，CaN的蛋白表达量无显著改变，但其磷酸化增强, 环孢素A（CsA）抑制CaN的磷酸化。AngⅡ可使无血清培养新生大鼠心肌细胞［3H］-Leu掺入率随时间增加而增加，与对照组差异显著(P<0.01或P<0.05)，且在10^-8-10^-5 mol·L^-1范围内呈量效依赖关系。结论: AngⅡ剌激细胞外Ca2+跨膜内流和（或）内贮Ca2+的释放导致μ-calpain的激活，进一步激活钙敏感的CaN信号通路，在心肌肥厚的病理过程中起重要作用。     

血管生成素-1激活tyrosine kinase/PI3K增加血管内皮细胞［Mg2+］i

目的：探讨血管生成素-1（Ang-1）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）内游离镁离子浓度（［Mg²⁺］_i）的调节机制。方法:我们采用荧光指示剂mag-fura-2，运用PTi 阳离子测定系统动态测HUVECs的［Mg²⁺］_i。结果:Ang-1诱导的［Mg²⁺］_i增加与细胞外Mg2+浓度无关。Ang-1诱导的［Mg²⁺］_i增加与细胞内Ca2+浓度无关。经酪氨酸激酶阻断剂(tyrphostin A23 和 genistein), 磷脂酰3激酶阻断剂 (wortmannin和LY294002)预处理，均显著阻断Ang-1诱导的［Mg²⁺］_i增加。但经活化丝裂原激活激酶阻断剂(SB202190和PD98059) 预处理，不能阻断Ang-1诱导的［Mg²⁺］_i增加。结论:Ang-1通过酪氨酸激酶/磷脂酰3激酶信号传递途径使细胞内的Mg2+库释放Mg2+，从而增加HUVECs的［Mg²⁺］_i。     

β2肾上腺素受体拮抗剂对大鼠心肌梗死后心肌细胞胞浆游离Ca2+浓度的影响

目的：观察β2肾上腺素受体拮抗剂对心肌梗死后心肌细胞胞浆游离Ca2+浓度(［Ca2+］i)的影响。 方法： 结扎冠状动脉，复制大鼠心肌梗死模型。随机分为心肌梗死后2、4、8周组，正常对照组作假手术。分离大鼠心肌细胞，每组大鼠制备20份样品，再随机分为4小组，分别给予β2受体拮抗剂ICI118,551、β1受体拮抗剂阿替洛尔、非选择性β受体拮抗剂普萘洛尔后，用Fura-2荧光技术测定心肌细胞［Ca2+］i。 结果： 心肌梗死后4、8周，ICI118,551组心肌细胞［Ca2+］i增幅显著低于异丙肾上腺素组(24.5%±5.7% vs 57.8%±13.2%, P<0.01; 12.2%±7.9% vs 44.6%±11.3%,P<0.01)；正常对照组和心肌梗死后2周，上述两组心肌细胞［Ca2+］i增幅无显著差异(P>0.05)。正常对照组和心肌梗死后2周，阿替洛尔组心肌细胞［Ca2+］i增幅显著低于异丙肾上腺素组(P<0.05)；正常对照组及心肌梗死后2、4、8周,普萘洛尔组心肌细胞［Ca2+］i增幅均显著低于异丙肾上腺素组（P<0.05）。 结论： β2受体拮抗剂对于有效抑制心肌梗死后交感神经激动引起的心肌细胞内钙超载可能起重要作用。     

白细胞介素-2对心肌β-肾上腺素受体作用的调制

目的：研究生理浓度白细胞介素-2（IL-2）对β-肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素（ISO）心肌细胞效应的调制作用及其信号途径。方法： 采用酶解分离的成鼠心室肌细胞模型，用视频跟踪系统测定单个心室肌细胞的收缩幅度、最大收缩速度和最大舒张速度（±dL/dtmax）；以Fura-2/AM为钙探针，用细胞内双波长钙荧光系统检测心肌［Ca2+］i的变化。结果： ① ISO显著增加心肌细胞的收缩幅度和±dL/dtmax，2×103 U/L的IL-2预处理15 min对心肌细胞的收缩没有影响，但是使心肌细胞对ISO的反应明显降低；② ISO浓度依赖性地增加心肌细胞的钙瞬态值，EC50为（0.12±0.01）μmol/L。2×103U/L的IL-2预处理15 min对心肌细胞的钙瞬态值没有影响，但是使心肌细胞对ISO的反应曲线显著降低，EC50为（0.44±0.06）μmol/L；③ 20 mg/L CTX预处理12 h可显著增加心肌细胞的钙瞬态值，2×103 U/L 的IL-2处理5 min可显著降低钙瞬态值；④ Forskolin显著增加单个心肌细胞的钙瞬态值，IL-2 2×103 U/L预处理15 min后，forskolin增加钙瞬态值的最大效应降低。结论： 生理浓度的IL-2 (2×103 U/L)能够显著抑制ISO对单个分离心肌细胞的正性肌力作用和钙瞬态值增高作用。IL-2的调制作用可能是通过抑制Gs蛋白，降低AC的活性来实现的。