8-溴-7-甲氧基白杨素对人卵巢癌A2780 细胞凋亡的作用及其机制

目的探讨8-溴-7-甲氧基白杨素（8-bromo-7-methoxychrysin, BrMC）诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的作用及其可能机制.方法采用不同浓度（2.5、5.0和10.0μmol·L^-1）的BrMC处理体外培养的A2780细胞,通过碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）和ELISA法检测细胞凋亡的情况,Western Blot检测Bim和caspase-3蛋白的表达水平.结果不同浓度（2.5、5.0和10.0μmol·L^-1）BrMC均可促进A2780细胞的凋亡,且细胞凋亡率随BrMC浓度的升高而上升.不同浓度（5.0和10.0μmol·L^-1）BrMC作用的A2780细胞中Bim蛋白的表达均较正常对照组显著增加,而通过siRNA干扰下调Bim蛋白的表达能显著抑制BrMC诱导的A2780细胞凋亡.结论 BrMC可诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡,促进Bim蛋白的表达可能是其作用机制之一.     

8-溴-7-甲氧基白杨素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的观察8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxy-chrysin,BrMChR)诱导人胃癌(SGC-7901)细胞凋亡作用。方法体外培养SGC-7901细胞,MTT法测定细胞存活率;PI染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察梯形条带。结果MTT测定结果显示,BrMChR明显抑制SGC-7901细胞增殖,呈浓度依赖性,其IC50为2.6μmol·L-1,BrMChR的效价强度约是白杨素(ChR,IC50为16.5μmol·L-1)的8倍,约为氟尿嘧啶(5-FU,IC50为7.7μmol·L-1)的3倍。PI染色FCM分析发现BrMChR(1.25、5.00、20.00μmol·L-1)作用SGC-7901细胞48h的细胞凋亡率分别是19.8%±0.2%,36.8%±1.9%,45.5%±3.5%,BrMChR(1.25μmol·L-1)处理的细胞凋亡率较ChR(20.00μmol·L-1)的凋亡率(12.9%±1.5%)高;DNA琼脂糖凝胶电泳观察BrMChR(20.00μmol·L-1)作用24h和48h后SGC-7901细胞的基因DNA呈现典型梯形条带,且能被PPARγ阻断剂GW9662(10.00μmol·L-1)预孵育减弱。结论BrMChR可能部分通过活化PPARγ诱导SGC-7901细胞凋亡。     

罗格列酮增强顺铂对肺腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的观察罗格列酮(ROZ)和顺铂(DDP)合用对人肺腺癌A549细胞裸小鼠移植瘤生长的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法采用A549细胞株建立人肺腺癌裸鼠模型,将28只成瘤雌裸小鼠随机分成7组:①对照组(生理盐水0.2ml);②DDP低剂量组(1mg.kg-1);③DDP高剂量组(4mg.kg-1);④ROZ低剂量组(10mg.kg-1);⑤ROZ高剂量组(30mg.kg-1);⑥DDP低剂量组+ROZ低剂量组;⑦DDP低剂量组+ROZ高剂量组,隔天腹腔注射给药,共8次。于最后一次给药后48h处死各组小鼠,收集瘤标本行光镜观察,免疫组化检测PPARγ、PTEN和pAkt蛋白表达情况。结果①各实验组肿瘤的生长明显受到抑制,瘤质量明显低于对照组(P<0.01)。低、高剂量ROZ联合用药组较低剂量顺铂组抑瘤作用明显增强(P<0.05),其瘤重抑制率分别为52.11%和83.8%。②免疫组化:低、高剂量罗格列酮组与对照组比较,PPARγ、PTEN的表达上调,而pAkt的表达呈现下调,差异具有显著性(P<0.05),联合用药组该调节作用进一步增强(P=0.00)。③不良反应:高剂量顺铂组出现不良反应,其余各组无明显不良反应。结论罗格列酮能够增强顺铂对人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用,其作用机制可能与罗格列酮激活PPARγ,上调PTEN的表达和抑制pAkt的表达有关。     

