抗原冲击致敏的脐血有核细胞体外诱导特异性CTL的实验研究

目的研究抗原(Ag)冲击致敏的脐血有核细胞的抗肿瘤作用.方法用密度梯度离心法提取人肺癌组织抗原,并与IL-2协同刺激脐血有核细胞,测定不同时间CTL和NK活性.结果脐血中NK活性变化不明显,但CTL于第7天增强至最高值.结论抗原与IL-2联合应用可明显提高脐血CTL活性.     

胃癌相关抗原与自身CTL细胞增殖及体外杀瘤活性关系

目的：探讨胃癌相关抗原与胃癌患者自身细胞毒Ｔ细胞（ＣＴＬ）细胞增殖及体外杀瘤活性的关系。方法：用生化方法提取胃癌相关抗原,体外协同ＩＬ－２培养淋巴细胞,ＭＴＴ法测定细胞增殖及瘤活性,流式细胞仪（ＦＣＭ）检测细胞表型变化。结果：１２例胃癌相关抗原阳性患者ＣＴＬ细胞增殖快于９例阴性患者,统计比较,差异有极显著意义（Ｐ〈０．００１）。Ｅ／Ｔ为８０：１时,前者体外杀瘤活性均值也大于后者（Ｐ〈０．０１）,Ｆ     

胃癌相关抗原及其与自身CTL细胞增殖及体外杀瘤活性关系的研究

探讨胃癌相关抗原与胃癌患者自身ＣＴＬ细胞增殖及体外杀瘤活性的关系。方法生化方法提取胃癌相关抗原,体外协同ＩＬ－２培养淋巴细胞,ＭＴＴ法测定细胞增殖及杀瘤活性,ＦＣＭ仪检测细胞表型变化。结果１２例胃癌相关抗原阳性患者ＣＴＬ细胞增殖快于９例阴性患者,差异有极显著性（Ｐ＜０．００１）。Ｅ：Ｔ为８０：１时,前者体外杀瘤活性均值也大于后者（Ｐ＜０．０１）,ＦＣＭ检测结果表明前者ＣＤ８及ＣＤ２５表达率也显著高于后者（Ｐ＜０．０１）。结论为解释胃癌等“不敏感群体”现象提供实验依据,提示该类抗原诱导的杀伤细胞可望用于胃癌临床免疫治疗;结合相关抗原筛查,可实施个体化免疫治疗。     

脐血及外周血中细胞毒性T细胞的体外诱导及杀瘤活性研究

目的　在体外研究卵巢癌细胞诱导脐血来源的CTL的扩增及其杀瘤活性。探索其用于卵巢癌过继免疫治疗的可行性。方法　从脐血中分离出单个核细胞 ,用不同剂量的SKOV 3细胞及IL -2刺激扩增 ;用FCM检测表型变化 ,MTT比色法检测其对SKOV 3及K 5 62的杀伤活性 ,并与用同样方法所得外周血来源CTL细胞相对照。结果　用 2× 10 6个 /ml的卵巢癌细胞可诱导脐血CTL细胞较高的杀伤活性为 5 3 .46%± 8.45 % ;诱导 10天后杀伤SKOV 3活性为 44 .0 9%± 6.95 % ,杀伤K 5 62的活性为41.0 3 %± 5 .79% ,CD3、CD4、CD 8及CD4/CD8值分别为 5 2 .0 0± 9.5 0、3 6.0 0± 4.80、3 8.0 0± 10 .2 0、1.10± 0 .40。结论　应用适当剂量的抗原可诱导较高活性的脐血源CTL ,对卵巢癌细胞株有较高的杀伤活性     

自体可溶性肿瘤抗原协同IL-2诱导外周血单个核细胞体外增殖及杀瘤作用的研究

本研究观察了胃癌自体可溶性肿瘤抗原协同IL-2诱导外周血单个核细胞(peripheral blood monoclear cells,PBMC)体外增殖及杀瘤作用.我们以生化方法提取胃癌自体可溶性抗原(rumor soluible antigen,TSA),协同IL-2体外培养淋巴细胞,MTT法测定增殖及杀瘤作用,APAAF法检测细胞表型变化.结果表明,一定剂量TSA可协同IL-2诱导PBMC增殖及杀瘤,单独TSA无此效应.促增殖效应呈时间剂量依赖特征.E/T为80:1时,TSA协同诱导的PBMC杀瘤活性为86.3%,单独IL-2诱导时为48.6%.表型测定表明,TSA协同诱导的PBMC其CD25及CD8表达均显著增高.由此可见,粗提自体胃癌抗原具有诱导T细胞增殖及杀伤肿瘤作用,提示增殖的T细胞可望用于肿瘤的临床过继免疫治疗.     