芦荟多糖增强顺铂对肺腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 观察芦荟多糖（Aloe polysaccharide,AP）和顺铂（DDP）合用对人肺腺癌A549细胞裸小鼠移植瘤生长的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法 采用A549细胞株建立人肺腺癌裸鼠模型,将35只,♀,成瘤裸小鼠随机分为7组：对照组（生理盐水0.2 mL）;DDP低剂量组（1.0 mg·kg^-1）;DDP高剂量组（5 mg·kg^-1）;AP低剂量组（10 mg·kg^-1）;AP高剂量组（30 mg·kg^-1）;DDP低剂量组＋AP低剂量组;DDP低剂量组＋AP高剂量组,隔天腹腔注射给药,共8次。于最后1次给药后48 h处死各组小鼠,收集瘤标本行光镜观察,免疫组化检测p53和bcl-2蛋白表达情况。结果 各实验组肿瘤的生长明显受到抑制,瘤质量明显低于对照组（P〈0.01）。低、高剂量AP联合用药组较低剂量DDP组抑瘤作用明显增强（P〈0.05）,其瘤重抑制率分别为49.34%和82.61%。高剂量AP组与对照组比较,p53和bcl-2的表达均下调,差异具有统计学意义（P〈0.05）,联合用药组该调节作用进一步增强。高剂量DDP组出现不良反应,其余各组无明显不良反应。结论 AP能够增强DDP对人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用,其作用机制可能与AP抑制p53和bcl-2的表达有关。     

莪术油对卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其联合顺铂的协同作用研究

目的 探讨莪术油对卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用,并探讨其与顺铂联合的协同作用。方法 建立卵巢癌细胞株HO-8910PM荷瘤裸鼠模型,随机分为模型对照组、莪术油组、顺铂组和联合给药组（莪术油+顺铂）4组,每组6只,分别腹腔注射莪术油（300 mg·kg^-1）、顺铂（2 mg·kg^-1）、莪术油联合顺铂（300 mg·kg^-1+2 mg·kg^-1）以及空白对照液（0.4 mL生理盐水）,给药3周后处死小鼠并测瘤体积变化,计算肿瘤生长抑制率,免疫组化检测各组肿瘤组织中NM23、TNF-α、VEGF、NF-KBP65、PCNA的蛋白表达。ELISA检测裸鼠血清中IL-2、IFN-γ水平。结果 与模型对照组比较,莪术油、顺铂及其联合给药后均能显著抑制裸鼠肿瘤体积的增长（P<0.05或P<0.01）,且联合给药的抑瘤率（55.06%）要高于莪术油（20.5%）和顺铂（52.52%）单独给药。免疫组化检测结果显示各组药物治疗后,能显著降低裸鼠肿瘤组织中NM23、TNF-α、VEGF、NF-KBP65、PCNA的阳性表达（P<0.05或P<0.01）,且降低程度从低到高依次为莪术油组、顺铂组、联合给药组。ELISA检测结果也表明顺铂以及莪术油联合顺铂给药3周后能显著提高裸鼠血清IL-2、IFN-γ水平（P<0.01）,且含量上升程度由低到高依次为莪术油组、顺铂组、联合给药组。结论 莪术油能够抑制卵巢癌荷瘤裸鼠移植瘤的增长,具有一定的抗肿瘤效果,其机制可能与调节肿瘤生长因子NM23、TNF-α、VEGF、NF-KBP65、PCNA及免疫相关因子IL-2、IFN-γ的表达有关。莪术油联合顺铂用药对卵巢癌肿瘤的抑制具有潜在的协同作用,但还需更深入实验研究。     

诺斯卡品逆转人卵巢癌裸鼠移植瘤对顺铂耐药的作用及机制

目的：探讨微管抑制剂诺斯卡品（ NOS ）逆转人卵巢癌细胞株 SKOV3/DDP 裸鼠皮下移植瘤对顺铂（ DDP）耐药的作用及其机制。方法建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,分为对照组、DDP组、NOS组、NOS与DDP联合组,每组6只。观察各组裸鼠饮食和精神状态,测量裸鼠的体重及移植瘤的体积,并绘制肿瘤生长曲线。用网搓法制备单细胞悬液,采用流式细胞术检测移植瘤细胞周期和细胞凋亡率的变化,细胞中X链锁凋亡抑制蛋白（ XIAP ）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和生存素（Survivin）蛋白表达。结果联合组裸鼠移植瘤体积明显小于对照组和其他用药组（ P ＜0ⅱ．05）。与对照组和DDP组比较,联合组皮下移植瘤细胞凋亡率显著增加（ P ＜0．05）,G2/M期细胞比例增多（ P ＜0．05）,细胞中XIAP、Bcl-2和Survivin蛋白表达降低（ P ＜0．05）, Caspase-3蛋白表达升高（ P ＜0．05）。结论 NOS增加了移植瘤细胞对DDP的敏感性,逆转其对DDP的多药耐药,其机制可能与XIAP、Bcl-2和Survivin蛋白表达的下调,Caspase-3蛋白表达的上调有关。     