卵巢癌细胞系SKOV3冻融抗原诱导CTL特异性杀瘤效应的研究

目的探讨卵巢癌冻融抗原对T淋巴细胞的增殖作用及其诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在体外杀伤卵巢癌细胞的抗原特异性细胞毒性效应。方法采用免疫磁珠分离法(magnetic activated cell sorting，MACS)分离纯化正常人外周血CD3^ 细胞，体外以SKOV3卵巢癌细胞中提取的可溶性肿瘤抗原加以刺激。溴标法检测肿瘤抗原对T细胞增殖的影响；MTT法测定肿瘤抗原诱导的CTL体外杀伤卵巢癌细胞的能力；利用绒毛膜癌细胞抗原对比观察肿瘤抗原诱导CTL杀伤肿瘤细胞的抗原特异性。结果卵巢癌细胞抗原有很强的促进T淋巴细胞增殖的作用，且存在时间依赖性，在24h时促进作用最强。SKOV3抗原诱导的CTL在体外对SKOV3细胞的杀伤率为68．38％，显著高于它对JAR绒毛膜癌细胞的杀伤率(18．31％)；而JAR细胞抗原诱导的CTL对JAR和SKOV3细胞的杀伤率分别为61．02％和14．79％，有显著的抗原特异性(P=0．0001)。结论卵巢癌细胞冻融抗原诱导的CTL在体外具有很强的增殖能力和抗原特异性杀伤卵巢癌细胞的作用。     

超抗原SEB诱导人CTL细胞杀瘤条件优化

目的通过正交设计优化CTL细胞最佳杀瘤条件。方法补体裂解法分离CTL细胞,MTT法测定CTL细胞杀瘤活性,正交设计选择CTL细胞最佳杀瘤条件。结果在SEB浓度为10-6g/ml,SEB作用CTL细胞时间为24h,CTL细胞与肿瘤细胞之比为20∶1情况下CTL细胞杀瘤活性最强。结论CTL细胞最佳杀瘤条件组合为SEB10-6g/ml,作用时间24h,效靶比20∶1。     

自体可溶性肿瘤抗原协同IL-2诱导外周血PBMC增殖及杀瘤

探讨自体可溶性肿瘤抗原（ＴＳＡ）与ＩＬ┐２共同诱导ＰＢＭＣ增殖及杀瘤作用。方法分三组用ＡＰＡＡＰ法观察细胞表型，ＭＴＴ法测定细胞增殖及杀瘤活性（靶细胞为ＭＮＫ４５系人胃低分化腺癌细胞）。结果培养第７天ＴＳＡ（１０μｇ／ｍｌ）协同ＩＬ┐２诱导ＰＢＭＣ增殖显著高于单独ＩＬ┐２诱导（Ｐ＜０．０１）。且ＣＤ＋８及ＣＤ＋２５表达率增高，差异有显著性（Ｐ＜０．０１０，当效／靶比为８０∶１时ＩＬ┐２诱导的ＰＢＭＣ杀瘤活性为４８．６％，而１０μｇ／ｍｌＴＳＡ协同诱导ＰＢＭＣ杀瘤活性为８６．３％。结论为研究ＴＡＫ细胞提供了实验依据，提示该类细胞具有临床过继免疫治疗应用的潜能     

血液肿瘤抗原特异性CTL的诱导和应用

肿瘤抗原特异细胞毒T细胞（CTL）是特异性免疫靶向治疗的理想免疫细胞,近年来对血液肿瘤抗原诱导特异性CTL的诱导和应用研究有很大的发展.     

DC联合小剂量IL-2大量扩增白血病特异性CTL的实验研究

目的： 建立和优化体外大量扩增白血病特异性CTL的方法。 方法： 用1×107FBL3细胞冻融产物（FBL3LY）冲击的DC每10天1次对C57BL/6小鼠反复接种，在第3次接种5 d后处死小鼠制备脾T细胞，每周用FBL3LY冲击的DC刺激，体外培养10 d后加入小剂量的IL2。 结果： 共培养至21 d， T细胞可扩增100倍以上，其中CD8+细胞比率明显增高。乳酸脱氢酶释放试验证实扩增所得CTL对FBL3细胞具有高效的杀伤作用（81.84±8.68%），而对K562细胞无特异性杀伤作用。 结论： FBL3LY冲击的DC联合小剂量IL2可大量扩增FBL3白血病特异性CTL，该方法的建立对提高白血病特异性CTL免疫治疗的临床疗效具有重要意义。     