紫花牡荆素对人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的影响及其机制

目的研究紫花牡荆素（CAS）对人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其机制。方法建立人宫颈癌HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤模型,并随机分成5组,每组5只：生理盐水组、顺铂组、低剂量CAS组、中剂量CAS组和高剂量CAS组。观察和比较各组裸鼠移植瘤的体积和重量,裸鼠体重的变化,裸鼠血清乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、肌酐值和外周血白细胞计数的变化;FCM测定瘤组织细胞凋亡率;Westernblot分析瘤组织细胞内p21和cyclinB1的蛋白表达。结果CAS可显著抑制人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤的体积和重量的增加,呈作用剂量和时间依赖性;而对裸鼠的体重、谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酐值和外周血白细胞计数均无明显的影响。CAS作用16天后,裸鼠移植瘤细胞的凋亡率呈剂量依赖性增加,cyclinBl的蛋白表达降低,p21的蛋白表达增高。结论CAS具有抑制人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的作用,可能与其降低cyclinB1的蛋白表达,增加p21的蛋白表达,促进细胞凋亡有关。     

顺铂不同疗程化疗对裸鼠人卵巢癌移植瘤的影响

目的观察顺铂(DDP)不同疗程化疗对裸鼠人卵巢癌移植瘤的影响,并探讨其对乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、P-糖蛋白(P-gp)和肿瘤干细胞标记物CD133表达水平的影响。方法用人卵巢癌细胞株SKOV3建立荷人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,24只裸鼠随机分为对照组、短疗程化疗组和足疗程化疗组,每组8只。化疗期间观察裸鼠体重和肿瘤生长状况;Western Blot方法检测3组移植瘤组织中BCRP、P-gp、CD133的蛋白表达水平。结果对照组移植瘤体积最大,短疗程化疗组次之,足疗程化疗组最小(P<0.05);足疗程化疗组裸鼠体重低于对照组及短疗程化疗组(P<0.01,P<0.05);足疗程化疗组CD133、BCRP、P-gp蛋白表达水平高于对照组及短疗程化疗组(P<0.01,P<0.05)。结论 DDP足疗程化疗可以更好地抑制荷人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长,但残余瘤对化疗抵抗性更强,更难治疗。     

姜黄素对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的　探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株 HO 8910 裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法　1×107 个HO 8910细胞接种于裸鼠皮下,待瘤长成约为 10 mm×10 mm×10 mm时,随机分成对照组和治疗组,对照组给予RPMI 1640 4 ml/kg、治疗组分别给予50、100 mg/kg姜黄素腹腔注射治疗5d后,计算移植瘤的体积、瘤重、抑瘤率;瘤组织标本分别进行 HE染色病理检查,电镜和流式细胞仪检测。结果　姜黄素对移植瘤的生长有明显抑制作用,低剂量组和高剂量组的抑瘤率分别达53 .08%和70 .47%,病理、电镜和流式细胞仪检测瘤组织标本均提示经姜黄素治疗后的肿瘤细胞发生了凋亡。结论　姜黄素对人卵巢癌移植瘤的生长具有抑制作用。     