人舌癌Tca8113肿瘤抗原对树突状细胞诱导 CTL杀伤活性的影响

目的 探讨人舌癌Tca8113细胞肿瘤抗原体外诱导外周血来源的树突状细胞(dendritic cell,DC)对CTL杀伤活性的影响.方法 选取健康成年人,抽取外周血,分离单核细胞,经贴壁获得树突状细胞前体,在体外先后加入GM-CSF、rhIL-4和(或)肿瘤抗原、LPS诱导培养10 d,获得成熟DC;而未贴壁细胞经rhIL-2诱导培养,获得T淋巴细胞.实验中设置舌癌Tca8113组和对照EC9706组,每组再根据效应细胞不同分为A组Tca8113细胞冻融抗原致敏的DC与T淋巴细胞共培养组;B组未经致敏DC与T细胞共培养组;C组单纯T细胞组.结果 A、B、C组效应细胞对Tca8113细胞株的杀伤活性分别为(76.48±1.47)%、(50.17±3.34)%、(27.66±4.12)%.A与B组、A与C组比较差异有统计学意义(P＜0.05),A组效应细胞对EC9706杀伤活性为(51.18±5.31)%,与对Tca8113的杀伤活性相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人舌癌Tca8113细胞冻融抗原能增强DC-CTL效应细胞对舌鳞癌Tca8113细胞株特异性杀伤活性.     

两种不同来源的树突状细胞体外诱导CTL杀瘤作用的研究

目的比较两种不同来源的树突状细胞体外负载肿瘤抗原后激活CTL的杀瘤效果,探讨其在抗肿瘤免疫中的作用.方法分别应用相应的细胞因子组合建立外周血单个核细胞来源和脐血来源DC的培养体系.体外比较两类DC负载K562白血病细胞冻融抗原后激活CTL的杀瘤效果.结果在合适的细胞因子组合下,两种方法都能得到成熟的DC,两种来源的DC在负载了肿瘤抗原后对于CTL肿瘤的杀伤有明显的增效作用.结论外周血和脐血来源的DC功能相似,均可在肿瘤免疫中发挥重要作用.     

人黑色素瘤抗原MAGE-3 肿瘤疫苗的构建及其诱导HLA-A *0201 转基因小鼠CTL活性的观察

 目的 通过基因工程的方法获得人黑色素瘤抗原MAGE-3的DNA和蛋白疫苗，并观察其对HLA-A＊0201转基因小鼠的CTL活性的影响。方法 用RT-PCR的方法，从人黑色素瘤细胞株A375中扩增MAGE-3的cDNA片段，分别将其插入到pcDNA3．1／v5-His真核扣pET32a原核表达载体。将pcDNA-MAGE-3转染B16肿瘤细胞观察其是否能在真核细胞中表达；将pET32a-MAGE-3转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导，SDS-PAGE观察融合蛋白表达情况。并用镍柱亲和层析的方法纯化融合蛋白。然后，采用DNA疫苗初次免疫和蛋白疫苗加强的策略免疫HL-A＊0201转基因小鼠，LDH方法检测CTL活性。结果 酶切结果证实，成功地构建了pcDNA-MAGE-3真核表达载体和pET32a-MAGE-3原核表达载体，并在真核细胞B16和原核细胞大肠杆菌中获稳定表达，原核表达产物为融合蛋白且分布于包涵体。用DNA疫苗进行初次免疫，镍柱纯化的融合蛋白加强免疫后，可成功地诱导HL-A＊0201转基因小鼠CTL活性。结论 成功地获得了MAGE-3肿瘤抗原，为进一步完善MAGE-3肿瘤疫苗打下了基础。     

人脑胶质瘤特异性CTL的诱导及体外抗瘤活性的实验研究

细胞毒淋巴细胞(CTL)是体内重要的抗肿瘤效应细胞.克隆的CTL由于具有高效特异性杀伤肿瘤的特点,近年来越来越受到人们的瞩目;体外诱导肿瘤特异性CTL,并进行特异性过继免疫治疗也就成为肿瘤兔疫治疗研究的一个热点.     

人νδT细胞细胞毒活性研究

细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤肿瘤细胞的作用是机体抗瘤机制的重要环节，也是肿瘤过继免疫疗法中的主要效应细胞之一。因此寻找能特异杀伤肿瘤细胞的CTL是目前肿瘤生物疗法中急待解决的焦点之一。νδT细胞是T细胞的另一亚类，大量的实验表明：这群细胞与LAK，NK细胞相似，其胞浆中富含穿孔素，     