紫杉醇静脉滴注联合顺铂腹腔给药治疗晚期卵巢癌32例疗效及安全性观察

目的探讨紫杉醇静脉滴注联合顺铂腹腔给药治疗晚期卵巢癌的临床疗效及不良反应。方法选取2010年2月至2013年2月医院收治的64例晚期卵巢癌患者,随机分为两组,各32例。观察组患者给予紫杉醇静脉滴注联合顺铂腹腔化疗给药,对照组患者给予2种药物静脉滴注,4个疗程后比较两组患者的临床疗效和不良反应。结果观察组有效率和疾病控制率分别为81.25%和100.00%。明显高于对照组的56.25%和78.12%（P〈0.05）;观察组CA125水平下降有效率为59.38%,明显高于对照组的34.38%（P〈0.05）;两组患者的主要不良反应为骨髓移植、脱发、胃肠道反应、肝功能损害、神经毒性、关节肌肉痛等,观察组不良反应发生率虽低于对照组,但两组间差异无统计学意义。结论紫杉醇静脉滴注联合顺铂腹腔化疗治疗晚期卵巢癌的临床疗效确切。不良反应患者可耐受,是较理想的治疗方法。     

SurViVin在顺铂诱导Panc-1细胞凋亡中的作用

的 :体外观察顺铂是否具有诱导胰腺癌细胞株 (Panc-1)凋亡的作用 ,同时观察在此过程中凋亡抑制蛋白 Survivin的表达变化 ,为探讨胰腺癌的化疗耐药机制提供理论基础。方法 :用人 Panc-1株进行培养传代 ;MTT试验检测顺铂以不同浓度和不同时间对 Panc-1株生长的抑制作用 ;用 RT-PCR检测凋亡过程中 Survivin基因表达的动态变化。结果 :顺铂可明显抑制 Panc-1细胞增殖 ,其增殖抑制率呈浓度和时间依赖性 ;DNA电泳可以观察到凋亡的发生 ,而且呈药物浓度、作用时间依赖关系 ;Survivin表达水平随着顺铂作用浓度的增加而下降 ,当顺铂浓度为 5 0μg/ml时下降最明显 (61% ) ;Survivin c DNA/β-actin c DNA比值与细胞增殖抑制率和细胞凋亡率呈负相关 (P<0 .0 1)。结论 :顺铂可以有效诱导 Panc-1株的细胞凋亡 ,而且 Survivin基因的抑制在顺铂诱导 Panc-1株的细胞凋亡中起重要作用。     

人canstatin基因对人食管癌裸鼠移植瘤中bcl-xl和cyclin D1表达的影响及意义

目的探讨人canstatin基因对人食管癌裸鼠移植瘤的的影响作用,寻求其抑制肿瘤生长的机制。方法 KYSE150细胞建立裸鼠食管癌动物模型,Ad-canstatin实施干预,RT-PCR检测肿瘤组织bcl-xl、cy-clinD1的mRNA的表达水平。免疫组织化学方法检测微血管密度（MVD）。结果治疗组肿瘤体积明显小于两个对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,而两对照组间差异无统计学意义。对电泳结果进行灰度分析和统计学分析显示canstatin治疗组cyclinD1、bcl-xl的mRNA表达明显低于GFP组和PBS组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。canstatin治疗组MVD明显低于对照组。结论人canstatin基因对人食管癌移植瘤的生长具有抑制作用,其作用机制可能与抑制cyclin D1、bcl-xl表达而抑制肿瘤血管生成有关。     

紫杉醇联合顺铂治疗晚期卵巢癌的临床疗效观察

目的探讨紫杉醇联合顺铂治疗晚期卵巢癌的临床疗效及不良反应。方法选取2008年10月～2010年6月我院收治的60例晚期卵巢癌病例,随机分为研究组和对照组,研究组采用紫杉醇联合顺铂化疗方案治疗,对照组采用顺铂、阿霉素联合环磷酰胺化疗方案治疗,30天为1个疗程,治疗均在2个疗程以上,观察其临床疗效及不良反应。结果经过2个疗程的治疗后,研究组治疗有效率为73.33%,其中10例腹水恢复正常;对照组有效率仅为40%,仅3例腹水恢复正常。研究组中位总生存期为38.5个月,1年生存率为76.67%,3年生存率为46.67%,5年生存率为36.67%。对照组中位总生存期为28.5个月,1年生存率为53.33%,3年生存率为33.33%,5年生存率为26.67%。研究组1、3、5年生存率均显著高于对照组(P<0.05)。研究组与对照组所出现的副反应相似,经过对症处理后均缓解或者痊愈。结论紫杉醇联合顺铂化疗方案治疗晚期卵巢癌疗效明显,不良反应可以接受,可作为晚期卵巢癌的化疗方案之一。     

地塞米松对卵巢癌SKOV-3细胞的影响

目的研究地塞米松对体外培养条件下的卵巢癌细胞SKOV-3细胞增殖的影响及诱导其凋亡的情况。方法取对数生长期的SKOV-3细胞（细胞数为5×10^4／mL）分别接种于不同细胞培养板上,试验组每孔加入200μL不同浓度的地塞米松,空白对照组加入等体积PRMI-1640培养液孵育,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测吸光度（A490值）并计算SKOV-3细胞增殖抑制率;PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点的细胞凋亡率。结果MTT法检测结果显示,SKOV-3细胞增殖抑制率随着地塞米松浓度和作用时间的增加均明显增大,以40μmol／L浓度的试验组培养48h的抑制率最高,达（45．25±3．12）％。流式细胞仪检测显示。地塞米松处理后可引起G0／G1期细胞明显增加（P〈0．05）,且SKOV-3细胞凋亡率随着地塞米松浓度增加有升高趋势。结论地塞米松能诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡。     

洛伐他汀联合顺铂对人肝癌HepG2细胞生物学特性的影响及其机制

目的 研究洛伐他汀单用或与化疗药物顺铂联用时对人肝癌HepG2细胞生物学特性的影响,初步探索其抗肿瘤作用机制。方法 不同浓度洛伐他汀、洛伐他汀联合顺铂处理细胞 48 h后,CCK-8法检测HepG2细胞的增殖抑制作用,金氏公式计算联合应用效果;平板克隆形成实验评价药物作用于肝癌细胞的远期效应;划痕实验检测药物对细胞迁移能力的影响;Transwell小室法检测药物对细胞侵袭能力的影响;流式细胞术检测药物处理后细胞周期和凋亡情况;蛋白印迹技术（Western-blot）检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达水平变化。结果 洛伐他汀呈浓度依赖性抑制HepG2细胞的增殖,金氏公式计算结果显示洛伐他汀可协同增强顺铂的抗肿瘤作用;平板克隆形成实验结果表明洛伐他汀能显著抑制HepG2细胞克隆形成率;划痕实验提示洛伐他汀能显著降低肝癌细胞的迁移率;Transwell小室侵袭实验结果发现洛伐他汀能明显减少穿膜细胞数量;流式细胞检测发现洛伐他汀可引起G0/G1期细胞增加,S期细胞减少,细胞凋亡率增加;Western-blot检测结果显示洛伐他汀可下调Bcl-2蛋白表达,同时上调Bax和Caspase-3蛋白表达。结论 洛伐他汀可明显抑制HepG2细胞增殖、迁移和侵袭能力,与顺铂联用可增强顺铂体外抗肿瘤效果,通过线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡是其可能的抗肿瘤作用机制之一。     

抗CD44 mAb A3D8对卵巢癌球形体形成细胞增殖和凋亡的影响*

摘要 目的：探讨抗CD44单克隆抗体(mAb)A3D8对3种卵巢癌球形体形成细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法：用MTS法检测A3D8对细胞增殖的影响;采用PI染色及流式细胞仪检测A3D8对细胞周期的影响;用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测A3D8在细胞凋亡中的作用;用罗丹明123试剂盒检测A3D8对细胞线粒体膜电位的影响;并采用Western Blotting法检测A3D8作用于3种卵巢癌球形体形成细胞后,CDK2、cyclinA、Bcl-2和caspase-3的改变。结果：A3D8可抑制3种卵巢癌球形体形成细胞的增殖,且此抑制作用呈现剂量和时间依赖性;A3D8可在阻滞S期的同时降低G0/G1期比例;A3D8可促进3种细胞凋亡,与DDP联用,细胞凋亡率较单独使用DDP增高;A3D8的处理可导致3种细胞的线粒体膜电位损失,CDK2、cyclinA、Bcl-2蛋白表达下调,caspase-3表达上调。结论：A3D8可能是通过影响p21/CDK2/cyclinA途径阻滞细胞周期达到抑制3种卵巢癌球形体形成细胞增殖的结果,并且可通过线粒体途径促进细胞凋亡。