IL-18基因增强肿瘤抗原致敏DC诱导的CTL特异性杀伤肝癌细胞

目的:探讨腺病毒介导的白细胞介素18(IL18）基因转染能否使肿瘤抗原冲击的树突状细胞(dentritic cell,DC) 在体外诱导出更强的抗肝癌免疫反应。方法：携IL18 的重组腺病毒载体感染经肝癌细胞株HepG2冻融抗原致敏的DC(AdIL18HepG2/DC), FACS分析AdIL18HepG2/DC表面分子的表达, ELISA法检测IL18的分泌水平, 3HTdR掺入法检测T淋巴细胞增殖能力, MTT法检测细胞毒性T 淋巴细胞杀伤效应。结果： AdIL18HepG2/DC较未转染DC能高水平地表达CD1a、CD11c、CD80、CD86以及HLADR;较未经IL18转染的DC分泌较高水平的IL18。AdIL18HepG2/DC 能非常有效地刺激自体T 细胞增殖(CPM 值为228 018±1 079),其刺激强度显著强于AdIL18DC、HepG2/DC、AdlzcZ/DC及DC（均P＜0.05）。当靶细胞为HepG2时,AdIL18HepG2/DC诱导的CTL杀伤活性显著高于其他各组（均P＜0.05）,并且其杀伤能力与效应细胞数量成正比。结论： IL18 基因转染且肝癌抗原致敏的DC可以显著增强DC的特异性抗肝癌效应。     

IL-18基因增强肿瘤抗原致敏DC诱导的CTL特异性杀伤肝癌细胞

目的: 探讨腺病毒介导的白细胞介素-18(IL-18)基因转染能否使肿瘤抗原冲击的树突状细胞(dentritic cell,DC) 在体外诱导出更强的抗肝癌免疫反应.方法:携IL-18 的重组腺病毒载体感染经肝癌细胞株HepG2冻融抗原致敏的DC(AdIL-18-HepG2/DC), FACS分析AdIL-18-HepG2/DC表面分子的表达, ELISA法检测IL-18的分泌水平, 3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞增殖能力, MTT法检测细胞毒性T 淋巴细胞杀伤效应.结果:AdIL-18-HepG2/DC较未转染DC能高水平地表达CD1a、CD11c、CD80、CD86以及HLA-DR;较未经IL-18转染的DC分泌较高水平的IL-18.AdIL-18-HepG2/DC 能非常有效地刺激自体T 细胞增殖(CPM 值为228 018±1 079),其刺激强度显著强于AdIL-18DC、HepG2/DC、AdlzcZ/DC及DC(均P＜0.05).当靶细胞为HepG2时,AdIL-18-HepG2/DC诱导的CTL杀伤活性显著高于其他各组(均P＜0.05),并且其杀伤能力与效应细胞数量成正比.结论:IL-18 基因转染且肝癌抗原致敏的DC可以显著增强DC的特异性抗肝癌效应.     

IL-2基因转导自身肿瘤特异性细胞毒T细胞对小鼠实体瘤作用的实验研究

许多研究发现自身肿瘤特异性细胞毒T细胞(CTL)能定位于体内肿瘤所在部位．其杀瘤细胞活性及特异性远在LAK细胞之上，来源和增殖性方面较TIL为优，因此可作为较为理想的载体细胞导入各种治疗基因。将IL-2基因导入CTL中表达并回输．通过其聚集在肿瘤发生局部持续分泌一定量的IL-2，激活机体肿瘤免疫反应或直接杀伤肿瘤细胞，     

可溶性抗原联合超抗原诱导的 CTL 抗瘤作用的实验研究

目的:探讨肿瘤可溶性抗原联合超抗原SEC诱导的细胞毒性T细胞(CTLs)对肿瘤细胞杀伤机理.方法:外周血淋巴细胞经肿瘤可溶性抗原、超抗原SEC联合作用,进行体外培养.对其增殖、细胞因子分泌、杀瘤活性和形态学变化进行观察和测定.结果:经肿瘤可溶性抗原、超抗原SEC联合刺激的淋巴细胞组增殖活性最强,诱导的CTLs对靶细胞杀伤活性显著高于单纯淋巴细胞组(P＜0.05),对TSA来源的肺癌细胞具有选择性杀伤作用,能够诱导肿瘤细胞出现凋亡的形态学变化.结论:肿瘤可溶性抗原与超抗原SEC联合应用能诱导效应细胞明显增殖、活化、并产生高效特异性的抗肿瘤效果.     

可溶性抗原联合超抗原诱导的CTL抗瘤作用的实验研究

目的：探讨肿瘤可溶性抗原联合超抗原SEC诱导的细胞毒性T细胞（CTLs）对肿瘤细胞杀伤机理。方法：外周血淋巴细胞经肿瘤可溶性抗原、超抗原SEC联合作用,进行体外培养。对其增殖、细胞因子分泌、杀瘤活性和形态学变化进行观察和测定。结果：经肿瘤可溶性抗原、超抗原SEC联合刺激的淋巴细胞组增殖活性最强,诱导的CTLs对靶细胞杀伤活性显著高于单纯淋巴细胞组（P〈0．05）,对TSA来源的肺癌细胞具有选择性杀伤作用,能够诱导肿瘤细胞出现凋亡的形态学变化。结论：肿瘤可溶性抗原与超抗原SEC联合应用能诱导效应细胞明显增殖、活化、并产生高效特异性的抗肿瘤效果。